專利名稱：八寶素在制備抗病毒新藥中的應(yīng)用的制作方法
本申請(qǐng)是《一種抗病毒化合物八寶素的制法》發(fā)明專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)，原發(fā)明名稱為《一種新的抗病毒化合物八寶素的制法及其制劑》，原申請(qǐng)日為960726，申請(qǐng)?zhí)?6115901.4。本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，是關(guān)于一種具有抗病毒性活性的化合物，更具體地說(shuō)是一種用于抗乙型肝炎病毒和雙向免疫調(diào)節(jié)的活性化合物。
乙型肝炎是危害人類健康的主要傳染病之一，國(guó)內(nèi)約有10％的人口攜帶乙肝表面抗原。目前治療乙肝的藥物及其乙肝疫苗的研究雖有進(jìn)展，但至今仍無(wú)良好的特效藥。景天科植物在民間曾作為清熱解毒、散瘀消腫及跌打損傷中草藥使用，但對(duì)其內(nèi)在的藥物活性均未深入研究。
本發(fā)明的目的在于提供一種新的具有抗乙肝病毒活性的化合物，以及從景天科植物提取物合成這種化合物的方法。
本發(fā)明研制的抗乙肝病毒活性化合物是長(zhǎng)藥八寶(H.spectabile)或景天科植物八寶(Hylotelephium erythrosticlum)或瓦松(Orostachys fimbriatus)等植物的全草中提取、分離純化而得到景酮糖酐，再以該景酮糖酐化合物與丙酮一步縮合獲得具有活性的化合物，這里命名為八寶素(Hylotelephin)。合成這種活性化合物主要包括以下操作步驟1、粉碎干燥景天科植物全草，先用沸水浸取，一般浸取兩次，合并浸取液；2、浸取液先經(jīng)薄膜濃縮，爾后再以減壓濃縮至濃縮后體積為原浸取液體積的五分之一左右。加等量的乙醇定容，使醇度約為50％左右，放置；3、取上清液，先通過(guò)強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換脂柱，再通過(guò)強(qiáng)堿型陰離子交換樹(shù)脂柱處理；4、流出液蒸除乙醇，并回收乙醇，得到浸膏；5、浸膏以硅藻土和酸性氧化鋁拌料后，上氧化鋁柱，以乙醇洗脫，得到景酮糖酐；6、取景酮糖酐，在適量硫酸存在下，加丙酮一步縮合得到八寶素；按上述方法得到的這種抗病毒活性化合物八寶素。用化學(xué)、紅外、核磁共振和質(zhì)譜等現(xiàn)代波譜方法，對(duì)該化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了鑒定，鑒定結(jié)果如下八寶素為白色針狀結(jié)晶，m.p224-225℃，熔融時(shí)升華，αD28＝-125.2°(水溶液)，分子式C10H16O6，M+232。元素分析計(jì)算值，C51.72％，H6.94％；實(shí)測(cè)值C51.32％，H6.74％，Molish反應(yīng)強(qiáng)陽(yáng)性，苔黑酚反應(yīng)陽(yáng)性，Liebermann-Burchard反應(yīng)陽(yáng)性，茴香醛-硫酸反應(yīng)陽(yáng)性。
IR(Vcm)3410 3280(寬)1380 1365 982 955 932 850 820 810785 740 720H-NMRL(CD3)2SO，加三氟醋酸δ1.31(S，3H，-CH3)，1.43(S，3H，-CH3)，3.43(d，1H，J＝12，C1-H)，3.65(d，1H，C1-H1)，3.61(d，1H，J3，4＝5，C3-H)，3.73(d，1H，J6.7＝5.4，C7-H6x)，3.85(d，1H，J6，76a＝1.5，C7-H6a)，4.01(q，1H，J4，6＝6，C4-H)，4.21(q，1H，J5，6＝1.2，C6-H)4.78(m，1H，C6-H)MS m/e(％)電子轟擊232(M+0.17)，217(100)，156(11.2)，101(27.0)，85(6.99)，70(46.3)，59(48.6)，43(35.6)；場(chǎng)解吸217(100，m-CH3)，232(10.7，M+)，233(16，M+1)，234(29，M+2)13C-NMRδ(OFR)61.4(t，c-1)，110.9(s，c-2)，73.30(d，c-3)，76.79(d，c-4)，74.85(d，c-5)，79.47(d，c-6)，67.78(t，c-7)，108.05(s，c-8)，26.55)q，c-9)，28.17(q，c-10)。
經(jīng)化學(xué)反應(yīng)和波譜數(shù)據(jù)的歸屬，并與已知有關(guān)化合物比較，該活性化合物的結(jié)構(gòu)式定為
化學(xué)名為異丙叉景酮糖酐(Isopropylidene Sedoheptulosan)，該化合物可作為制備抗鴨乙型肝炎病毒及雙向免疫新藥的制劑。
為證明本發(fā)明對(duì)鴨乙型肝炎病毒的治療效果，以目前國(guó)內(nèi)外共認(rèn)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ驮邙喴倚透窝撞《靖腥绝嗴w內(nèi)進(jìn)行治療效果試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)采用一日齡北京鴨靜脈注射鴨乙型肝炎病毒，七日后開(kāi)始給鴨腹腔注射本發(fā)明注射液，一天兩次，給藥10天(Bidx10)或14天(Bidx14)，觀察藥物對(duì)鴨的毒性和鴨血清鴨乙型肝炎病毒DNA(DHBV-DNA)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，200，100和50mg/kg劑量組，一天二次，10天或14天，均無(wú)毒性，200mg/kg和100mg/kg兩個(gè)劑量組均能降低DHBA感染鴨血清DHBR-DNA水平，與病毒對(duì)照組作成組統(tǒng)計(jì)分析比較，給藥第七天(T7)或第14天(T14)DHBV-DNA有顯著性降低，50mg/kg劑量組，實(shí)驗(yàn)中未出現(xiàn)顯著性差異，表明本發(fā)明注射液對(duì)鴨血清DHBV-DNA有抑制作用，同時(shí)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明，本發(fā)明注射液，在本實(shí)驗(yàn)條件下，其200mg/kg和100mg/kg組為治療鴨乙型肝炎病毒的有效劑量。
進(jìn)一步以昆明小鼠觀察了本發(fā)明針劑對(duì)機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)活性。本發(fā)明的體內(nèi)試驗(yàn)，對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞溶酶體酶-酸性磷酸酶(ACP)活性有明顯的增強(qiáng)作用(P＜0.01)。對(duì)細(xì)胞膜酶-堿性磷酸酶(AKP)的活性，有明顯的免疫調(diào)節(jié)作用。對(duì)腫瘤環(huán)死因子(TNF)活性，亦有明顯的增強(qiáng)作用(P＜0.01)，體外實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明與CONA及LPS合用，可加強(qiáng)二者的絲、裂原作用，促進(jìn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，兩者合用有協(xié)同作用(P值分別為＜0.01及＜0.05)，因此，本發(fā)明注射液是生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑(Biological Response Modifer，BRM)中的免疫調(diào)節(jié)劑和/或免疫增強(qiáng)劑，具有雙向免疫功能。
下面再用一個(gè)實(shí)際例子對(duì)本發(fā)明自景天科植物中提取景酮糖酐，進(jìn)一步合成八寶素的方法作進(jìn)一步描述。
取八寶(或瓦松、長(zhǎng)藥八寶)(50kg，粉碎成粗粉，加水煮沸1小時(shí)，放出浸取液后，再加水煮沸1小時(shí)，合并兩次浸取液，先經(jīng)薄膜濃縮，再經(jīng)減壓濃縮至液體體積為原浸取液體積的五分之一左右，加入等量的95％乙醇定容，使醇濃度約為50％左右，放置，取上清液先通過(guò)強(qiáng)酸性H+型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱交換，流出液再通過(guò)強(qiáng)堿性O(shè)H-型陰離子交換樹(shù)脂柱交換。流出液蒸出乙醇，并回收乙醇再用，制得浸膏。所得浸膏以硅藻土和酸性氧化鋁拌料后，上氧化鋁柱，以乙醇洗脫，可得最酮糖酐約50克。
取以上景酮糖酐4克，加丙酮80毫升，加適量硫酸，電磁攪拌24小時(shí)后，放置，即有八寶素針狀結(jié)晶析出，回收丙酮，得產(chǎn)品4.1克，收率大于85％。
經(jīng)質(zhì)量檢驗(yàn)合格后，在無(wú)菌條件下，分裝于10ml容量的青霉素安瓶?jī)?nèi)，每支100mg，在105℃加熱消毒20分鐘，即得八寶素針劑。
使用時(shí)，在臨用前加滅菌注射用水5毫升左右，使溶解后，靜脈滴注，一日200-300mg。
本發(fā)明從景天科植物八寶或長(zhǎng)藥八寶，瓦松等植物的全草中提取景酮糖酐，再合成八寶素，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)這種 化合物對(duì)乙型肝炎病毒有顯著的抗病毒活性及雙向免疫功能?？勺鳛橹委熞倚透窝椎燃膊〉碾p向免疫調(diào)節(jié)劑。
權(quán)利要求
1.八寶素在制備治療乙型肝炎藥物中的應(yīng)用。
2.八寶素作為制備生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
一種從景天科植物八寶或瓦松或長(zhǎng)藥八寶的全草中提取、分離得到景酮糖酐,再與丙酮一步縮合得到一種具有抗病毒活性的化合物。經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定該化合物為異丙叉景酮糖酐,即八寶素,結(jié)構(gòu)式為:該化合物可作為制備抗乙型肝炎病毒及雙向免疫等抗病毒新藥中應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K31/357GK1277020SQ99112550
公開(kāi)日2000年12月20日 申請(qǐng)日期1999年11月17日 優(yōu)先權(quán)日1999年11月17日
發(fā)明者左春旭, 仲英, 李風(fēng)琴, 丁杏苞 申請(qǐng)人:山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所