一種胃、胰蛋白酶處理的歸芍地黃復(fù)合微生態(tài)口服液的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種胃、胰蛋白酶處理的歸芍地黃復(fù)合微生態(tài)口服液的制備方法，特 別涉及一種利用生物技術(shù)處理經(jīng)典歸芍地黃丸組方的方法，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 歸芍地黃丸是一種常用中成藥，是由補(bǔ)陰經(jīng)典代表方劑六味地黃丸（熟地黃山萸 肉山藥澤瀉牡丹皮和茯苓）加當(dāng)歸、白芍而成，歸芍地黃丸是以六味地黃丸為基礎(chǔ)的方劑， 滋補(bǔ)肝腎之陰，配以當(dāng)歸養(yǎng)血和血，活血調(diào)經(jīng)；白芍補(bǔ)血柔肝，諸藥配伍既能補(bǔ)腎陰，又能益 精血，對于肝腎不足、陰虧血虛所致之疾患極為適宜。
[0003] 但由于歸芍地黃丸屬甘溫性，偏于補(bǔ)陰的藥，主治肺腎陰虛，其配方中陰柔的藥多 一些，所以吃后有時候會妨礙消化的副作用，因此不僅脾胃功能弱、消化不良者慎吃，而且 長期服用會導(dǎo)致腹?jié)M、便溏、食欲不振等不適癥狀。
[0004] 中國專利文獻(xiàn)CN1365810A (申請?zhí)?1102108. X)公開了一種納米歸芍地黃制劑 藥物，其特征在于它是下述重量配比的納米原料制成的藥劑：納米當(dāng)歸30-60份、納米白芍 30-60份、納米熟地黃100-200份、納米山茱萸60-95份、納米牡丹皮40-80份、納米山藥 60-95份、納米茯苓40-80份、納米澤瀉40-80份，采用下述方法制成：選擇配方用中藥材炮 制加工成中藥飲片；置于提取罐中，加溶劑并導(dǎo)入微波萃取，使其以20-30億次/秒速度作 極性變化運動，其微波萃取的溫度為30--60°C，時間1-10小時；將上述萃取液進(jìn)行減壓濃 縮，溫度為30--60°C，時間為3-72小時，同時另收取中藥中揮發(fā)性物質(zhì)；將減壓濃縮液與可 揮發(fā)性物質(zhì)合并置于噴霧干燥塔，用超音射流技術(shù)，在30-60°C溫度，0至0. 05MPa壓力下， 以超音速速度瞬時射流干燥，其中超音速射流速度為330米-990米/秒，即制成納米中藥 飲片。上述專利中歸芍地黃丸妨礙消化的副作用并沒有減弱。
[0005] 雙歧桿菌Bifidobacterium是1899年由法國學(xué)者Tissier從母乳營養(yǎng)兒的糞便 中分離出的一種厭氧的革蘭氏陽性桿菌，末端常常分叉，故名雙歧桿菌。雙歧桿菌具有以下 治療效果：1、維護(hù)腸道正常細(xì)菌菌群平衡，抑制病原菌的生長，防止便秘，下痢和胃腸障礙 等；2、抗腫瘤；3、在腸道內(nèi)合成維生素、氨基酸和提高機(jī)體對鈣離子的吸收；4、降低血液中 膽固醇水平，防治高血壓；5、改善乳制品的耐乳糖性，提高消化率；6、增強(qiáng)人體免疫機(jī)能， 預(yù)防抗生素的副作用，抗衰老，延年益壽。
[0006] 植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum)是乳酸桿菌中的一種，常存在于發(fā)酵的 蔬菜和果汁中。植物乳桿菌作為人體胃腸道的益生菌群，具有維持腸道內(nèi)菌群平衡、提高機(jī) 體免疫力和促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)吸收等多種功能。植物乳桿菌在食品工業(yè)中應(yīng)用十分廣泛。由于 對食鹽、亞硝酸鹽具有良好的耐受性，對蛋白質(zhì)、脂肪無明顯直接的分解作用等特點，在發(fā) 酵肉制品中應(yīng)用很多。同時，也廣泛用于發(fā)酵植物性食品，此外利用植物乳桿菌還可以生產(chǎn) 共軛亞油酸。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種胃、胰蛋白酶處理的歸芍地黃復(fù)合微生態(tài) 口服液的制備方法。
[0008] 術(shù)語說明
[0009] 胃蛋白酶的活力單位（U):采用中國藥典1977年版制定的檢測方法檢測的活力單 位。
[0010] 胰蛋白酶的活力單位（U):采用中國藥典1990年版制定的檢測方法檢測的活力單 位。
[0011] 本發(fā)明技術(shù)方案如下：
[0012] 一種胃、胰蛋白酶處理的歸芍地黃復(fù)合微生態(tài)口服液的制備方法，步驟如下：
[0013] (1)將歸芍地黃丸原料中的八味原料藥經(jīng)粉碎后，制得原料粉末，然后按每百克原 料粉末加入200~600克水和煉蜜，混合均勻，制得原料漿液；
[0014] (2)向步驟（1)制得的原料漿液中加入酸調(diào)pH值為1.5~2. 2,按每百克歸芍地 黃丸原料加入20~60活力單位的胃蛋白酶，在溫度36~38°C，處理2~3小時，堿調(diào)pH 值為7. 8~8. 2,制得胃蛋白酶處理的漿液；
[0015] (3)向步驟（2)制得的胃蛋白酶處理的漿液中，按每百毫升加入20~50活力單位 的胰蛋白酶，在溫度36~38°C，處理2~3小時，酸調(diào)pH值至5. 5~6,制得胃、胰蛋白酶 處理的漿液；
[0016] (4)向步驟（3)制得的胃、胰蛋白酶處理的漿液中，按每百毫升接種0. 5~2g的經(jīng) 活化的雙歧桿菌和1. 5~3g的經(jīng)活化的植物乳桿菌，制得胃、胰蛋白酶處理的歸芍地黃復(fù) 合微生態(tài)口服液。
[0017] 根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述步驟（1)的歸芍地黃丸原料如下，均為重量份：
[0018] 當(dāng)歸30~60份、白芍30~60份、熟地黃80~320、制山茱萸40~160、牡丹皮 30~120、山藥40~160、茯苓30~120、澤瀉30~120、煉蜜7~22份。
[0019] 進(jìn)一步優(yōu)選的，所述步驟（1)的歸芍地黃丸原料如下，均為重量份：
[0020] 當(dāng)歸40份、白芍40份、熟地黃160份、制山茱萸(酒萸肉）80份、牡丹皮60份、山 藥80份、茯苓60份、澤瀉60份、煉蜜7~10份。
[0021] 進(jìn)一步優(yōu)選的，所述步驟（1)的歸芍地黃丸原料如下，均為重量份：
[0022] 當(dāng)歸40份、白芍40份、熟地黃160份、制山茱萸(酒萸肉）80份、牡丹皮60份、山 藥80份、茯苓60份、澤瀉60份、煉蜜16~22份。
[0023] 根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述步驟（2)、（3)中的酸為鹽酸。
[0024] 根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述步驟（1)的堿為碳酸鈉。
[0025] 根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述步驟（4)中經(jīng)活化的雙歧桿菌是指將雙歧桿菌接種于 TPY液體培養(yǎng)基中，在36~38°C培養(yǎng)至對數(shù)生長期的雙歧桿菌。
[0026] 根據(jù)本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的，所述TPY液體培養(yǎng)基每升組分如下：
[0027] 蛋白胨15. 0g、酵母粉2. 0g、葡萄糖20. 0g、可溶性淀粉0· 5g、氯化鈉5. Og、5wt°/〇 半胱氨酸溶液10.0 mL、西紅柿浸出液400.0 mL、吐溫80 I. 0g、肝提取液80.0 mL、蒸餾水 520.0 mL、pH7. 0。
[0028] 所述西紅柿浸出液的制備為本領(lǐng)域常規(guī)方法，步驟如下：
[0029] 將新鮮西紅柿洗凈稱重后切碎，加等量蒸餾水在KKTC水浴中加熱，攪拌90min， 然后用紗布過濾，調(diào)pH7. 0。
[0030] 所述肝提取液的制備為本領(lǐng)域常規(guī)方法，步驟如下：
[0031] 稱取新鮮豬肝l〇〇〇g，切成小塊或絞碎，加蒸餾水至2000mL，混勻，置冰箱中過夜， 第二天煮沸15min，紗布過濾并擠壓收集濾液，加水定容至2000mL。
[0032] 所述雙歧桿菌為腸道益生菌，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)需要進(jìn)行選擇，如中國 專利文獻(xiàn)CN 102946891A中的菌種保藏號為NCMB 41676的雙歧桿菌，中國專利文獻(xiàn)CN 101679938 A中的菌種保藏號為NCMB 41387的長雙歧桿菌等。
[0033] 根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述步驟（4)中經(jīng)活化的植物乳桿菌是指將植物乳桿菌接種 于MRS液體培養(yǎng)基中，在30~35°C培養(yǎng)至對數(shù)生長期的植物乳桿菌。
[0034] 根據(jù)本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的，所述所述MRS液體培養(yǎng)基每升組分如下：
[0035] 蛋白胨 lO.Og、牛肉膏 lO.Og、酵母膏 5.0g、檸檬酸氫二銨[(NH4)2HC6H50 7]2.0g、 葡萄糖（C6H12O6 · H2O) 20. 0g、吐溫 80 1.0 mL、乙酸鈉（CH3COONa · 3H20) 5. 0g、磷酸氫二鉀 (K2HPO4 · 3H20) 2. 0g、硫酸鎂（MgSO4 · 7H20) 0· 58g、硫酸錳（MnSO4 · H2O) 0· 25g、瓊脂 18. 0g、 蒸饋水定容至lOOOmL，pH 6· 2~6· 6。
[0036] 所述植物乳桿菌為腸道益生菌，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)需要進(jìn)行選擇，如中國 專利文獻(xiàn)CN 102597214Α中的菌種保藏號為KCTC 11403ΒΡ的植物乳桿菌CJLP133,中國專 利文獻(xiàn)CN 102597215Α中的菌種保藏號為KCTC 11401ΒΡ的植物乳桿菌CJLP55等。
[0037] 有益效果
[0038] 本發(fā)明通過將傳統(tǒng)歸芍地黃丸原料經(jīng)胃、胰蛋白酶分解處理，得到了副作用較小 的胃、胰蛋白酶處理的歸芍地黃復(fù)合微生態(tài)口服液，該品酸甜適口，且經(jīng)實際應(yīng)用，長期服 用該胃、胰蛋白酶處理的歸芍地黃復(fù)合微生態(tài)口服液不僅能夠達(dá)到服用歸芍地黃丸治療效 果，并且導(dǎo)致胃寒、阻礙消化的副作用也得到極大的降低。
【具體實施方式】
[0039] 下面結(jié)合實施例，對本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步說明，但本發(fā)明所保護(hù)范圍不限 于此。
[0040] 實施例中的TPY液體培養(yǎng)基每升組分如下：
[0041] 蛋白胨15. 0g、酵母粉2. 0g、葡萄糖20. 0g、可溶性淀粉0· 5g、氯化鈉5. Og、5wt°/〇 半胱氨酸溶液10.0 mL、西紅柿浸出液400.0 mL、吐溫80 I. 0g、肝提取液80.0 mL、蒸餾水 520.0 mL、pH7. 0 ;