以60KG計(jì)，平均用藥劑量為0.073g生藥/kg/日。按體重計(jì):小鼠(平均體重以20g計(jì))口服灌胃本發(fā)明的藥物制劑的耐受量為臨床用量的901倍。因此本發(fā)明實(shí)施例1的煎膏劑急性毒性低，臨床用藥安全。
[0063]應(yīng)用NIH小鼠40只，SPF級，雌雄各半，體重18?22g，進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)。小鼠隨機(jī)分為兩組，每組20只，即對照組和給藥組，實(shí)驗(yàn)前禁食12小時；將本發(fā)明的實(shí)施例5制備的膠囊劑，(濃度為6.58g生藥/ml，最高濃度)灌胃，灌胃容積為5ml/kg (即單次給藥劑量為32.9生藥/kg)，對照組給予等量生理鹽水，一天給藥2次，給藥間隔時間6小時，給藥后連續(xù)觀察14天，并記錄小鼠的的毒性反應(yīng)及死亡數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:與對照組比較，給藥后小鼠未見明顯差異，實(shí)驗(yàn)連續(xù)觀察14天，小鼠全身狀況、飲食、飲水、體重增長均正常。小鼠口服灌胃本發(fā)明的膠囊劑LD50>32.9生藥/kg，每日最大給藥量為65.8生藥/kg/日。本發(fā)明的藥物制劑臨床用藥量為4.4g生藥/日/人，成人體重以60KG計(jì)，平均用藥劑量為
0.073g生藥/kg/日。按體重計(jì):小鼠(平均體重以20g計(jì))口服灌胃本發(fā)明的藥物制劑的耐受量為臨床用量的901倍。因此本發(fā)明實(shí)施例5的膠囊劑急性毒性低，臨床用藥安全。
[0064]長期毒性實(shí)驗(yàn):
本發(fā)明實(shí)施例2的煎膏劑對小鼠按10.78,20.35和33.48g生藥/kg連續(xù)用藥16周(1.0ml/100g體重，每天2次)及停藥4周后，結(jié)果表明:本發(fā)明藥物制劑對小鼠的毛發(fā)、行為、大小便、體重、臟器重量、血象、肝腎功能、血糖、血脂等指標(biāo)均無明顯影響，臟器肉眼沒有發(fā)現(xiàn)異樣變化和組織學(xué)檢查結(jié)果表明，用藥16周及停藥4周后，小鼠各臟器均無明顯改變。說明本發(fā)明實(shí)施例2的煎膏劑對小鼠長期用藥后毒性小，停藥后也沒有異樣反應(yīng)，應(yīng)用安全。
[0065]本發(fā)明實(shí)施例3的煎膏劑對小鼠按10.78、20.35和33.48g生藥/kg連續(xù)用藥16周(1.0ml/100g體重，每天2次)及停藥4周后，結(jié)果表明:本發(fā)明藥物制劑對小鼠的毛發(fā)、行為、大小便、體重、臟器重量、血象、肝腎功能、血糖、血脂等指標(biāo)均無明顯影響，臟器肉眼沒有發(fā)現(xiàn)異樣變化和組織學(xué)檢查結(jié)果表明，用藥16周及停藥4周后，小鼠各臟器均無明顯改變。說明本發(fā)明實(shí)施例3的煎膏劑對小鼠長期用藥后毒性小，停藥后也沒有異樣反應(yīng)，應(yīng)用安全。
[0066]本發(fā)明實(shí)施例4的煎膏劑對小鼠按10.78、20.35和33.48g生藥/kg連續(xù)用藥16周(1.0ml/100g體重，每天2次)及停藥4周后，結(jié)果表明:本發(fā)明藥物制劑對小鼠的毛發(fā)、行為、大小便、體重、臟器重量、血象、肝腎功能、血糖、血脂等指標(biāo)均無明顯影響，臟器肉眼沒有發(fā)現(xiàn)異樣變化和組織學(xué)檢查結(jié)果表明，用藥16周及停藥4周后，小鼠各臟器均無明顯改變。說明本發(fā)明實(shí)施例4的煎膏劑對小鼠長期用藥后毒性小，停藥后也沒有異樣反應(yīng)，應(yīng)用安全。
[0067]急性皮膚刺激試驗(yàn):
該品依據(jù)衛(wèi)生部《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》(2002)第二部分“皮膚刺激性/腐蝕性試驗(yàn)”中6.3節(jié)，日本大耳白兔雄性4只，體重2kg?3kg，將本發(fā)明的實(shí)施例6制備的擦劑直接擦在動物左側(cè)皮膚上(另一側(cè)作為對照)，采用封閉試驗(yàn)，敷用時間4小時，試驗(yàn)結(jié)束后用溫水沖洗殘留受試物，于除去受試物后lh、24h、48h和72h分別觀察動物受試區(qū)和對照區(qū)的皮膚反應(yīng)，最高積分均值為“0”，判斷該品對動物皮膚無刺激性。
[0068]過敏試驗(yàn):
取健康白色豚鼠18只，體重250-300g，雌雄兼用，試驗(yàn)前剔除兩側(cè)背毛，每側(cè)3X3cm，隨機(jī)分為試驗(yàn)組、空白對照組(基質(zhì))和陽性對照組。陽性對照組用2，4_ 二硝基氯苯，致敏用I %濃度，激發(fā)用0.1%濃度；試驗(yàn)組用本發(fā)明實(shí)施例6的擦劑。取本發(fā)明實(shí)施例6的擦劑0.1g涂于背部去毛區(qū)，隔日I次，共3次。于末次接觸后14天，在背部同一區(qū)域涂抹本品0.lg, 6h后去除藥品后即刻觀察，并于24、48、72h觀察有無過敏反應(yīng)。空白對照組和陽性對照組用同法激發(fā)接觸和觀察。試驗(yàn)結(jié)果:陽性對照組動物皮膚在致敏I小時后即出現(xiàn)局限性紅斑和輕微水腫，24小時過敏反應(yīng)癥狀加重，并有硬結(jié)形成，致敏率為100%，試驗(yàn)組和空白對照組動物皮膚均未出現(xiàn)任何過敏反應(yīng)癥狀，致敏率為0%。
[0069]診斷標(biāo)準(zhǔn)
根據(jù)中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會皮膚性病專業(yè)委員會色素病學(xué)組制定的《黃褐斑的臨床診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》(2003年修定稿)制定:
1、面部淡褐色至深褐色、界限清楚的斑片，通常對稱性分布，無炎癥表現(xiàn)及鱗屑；
2、無明顯自覺癥狀；
3、女性多發(fā)，主要發(fā)生在青春期后；
4、病情可有季節(jié)性，常夏重冬輕；
5、排除其他疾病，如顴部褐青色痣、Riehl黑變病及色素性光化性扁平苔蘚等引起的色素沉著；
6、色素沿著區(qū)域平均光密度值大于自身面部平均光密度值的20%以上。
[0070]凡符合上述臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)確診為黃褐斑。
[0071]療效評定標(biāo)準(zhǔn):
療效判定參照中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會皮膚性病專業(yè)委員會色素病學(xué)組制定的《黃褐斑的臨床診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》(2003年修定稿)，根據(jù)色斑面積、積分下降指數(shù)將臨床療效分為基本治愈、顯效、好轉(zhuǎn)、無效四級。
[0072]基本治愈:肉眼觀察色斑面積消減大于90%以上，顏色基本消失，治療后下降指數(shù)彡0.8; 顯效:肉眼觀察色斑面積消減大于60%，顏色明顯變淡，治療后下降指數(shù)>0.5; 好轉(zhuǎn):肉眼觀察色斑面積消減大于30%，顏色變淡，治療后下降指數(shù)>0.3;
無效:肉眼觀察色斑面積消減小于30%，顏色變化不明顯，治療后下降指數(shù)〈0.3。
[0073]下降指數(shù)計(jì)算方法:下降指數(shù)=(治療前總積分/治療后總積分)/治療前總積分。
[0074]有效率計(jì)算方法:有效率=[(基本治愈+顯效)/總例數(shù)]*100%。
[0075]本發(fā)明煎膏劑患者口服，每日兩次，每次20ml，服用四周為一療程。
[0076]本發(fā)明膠囊劑患者口服，每日兩次，每次3粒，服用四周為一療程。
[0077]本發(fā)明擦劑患者外擦患處，每日兩次，使用四周為一療程。
[0078]典型病例I
患者王某，女，57歲，已婚已育，顏面部黃褐斑3年逐漸加重，經(jīng)發(fā)明人提供，服用按照本發(fā)明實(shí)施例1制得的煎膏劑治療黃褐斑的藥物，并按照每天兩次，一次20ml的劑量服用，連續(xù)服用一個療程后顯效，又堅(jiān)持連續(xù)服用二個療程后治愈，并囑患者低鹽低脂清淡飲食，調(diào)暢情志，注意防曬，至今未復(fù)發(fā)，患者反應(yīng)良好，無副作用。
[0079]典型病例2
患者李某，女，44歲，已婚已育，顏面部黃褐斑7年伴心煩，焦慮，乏力，多汗，經(jīng)發(fā)明人提供，服用按照本發(fā)明實(shí)施例2制得的煎膏劑治療黃褐斑的藥物，并按照每天兩次，一次20ml的劑量服用，連續(xù)服用一個療程后治愈，并囑患者低鹽低脂清淡飲食，注意防曬，調(diào)暢情志，至今未復(fù)發(fā)，患者反應(yīng)良好，無副作用。
[0080]典型病例3
患者王某，女，27歲，未婚未育，顏面部黃褐斑2年逐漸加重，經(jīng)發(fā)明人提供，服用按照本發(fā)明實(shí)施例3制得的煎膏劑治療黃褐斑的藥物，并按照每天兩次，一次20ml的劑量服用，連續(xù)服用二個療程后治愈，并囑患者低鹽低脂清淡飲食，調(diào)暢情志，注意防曬，至今未復(fù)發(fā)，患者反應(yīng)良好，無副作用。
[0081]典型病例4
患者董某，女，52歲，已婚已育，顏面部黃褐斑6年逐漸加重，經(jīng)發(fā)明人提供，服用按照本發(fā)明實(shí)施例4制得的煎膏劑治療黃褐斑的藥物，并按照每天兩次，一次20ml的劑量服用，連續(xù)服用一個療程后治愈，并囑患者低鹽低脂清淡飲食，調(diào)暢情志，注意防曬，至今未復(fù)發(fā)，患者反應(yīng)良好，無副作用。
[0082]典型病例5
患者鄭某，女，32歲，已婚未育，顏面部黃褐斑6個月伴乳房脹痛，月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)發(fā)明人提供，服用按照本發(fā)明實(shí)施例5制得的膠囊劑治療黃褐斑的藥物，并按照每天兩次，一次3粒的劑量服用，連續(xù)服用一個療程后治愈，并囑患者低鹽低脂清淡飲食，調(diào)暢情志，注意防曬，至今未復(fù)發(fā)，患者反應(yīng)良好，無副作用。
[0083]典型病例6
患者齊某，女，30歲，已婚已育，顏