專利名稱：N－(2－芳基－丙?；?－磺胺類化合物及其藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及N-(2-芳基-丙酰基)-磺胺類化合物及其藥物組合物，該組合物可用于預(yù)防和治療多形核嗜中性白細(xì)胞(PMN白細(xì)胞)在炎癥部位惡性聚集所致的組織損傷。
趨化性是一種細(xì)胞反應(yīng)，它引起特定血細(xì)胞(巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞、多形核嗜中性白細(xì)胞)隨著化學(xué)刺激(趨化因子)順刺激劑的濃度梯度方向遷移。最具有代表性的趨化因子是補(bǔ)體剪切產(chǎn)物C5a，細(xì)菌表面裂解產(chǎn)生或合成的N-甲酰肽，例如甲?；?甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸(f-MLP)，最重要的是稱為白介素IL-8的一類細(xì)胞因子。白介素IL-8是大多數(shù)有核細(xì)胞(成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞)接觸TNF-α(腫瘤壞死因子)、白介素IL-1α和IL-1β和細(xì)菌細(xì)胞壁的脂多糖(LPS)時(shí)產(chǎn)生，或嗜中性白細(xì)胞本子在LPS和細(xì)菌N-甲酰肽(fMPL樣肽)作用下產(chǎn)生的一種內(nèi)源性趨化因子。這一趨化因子[又稱嗜中性白細(xì)胞活化因子(NAF)、T細(xì)胞趨化因子、單核細(xì)胞源嗜中性白細(xì)胞趨化因子(MDNCF)]控制著一系列與IL-8受體結(jié)合的IL-8樣趨化因子[GROα、β、γ和NAP-2](Chang等，免疫學(xué)雜志148:451,1992)。
在趨化因子的作用下，嗜中性白細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變，使它們傾向于遷移和活化，最后發(fā)生脫粒、耗氧，并產(chǎn)生氧自由基。
所有這些作用在嗜中性白細(xì)胞接觸趨化因子后的數(shù)秒內(nèi)發(fā)生，其生物化學(xué)特征在于胞內(nèi)Ca2+離子、Na+離子和c-AMP水平瞬間升高，細(xì)胞膜電勢(shì)因而改變。趨化因子誘導(dǎo)[Ca2+]i升高后，G蛋白、磷脂酶C、A2和花生四烯酸級(jí)聯(lián)被活化，并形成環(huán)加氧酶和脂氧合酶產(chǎn)物(L.Harvath的“嗜中性白細(xì)胞趨化性調(diào)節(jié)”，醫(yī)學(xué)化學(xué)報(bào)道年報(bào)，ps.233-235,Vol.24,1992和該論文所引用的文獻(xiàn))。嗜中性白細(xì)胞是抵擋細(xì)菌感染的第一道防線，因?yàn)樗鼈儠?huì)從外周血流通過內(nèi)皮細(xì)胞界和組織基質(zhì)向感染部位迅速遷移，在此發(fā)揮其特殊的作用，例如破壞微生物、清除被損傷細(xì)胞和促進(jìn)組織修復(fù)(M.A.Goucerot-Podicalo等，病理學(xué)和生物學(xué)(巴黎)44,36,1996)。
在以嗜中性白細(xì)胞惡性聚集為特征的特定病理情況下，以上有益的聚集作用被組織損傷的進(jìn)一步惡化所抵消，這種惡化延緩愈創(chuàng)過程，最嚴(yán)重時(shí)，可能導(dǎo)致患者死亡。
最近，有重要而可信的證據(jù)支持以下假設(shè)局部缺血和重充血損傷，以及氧過多性肺損傷與存在活化嗜中性白細(xì)胞有關(guān)，而細(xì)胞損害則是這一作用的直接后果。實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蚚N.Sekido等，自然365,654,1993和T.Matsumoto等，實(shí)驗(yàn)室研究77,119,1997]和人臨床病理學(xué)報(bào)道[A.Mazzone等，最新醫(yī)學(xué)發(fā)展85,397,1994；T.C.Fisher和H.J.Meiselmann，凝血研究74(增刊1),S21-S34,1994；G.Ricevuti等，動(dòng)脈硬化91,1,1991]證實(shí)了這一點(diǎn)，其中，細(xì)胞損傷與PMN白細(xì)胞浸潤(rùn)的程度和范圍直接、嚴(yán)格相關(guān)，IL-8細(xì)胞因子則越來越被認(rèn)為是這種浸潤(rùn)的最具特異性和最強(qiáng)的活化劑。在這些情況的致病過程中，在諸如C5a、PAF、LTB4等激活嗜中性白細(xì)胞的各種趨化因子(它們參與嗜中性白細(xì)胞的直接遷移)之外，IL-8也具有重要作用它由單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，而這種產(chǎn)生能通過產(chǎn)生前新IL-8和附近非免疫細(xì)胞對(duì)其產(chǎn)生的誘導(dǎo)而介導(dǎo)其他炎性細(xì)胞遷移[A.P.Metiko等，臨床研究雜志90,791,1992]。
在急性呼吸機(jī)能不全(ARDS)患者中，空間和肺液內(nèi)嗜中性白細(xì)胞的惡性存在(疾病的特征之一)與細(xì)胞因子的高濃度顯著相關(guān)。另一方面，患者肺水腫液內(nèi)NAP-1/IL-8的濃度與誘導(dǎo)嗜中性白細(xì)胞趨化性所需的最佳濃度相符(E.J.Miller等，呼吸疾病評(píng)論146,437,1992)；最后，死亡率與肺泡液內(nèi)的高濃度IL-8之間存在著密切的關(guān)聯(lián)(A.Kurdowska等，免疫學(xué)雜志157,2699,1996)。
在這場(chǎng)爭(zhēng)論中，特別重要的是用抗IL-8抗體所得的結(jié)果，該抗體能夠在急性呼吸機(jī)能不全和管內(nèi)滴注熱滅活釀膿鏈球菌(OK-432)引起內(nèi)毒素血癥肺損傷的模型中中和細(xì)胞因子的作用(K.Yokoi等，實(shí)驗(yàn)室研究76,376,1997)。
急性心肌梗塞患者在發(fā)作后24小時(shí)內(nèi)表現(xiàn)出血清IL-8顯著升高(13-1100ng/L)。這一升高將在心肌細(xì)胞損傷的發(fā)展中起極其重要的作用，因?yàn)樵摷?xì)胞因子對(duì)嗜中性白細(xì)胞及其在組織損傷中的作用具有很強(qiáng)的刺激力(Y.Abe等，心臟病雜志70,132,1993)，在臨床局部缺血情況發(fā)展中，這種作用更多地取決于重充血過程而不是缺血持續(xù)時(shí)間。
最近在一個(gè)重充血模型中證明，在兔腦內(nèi)點(diǎn)局部缺血后，用抗IL-8抗體治療能減輕腦水腫和縮小損傷面積(T.Matsumoto等，實(shí)驗(yàn)室研究，77,119,1997)。該模型中觀察到的腦組織內(nèi)IL-8顯著升高證明灌注組織內(nèi)IL-8的局部產(chǎn)生及其在血管壁內(nèi)活化嗜中性白細(xì)胞內(nèi)的存在共同決定組織損傷的程度。
嗜中性白細(xì)胞與趨化劑之間的受體相互作用對(duì)于趨化性來說是決定性的；IL-8通過兩種人嗜中性白細(xì)胞上和部分T細(xì)胞上的不同受體(CXCR1和CXCR2)參與這一作用(L.Xu等，白細(xì)胞生物學(xué)雜志57,335,1995)。N-(2-羥基-4-硝基苯基)-N＇-(2-溴-苯基)脲選擇性地抑制IL-8與嗜中性白細(xì)胞表面受體CXCR2結(jié)合，IC50為22nM，可證明這一點(diǎn)(J.R.White等，生物化學(xué)雜志273,10095,1998)。結(jié)果，IL-8(1nM)和GROα(10nM)激發(fā)的人嗜中性白細(xì)胞趨化性受到IC50相似(20-60nM)地抑制[補(bǔ)體C5a激發(fā)的趨化性的IC50則為50-330nM]，但并不抑制相同人嗜中性白細(xì)胞內(nèi)IL-8或最佳濃度LTB4誘導(dǎo)的Ca2+i動(dòng)員。
最近(1998年2月28日)的WO98/07418提出了將苯基脲用于治療白介素8(IL-8)介導(dǎo)的病理的專利。
在研究評(píng)價(jià)酮洛芬(S)和(R)對(duì)映體對(duì)于其外消旋體消炎活性的貢獻(xiàn)，以及它們?cè)诩?xì)胞因子調(diào)節(jié)中的作用時(shí)(P.Ghezzi等，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)和治療學(xué)雜志，1999，在印)，出人意料地發(fā)現(xiàn)，具有手性和非手性有機(jī)堿(organic bases)的單對(duì)映體的鹽劑量依賴性性地抑制IL-8在PMN白細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)的Ca2+胞內(nèi)濃度升高([Ca2+]i(本申請(qǐng)人在意大利的專利申請(qǐng)n°MI98A000146(28.01.1998)。用La(鑭)離子進(jìn)行的競(jìng)爭(zhēng)研究證明這些鹽對(duì)于嗜中性白細(xì)胞IL-8應(yīng)答的抑制作用既不是受體相互作用的結(jié)果也不是IL-8受體表達(dá)受阻的結(jié)果，而是選擇性抑制Ca2+作用的結(jié)果，這種抑制的程度足以阻止細(xì)胞因子激活嗜中性白細(xì)胞特有的一系列反應(yīng)嗜中性白細(xì)胞趨化性和脫粒(同時(shí)釋放出彈性酶、組織蛋白酶等酶)。而且，單對(duì)映體還抑制C5a和fMLP誘導(dǎo)的趨化性和[Ca2+]i升高，雖然效率略低。
這兩種單對(duì)映體的主要區(qū)別在于(R)對(duì)映體作為CO酶抑制劑的效力較低(低約10-100倍)。
所以，與(S)對(duì)映體相比，(R)對(duì)映體的PG合成抑制活力較低，PG則具有抑制和控制放大(例如)嗜中性白細(xì)胞促炎作用的TNF-α等細(xì)胞因子釋放的作用。因此，在嗜中性白細(xì)胞依賴性病理和炎癥，例如牛皮癬、原發(fā)性肺纖維變性、急性呼吸機(jī)能不全、重充血損傷和血管球性腎炎等的治療中，(S)對(duì)映體的治療性作用較低。
現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)，2-芳基-丙酸的N-?；?磺胺類化合物是IL-8誘導(dǎo)的嗜中性白細(xì)胞趨化性和脫粒有效的抑制劑。如W.H.Pirke和J.Mc Cune(層析法469,67,1989)所述，R(2)-[(4-異丁基)苯基]丙酰胺也具有類似的特性。所以，本發(fā)明也涉及它在治療嗜中性白細(xì)胞依賴性病理中的用途。
更具體地說，本發(fā)明涉及以下通式(1)所示的新N-(2-芳基-丙?；?-磺胺類化合物 其中，R2是芳基；R是直鏈或分支C1-16烷基，三氟甲基，環(huán)己基，鄰甲苯基，3-吡啶基，2-吡啶基乙基，對(duì)氰基苯基甲基，對(duì)氨基苯基甲基，3-氰基-1-丙基，4-氨基丁基，烷氧基亞乙基CH3-(CH2)ni-(OCH2CH2)mi-，其中ni是0或1,mi是整數(shù)1-3，或是P1P2N-CH2-CH2-，其中P1和P2各自是H、C1-3烷基，芐氧基羰基α-、β-或γ-吡啶基羰基，羧基羰基或烷酯基羰基，P1和P2或者與相連的N原子構(gòu)成苯二甲酰亞氨基、哌啶子基、嗎啉代基；R＇是H或直鏈或分支C1-3烷基，以H為佳。
“芳基”以可被1-3個(gè)相同或不同取代基取代的苯基為佳，這些取代基選自H,C1-4烷基，C1-4烷氧基，羥基，C1-7酸基，氰基，硝基，氨基，C1-3?；被?，鹵代C1-3烷基，鹵代C1-3烷氧基，苯甲酰基，或如異布洛芬、酮洛芬、萘普生、舒洛芬、卡洛芬、吡洛芬、芬洛芬等已知消炎性2-芳基丙酸的芳基部分。
較好的2-芳基丙酸的芳基是4-異丁基苯基，3-苯甲?；交?，5-苯甲酰基-2-乙酸基苯基，3-苯氧基苯基，5-苯甲酰基噻吩-2-基，4-噻吩甲?；?thienoyl)苯基，1-氧-2-異二氫氮雜茚基苯基，3-氯-4-(2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)苯基，6-甲氧基-β-萘基，5-苯甲酰基-2-苯硫基，1-羥基苯基，或以下通式所示的基團(tuán) 其中，A是芐基、苯甲?；騈-羥基-芐亞胺、1-羥基苯基-1-甲基，B是H、羥基、C1-3酸基或氨基。
R2以上述已知消炎性2-芳基丙酸的芳基為佳。
特別優(yōu)選的PR2是4-(2-甲基丙基)-苯基，3-苯氧基-苯基，2-[4-(1-氧-2-異二氫氮雜茚基)苯基]，5-苯甲酰基噻吩-2-基，4-噻吩甲?；交?br> 優(yōu)選的C1-3酸基是乙?；?；優(yōu)選的直鏈或分支C1-16烷基是甲基、己基、十二烷基和十六烷基；優(yōu)選的C1-3烷基是甲基。
本發(fā)明中最為優(yōu)選的通式(1)所示化合物是甲基為R構(gòu)型的那些。
本發(fā)明化合物可用已知方法制得，例如等分子量的通式(2)酸 其中，R2＇與R2相同，或是可通過去保護(hù)轉(zhuǎn)化為R2的基團(tuán)，與通式(3)磺酰胺 其中，R和R＇與前文所述的相同，在惰性溶劑中，在等分子量和/或略過量的碳二亞胺(例如二環(huán)己基碳二亞胺)、可溶性碳二亞胺(例如鹽酸N-(3-二甲基-氨基-丙基)-N＇-乙基碳二亞胺)或1,1＇-羰基二咪唑等縮合劑和選自三乙基胺、4-(N,N-二甲基氨基)-吡啶、1,8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一-7-烯和1,5-二氮雜二環(huán)[4.3.0]壬-5-烯的抗衡堿存在下反應(yīng)生成。
或者，同樣有效的另一過程包括通式(3)所示的磺胺陰離子 其中，R如前述，與通式(2)酸的適當(dāng)反應(yīng)性形式在惰性溶劑中反應(yīng)；更具體地說，在制備本發(fā)明手性N-酰基磺胺類化合物的過程中，通式(2)酸的氯化物是最佳反應(yīng)形式，不會(huì)發(fā)生在通式(4)磺酰氯與通式(5)酰胺陰離子反應(yīng)中可能發(fā)生的部分外消旋作用 當(dāng)以上過程所得化合物中的R2＇是苯甲?；鶗r(shí)，所述苯甲?；赏ㄟ^已知的肟化反應(yīng)或在合適催化劑存在下吸收1到2當(dāng)量氫而發(fā)生的羰基還原成醇成烷(芐基)的反應(yīng)，形成另一種不同的通式(1)化合物。
通式(1)所示化合物的N-?；前被且粋€(gè)酸性足以與L-賴氨酸、L-精氨酸、三羧甲基氨甲烷或手性胺(例如麻黃堿、弱金雞納堿、金雞納啶等)等強(qiáng)堿和中強(qiáng)堿形成加成鹽的基團(tuán)，因而能夠?qū)⒃摶前坊衔锕鈱W(xué)拆分成(R)和(S)對(duì)映體?？捎萌芜x手性載體進(jìn)行的TLC或多種柱層析等各種層析技術(shù)(參見W.H.Pirkle和J.McCune的前述論文)純化和分離單對(duì)映體和非對(duì)映體，并用R-(-)-2-[(4＇-異丁基)苯基]丙酰胺作為標(biāo)準(zhǔn)參照物評(píng)定其光學(xué)純度。
烷基磺酸、芳基磺酸和雜芳基磺酸的氯化物，以及它們的酰胺是已知化合物，可以購(gòu)得或方便地制得。所以，例如在將通式為CH3-(CH2)ni-(OCH2CH2)mi-OH(其中ni和mi如前所述)的聚氧乙烯醇轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的甲苯磺酸酯或鹵化物(X=Cl,Br或I)后，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物與過量硫脲反應(yīng)，可生成相應(yīng)的異硫脲鎓鹽CH3-(CH2)ni-(OCH2CH2)mi-S-(C=NH)-NH2·HX，該產(chǎn)物再通過室溫下的氯化直接轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的磺酰氯CH3-(CH2)ni-(OCH2CH2)mi-SO2Cl，然后轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的磺酰胺(J.M.Sprague和T.B.Johnson，美國(guó)化學(xué)協(xié)會(huì)雜志59,1837,1937)。
通式為P1P2-N-CH2-CH2-SO2NH2的2-烷基-氨基乙磺酰胺是已知的化合物，或者可用已知方法方便地制得，其中，P1和P2是C1-3烷基，或者如前所述，P1和P2與相連的N原子形成環(huán)。有關(guān)氨基乙磺酰胺的合成，參見例如Miller等在化學(xué)協(xié)會(huì)雜志75,1941中所述；A.Le Berre和C.Porte(Bull.Soc.Chim(法國(guó))Ⅱ-602,1978)揭示了一種在乙烯-磺酰胺[CH2=CH-SO2NH2]中加入仲胺(二甲基胺、哌啶和嗎啉)的方法，作為制備2-二烷基氨基乙磺酰胺的一般方法，乙烯-磺酰胺的合成可參見A.S.Matlack，有機(jī)化學(xué)雜志23,729,1958，以及該論文所引用的文獻(xiàn)所述。
通式(3)磺酰胺和通式(4)磺酰氯是已知的化合物，或者可用熟知的方法制得。
通式(2)所示的2-芳基丙酸是熟知用作鎮(zhèn)痛和消炎藥的化合物。已知許多它(包括其單對(duì)映體和外消旋體)的制備方法。已知許多光學(xué)拆分外消旋體的有效方法。對(duì)映體選擇性合成主要涉及芳基丙酸(S)對(duì)映體的合成，但通過適當(dāng)選擇反應(yīng)試劑(手性助劑)，也可改用于獲得(R)對(duì)映體參見，例如，用烷基芳基酮作為基質(zhì)合成α-芳基烷酸，參見B.M.Trost和J.H.Rigby，有機(jī)化學(xué)雜志14,2936,1978；有關(guān)Meldrum酸的α-芳基化，參見J.T.Piney和B.A.Rowe,Tetrah.lett.,21,965,1980；有關(guān)酒石酸作為手性助劑的用途，參見G.Castaldi等，有機(jī)化學(xué)雜志52,3018,1987；有關(guān)α-羥基酯作為手性助劑的用途，參見R.D.Larsen等，美國(guó)化學(xué)協(xié)會(huì)雜志111,7650,1989和美國(guó)專利4,940,813以及其中引用的文獻(xiàn)。
更具體地說，其中R2為3-苯甲?；?2-羥基-苯基或3-苯甲?；?2-氨基苯基的通式(2)所示芳基酸是已知化合物；其制備方法可參見本申請(qǐng)人的意大利專利1,283,649(23.04.1998)。
本發(fā)明化合物的具體例子是R(-)-N-2-[(4-異丁基苯基)-丙?；鵠-甲磺酰胺及其L(+)-賴氨酸鹽；R(-)-N-2-[(3-苯甲?；交?-丙?；鵠-甲磺酰胺；R(-)-N-(2-[3-(1ξ-羥基-1ξ-苯基)甲基]-丙?；?-甲磺酰胺；R(-)-N-甲基，N-2-[(4-異丁基苯基)-丙酰基]-甲磺酰胺；R(-)-N-[2-(3-芐基苯基)丙酰基]-甲磺酰胺；(±)N-[2-(5＇-苯甲酰基-2＇-乙酸基苯基)-丙?；鵠-甲磺酰胺；鹽酸R(-)-N-2-[(4-異丁基苯基)-丙?；鵠-2-氨基乙基磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基苯基)-丙?；?2-苯二甲酰亞氨基乙磺酰胺；R(-)-N-[2-(3-苯甲?；交?-丙?；鵠，N＇-芐酯基氨基乙磺酰胺；R(-)-N-[2-(3-苯氧基苯基)-丙?；鵠，N＇-芐酯基氨基乙磺酰胺；R(-)-N-[2-[4-(1-氧-2-異二氫氮雜茚基)苯基]丙?；鵠，N＇-芐酯基氨基乙磺酰胺；N-[2-(5-苯甲?；?噻吩-2-基)-丙?；鵠-(2-芐酯基氨基)-乙磺酰胺；N-[2-(4-噻吩甲酰基-苯基)丙?；鵠-(2-芐酯基氨基)-乙磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基苯基)-丙酰基]-(2-芐酯基氨基)-乙磺酰胺；R(-)-N-[2-(3-苯甲酰基苯基)-丙?；鵠-(2-氨基)-乙磺酰胺；R(-)-N-[2-(3-苯氧基苯基)-丙?；鵠-(2-氨基)-乙磺酰胺；N-[2-(5-苯甲?；?噻吩-2-基)-丙酰基]-(2-氨基)-乙磺酰胺；N-[2-(4-噻吩甲?；?苯基)丙?；鵠-(2-氨基)-乙磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基苯基)-丙酰基]-環(huán)己基磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基苯基)-丙酰基]-十二烷基磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基苯基)-丙?；鵠-對(duì)氰基苯基甲磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基苯基)-丙?；鵠-3-氰基-1-丙磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基苯基)-丙?；鵠-2-甲氧基乙磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基苯基)-丙?；鵠-3,6-二噁-庚基磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基苯基)-丙?；鵠-3,6-二噁-辛基磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基苯基)-丙?；鵠-3,6,9-三噁-癸基磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基苯基)-丙?；鵠-3,6,9-三噁-十一烷基磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基苯基)-丙?；鵠-環(huán)己基磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基苯基)-丙?；鵠-十二烷基磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基苯基)-丙?；鵠-對(duì)氰基苯基甲磺酰胺；
R(-)-N-[2-(4-異丁基苯基)-丙?；鵠-3-氰基-1-丙磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基苯基)-丙?；鵠-2-甲氧基乙磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基苯基)-丙?；鵠-3,6-二噁-庚基磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基苯基)-丙?；鵠-3,6-二噁-辛基磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基苯基)-丙?；鵠-3,6,9-三噁-癸基磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基苯基)-丙?；鵠-3,6,9-三噁-十一烷基磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基苯基)-丙?；鵠-2-二甲基氨基乙基磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基苯基)-丙?；鵠-2-(哌啶-1-基)-乙基磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基苯基)-丙酰基]-2-(嗎啉-4-基)-乙基磺酰胺。
用葡聚糖進(jìn)行肝素化健康供血者血液沉降，用如此制得的PMN細(xì)胞研究本發(fā)明的化合物；用Ficoll/Hypaque去除單核細(xì)胞，通過低滲溶液處理去除紅細(xì)胞。用Turk和臺(tái)盼藍(lán)排除法計(jì)算PMN白細(xì)胞的細(xì)胞活力，在用Diff Quinck染色后計(jì)算細(xì)胞離心產(chǎn)物中的PM細(xì)胞核百分比(W.J.Ming等，免疫學(xué)雜志138,1469,1987)。
在后文所述的各“體外”試驗(yàn)中，PMN與本發(fā)明化合物都在37℃一起培養(yǎng)10分鐘。
在趨化性試驗(yàn)以及評(píng)價(jià)Ca2+離子胞質(zhì)溶膠水平的試驗(yàn)中，用人重組IL-8(Pepro Tech.)作為刺激劑將凍干蛋白質(zhì)溶解在HBSS(Hank＇s平衡鹽溶液)中達(dá)100ng/ml濃度，以HBSS稀釋至10ng/ml用于趨化性試驗(yàn)，稀釋至25-50ng/ml用于評(píng)價(jià)[Ca2+]i細(xì)胞修飾的試驗(yàn)。
在趨化性試驗(yàn)(按照W.Falket等，免疫學(xué)方法雜志33,239,1980)中采用5mm孔徑的PVP濾膜和適合進(jìn)行48份相同試驗(yàn)的樹脂玻璃顯微照相機(jī)。顯微照相機(jī)有一片48孔的樹脂玻璃片，各孔容量為25μl，配有一塊48孔的蓋玻片，這樣，蓋上蓋玻片并旋緊后即在顯微照相機(jī)內(nèi)形成50μl的上部空間。
在含有PMN懸浮液的上部和下部的孔內(nèi)加入相同濃度的被測(cè)化合物，上部孔內(nèi)含有PMN懸浮液，下部孔內(nèi)含有載體，其中加有或沒有IL-8(或其他刺激劑)。
例如，10-6-10-11M濃度的R(-)-N-2-[(4-異丁基苯基)-丙?；鵠-甲磺酰胺(DF1681)，劑量依賴性地抑制IL-8(10ng/ml)誘導(dǎo)的趨化性。結(jié)果表示為遷移PMN的數(shù)量，是3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值±S.D.，參見

圖1中的柱狀圖。
(S)(+)-N-2-[(4-異丁基苯基)-丙?；鵠-甲磺酰胺和R(-)-N-2-[(4-異丁基苯基)-丙酰基]-甲磺酰胺的IC50為10-7-10-8M。
圖2中的結(jié)果證實(shí)本發(fā)明化合物選擇性地抑制IL-8誘導(dǎo)的趨化性，而不抑制C5a(10-9)或f-MLP(10-8)誘導(dǎo)的趨化性，至少10-6-10-7M濃度的DF1681是如此[結(jié)果表示為遷移PMN的數(shù)量，是3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值±S.D.]。
按照C.Bizzarri等(血液86,2388,1995)所述的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜏y(cè)定胞質(zhì)溶膠[Ca2+]i變化用貼附有PMN的玻片，加入1μMfura-2AM來實(shí)時(shí)測(cè)定[Ca2+]i的變化。將PNM細(xì)胞離心產(chǎn)物重懸在含5％FCS(胎牛血清)的RPMI1640培養(yǎng)液中達(dá)3×106個(gè)細(xì)胞/ml，然后(平板)接種到25mm直徑的圓形玻片上，將其在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)放置30分鐘。用BBS(平衡鹽溶液)洗滌3次去除非貼附細(xì)胞后，所有貼附細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)至多4小時(shí)，然后加入Fura-2AM。
例如，后文表格中記錄了用3名不同供血者的人PMN白細(xì)胞，用R(-)-N-2-[3-(苯甲酰基苯基)-丙?；鵠-甲磺酰胺(DF1661)和R(-)-N-2-[(4-異丁基苯基)-丙?；鵠-甲磺酰胺(DF1681)所得的結(jié)果。據(jù)信，當(dāng)刺激物導(dǎo)致[Ca2+]i高出基線值34％時(shí)，這些白細(xì)胞被對(duì)IL-8是有反應(yīng)。
表IL-8(50ng/ml) 254±23(n=20)DF1661(10-6M)+IL-8(50ng/ml)184±16(n=10)DF1681(10-6M)+IL-8(50ng/ml)159±16(n=10)以應(yīng)答細(xì)胞平均值和標(biāo)準(zhǔn)差(SEM)為反應(yīng)數(shù)據(jù)，表示為與[Ca2+]i基線值相比的百分比；其中n是試驗(yàn)重復(fù)次數(shù)。在這些試驗(yàn)中，不同組中無(wú)應(yīng)答細(xì)胞百分比互不相同只用IL-8處理的組為30％,DF1661預(yù)處理組為40％,DF1681預(yù)處理組則為70％。
本發(fā)明的通式(1)所示的N-2-芳基丙?；酋０肪哂心軌颉绑w外”抑制白介素-8激發(fā)的PMN人白細(xì)胞趨化性的特征。本發(fā)明的?；酋０穭┝恳蕾囆缘匾种芇MN人白細(xì)胞趨化性，IC50(具有50％作用的劑量)為10-7-10-9M，并對(duì)IL-8誘導(dǎo)的趨化性具有顯著的選擇性和特異性。要“體外”抑制其他趨化因子(5Ca，細(xì)菌來源或合成的甲酰肽(f-LMP))誘導(dǎo)的趨化性，則濃度需提高1至2個(gè)數(shù)量級(jí)。本發(fā)明化合物能夠抑制受IL-8刺激的人PNM內(nèi)的胞內(nèi)[Ca2+]i升高，這一升高與人PMNL的活化有關(guān)(J.H.Liu等，傳染病雜志166,1089(1992))，這證明了本發(fā)明化合物的特異性。
與甲基的絕對(duì)構(gòu)象無(wú)關(guān)，本發(fā)明化合物對(duì)CO和PG的產(chǎn)生沒有顯著作用。實(shí)際上，在LPS刺激的鼠巨噬細(xì)胞內(nèi)(1mg/ml)，本發(fā)明化合物(評(píng)價(jià)濃度為10-5-10-7M)對(duì)PGE2產(chǎn)生的抑制通常低于統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性，而且從未超過基線值的10-15％。
(LPS刺激的)鼠巨噬細(xì)胞并非增強(qiáng)促進(jìn)嗜中性白細(xì)胞活化和趨化性以及IL-8合成的TNFα合成的適宜刺激物，此時(shí)，這一非相關(guān)性PGE2合成抑制是本發(fā)明相比部分2-芳基-丙酸的優(yōu)點(diǎn)。在由過氧化氫刺激的TNF-α合成中也存在這種作用(TNF-α合成的非增強(qiáng)作用)。
根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)證據(jù)，以及，已知白介素-8(IL-8)及其同類物參與牛皮癬(B.J.Nickoloff等，美國(guó)病理學(xué)雜志138,129,1991)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(M.Selz等，臨床研究雜志87,463,1991)，潰瘍性結(jié)腸炎(Y.R.Mahkla等，臨床科學(xué)82,273,1992)，急性呼吸機(jī)能不全(ARDS)和原發(fā)性纖維變性(P.C.Carre等，臨床研究雜志88,1802,1991和E.J.Miller等，美國(guó)呼吸疾病論述，同上)，血管球性腎炎(T.Wada等，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志180,1135,1994)，本發(fā)明化合物可用于以上疾病的治療。
為了以上治療目的，可用常規(guī)技術(shù)和賦型劑，例如“Remington藥學(xué)手冊(cè)”，Mack出版社，第18版，1990所述，將本發(fā)明化合物配制成藥物組合物。
本發(fā)明的組合物的給予形式可以是肌內(nèi)或靜脈推注，皮膚病制劑(霜?jiǎng)⒁簞?、噴霧劑和藥膏)，以及以膠囊、片劑、糖漿、控釋劑等形式口服。
平均日用量取決于多種因素，例如疾病的嚴(yán)重程度和患者情況(年齡、性別和體重)。該劑量一般為每日1或數(shù)毫克(mg)至1500mg本發(fā)明化合物，可以分多次給予。因?yàn)楸景l(fā)明化合物的毒性很低，所以，可以給予更高的劑量，甚至可以用于長(zhǎng)期治療。
以下實(shí)施例進(jìn)一步說明了本發(fā)明。
制備按照J(rèn).M.Sprague和T.B.Jonson在J.A.C.S.59,1837,1937和E.Miller等在ibidem62,2099(1940)中所述的方法制備烷基-、芳基烷基-、雜芳基烷基-磺酰胺和通式為CH3-(CH2)ni-(OCH2-CH2)mi-SO2NH2的烷氧基-聚氧乙烯磺酰胺，其中，ni是0或1,mi是整數(shù)1-3。
因此，例如，2-乙氧基乙基氯與略微過量的硫脲在醇中回流反應(yīng)，可得到2-鹽酸2-乙氧基乙基硫脲。在該鹽的溶液中在25℃冷卻并通入Cl2，于是分離出黃色油狀物，將該物質(zhì)溶于乙醚，以硫酸鈉干燥。揮發(fā)去除溶劑，得到2-乙氧基乙基磺酰氯，將其緩慢加入氫氧化銨溶液，得到2-乙氧基乙磺酰胺，根據(jù)需要，可對(duì)其進(jìn)行稀釋醇重結(jié)晶或柱層析純化。采用以上過程制備了以下化合物2-甲氧基-乙磺酰胺，2-(2-甲氧基-乙氧基)-乙磺酰胺或3,6-二噁-庚基磺酰胺；
2-(2-乙氧基-乙氧基)-乙磺酰胺或3,6-二噁-辛基磺酰胺；3,6,9-三噁-癸基磺酰胺；3,6,9-三噁-十一烷基磺酰胺。
實(shí)施例1制備N-?；酋０返囊话惴椒ˋ)通式(2)酸的氯化物與通式(3)磺酰胺陰離子反應(yīng)R(-)-N-[2-(4-異丁基)丙酰基]-甲磺酰胺a)制備通式(2)酸的氯化物R(-)-2-(4-異丁基)丙酸(R-異吡洛芬，4g,0.019mol)的亞硫酰氯(7.4ml)懸浮液回流4小時(shí)；然后室溫下自然冷卻。真空蒸發(fā)過量的亞硫酰氯。用數(shù)滴無(wú)水二噁烷洗滌殘留物數(shù)次并真空蒸發(fā)溶劑，以去除最后的微量亞硫酰氯。得到4.66g(0.019mol)R(-)-2-(4-異丁基)丙酰氯黃色油狀物，將其溶于數(shù)m]無(wú)水四氫呋喃(THF)中。
b)制備磺酰胺陰離子將甲磺酰胺(2.3g,0.0243mol)加入叔丁氧鉀(2.73g,0.0244mol)的THF(28ml)懸浮液中，混合物室溫下攪拌30分鐘。然后，攪拌加入R(-)-2-(4-異丁基)丙酰氯(4.66g,0.019mol)溶液，反應(yīng)混合物室溫下攪拌過夜。
過濾出分層的無(wú)機(jī)鹽，真空蒸發(fā)去除溶劑，將油狀殘留物分配在CH2Cl2(30ml)和磷酸二氫鈉飽和溶液之間。用水洗滌(2×10ml)有機(jī)相，用CH2Cl2萃取(2×10ml)水相。合并有機(jī)萃得液，以硫酸鈉干燥，并真空蒸發(fā)溶劑，然后，在油狀殘留物的無(wú)水MeOH(10ml)溶液中加2微滴濃硫酸，將微量未轉(zhuǎn)化的R(-)-2-(4-異丁基)丙酸都酯化成甲酯?；旌衔镌谑覝叵路胖眠^夜，小心地真空蒸發(fā)溶劑，將殘留物分配在水(10ml)和二氯甲烷(25ml)之間。棄水相，用NaHCO3飽和溶液萃取(2×20ml)有機(jī)相。合并堿相，用濃鹽酸酸化，并用CH2Cl2萃取(3×15ml)。常規(guī)洗滌至中性后，以Na2SO4干燥合并的有機(jī)萃得液，真空蒸發(fā)溶劑后得1.86g(0.0066mol)R(-)-N-[2-(4-異丁基)丙?；鵠-甲磺酰胺m.p.:103-105℃(dec.)；[α]D=-68°(c=1；CH3OH)；1H-NMR(DMSO-d6)δ7.3(d,2H J=8Hz)；7.09(d,2H J=7Hz)；3.42(q,1H,J=8Hz)；2.8(s,3H)；2.45(d,2H,J=7Hz)；1.55(m,1H)；1.3(d,3H,J=Hz)；0.95(d,6H,J=7Hz)。
B)在縮合劑存在下，通式(2)酸與通式(3)磺酰胺直接縮合將N,N-二甲基氨基吡啶(2.363g,0.0194mol)，鹽酸N-(3-二甲基氨基丙基)-N＇-乙基碳二亞胺(3.721g,0.0194mol)和甲磺酰胺(1.845g,0.0194mol)依次加入R-(-)-異吡洛芬(4g,0.0194mol)的無(wú)水CH2Cl2溶液(30ml)；混合物攪拌過夜。蒸發(fā)溶劑，殘留物用乙酸乙酯(40ml)皂化，合并的有機(jī)相用水(15ml)和20％檸檬酸水溶液(2×10ml)洗滌，并用硫酸鈉干燥，然后蒸發(fā)溶劑，得到2.2g(0.0076mol)R(-)-N-[2-(4-異丁基)丙?；鵠-甲磺酰胺m.p.:103-105℃(dec.)；[α]D=-68°(c=1；CH3OH)。
實(shí)施例2按照實(shí)施例1的方法，制備以下混合物S(+)-N-[2-(4-異丁基)丙?；鵠甲磺酰胺m.p.:109-111℃(dec.)；[α]D=+73°(c=1；CH3OH)；1H-NMR(CDCl3)δ 7.65(bs,1H,NH)；7.2-7.0(m,4H)；3.65(q,1H,J=8Hz)；3.25(s,3H)；2.5(d,2H,J=7Hz)；1.85(m,1H)；1.5(d,3H,J=8Hz)；0.95(d,6H,J=7Hz)。
R(-)-N-[2-(3-苯甲?；交?-丙?；鵠-甲磺酰胺淺黃色油狀物；[α]D=-73°(c=1；CH3OH)；1H-NMR(CDCl3)δ8.25(bs,1H,NH)；7.80-7.35(m,9H)；3.80(q,J=7Hz,1H)；3.21(s,3H)；1.55(d,J=7Hz,3H)。
S(+)-N-[2-(3-苯甲?；交?-丙?；鵠-甲磺酰胺淺黃色油狀物；[α]D=+67°(c=1；CH3OH)；1H-NMR(CDCl3)δ8.5(bs,1H,NH)；7.9-7.45(m,9H)；3.75(q,J=7Hz,1H)；3.21(s,3H)；1.55(d,J=7Hz,3H)。
S(+)-N-[2-(2-氟-4-聯(lián)苯基)丙酰基]-甲磺酰胺m.p.:130-132℃(dec.)；[α]D=+44°(c=1；CH3OH)；1H-NMR(CDCl3)δ7.8(bs,1H,NH)；7.50-7.30(m,5H)；7.05-6.90(m,3H)；3.65(q,1H,J=7Hz)；3.20(s,1H)；1.50(d,3H,J=7Hz)。
R(-)-N-[2-(2-氟-4-聯(lián)苯基)丙?；鵠-甲磺酰胺m.p.:106-108℃；[α]D=-42°(c=1；CH3OH)；1H-NMR(CDCl3)δ7.9(bs,1H,NH)；7.50-7.30(m,5H)；7.10-6.95(m,3H)；3.65(q,1H,J=7Hz)；3.20(s,1H)；1.50(d,3H,J=7Hz)。
實(shí)施例3R(-)-N-甲基，N-[2-(4-異丁基)丙?；鵠-甲磺酰胺N-?；酋０返乃嵝宰阋园匆韵逻^程與重氮烷反應(yīng)生成N-酰基-N-烷基磺酰胺。
將冰浴冷卻(4℃)的R(-)-N-[2-(4-異丁基)丙?；鵠-甲磺酰胺(0.3g,0.001mol)的無(wú)水乙醚溶液滴加到0.67N的重氮甲烷的乙醚溶液中，直至得到穩(wěn)定的黃色。向以上冷卻溶液中加入數(shù)滴冰醋酸以破壞過量的重氮甲烷。溶液在室溫下靜置，蒸發(fā)去除溶劑。將殘留物重溶于甲苯，真空蒸發(fā)去除微量乙酸。柱層析(正己烷/CH2Cl27∶3)純化油狀殘留物，得到R(-)-N-甲基-N-[2-(4-異丁基)丙?；鵠-甲磺酰胺(0.24g,0.00076mol)，無(wú)色油狀物。[α]D=-60°(c=1；CH3OH)；1H-NMR(CDCl3)δ7.2-7.09(m,4)；4.15(q,1H,J=8Hz)；3.2(s,3H)；2.9(s,3H)；2.45(d,2H,J=7Hz)；1.75(m,1H)；1.35(d,3H,J=8Hz)；0.95(d,6H,J=7Hz)。
按照實(shí)施例1的方法，用等摩爾量的N-甲基-甲磺酰胺代替甲磺酰胺，可制得相同的化合物。
實(shí)施例4R(-)-N-(2-[3-(1ξ-羥基-1ξ-苯基)甲基]-苯基)丙?；鵠-甲磺酰胺在0.5g N-(R(-)-2-[3-(苯甲酰基苯基)-丙?；鵠-甲磺酰胺的乙醇溶液中加入0.05ml三乙基胺和催化量的5％Pd/C，將此溶液保持在H2氣氛下，直至吸收掉1mol當(dāng)量氣體。用celite濾掉催化劑，將洗脫液蒸干。將殘留物分配在乙醚和5％NaH2PO4水溶液之間，從有機(jī)相可制得0.4g R(-)-N-(2-[3-(1ξ-羥基-1ξ-苯基)甲基]-苯基)丙?；鵠-甲磺酰胺。
實(shí)施例5R(-)-N-2[3-(芐基苯基)丙?；鵠-甲磺酰胺；在0.5g N-(R(-)-2-[3-(苯甲?；交?-丙酰基]-甲磺酰胺的乙醇溶液中加入0.05ml三乙基胺和催化量的5％Pd/C，將此溶液保持在H2氣氛下，直至吸收掉至少2mol當(dāng)量氣體。用celite濾掉催化劑，將洗處液蒸干。將殘留物分配在乙醚和5％NaH2PO4水溶液之間，從有機(jī)相可制得0.4g R(-)-N-(2-[3-(1ξ-羥基-1ξ-苯基)甲基]-苯基)丙酰基]-甲磺酰胺。
實(shí)施例6(±)N-2-[(5＇-苯甲酰基-2＇-乙酸基苯基)-丙?；鵠-甲磺酰胺6g(±)4-乙酸基-3-(1＇-甲基-2＇-丙烯-1-基)-二苯甲酮的CH2Cl2(125ml)溶液中加入等體積的水，在此溶液中邊劇烈攪拌邊依次加入冰醋酸(12ml)，Aliquat336(0.37g)，和分成小份的高錳酸鉀(總量9.5g,0.060mol)?；旌衔锸覝叵聰嚢?0小時(shí)，直至起始物完全消失。加入偏亞硫酸氫鈉水溶液(7.2g溶于水，15ml)使反應(yīng)混合物褪色，再加入CH2Cl2(10ml)，于是分層。有機(jī)相用鹽水(2×25ml)洗滌，并用硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)溶劑后得到高純度的6.2g(±)N-2-[(5＇-苯甲?；?2＇-乙酸基苯基)-丙酰基]-甲磺酰胺油狀物。HPLC(H2O/CH3CNt=0 60 40,t=12 0100,t=15 0 100。Bondapak C18 20cm,1=254nm，室溫，5.5分鐘)。TLC(CH2Cl2/CH3OH/9∶1)Rf=0.2；1H-NMR(CDCl3)δ7.95(s,1H)；7.85(dd,2H,J＇=7Hz)；7.75(dd,1H,J＇=7Hz)；7.6(m,1H)；7.45(7,2H,7Hz)；7.25(s,1H)；3.9(q,1H,8Hz)；2.35(s,3H)；1.5(d,3H,J=8Hz)。
將該化合物用在實(shí)施例1的方法中，可制得(+)N-2-[(5＇-苯甲?；?2＇-乙酸基苯基)-丙酰基]-甲磺酰胺。
實(shí)施例7L(±)賴氨酸R(-)-N-[2-(4-異丁基)丙?；鵠甲磺酰胺鹽將L(+)賴氨酸(129mg,0.88mmol)的水溶液(1.3ml)加入R(-)-N-[2-(4-異丁基)丙?；鵠甲磺酰胺(250mg,0.88mmol)的1ml甲醇溶液。蒸發(fā)去除溶劑，殘留物溶于乙醚(5ml)，室溫下攪拌過夜。氮?dú)夥障卵杆贋V出分離產(chǎn)生的強(qiáng)吸濕性晶體，用無(wú)水乙醚洗滌濾得物，50℃真空干燥2小時(shí)，得到360mg R(-)-N-[2-(4-異丁基)丙酰基]甲磺酰胺的L(±)賴氨酸鹽，呈淺黃色粉末狀。[α]D=-17.3°(c=1.15；CH3OH)；1H-NMR(D2O)δ7.30(dd,4H,J=8Hz)；3.77(t,1H,J=7Hz)；3.65(q,1H,J=7Hz)；(m,4)；4.15(q,1H,J=8Hz)；3.2(s,3H)；2.9(s,3H)；2.45(d,2H,J=7Hz)；3.05(m,5H)；2.52(d,2H,J=7Hz)；1.92(m,2H)；1.75(m,2H)；1.50(m,3H)；1.40(d,3H,J=7Hz)；0.90(6H,d,J=7Hz)。
實(shí)施例8R(-)-2-[(4＇-異丁基)苯基]丙酰胺用28％NH4OH水溶液代替實(shí)施例1中的磺酰氨基陰離子，按以下方法制備通式(2)酸的酰胺。將1g R(-)-2-[4-異丁基-苯基]丙酰氯溶于無(wú)水乙腈(1.5ml)的溶液滴加到28％NH4OH水溶液(3ml)中，冷卻至0-5℃，滴加速度保持反應(yīng)混合物溫度不超過5℃?；衔锸覝?cái)嚢?小時(shí)，減壓蒸發(fā)溶劑，將所得殘留物溶于乙酸乙酯(5ml)。將該溶液冷卻至0-4℃，析出白色晶體沉淀，過濾并真空干燥后得到(1.218g；5.93mmol)R(-)-2-[(4＇-異丁基)苯基]丙酰胺m.p.:125-127℃；[α]D=-28°(c=1；CH3OH)；1H-NMR(CDCl3)δ7.20-7.05(m,4H)；5.25(bs,2H,NH2)；3.6(q,J=8Hz,1H)；2.5(m,2H)；1.9(m,1H)；1.55(d,J=8Hz,3H)；0.93(d,J=7Hz,6H)。
實(shí)施例9鹽酸R(-)N-[2-(4-異丁基)丙?；鵠-(2-氨基)乙基磺酰胺按照Winterbottom等(美國(guó)化學(xué)協(xié)會(huì)雜志69,1393-1401(1947))所述的方法，將21.4g鄰苯二甲酸酐(0.145mol)加入氨基乙磺酸(17g,0.137mol)和乙酸鉀(14.2g,0.145mol)在冰醋酸(48ml)中所成的懸浮液中，回流加熱。加熱持續(xù)至反應(yīng)物完全消失(2.5小時(shí))；冷卻至0-5℃后產(chǎn)生沉淀，過濾分離，用冰醋酸和無(wú)水乙醇洗滌，真空下空氣干燥(50℃)，得到31.2g 2-鄰苯二甲酰亞氨基乙磺酸鉀(m.p.＞300℃；1H-NMR(D2O)d7.85(m,4H),4.05(t,3H,J=8Hz),5.25(t,2H,J=8Hz)。5g該鹽在苯(50ml)中的懸浮液通過共沸蒸餾干燥，在其中加入2.56g五氯化磷(0.015mol)，回流1小時(shí)。然后加入第二份五氯化磷(2.56g,0.015mol)?；旌衔镌倩亓?0分鐘，然后真空和減壓蒸發(fā)溶劑和反應(yīng)物?；旌衔镌倩亓?.3小時(shí)，冷卻至室溫，減壓蒸發(fā)溶劑。用30g精細(xì)研磨的冰吸收殘留物，生成細(xì)小固體(過濾，水洗，干燥)狀的2-鄰苯二甲酰亞氨基乙磺酰氯(3.71g,m.p.=158-159℃)。
將乙腈(15ml)中的28％氨溶液(15.5ml)滴加到2-鄰苯二甲酰亞氨基乙磺酰氯的乙腈(30ml)溶液中，冷卻至0-4℃，混合物在0-4℃攪拌30分鐘，蒸發(fā)溶劑，將殘留物加入熱水，析出沉淀2-鄰苯二甲酰亞氨基乙磺酰胺(0.8g)(m.p.=206-209℃；1H-NMR(DMSO-d6)δ7.95(m,4H),7.15(bs 2H,NH2),4.05(t,3H,J=8Hz),3.35(t,2H,J=8Hz))。
在惰性氣氛下，將0.75g(0.00295mol)該化合物加入叔丁氧鉀(0.331g,0.00295mol)的無(wú)水THF(7ml)懸浮液中；攪拌1小時(shí)，然后加入R(-)2-(4-異丁基-苯基)-丙酰氯(0.47g酸(0.00227mol)與亞硫酰氯反應(yīng)新鮮制備的)的無(wú)水THF(2ml)溶液?；旌衔锸覝叵聰嚢?4小時(shí)；濾出固體殘留物，將溶劑蒸干，將殘留物分配在水和乙酸乙酯之間。合并有機(jī)相，用水(2×25ml)和鹽水(25ml)洗滌，用硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)溶劑，得到油狀殘留物，快速層析(洗脫劑CH2Cl2/CH3OH98:2)純化，得到透明油狀物，即0.6gN-[R(-)2-(4-異丁基-苯基)-丙?；鵠-2-鄰苯二甲酰亞氨基-乙磺酰胺。1H-NMR(CDCl3)δ8.05(m,4H),7.15(m,4H),7.05(bs,1H,NH),4.05(t,3H,J=8Hz),3.35(m,3H),2.50(d,2H,J=7Hz),1.92(m,1H),1.20(d,3H,J=8Hz),0.95(d,6H,J=7Hz)。
在該化合物(0.5g,1.12mmol)的乙醇(4ml)溶液中加入85％水合肼(0.4ml)，回流1小時(shí)。真空蒸發(fā)去除溶劑后，用水稀釋，用2N鹽酸酸化，過濾分離鄰苯二甲酰肼。將濾液蒸干，得到0.332g鹽酸R(-)-N-[2-(4-異丁基-苯基)-丙酰基]-(2-氨基)乙磺酰胺，又名鹽酸R(-)-N-[2-(4-異丁基-苯基)-丙?；鵠-牛磺酰胺。
實(shí)施例10按實(shí)施例9的方法，用按照H.McIlwain(化學(xué)協(xié)會(huì)雜志75,1941)所述方法制備的N＇-芐酯基氨基乙磺酰胺和選自以下所述的2-芳基丙酸氯化物R(-)2-(3-苯甲?；?苯基)丙酸，R(-)2-(3-苯氧基-苯基)-丙酸，R(-)2-[4-(1-氧-2-異二氫氮雜茚基)苯基]丙酸，2-(5-苯甲?；绶?2-基)丙酸，2-(4-噻吩甲?；?苯基)-丙酸和R(-)2-(4-異丁基-苯基)丙酸，分別獲得以下化合物R(-)-N-[2-(3-苯甲酰基-苯基)-丙?；鵠-(2-芐酯基)-乙磺酰胺；R(-)-N-[2-(3-苯氧基苯基)-丙?；鵠-(2-芐酯基)-乙磺酰胺；R(-)-N-[2-[4-(1-氧-2-異二氫氮雜茚基)苯基]丙酰基]-(2-芐酯基)-乙磺酰胺；N-[2-(5-苯甲?；?噻吩-2-基)-丙酰基]-(2-芐酯基)-乙磺酰胺；N-[2-(4-噻吩甲酰基-苯基)-丙?；鵠-(2-芐酯基)-乙磺酰胺；R(-)-N-[2-[4-(異丁基-苯基)-丙酰基]-(2-芐酯基)-乙磺酰胺。
實(shí)施例112g R(-)-N-[2-[4-(異丁基-苯基)-丙?；鵠-(2-芐酯基)-乙磺酰胺和0.1g鈀黑在水(20ml)、甲醇(20ml)和乙酸(6ml)的混合物中形成懸浮液，氫氣氛下攪拌；30分鐘后，二氧化碳放氣停止。過濾懸浮液，去除Pd，真空蒸發(fā)溶劑。NaOH存在下，將殘留物保持在真空中。將此殘留物溶于乙醇(5ml)，用HCl飽和的乙醇溶液處理，分離并過濾收集R(-)-N-[2-[4-(異丁基-苯基)-丙酰基]-(2-氨基)-乙磺酰胺。
按實(shí)施例10的方法，使用芐酯基氨基乙磺酰亞胺，得到以下以下化合物的鹽酸鹽R(-)-N-[2-(3-苯甲酰基-苯基)-丙?；鵠-(2-氨基)-乙磺酰胺；R(-)-N-[2-(3-苯氧基-苯基)-丙?；鵠-(2-氨基)-乙磺酰胺；R(-)-N-[2-[4-(1-氧-2-異二氫氮雜茚基)苯基]丙?；鵠-(2-氨基)-乙磺酰胺；N-[2-(5-苯甲酰基-噻吩-2-基)-丙?；鵠-(2-氨基)-乙磺酰胺；N-[2-(4-噻吩甲?；?苯基)-丙?；鵠-(2-氨基)-乙磺酰胺；實(shí)施例12在實(shí)施例1的方法中，使用選自以下所述的磺酰胺環(huán)己基磺酰胺，己基磺酰胺，十二烷基磺酰胺或十六烷基磺酰胺，對(duì)氰基苯基甲磺酰胺，3-氰基-1-丙磺酰胺，2-甲氧基乙磺酰胺，3,6-二噁-庚基磺酰胺，3,6-二噁-辛基磺酰胺，3,6,9-三噁-癸基烷基磺酰胺，3,6,9-三噁-十一烷基磺酰胺，得到以下化合物R(-)-N-[2-(4-異丁基-苯基)丙?；鵠-環(huán)己基磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基-苯基)丙酰基]-己基磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基-苯基)丙酰基]-十二烷基磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基-苯基)丙?；鵠-十六烷基磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基-苯基)丙?；鵠-對(duì)氰基苯基甲磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基-苯基)丙?；鵠-3-氰基-1-丙磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基-苯基)丙酰基]-2-甲氧基乙磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基-苯基)丙酰基]-3,6-二噁-庚基磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基-苯基)丙?；鵠-3,6-二噁-辛基磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基-苯基)丙?；鵠-3,6,9-三噁-癸基烷基磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基-苯基)丙酰基]-3,6,9-三噁-十一烷基磺酰胺。
如有必要，當(dāng)選自R(-)-N-[2-(4-異丁基-苯基)丙?；鵠-對(duì)氰基苯基甲磺酰胺和R(-)-N-[2-(4-異丁基-苯基)丙?；鵠-3-氰基-1-丙磺酰胺的氰基磺酰胺在含HCl汽體的乙醇中，在氧化鉑存在下氫化時(shí)，可得到以下磺酰胺的鹽酸化物R(-)-N-[2-(4-異丁基-苯基)丙?；鵠-對(duì)氨基-甲基苯基甲磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基-苯基)丙酰基]-4-氨基-1-丁磺酰胺。
實(shí)施例13在實(shí)施例1方法中，用選自2-二甲基氨基-乙基磺酰胺、2-(哌啶-1-基)-乙基磺酰胺和2-(嗎啉-4-基)-乙基磺酰胺的磺酰胺，得到R(-)-N-[2-(4-異丁基-苯基)丙?；鵠-2-二甲基氨基-乙基磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基-苯基)丙酰基]-2-(哌啶-1-基)-乙基磺酰胺；R(-)-N-[2-(4-異丁基-苯基)丙?；鵠-2-(嗎啉-4-基)-乙基磺酰胺。
實(shí)施例14在實(shí)施例1的方法中，用R(-)-2-(3-苯甲?；?苯基)丙酰氯和選自三氟甲基磺酰胺、鄰甲苯基磺酰胺、3-吡啶基磺酰胺和4-吡啶基乙磺酰胺的磺酰胺得到以下化合物R(-)-N-[2-(3-苯甲?；?苯基)丙?；鵠-三氟甲基磺酰胺；R(-)-N-[2-(3-苯甲?；?苯基)丙?；鵠-鄰甲苯基磺酰胺；
R(-)-N-[2-(3-苯甲?；?苯基)丙?；鵠-(3-吡啶基)-磺酰胺；R(-)-N-[2-(3-苯甲?；?苯基)丙?；鵠-2-(4-吡啶基)-乙磺酰胺。
實(shí)施例15在0.35g R(-)-N-[2-(3-苯甲酰基-苯基)丙?；鵠-三氟甲基磺酰胺在5ml吡啶中所成的溶液中加入0.11g鹽酸羥基胺?；旌衔锸覝胤磻?yīng)12小時(shí)，然后將該溶液滴加到40ml 2N H2SO4中。用乙酸乙酯萃取(3×8ml)生成的沉淀。合并有機(jī)相，用水洗至中性，以硫酸鈉干燥并蒸干，得到0.36g R(-)-(Z,E)-N-[2-(3-苯甲?；?苯基)丙?；鵠三氟甲基磺酰胺肟。
用以上方法，用R(-)-N-[2-(3-苯甲酰基-苯基)丙?；鵠-甲磺酰胺，可制得R(-)-(Z,E)-N-[2-(3-苯甲?；?苯基)丙?；鵠甲磺酰胺肟。
實(shí)施例16R(-)2-(4＇-異丁基)苯基丙?；?(2″-N-煙?；?氨基)乙磺酰胺煙酸(0.565g,4.6mmol)的亞硫酰氯(3.07ml,42.3mmol)溶液回流3小時(shí)，冷卻至室溫并真空干燥后，得到淺黃色固體狀的煙酰氯(0.65g)。將該煙酰氯(0.64g,4.52mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(DMF,1ml)中所成的混合物滴加到R(-)2-(4＇-異丁基)苯基丙?；?(2″-氨基)乙磺酰胺(0.6g,1.92mmol)和三乙基胺(1ml)在DMF(10ml)中所成的溶液中。所得混合物室溫?cái)嚢?4小時(shí)。真空蒸發(fā)DMF，柱層析(洗脫液CHCl3/CH3OH/環(huán)己烷/NH4OH60∶14∶24∶2)純化粗制殘留物，得R(-)2-(4＇-異丁基)苯基丙?；?(2″-N-煙?；?氨基)乙磺酰胺[α]D=-10.7°(c=0.15,EtOH)；呈無(wú)色油狀(0.56g,1.34mmol),MW=417.53,MS=m/z418.5(ES)1；TLC(CHCl3/CH3OH/環(huán)己烷/NH4OH60∶14∶24∶2)Rf=0.4。1H-NMR(CD3OD)δppm9.2-9.0(bs,1H,NH)；8.7-8.5(bs,1H,NH)；8.4(d,1H,J=8Hz)；7.9(m,1H)；7.5-7.4(m,1H)；7.35(s,1H)；7.25(d,2H,J=8Hz)；7.05(d,2H,J=8Hz)；3.8-3.5(m,5H)；2.5(d,2H,J=7Hz)；1.95-1.8(m,1H)；1.45(d,3H,J=7Hz)；0.9(d,6H,J=7Hz)。
在以上方法中，用異煙酸和甲基吡啶酸代替煙酸，得到以下化合物R(-)2-(4＇-異丁基)苯基丙酰基-(2″-N-異煙?；?氨基)乙磺酰胺；R(-)2-(4＇-異丁基)苯基丙酰基-(2″-N-甲基吡啶?；?氨基)乙磺酰胺。
實(shí)施例17R(-)2-(4＇-異丁基)苯基丙?；?(2″-N-羧基羰基氨基)乙磺酰胺將草酸乙酯酰氯(0.62g,4.52mmo1)的DMF(1ml)溶液滴加到攪拌著的R(-)2-(4＇-異丁基)苯基丙?；?(2″-氨基)乙磺酰胺(0.6g,1.92mmol)和三乙基胺(1ml)在DMF(10ml)中所成的溶液中。所得化合物在室溫下攪拌24小時(shí)。真空蒸發(fā)DMF，粗制殘留物以水稀釋，以乙醚萃取(3×10ml)。收集有機(jī)萃得液，用水(2×15ml)、鹽水(20ml)洗滌，硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)后得無(wú)色油狀R(-)2-(4＇-異丁基)苯基丙?；?(2″-N-乙基草酰基氨基)乙磺酰胺(0.51g,1.25mmol)。
在以上R(-)2-(4＇-異丁基)苯基丙酰基-(2″-N-乙基草?；被?乙磺酰胺(0.5g,1.22mmol)的二噁烷(1.55ml)溶液中加入1N NaOH(1.55ml)，室溫下攪拌過夜。真空蒸發(fā)二噁烷，然后用水稀釋水性殘留物；加4N H2SO4，直至pH2；用二氯甲烷萃取(4×15ml)水相，收集有機(jī)相，用水(2×15ml)和鹽水(15ml)洗滌，硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)，得到R(-)2-(4＇-異丁基)苯基丙?；?(2″-N-羧基羰基氨基)乙磺酰胺油狀物(0.426g,1.1mmol)；TLC(CHCl3/CH3OH/H2O65∶25∶4)Rf=0.5；[α]D=-60°(c=1,CH3OH)；1H-NMR(CD3OD)δppm10.55-10.0(bs,1H,COOH)；7.25(d,2H,J=8Hz)；7.05(d,2H,J=8Hz)；3.8-3.5(m,5H)；2.5(d,2H,J=7Hz)；1.95-1.8(m,1H)；1.45(d,3H,J=7Hz)；0.9(d,6H,J=7Hz)。
實(shí)施例18R(-)2-(4＇-異丁基)苯基丙酰基-(2″-N-芐氧基羰基氨基)乙磺酰胺將氨基乙磺酸(1g,8mmol)溶于2NNaOH(4.3ml)，冰/水浴冷卻后，同時(shí)滴加4N NaOH(2.14ml)和芐氧基羰基氯(3.27ml,8mmol)的甲苯(3ml)溶液。然后，混合物在0-5℃攪拌1小時(shí)。加入乙醚終止反應(yīng)?；旌衔镉谑欠謱?。將水相冷卻至0-5℃，加入37％HCl直至pH2。用乙酸乙酯萃取(3×10ml)酸性相，收集有機(jī)萃得液，用水(2×15ml)和鹽水(15ml)洗滌，硫酸鈉干燥并真空蒸發(fā)，得2-(N-芐氧基羰基氨基)乙磺酸粗產(chǎn)物，乙醚研磨得白色固體純產(chǎn)物(1.46g,5.64mmol，得率70.5％)。
將2-(N-芐氧基羰基氨基)乙磺酸(0.6g,2.31mmol)懸浮在無(wú)水甲苯(6ml)中，加入PCl5(0.65g,3.11mmol)。該混合物回流2小時(shí)，直至反應(yīng)物完全溶解。室溫冷卻后，真空蒸發(fā)溶劑，得到粗制2-(N-芐氧基羰基氨基)乙磺酰氯，其程度足以進(jìn)行下一步反應(yīng)。
將粗制2-(N-芐氧基羰基氨基)乙磺酰氯溶于乙腈(10ml)。所得溶液在冰/水浴中冷卻，滴加1∶1的28％NH4OH(5ml)和乙腈(5ml)。攪拌30分鐘后，真空蒸發(fā)溶劑，粗制殘留物在甲醇中重結(jié)晶，得到白色粉末狀2-(N-芐氧基羰基氨基)乙磺酰胺(0.51g,1.96mmol)。
將R(-)異吡洛芬(0.32g,1.55mmol)溶于無(wú)水二氯甲烷(7.5ml)，在其中加入N,N-二甲基氨基吡啶(0.19g,1.55mmol)和二環(huán)己基碳二亞胺(0.32g,1.7mmol)，所得混合物攪拌30分鐘。然后，加入2-(N-芐氧基羰基氨基)乙磺酰胺(0.4g,1.55mmol)，將該混合物攪拌過夜。濾出沉淀的N,N-二環(huán)己基脲，濾液經(jīng)真空蒸發(fā)得粗制殘留物，以乙腈稀釋；濾出第二批N,N-二環(huán)己基脲，濾液經(jīng)溶劑蒸發(fā)后用二氯甲烷稀釋。有機(jī)相用2N HCl(2×10ml)、鹽水(15ml)洗滌，硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)，得白色粉末狀R(-)2-(4＇-異丁基)苯基丙?；?(2″-N-芐氧基氨基甲?；被?乙磺酰胺(0.44g,0.98mmol)；m.p.=107-109℃；TLC(CH2Cl2/CH3OH98∶2)Rf=0.2；[α]D=-47.4°(c=1,EtOH)；1H-NMR(CD3OD)δppm7.45-7.30(m,5H)；7.25-7.05(m,5H,NH)；5.4-5.3(bs,1H,NH)；5.1(s,2H)；3.75-3.5(m,5H)；2.45(d,3H,J=7Hz)；1.95-1.8(m,1H)；1.5(d,3H,J=7Hz)；0.9(d,6H,J=7Hz)。
權(quán)利要求
1．通式1所示的化合物， 其中，R2是芳基；R是直鏈或分支C1-16烷基，三氟甲基，環(huán)己基，鄰甲苯基，3-吡啶基，2-吡啶基乙基，對(duì)氰基苯基甲基，對(duì)氨基苯基甲基，3-氰基-1-丙基，4-氨基丁基，烷氧基亞乙基CH3-(CH2)ni-(OCH2CH2)mi-，其中ni是0或1,mi是整數(shù)1-3，或是P1P2N-CH2-CH2-，其中P1和P2各自是H、C1-3烷基，芐氧基羰基α-、β-或γ-吡啶基羰基，羧基羰基或烷酯基羰基，P1和P2或者與相連的N原子構(gòu)成苯二甲酰亞氨基、哌啶子基、嗎啉代基；R′是H或直鏈或分支C1-3烷基。
2．根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中的R＇是H。
3．根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中的R2選自4-異丁基苯基，3-苯甲酰基苯基，5-苯甲?；?2-乙酸基苯基，3-苯氧基苯基，5-苯甲?；?噻吩-2-基，4-噻吩甲?；交?，1-氧-2-異二氫氮雜茚基苯基，3-氯-4-(2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)苯基，甲氧基乙萘基，1-羥基苯基，或以下通式所示的基團(tuán) 其中，A是芐基、苯甲?；虮郊柞；?肟、1-羥基苯基-1-甲基，B是H、羥基、C1-3酸基或氨基。
4．根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所示的化合物，其中被甲基取代的不對(duì)稱碳原子具有絕對(duì)R構(gòu)型。
5．權(quán)利要求1-4所述化合物作為白介素8誘導(dǎo)的嗜中性白細(xì)胞趨化性和脫粒作用抑制劑的用途。
6．一種藥物組合物，含有權(quán)利要求1-4所述的化合物作為活性成分，并與合適的載體混合。
7．R(-)-2-[(4-異丁基)苯基]丙酰胺作為白介素8誘導(dǎo)的嗜中性白細(xì)胞趨化性和脫粒作用抑制劑的用途。
全文摘要
通式(1)所示的化合物可用于預(yù)防和治療因多形核嗜中性白細(xì)胞(PMN白細(xì)胞)在炎癥部位惡性聚集造成的組織損傷,化合物中的R和R
文檔編號(hào)A61K31/537GK1324344SQ99812451
公開日2001年11月28日 申請(qǐng)日期1999年10月14日 優(yōu)先權(quán)日1998年10月23日
發(fā)明者R·貝爾蒂尼, C·比薩里, V·薩巴蒂尼, S·波熱焦, G·卡塞利, M·阿萊格蒂, M·C·切斯塔, C·A·甘多利, M·曼托瓦尼, F·科洛塔 申請(qǐng)人:冬姆佩股份公司