曼陀羅子丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物及其組合物的醫(yī)藥用途和制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種曼陀羅子丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物及 其組合物的醫(yī)藥用途和制備方法以及它在治療阿爾茨海默?。ˋD)等方面的醫(yī)藥用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 曼陀羅子為前科植物白曼陀羅Datura metel L. D. innoxia Mill.或毛曼陀羅 的果實或種子。植物形態(tài)類似"洋金花"條。夏、秋果實成熟時采收。果實球形或卵圓形, 直徑約3厘米,基部殘留部分宿萼及果柄;外表淡褐色,具針刺,長短不一;頂端作不規(guī)則開 裂,內(nèi)含多數(shù)種子。種子略呈三角形或腎臟形,扁平,褐色,寬約3~4毫米。產(chǎn)于江蘇、浙 江、四川等地。曼陀羅子除上述品種外,尚有同屬植物歐曼陀羅、紫花曼陀羅的果實或種子, 亦同等使用。白曼陀羅果實的各部分(包括種子)都含生物堿。種子中含總生物堿〇. 17~ 0. 455% ;其中有天仙子胺、天仙子堿和痕跡量的阿托品等。在高通量篩選的過程中,本發(fā)明 意外地發(fā)現(xiàn)曼陀羅子具有很好的抑制丁酰膽堿酯酶的活性,該活性提取物及其組合物有望 應用于治療阿爾茨海默?。ˋD)等方面的醫(yī)藥用途。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003] 本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是提供一種曼陀羅子提取物。
[0004] 本發(fā)明還提供了以曼陀羅子提取物為主要活性成分的組合物。
[0005] 本發(fā)明同時提供了曼陀羅子提取物及其組合物的制備和其在制備丁酰膽堿酯酶 抑制活性藥物中的應用。
[0006] 本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的: 維吾爾藥曼陀羅子經(jīng)溶劑超聲提取,提取液濃縮后,用硅膠(SiO2)柱分離,上樣后的硅 膠柱,用二氯甲烷-甲醇混合溶劑梯度洗脫(二氯甲烷-甲醇,比例見表1),各二氯甲烷-甲 醇比例混合溶劑洗脫液,濃縮,干燥后,利用體外篩選體系測試其丁酰膽堿酯酶抑制活性, 意外地發(fā)現(xiàn)先用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:0,體積比)洗脫,繼用二氯 甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:3,體積比)洗脫得到的二氯甲烷-甲醇混合溶 劑(二氯甲烷-甲醇,100:3,體積比)洗脫液經(jīng)回收有機溶劑,干燥,即為丁酰膽堿酯酶抑制 活性提取物。而其他比例的洗脫部位,沒有丁酰膽堿酯酶抑制活性的作用。特別地,優(yōu)選為 先用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:0,體積比)洗脫25倍柱體積,繼用二 氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:3,體積比)洗脫20倍柱體積,洗脫液為本發(fā) 明丁酰膽堿酯酶抑制活性的提取物。丁酰膽堿酯酶抑制活性的提取物,可以通過以上方法 得到富集,從而與其他雜質(zhì)類成分分離開。該曼陀羅子丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物從未 見文獻報道,其薄層色譜(TLC)分析結(jié)果見圖1,TLC分析條件:GF254硅膠板,展開系統(tǒng): 二氯:乙酸乙酯:甲醇(6:1:1)顯色方法:香草醛-硫酸顯色。
[0007] 維吾爾藥曼陀羅子經(jīng)甲醇超聲提取,提取液濃縮后,用硅膠柱分離,上樣后的硅膠 柱,用二氯甲烷-甲醇混合溶劑梯度洗脫(二氯甲烷-甲醇,比例見表1),各二氯甲烷-甲醇 比例混合溶劑洗脫液,濃縮,干燥后,利用體外篩選體系測試其丁酰膽堿酯酶抑制活性,意 外地發(fā)現(xiàn)先用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:12,體積比)洗脫,繼用二氯 甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:20,體積比)洗脫得到的二氯甲烷-甲醇混合溶 劑(二氯甲烷-甲醇,100:20,體積比)洗脫液經(jīng)回收有機溶劑,干燥,即為丁酰膽堿酯酶抑制 活性提取物。而其他比例的洗脫部位,沒有丁酰膽堿酯酶抑制活性的作用。特別地,優(yōu)選為 先用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:12,體積比)洗脫15倍柱體積,繼用二 氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:20,體積比)洗脫25倍柱體積,洗脫液干燥后 即為本發(fā)明丁酰膽堿酯酶抑制活性的提取物。丁酰膽堿酯酶抑制活性的提取物可以通過以 上方法得到富集,從而與其他雜質(zhì)類成分分離開。該曼陀羅子丁酰膽堿酯酶抑制活性提取 物從未見文獻報道,其薄層色譜(TLC)分析結(jié)果見圖2, TLC分析條件:GF254硅膠板,展開 系統(tǒng):二氯:乙酸乙酯:甲醇(3:1:1)顯色方法:香草醛-硫酸顯色。
[0008] 具體,發(fā)現(xiàn)過程如下: 1、曼陀羅子經(jīng)甲醇超聲提取物的制備 取維吾爾藥曼陀羅子20 g,經(jīng)100 mL超聲提取15 min,提取液濃縮后,得提取物 SN0057 :0. 0134g,留樣:0. 0168mg,共上樣0. 3861g,二氯甲烷-甲醇系統(tǒng)。
[0009] 2、二氯甲烷-甲醇混合溶劑梯度洗脫方法和結(jié)果 取維吾爾藥曼陀羅子20 g,經(jīng)100 mL超聲提取15 min,提取液濃縮后,得提取物 SN0057,上樣0. 3861g甲醇溶解,拌樣硅膠I. 0g,,空白硅膠5g,,玻璃柱內(nèi)徑I. 5cm,柱體積 11ml,每個梯度洗脫100ml,二氯甲烷-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫(條件見表1)得到各個濃度提取 洗脫液的洗脫物,回收溶劑,即得,酮梯度洗脫提取物,TLC分析結(jié)果見圖3,圖4, TLC分析條 件:GF254硅膠板,展開系統(tǒng):二氯:乙酸乙酯:甲醇(6:1:1),二氯:乙酸乙酯:甲醇(3:1:1) 顯色方法:香草醛-硫酸顯色。表1
【主權(quán)項】
1. 一種曼陀羅子提取物,其特征為曼陀羅子經(jīng)溶劑超聲提取,提取液濃縮后,用硅膠 (SiO 2)柱分離,上樣后的硅膠柱,先用體積比100:0的二氯甲烷-甲醇混合溶劑洗脫,繼用 體積比100:3的二氯甲烷-甲醇混合溶劑洗脫,用100:3二氯甲烷-甲醇混合溶劑洗脫的洗 脫液經(jīng)回收有機溶劑,干燥,即為該提取物;或先用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲 醇,100:12,體積比)洗脫,繼用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:20,體積比) 洗脫,用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:20,體積比)洗脫的洗脫液經(jīng)回收 有機溶劑,干燥,即為該提取物。
2. 如權(quán)利要求1所述曼陀羅子提取物,其特征為,提取溶劑可以為甲醇、石油醚、水、丙 酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑或乙醇水混合溶劑,最優(yōu)條件為甲醇和95%乙醇。
3. 權(quán)利要求1所述曼陀羅子提取物,其特征為曼陀羅子經(jīng)溶劑超聲提取,提取液濃 縮后,用硅膠柱分離,上樣后的硅膠柱,先用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇, 100:0,體積比)洗脫,繼用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:3,體積比)洗脫, 用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:3,體積比)洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機溶 劑,干燥,即為該提取物;或先用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:12,體積 比)洗脫,繼用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:20,體積比)洗脫,用二氯甲 烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:20,體積比)洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機溶劑,干燥, 即為該提取物。
4. 如權(quán)利要求1-3任何一項所述的一種維吾爾藥曼陀羅子提取物,其特征為,用于洗 脫的二氯甲烷-甲醇混合溶劑的洗脫體積為2-50倍柱體積。
5. 如權(quán)利要求1、要求2所述提取物的制備方法,其特征為:曼陀羅子經(jīng)有機溶劑超聲 提取,提取液濃縮后,用硅膠柱分離,上樣后的硅膠柱,先用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯 甲烷-甲醇,100:0,體積比)洗脫2-50倍柱體積,繼用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲 烷-甲醇,100:3,體積比)洗脫2-50倍柱體積,用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲 醇,100:3,體積比)洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機溶劑,干燥,即為該提取物;以上條件最優(yōu)為先 用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:0,體積比)洗脫25倍柱體積,繼用二氯 甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:3,體積比)洗脫20倍柱體積;或曼陀羅子經(jīng)有 機溶劑超聲提取,提取液濃縮后,用硅膠柱分離,上樣后的硅膠柱,先用二氯甲烷-甲醇混 合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:12,體積比)洗脫2-50倍柱體積,繼用二氯甲烷-甲醇混合溶 劑(二氯甲烷-甲醇,100:20,體積比)洗脫2-50倍柱體積,用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二 氯甲烷-甲醇,100:20,體積比)洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機溶劑,干燥,即為該提取物;以上 條件最優(yōu)為先用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:12,體積比)洗脫15倍柱 體積,繼用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:20,體積比)洗脫25倍柱體積。
6. -種藥物組合物,其特征在于,包含權(quán)利要求1-5任何一項所述的提取物和藥學上 可接受的載體。
7. -種藥物制劑,其特征在于,包含權(quán)利要求1-5任何一項所述的提取物或權(quán)利要求6 所述的藥物組合物。
8. 權(quán)利要求1-5任何一項所述的曼陀羅子提取物或權(quán)利要求6所述的組合物或權(quán)利要 求7所述的藥物制劑在制備丁酰膽堿酯酶活性藥物中的應用。
9. 權(quán)利要求1所述曼陀羅子提取物,其特征為曼陀羅子提取物具備丁酰膽堿酯酶活 性,可用于治療阿爾茨海默?。ˋD)等方面的醫(yī)藥用途。
10. 如權(quán)利要求3曼陀羅子提取物組合物,其特征在于,用TLC法檢測;其色譜條件: GF254硅膠板,展開系統(tǒng):氯仿:乙酸乙酯:甲醇(6:1:1)顯色方法:香草醛-濃硫酸顯色。
11. 如權(quán)利要求4曼陀羅子提取物組合物,其特征在于,用TLC法檢測;其特征:色譜條 件:GF254硅膠板,展開系統(tǒng):氯仿:乙酸乙酯:甲醇(3:1:1)顯色方法:香草醛-濃硫酸顯色。
【專利摘要】本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種曼陀羅子丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物及其組合物的制備方法以及它在治療阿爾茨海默病(AD)等方面的醫(yī)藥用途。所述的提取物通過如下方法獲得:先用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:0,體積比)洗脫,繼用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:3,體積比)洗脫,用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:3,體積比)洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機溶劑,干燥,即為該丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物,或先用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:12,體積比)洗脫,繼用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:20,體積比)洗脫,用二氯甲烷-甲醇混合溶劑(二氯甲烷-甲醇,100:20,體積比)洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機溶劑,干燥,即為該丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物。
【IPC分類】A61P25-28, A61K36-81, G01N30-90
【公開號】CN104706809
【申請?zhí)枴緾N201510058784
【發(fā)明人】王金輝, 熱娜·卡斯木, 黃健, 李國玉, 李理, 王小青, 馬慶東, 張珂
【申請人】新疆醫(yī)科大學
【公開日】2015年6月17日
【申請日】2015年2月4日