專利名稱：裂－乳胱氨酸－β－內(nèi)脂及其類似物的合成的制作方法
背景技術：
發(fā)明領域本發(fā)明一般涉及乳胱氨酸和相關化合物的制備方法，及乳胱氨酸和裂-乳胱氨酸(clasto-lactacystin)-β-內(nèi)酯的新類似物，以及它們作為蛋白體抑制劑的用途。
相關技術的描述鏈霉菌屬代謝物乳胱氨酸(1)抑制細胞周期過程并在培養(yǎng)的成神經(jīng)細胞瘤細胞中誘發(fā)軸突長出(Omura等人，《抗生素雜志》(J.Antibiotics)，44117(1991)；Omura等人，《抗生素雜志》(J.Antibiotics)，44113(1991)；Fenteany等人，《美國國家科學院院報》(Proc.Natl.Acad.Sci.(USA))，913358(1994))。介導這些作用的細胞靶是20S蛋白體，即26S蛋白體的蛋白水解核心，它是細胞內(nèi)蛋白質降解的遍在蛋白-蛋白體途徑的主要組分。對其機理進行研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，通過活性種類裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯(2)的媒介作用乳胱氨酸可以抑制蛋白體，該內(nèi)酯(2)特異性地?；鞍左wX/MB1亞基的N末端蘇氨酸殘基(Fenteany等人，《科學》(Science)，268726(1995)；Dick等人，《生物化學雜志》(J.Biol.Chem.)，2717273(1996))。Fenteany等人還公開了乳胱氨酸類似物(WO96/32105)。
在多種重要的生理過程中都涉及遍在蛋白-蛋白體途徑(Goldberg等人，《化學與生物學》(Chemistry & Biology)，2503(1995)；Ciechanover，《細胞》(Cell)，7913(1994)；Deshaies，《細胞生物學的趨勢》(Trends Cell Biol.)，5431(1995))。事實上，細胞蛋白的大多數(shù)都通過此途徑被水解。首先通過共價綴合到小蛋白遍在蛋白的多個分子上標記蛋白質底物以便進行降解。然后，所得多遍在蛋白化蛋白質被26S蛋白體識別和降解。經(jīng)過對其在損壞的或突變的細胞內(nèi)蛋白的降解過程中的作用的長期認識，人們現(xiàn)在也已知道，該途徑負責多種調(diào)節(jié)蛋白質的選擇性降解。例如，有序的細胞周期過程要求細胞周期蛋白的程序性遍在蛋白化和降解。遍在蛋白-蛋白體途徑還介導眾多其它細胞周期調(diào)節(jié)蛋白和腫瘤抑制蛋白的降解(例如，p21，p27，p53)。轉錄因子NF-κB的激活依賴于抑制性蛋白IκB-α的遍在蛋白化和降解，該轉錄因子在與免疫和炎癥反應有關的基因調(diào)節(jié)作用方面起著重要的作用(Palombella等人，WO95/25533)。另外，細胞內(nèi)蛋白通過遍在蛋白-蛋白體途徑實現(xiàn)連續(xù)性周轉是加工抗原肽以便于MHC I類分子上呈遞所必需的(Goldberg和Rock，WO 94/17816)。
乳胱氨酸和裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯令人感興趣的生物活性和天然原料的不足，以及這些分子的引起爭論的化學結構，已經(jīng)激勵人們努力合成乳胱氨酸和相關類似物。Corey和Reichard(《美國化學會志》(J.Am.Chem.Soc.)，11410677(1992)；《四面體通訊》(Tetrahedron Lett.)，346977(1993))實現(xiàn)了乳胱氨酸的首次全合成，該合成反應有15步，總產(chǎn)率為10％。該合成反應的關鍵特征是從N-芐基絲氨酸衍生的順-噁唑啉醛通過立體有擇羥醛反應構造C(6)-C(7)鍵。在Uno等人(《美國化學會志》，1162139(1994))報道的合成方法中從D-焦谷氨酸衍生的雙環(huán)噁唑啉甲硅烷基烯醇醚中間體的立體有擇Mukaiyama-羥醛反應被用于構造C(5)-C(9)鍵。該合成反應有19步，總產(chǎn)率為5％。在類似的雙環(huán)噁唑啉中間體的堿性條件下進行的羥醛反應構成Dikshit等人(《四面體通訊》，366131(1995))報道的模型研究基礎。
噁唑啉衍生的烯醇化物的羥醛反應的顯著特征在于由Smith及其合作者報道的乳胱氨酸的合成(Suazuka等人，《美國化學會志》，1155302(1993)；Nagamitsu等人，《美國化學會志》，1183584(1996))及Corey和Choi報道的(6R)-乳胱氨酸的合成(Corey和Choi，《四面體通訊》，346969(1993)；Choi博士的論文，哈佛大學，44(1995))。在前一種合成方法(有20步，總產(chǎn)率為9％)中，烯醇化物與甲醛縮合引入一個單碳原子，然后必須將其在許多附加步驟中加工。在Corey和Choi合成方法中，羥醛反應選擇性提供不希望的立體化學產(chǎn)物，導致最終制成沒有生物活性的乳胱氨酸的C(6)差向異構體。
人們已經(jīng)用22步以2％總產(chǎn)率從D-葡萄糖制備出乳胱氨酸(Chida等人，《化學學會雜志，化學通訊》(J.Chem.Soc.，Chem.Commun.)，793(1995))。天然產(chǎn)物生產(chǎn)中所涉及的生物合成途徑已經(jīng)通過涉及富集13C化合物的進料實驗進行了研究(Nakagawa等人，《四面體通訊》，355009(1994))。
上述報道的乳胱氨酸合成方法時間長，產(chǎn)率低，而且沒有一種合成方法適用于類似物的合成。因此需要制備乳胱氨酸，裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯及其類似物的改進方法。
發(fā)明概述本發(fā)明的第一方面涉及式VI乳胱氨酸或其類似物或式VII裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯或其類似物的制備方法，
其中R1是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R2是烷基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，烷氧基，羥基，烷氧基烷基或酰氨基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；及R7是烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所說的烷基，芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個可以選擇性地被取代。
本發(fā)明的第二方面涉及式XIV甲酰基甲酰胺的制備方法，
其中R2是烷基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，烷氧基，羥基，烷氧基烷基或酰氨基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；及R5和R6分別是烷基和烷芳基之一；或R5和R6與其相連的氮原子一起形成一個5-7員雜環(huán)，該雜環(huán)可以選擇性地被取代，而且可以選擇性地含有另一個氧原子或氮原子。
本發(fā)明的第三方面涉及式Ia或Ib三取代噁唑啉的制備方法，
其中R1是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；及R4是芳基或雜芳基，二者都可以選擇性地被取代。式Ia或Ib三取代噁唑啉可以用作通過本文所述方法制備乳胱氨酸，裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯及其類似物的起始原料。
本發(fā)明的第四方面涉及式VI和VII的乳胱氨酸，裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯或類似物，它們具有意想不到的生物活性。乳胱氨酸，裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯及其類似物具有作為蛋白體抑制劑的生物活性。它們可用于治療由蛋白體功能直接介導的疾病，如肌肉萎縮，或通過蛋白質間接介導的疾病，所說蛋白質是由蛋白體如轉錄因子NF-κB加工而成的。
本發(fā)明的第五方面涉及藥物組合物，它含有式VI或式VII化合物以及可藥用載體或稀釋劑。
本發(fā)明的第六方面涉及抑制蛋白體功能或治療由蛋白體功能直接或間接介導的疾病的方法，包括給藥在抑制蛋白體方面具有意想不到的高活性的式VI或式VII化合物。優(yōu)選實施方案涉及到用式VI或VII化合物在血管閉塞之后防止梗塞或減小梗塞尺寸，例如，治療中風之后的神經(jīng)元損失。另一個優(yōu)選實施方案涉及所說化合物用于治療哮喘。
本發(fā)明的第七方面涉及式XIV甲酰基甲酰胺的對映體富集的組合物。
本發(fā)明的第八方面涉及新的各個中間體，如式II羥醛和式III氨基二醇，
和乳胱氨酸，裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯或其各種類似物的多步制備方法中的各個步驟。
本發(fā)明的第九方面涉及各個中間體，如式XVII，XVIII和XIX化合物，
其中X是鹵素，優(yōu)選Cl，Br或I，以及式I取代的噁唑啉的多步制備方法中的各個步驟。
本發(fā)明的其它特征或優(yōu)點將從下面詳細的論述和所附權利要求書明顯看出。
附圖簡述

圖1為靜脈內(nèi)注射化合物3b對大鼠(n＝6-8)梗塞體積的效應的直方圖。
圖2為靜脈內(nèi)注射化合物3b對大鼠(n＝6-8)神經(jīng)病學評分的效應的直方圖。
優(yōu)選實施方案的詳述本發(fā)明涉及乳胱氨酸，裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯及其類似物的改進的多步合成方法，它比現(xiàn)有技術中的合成方法步驟少，總產(chǎn)率高。一些單個的處理步驟和化學中間體使本發(fā)明的合成途徑區(qū)別于現(xiàn)有技術中的合成途徑。例如，該合成途徑依賴于噁唑啉中間體的新的立體有擇合成和甲?；柞０返絿f唑啉的唯一的立體有擇加成。
本發(fā)明還涉及具有意想不到生物活性的新式VI和VII類似物。乳胱氨酸，裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯及其類似物具有作為蛋白體抑制劑的生物活性。它們可用于治療由蛋白體功能直接介導的疾病，如肌肉萎縮，或通過蛋白質間接介導的疾病，所說蛋白質是由蛋白體如轉錄因子NF-κB加工而成。本發(fā)明還涉及抑制蛋白體功能或治療由蛋白體功能直接或間接介導的疾病的方法，包括給藥在抑制蛋白體方面具有意想不到的高活性的式VI或VII化合物。在本發(fā)明的優(yōu)選方面，給藥含有式VI或式VII化合物的藥物組合物以用于治療局部缺血或再灌注損傷。例如，在優(yōu)選實施方案中所說化合物被用于治療、預防或改善中風后的神經(jīng)元損失。合成方法本發(fā)明第一方面涉及式VI乳胱氨酸及其類似物和式VII裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯及其類似物的制備方法
其中R1是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R2是烷基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，烷氧基，羥基，烷氧基烷基或酰氨基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；及R7是烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所說的烷基，芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個可以選擇性地被取代。
這些化合物的制備方法依賴于式V普通羧酸中間體的形成
其中R1和R2的定義同上面在式VI和VII中的定義，該方法的步驟包括(a)通過用強堿處理式I取代的芳基-或雜芳基噁唑啉，
其中R1定義如上，R3是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，其中任何一個可以選擇性地被取代；及R4是芳基或雜芳基，二者都可以選擇性地被取代；將所說取代的芳基-或雜芳基噁唑啉脫質子化，形成烯醇化物；(b)用下列金屬之一將所說烯醇化物進行金屬轉移鈦，鋁，錫，鋅，鎂和硼，然后用式XIV甲?；柞０诽幚?，
其中R2的定義同上面在式VI和VII中的定義；及R5和R6各是烷基或烷芳基之一；或R5和R6與其相連的氮原子一起形成一個可以選擇性地被取代的5-7員雜環(huán)，該雜環(huán)可以選擇性地含有另一個氧原子或氮原子，形成式II加合物，
其中R1-R6定義如上；(c)催化氫化所說式II加合物，形成式IVγ-內(nèi)酰胺，
其中R1，R2和R3定義如上；(d)皂化所說式IVγ-內(nèi)酰胺，形成式V內(nèi)酰胺羧酸，
其中R1和R2定義如上。
式V羧酸中間體可以通過用環(huán)化劑處理而環(huán)化，形成式VII裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯或其類似物，并可以任選進一步與硫醇(R7CH)如N-乙?；腚装彼岱磻?，形成式VI乳胱氨酸或其類似物。
或者，直接將式V羧酸中間體與硫醇(R7CH)如N-乙?；腚装彼崤己?，形成式VI乳胱氨酸或其類似物。
本發(fā)明第二方面涉及式XIV對映體富集的甲?；柞０返闹苽浞椒?，
其中R2，R5和R6定義如上，所說方法包括(a)將式VIII化合物脫質子化，
其中R8是異丙基或芐基，隨后，用R2CH2COCl將所得陰離子?；?，形成式IX?；鶉f唑烷酮，
其中R2和R8定義如上；(b)將式IX酰基噁唑烷酮與芐氧基甲基氯進行立體有擇反應，形成式X保護的醇，
其中R2和R8定義如上；(c)水解式X保護的醇，形成式XI羧酸，
其中R2定義如上；(d)將所說式XI酸與酰胺R5R6NH2偶合，得到式XII酰胺，
其中R2，R5和R6定義如上；(e)催化氫化式XII酰胺，形成式XIII醇，
其中R2，R5和R6定義如上；(f)氧化所得的式XIII醇，得到式XIV甲?；柞０贰?br> 本發(fā)明第三方面涉及式Ia三取代順-噁唑啉化合物的制備方法，
其中R1是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R3是烷基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，其中任何一個可以選擇性地被取代；及R4是芳基或雜芳基，二者都可以選擇性地被取代；所說方法包括(a)不對稱二羥基化式XV烯烴中間體，
形成式XVIa光學活性的二醇，
(b)將所說式XVIa光學活性的二醇與芳族羧酸衍生的原酸酯在酸(Lewis或Bronsted酸)催化作用下反應，得到混合原酸酯，然后，在堿存在下將所得混合原酸酯中間體與下列試劑反應低級烷?；u化物，氫鹵酸(HX，其中X是鹵素)，酰氯和含鹵素Lewis酸(例如，BBr3，SnCl4，Ti(OR)2Cl2，Ti(OR)3Cl，Me3SiX等，其中X是鹵素，等等)，形成式XVIIa衍生物，
其中X是鹵素，優(yōu)選Cl，Br或I；(c)將所說式XVIIa衍生物與堿金屬疊氮化物反應，形成式XVIIIa疊氮化物，
(d)催化氫化所說疊氮化物，形成式XIXa化合物，
(e)將式XIXa化合物置于閉環(huán)條件下，形成所說的式I取代的芳基-或雜芳基噁唑啉，在氧取代的碳上構型發(fā)生逆轉，生成式Ia順-噁唑啉；其中對于每個式XV，XVIa，XVIIa，XVIIIa和XIXa，R1，R3和R4同上面式I中定義。
或者，本發(fā)明第三方面涉及式Ib三取代反-噁唑啉化合物的制備方法，包括(a)不對稱二羥基化式XV烯烴中間體，
形成式XVIb光學活性的二醇，
(b)將所說式XVIb光學活性的二醇與芳族羧酸衍生的原酸酯在酸(Lewis或Bronsted酸)催化作用下反應，得到混合原酸酯，然后，在堿存在下將所得混合原酸酯中間體與下列試劑反應低級烷?；u化物，氫鹵酸(HX，其中X是鹵素)，酰氯和含鹵素Lewis酸(例如，BBr3，SnCl4，Ti(OR)2Cl2，Ti(OR)3Cl，Me3SiX等，其中X是鹵素，等等)，形成式XVIIb衍生物，
其中X是鹵素，優(yōu)選Cl，Br或I；(c)將所說式XVIIb衍生物與堿金屬疊氮化物反應，形成式XVIIIb疊氮化物，
(d)催化氫化所說疊氮化物，形成式XIXb化合物，及
(e)將式XIXb化合物置于閉環(huán)條件下，形成所說的式Ib取代的芳基-或雜芳基噁唑啉，其中閉環(huán)反應隨著在氧取代的碳上構型的保持進行，生成式Ib反噁唑啉；其中對于每個式XV，XVI，XVII，XVIII和XIX，R1，R3和R4同上面式I中定義。
關于上述方法，下列優(yōu)選涵義是適用的R1的優(yōu)選涵義是C1-12烷基，特別是C1-8烷基，C3-8環(huán)烷基，特別是C3-6環(huán)烷基，C2-8鏈烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，特別是C6-10芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代?？梢赃x擇性地出現(xiàn)在R1部分的芳基環(huán)上的取代基包括一個或多個，優(yōu)選一個或兩個，羥基，硝基，三氟甲基，鹵素，C1-6烷基，C6-10芳基，C1-6烷氧基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，氨基，C2-6烷氧羰基，羧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，C1-6烷基磺?；?，C6-10芳基磺?；?，C1-6烷基亞磺酰基，C1-6烷基磺酰氨基，C6-10芳基磺酰氨基，C6-10芳基(C1-6)烷基磺酰氨基，C1-6烷基，C1-6羥基烷基，C6-10芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基，C1-6烷基羰基，C2-6羧基烷基，氰基和三氟甲氧基。
R1更優(yōu)選地是C1-3烷基，如乙基，丙基或異丙基；環(huán)烷基，如環(huán)己基；或C6-10芳基，如苯基。最優(yōu)選的是異丙基。
R2的優(yōu)選涵義是C1-8烷基，C3-8環(huán)烷基，特別是C3-6環(huán)烷基，C1-8烷氧基，C2-8鏈烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，特別是C6-10芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被上面R1中所述的任何取代基取代。
R2更優(yōu)選地是C1-4烷基，如甲基，乙基，丙基或丁基；或C1-4烷氧基，如甲氧基或乙氧基。最優(yōu)選的是甲基，乙基，丙基和丁基。
至于R3，在這個位置上可以使用各種酯官能團。優(yōu)選的涵義是C1-8烷基，C3-8環(huán)烷基，特別是C4-7環(huán)烷基，C2-8鏈烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，特別是C6-10芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，其中任何一個可以選擇性地被取代?？梢赃x擇性地出現(xiàn)在R3上的取代基包括一個或多個，優(yōu)選一個或兩個在上面R1中所述的取代基。
R3更優(yōu)選地是C1-4烷基，C6-10芳基或C6-10芳基(C1-6)烷基。最優(yōu)選的是甲基，乙基，叔丁基和芐基。
R4優(yōu)選是C6-10芳基，優(yōu)選苯基，或雜芳基，包括噻吩基，苯并[b]噻吩基，呋喃基，吡喃基，異苯并呋喃基，苯并噁唑基，2H-吡咯基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，吡啶基，吡嗪基，嘧啶基，噠嗪基，中氮茚基，異吲哚基，3H-吲哚基，吲哚基，吲唑基，嘌呤基，4H-喹嗪基，異喹啉基，喹啉基或三唑基。這些苯基或雜芳基可以被一個或兩個上面R1中所述的取代基選擇性地取代。最優(yōu)選的是苯基和被鹵素，C1-6烷基，C1-6烷氧基，羧基，氨基，C1-6烷基氨基和/或二(C1-6)烷基氨基取代的苯基。
R5和R6分別是烷基，芳烷基或烷芳基之一；或R5和R6與其相連的氮原子一起形成5-7員雜環(huán)，該雜環(huán)可以選擇性地被取代，而且可以選擇性地含有另一個氧原子或氮原子。任選的取代基列于上面關于R1的定義中。
R5和R6優(yōu)選是C1-6烷基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，或與其相連的氮原子一起形成5-7員雜環(huán)，該雜環(huán)可以選擇性地被取代，并且可以選擇性地含有另一個氧原子或氮原子。NR5R6最優(yōu)選的涵義是二甲氨基，二乙氨基，吡咯烷基，哌啶子基，嗎啉代，噁唑烷酮和被鹵素，C1-6烷基，C6-10芳基(C1-6)烷基，C1-6烷氧基，羧基和/或氨基取代的噁唑烷酮。
R7優(yōu)選是C1-8烷基，C3-8環(huán)烷基，C6-10芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基，C1-6烷基(C6-10)芳基，其中任何一個可以選擇性地被取代?？梢赃x擇性地出現(xiàn)在R7的一個或兩個環(huán)上或鏈上的取代基包括一個或多個，優(yōu)選一個或兩個在上面R1中所述的取代基。R7優(yōu)選與其相連的硫原子構成半胱氨酸或半胱氨酸衍生物，如N-乙酰基半胱氨酸，谷胱甘肽等。
流程1是從取代的噁唑啉起始原料制備乳胱氨酸和裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯類似物的一般流程。
流程1
起始原料噁唑啉I，既可以是順構型(Ia)也可以是反構型(Ib)，用強堿進行脫質子化，形成烯醇化物。適用于此反應的堿為例如有機堿，包括受阻酰胺堿，如二異丙基氨基化鋰(LDA)，四甲基哌啶化鋰(LiTMP)，六甲基二硅氮化鋰、鈉或鉀(LiHMDS，NaHMDS，KHMDS)等；或受阻烷基鋰試劑，如仲丁基鋰，叔丁基鋰等。該反應優(yōu)選在低溫下在醚類溶劑如乙醚，四氫呋喃(THF)或二甲氧基乙烷(DME)中進行。反應溫度優(yōu)選在約-100-約-30℃范圍進行，更優(yōu)選-85℃至-50℃，最優(yōu)選-85℃至-75℃。反應溫度在確定隨后向醛的加成反應的立體化學結果時很重要，因為較低溫度就可以得到較好的選擇性。
在脫質子反應步驟之后用下列金屬對所說烯醇化物進行金屬轉移鈦，鋁，錫，鋅，鎂和硼。適于這步反應的優(yōu)選試劑包括鈦或鋁Lewis酸，例如Me2AlCl或(i-PrO)3TiCl，或二者的混合物。優(yōu)選使用1-3摩爾當量的Lewis酸，更優(yōu)選使用2-3摩爾當量的，最優(yōu)選使用約2.2-2.3當量的。然后用甲?；０?XIV)處理烯醇化物，得到加合物II。用硫酸氫鈉溶液洗掉過量的醛，粗產(chǎn)物無需進一步純化即可用于下步反應。使用2.2-2.3當量Me2AlCl可以選擇性地生成(6S)產(chǎn)物(以乳胱氨酸計)，比例一般好于約10∶1，而使用1當量Me2AlCl，則選擇性形成(6R)產(chǎn)物，比例約為5∶1。
作為(6S)-和(6R)-差向異構體的混合物的加合物II經(jīng)過催化氫化反應生成所要的γ-內(nèi)酰胺(IV)，有時作為與氨基二醇III的混合物
適用于該反應的催化劑包括鈀黑，鈀-活性炭，氫氧化鈀/炭等。適用于該反應的有機溶劑包括低級鏈烷醇如甲醇，乙醇或異丙醇，低級鏈烷酸酯如乙酸乙酯，低級鏈烷酸如乙酸，或它們的混合物。該反應在氫氣中進行，氫氣壓力約為15-100psi，更優(yōu)選約30-50psi?；蛘?，可以采用轉移氫化法(R.A.W.Johnstone等人，《化學評論》(Chem.Rev.)，85129(1985))，即在大氣壓下用催化劑和氫供體處理加合物II。
粗產(chǎn)物混合物經(jīng)過加熱后，使氨基二醇III轉變成γ-內(nèi)酰胺IV，然后可以約60-75％的總產(chǎn)率從II分離。加熱步驟通過先濾除氫化步驟中所用的催化劑，然后將濾液加熱回流而方便地進行。如果粗產(chǎn)物混合物中沒有氨基二醇III，可以省略加熱步驟。經(jīng)過酯皂化反應及隨后的環(huán)化反應，可以40-90％產(chǎn)率，一般大于60％產(chǎn)率，得到β-內(nèi)酯VII?？梢杂矛F(xiàn)有技術中已知的偶合劑完成環(huán)化反應，其中所說偶合劑包括芳基磺酰氯，六氟磷酸苯并三唑-1-基氧三(二甲氨基)鏻(BOP試劑)，四氟硼酸O-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓(TBTU)，烷基，芳基或鏈烯基氯甲酸酯等。氯甲酸異丙烯酯是該步反應的優(yōu)選試劑，因為所有副產(chǎn)物都是揮發(fā)性的，而且不需要對產(chǎn)物進行色譜純化。
根據(jù)文獻記載的方法(Corey等人，《四面體通訊》，346977(1993))，用N-乙?；腚装彼崽幚恙?內(nèi)酯可將裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯轉化成乳胱氨酸。β-內(nèi)酯VII與其它硫醇的反應類似地進行。或者，將羧酸中間體V與硫醇偶合形成相應的硫醇酯VI，制成乳胱氨酸類似物。因此，本發(fā)明方法被用于乳胱氨酸和裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯及其類似物的合成。
用在醛醇縮合反應中的對映體富集的甲?；０稾IV是新化合物。它們可以按照如流程2中所述的代表性反應順序制備。至于本發(fā)明中的術語“對映體富集的”，是指一種對映體相對于另一種對映體是過量的，即在混合物中一種對映體的含量超過50％。術語“立體有擇反應”用來指合成或反應步驟使一種對映體或非對映體的產(chǎn)量超過另一種對映體或其它非對映體。
流程2
(S)-(-)-4-芐基-2-噁唑烷酮(VIIIa)或(S)-(-)-4-異丙基-2-噁唑烷酮(VIIIb)(其中R8是芐基或異丙基)的陰離子經(jīng)過?；磻猿^80％產(chǎn)率生成酰基噁唑烷酮IX。隨后經(jīng)過立體有擇芐氧基甲基化反應(Evans等人，《美國化學會志》，1128215(1990))以超過80％產(chǎn)率得到保護的醇X，條件是芐基氯甲基醚是新制備的(Conner等人，《有機合成》(Organic Syntheses)，5216(1974))。經(jīng)過過氧化物介導的水解得到酸XI，將其與胺偶合得到酰胺XII，總產(chǎn)率一般超過50％。芐基經(jīng)過氫解反應，然后將得到的醇(XIII)進行氧化反應，可以80-85％產(chǎn)率得到甲?；０稾IV。氫解反應步驟中優(yōu)選使用Pearlmans催化劑(Pd(OH)2)。最后的氧化步驟最好用Dess-Martin所述的全碘烷(periodinane)(《有機化學雜志》(J.Org.Chem.)，484156(1983))或用2，2，6，6-四甲基-1-哌啶氧基(TEMPO)游離基和在溴離子存在下的緩沖的次氯酸鹽(《有機化學雜志》，504888(1985)；《有機合成文集》(Org.Synth.Coll.)，8367(1993))完成。其它溫和的氧化劑如過釕酸四丙基銨(TPAP)也可以使用。通過用硼氫化鈉還原醛并用R-(+)-α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯基乙酰氯(Dale等人，《有機化學雜志》，342543(1969))將所得的醇轉化成相應的Mosher酯可以使甲?；０稾IV表現(xiàn)為對映體純的。在300MHz的1H NMR分析顯示了單一非對映體。根據(jù)流程2制備的醛構型是穩(wěn)定的，當貯存在0℃時，一周后沒有對映體劣化跡象出現(xiàn)。該醛在醛醇反應條件下構型也是穩(wěn)定的，并且形成加合物II，而無需在C(7)位進行取代基R2的差向異構化。
本合成方法將有對強堿和任何一個R1的取代基參與。異丙基是使終產(chǎn)物具有良好蛋白體抑制活性的優(yōu)選取代基。
流程3
本發(fā)明還涉及制備噁唑啉起始原料I的新途徑。整個合成過程包括5步(見流程3)，最后得到順-取代的噁唑啉Ia，此后，它被用于上述方法。流程3的第一步是烯烴XV的Sharpless不對稱二羥基化反應(Sharpless等人，《有機化學雜志》，572768(1992)；Kolb等人，《化學評論》，942483(1994)；Shao和Goodman，《有機化學雜志》，612582(1996))。如果無法買到，可以利用醛和乙氧羰基亞甲基三苯基膦之間的Wittig縮合反應制備烯烴XV(Hale等人，《四面體》，509181(1994))。其它烯化反應過程也是現(xiàn)有技術中已知的。二羥基化反應優(yōu)選用AD-混合-β(Aldrich化學公司)在甲磺酰胺存在下進行，立體有擇地得到二醇XVIa，正如Sharpless的面選擇規(guī)則所預測的那樣。對于大規(guī)模生產(chǎn)，二羥基化反應優(yōu)選用N-甲基嗎啉-N-氧化物(NMO)作為再氧化劑代替存在于AD-混合-β中的K3Fe(CN)6進行。雖然該方法的對映體選擇性稍低，但它允許用更濃的反應混合物，而且可以大大簡化加工步驟?？梢圆捎弥亟Y晶方法提高產(chǎn)物的對映體純度。
下一步，在Lewis或Bronsted酸催化作用下用原酸酯處理二醇XVIa，得到混合原酸酯，用酰鹵處理(Haddad等人，《四面體通訊》，374525(1996))可當場將其轉化成鹵代酯XVIIa。雖然此反應優(yōu)選采用酰鹵，特別是乙酰鹵，但其它酰鹵如HCl，HBr，HI，Me3SiCl，Me3SiI，Me3SiBr等也可以使用。式MLnX含鹵素Lewis酸，如BBr3，SnCl4，Ti(OR)2Cl2，Ti(OR)3Cl等也可以使用。上式中，M選自下列金屬B，Ti，Sn，Al，Zn和Mg；L是適合上述金屬的任何配體，優(yōu)選醇鹽或鹵素基團；n是能獲得穩(wěn)定復合物的整數(shù)；及X是鹵素。優(yōu)選用乙酰溴制備鹵代酯XVIIa。用于本反應的原酸酯優(yōu)選從芳族或雜芳族羧酸衍生。更優(yōu)選原酸酯從苯甲酸衍生，如原苯甲酸三甲酯。在制備混合原酸酯時優(yōu)選用三氟化硼醚合物作Lewis酸催化劑，但其它酸如HBr，SnCl4，TiCl4，BBr3等也可以使用。
加工之后，在極性非質子傳遞有機溶劑如二甲亞砜(DMSO)或N，N-二甲基甲?；柞０?DMF)中用堿金屬疊氮化物處理，將粗鹵化物XVIIa轉變成疊氮化物XVIIIa。在乙酸乙酯中用鈀催化劑疊氮化物XVIIIa的催化氫化反應隨著芳酰基的遷移進行(Wang等人，《有機化學雜志》，595014(1994))，得到羥基酰胺XIXa。
在二氯甲烷中用亞硫酰氯處理XIXa實現(xiàn)閉環(huán)及羥基取代的碳原子構型的逆轉，生成順-取代的噁唑啉起始原料Ia。適用于本反應的其它試劑包括磺酰氯，三氯化磷，磷酰氯和(甲氧羰基氨磺?；?-氫氧化三乙基銨內(nèi)鹽(Burgess試劑)。在Mitsunobu條件(Mitsunobu，《合成》，1(1981))下處理XIXa也能實現(xiàn)閉環(huán)。噁唑啉環(huán)上的氧原子預定變成終產(chǎn)物VI和VII中的C(9)-羥基。在平衡條件下(甲醇鈉，甲醇)，通過酯取代基構型的逆轉使順-噁唑啉(Ia)轉變成反-噁唑啉(Ib)，同時R1取代基的構型保持固定。順-和反-噁唑啉都可以用于流程1所示的方法，會產(chǎn)生等價的結果。
在制備噁唑啉起始原料I的另一個方法中，對甲苯磺酸(p-TsOH)被用來實現(xiàn)閉環(huán)(流程4)。在這種情況下，閉環(huán)使羥基取代的碳原子構型得以保持，得到反-噁唑啉(Ib)。為了在終產(chǎn)物的C(9)上得到適合的立體化學構型，必須選擇在二羥基化反應中使用的手性配體以便提供與流程3中所述的相反的面選擇性。例如，用AD-混合-α代替AD-混合-β。所有接下來的其它步驟類似于在順-噁唑啉Ia的合成中所述的那些步驟。
流程4
化合物上述許多化合物是新化合物；這些新化合物都是要求權利保護的。
本發(fā)明第四、五和六方面涉及可以通過本文所述合成途徑制備的乳胱氨酸類似物；涉及含有這類化合物的藥物組合物；以及涉及治療患有由蛋白體加工而成的蛋白質介導的疾病的患者的方法，該方法包括給患者服用有效量的本文公開的藥物組合物。這些方法可治療阿爾茨海默病，噁病質，癌癥，炎癥，如與下列疾病有關的炎癥反應變態(tài)反應，骨髓或實體器官移植，或疾病狀態(tài)，包括(但不限于)關節(jié)炎，多發(fā)性硬化，腸炎和寄生蟲病如瘧疾)，牛皮癬，再狹窄，中風和心肌梗塞。
本文公開的式VI和VII化合物對蛋白體具有高選擇性，但卻不抑制其它蛋白酶如胰蛋白酶，α-胰凝乳蛋白酶，(需)鈣蛋白酶I，(需)鈣蛋白酶II，木瓜蛋白酶和組織蛋白酶B。
正如Fenteany等人所公開的那樣(WO 96/32105，該文全部在此引作參考)，乳胱氨酸，裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯及其類似物具有抑制蛋白體的生物活性。它們可用于治療由蛋白體功能直接介導的疾病，如肌肉萎縮，或通過蛋白質間接介導的疾病，所說蛋白質是由蛋白體如轉錄因子NF-κB加工而成的。用本發(fā)明方法制備的化合物還可以用來確定細胞、發(fā)育或生理過程或輸出是否由蛋白體的蛋白酶解活性調(diào)節(jié)。
具有意想不到的蛋白體功能抑制活性的化合物是式VI和VII化合物或它們的鹽，
其中R1是C1-12烷基，C3-8環(huán)烷基，C2-8鏈烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基；R2是C2-6烷基；及R7是C1-8烷基，C3-8環(huán)烷基，C6-10芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基，C1-6烷基(C6-10)芳基，其中任何一個可以選擇性地被取代?？梢赃x擇性地出現(xiàn)在R7的一個或兩個環(huán)上或鏈上的取代基包括一個或多個，優(yōu)選一個或兩個在上面R1中所述的取代基。
優(yōu)選的化合物是其中R1是C1-4烷基，更優(yōu)選為異丙基的化合物。R2優(yōu)選是乙基，正丙基，正丁基或異丁基。R7優(yōu)選與其相連的硫原子一起形成半胱氨酸或半胱氨酸衍生物如N-乙?；腚装彼?，谷胱甘肽等。
本發(fā)明第七方面涉及式XIV對映體富集的甲?；柞０坊蚱潲}，
其中R2是C1-8烷基，C3-8環(huán)烷基，C2-8鏈烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基；及R5和R6分別是C1-6烷基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，或與其相連的氮原子一起形成5-7員雜環(huán)，該雜環(huán)可以選擇性地被取代，而且可以選擇性地含有另一個氧原子或氮原子。
優(yōu)選R2是C2-6烷基的化合物。
本發(fā)明第八方面涉及式II和III化合物或其鹽，
其中R1是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R2是烷基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，烷氧基，羥基，烷氧基烷基或酰氨基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R3是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，其中任何一個可以選擇性地被取代；R4是選擇性地被取代的芳基或選擇性地被取代的雜芳基；及R5和R6分別是烷基或烷芳基之一；或R5和R6與其相連的氮原子一起形成5-7員雜環(huán)，該雜環(huán)可以選擇性地被取代，而且可以選擇性地含有另一個氧原子或氮原子。最優(yōu)選的NR5R6是二甲氨基，二乙氨基，吡咯烷基，哌啶子基，嗎啉代，噁唑烷酮和被鹵素，C1-6烷基，C6-10芳基(C1-6)烷基，C1-6烷氧基，羧基和/或氨基取代的噁唑烷酮。
優(yōu)選的式II和III化合物是其中取代基涵義如下的化合物
R1是C1-12烷基，C3-8環(huán)烷基，C2-8鏈烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，其中所說芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R2是C1-8烷基，C3-8環(huán)烷基，C2-8鏈烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基，或C1-6烷基(C6-10)芳基，其中所說芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R3是C1-8烷基，C3-8環(huán)烷基，C2-8鏈烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，其中任何一個可以選擇性地被取代；R4是選擇性地被取代的C6-10芳基，或下列選擇性地被取代的雜芳基噻吩基，苯并[b]噻吩基，呋喃基，吡喃基，異苯并呋喃基，苯并噁唑啉，2H-吡咯基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，吡啶基，吡嗪基，嘧啶基，噠嗪基，中氮茚基，異吲哚基，3H-吲哚基，吲哚基，吲唑基，嘌呤基，4H-喹嗪基，異喹啉基，喹啉基或三唑基；及R5和R6分別是C1-6烷基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，或與其相連的氮原子一起形成5-7員雜環(huán)，該雜環(huán)可以選擇性地被取代，并且可以選擇性地含有另一個氧原子或氮原子。最優(yōu)選的NR5R6是二甲氨基，二乙氨基，吡咯烷基，哌啶子基，嗎啉代，噁唑烷酮和被鹵素，C1-6烷基，C6-10芳基(C1-6)烷基，C1-6烷氧基，羧基和/或氨基取代的噁唑烷酮。
本發(fā)明第九方面涉及式XVIIa，XVIIb，XVIIIa，XVIIIb，XIXa或XIXb化合物或其鹽，
其中R1是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R3是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，其中任何一個可以選擇性地被取代；及R4是選擇性地被取代的芳基或選擇性地被取代的雜芳基。
優(yōu)選的式XVII，XVIII或XIX化合物是其中R1是C1-12烷基，C3-8環(huán)烷基，C2-8鏈烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，其中所說芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R3是C1-8烷基，C3-8環(huán)烷基，C2-8鏈烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，其中任何一個可以選擇性地被取代；及R4是選擇性地被取代的C6-10芳基，或下列選擇性地被取代的雜芳基噻吩基，苯并[b]噻吩基，呋喃基，吡喃基，異苯并呋喃基，苯并噁唑基，2H-吡咯基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，吡啶基，吡嗪基，嘧啶基，噠嗪基，中氮茚基，異吲哚基，3H-吲哚基，吲哚基，吲唑基，嘌呤基，4H-喹嗪基，異喹啉基，喹啉基或三唑基，的化合物。定義本文所用術語“烷基”指有至多12個碳原子，優(yōu)選1-8個碳原子的直鏈和支鏈殘基，如甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，叔丁基，異丁基，戊基，己基，異己基，1-乙基丙基，庚基，4，4-二甲基戊基，辛基，2，2，4-三甲基戊基，壬基，癸基，十一基和十二基。
本文所用術語“取代的烷基”指含有一、二或三個下列取代基的上面定義的烷基鹵，羥基，硝基，三氟甲基，鹵素，C1-6烷基，C6-10芳基，C1-6烷氧基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，氨基，C2-6烷氧羰基，羧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，C1-6烷基磺?；?，C6-10芳基磺酰基，C1-6烷基亞磺?；珻1-6烷基磺酰氨基，C6-10芳基磺酰氨基，C6-10芳基(C1-6)烷基磺酰氨基，C1-6烷基，C1-6羥基烷基，C6-10芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基，C1-6烷基羰基，C2-6羧基烷基，氰基及三氟甲氧基和/或羧基取代基。
本文所用術語“環(huán)烷基”指含有3-12個碳原子，優(yōu)選3-8個碳原子的飽和環(huán)烴基，包括環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)庚基，環(huán)辛基，環(huán)癸基和環(huán)十一基，其中任何基團都可以被下列取代基取代鹵素，C1-6烷基，C1-6烷氧基和/或羥基。
本文所用術語“雜芳基”指含有5-14個環(huán)原子，優(yōu)選5，6，9或10個環(huán)原子；在環(huán)陣列上共有的6，10或14個π電子；并含有碳原子和1，2或3個氧、氮或硫雜原子的基團，雜芳基的實例包括噻吩基，苯并[b]噻吩基，萘并[2，3-b]噻吩基，噻蒽基，呋喃基，吡喃基，異苯并呋喃基，苯并噁唑基，苯并吡喃基，呫噸基，苯氧硫雜環(huán)己烯基(phenoxathiinyl)，2H-吡咯基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，吡啶基，吡嗪基，嘧啶基，噠嗪基，中氮茚基，異吲哚基，3H-吲哚基，吲哚基，吲唑基，嘌呤基，4H-喹嗪基，異喹啉基，喹啉基，2，3-二氮雜萘基，1，5-二氮雜萘基，四唑基，喹唑啉基，噌啉基，蝶啶基，4αH-咔唑基，咔唑基，β-咔啉基，菲啶基，吖啶基，啶基，菲咯啉基，吩嗪基，異噻唑基，吩噻嗪基，異噁唑基，呋咱基和吩噁嗪基。
本文所用術語“芳基”，不論其本身還是作為另一基團的一部分，均指在環(huán)上含有6-12個碳原子的單環(huán)或雙環(huán)芳香基，如苯基，萘基或四氫萘基。
本文所用術語“芳烷基”或“芳基烷基”，不論其本身還是作為另一基團的一部分，均指上述C1-6烷基上帶有芳基取代基，如芐基，苯乙基或2-萘甲基。
本文所用術語“烷芳基”或“烷基芳基”，不論其本身還是作為另一基團的一部分，均指上述芳基上帶有C1-6烷基取代基，如甲苯基，乙基苯基或甲基萘基。
術語“選擇性地取代的”如果與芳基，芳烷基，烷芳基或5-，6-，9-或10-員雜環(huán)基聯(lián)用，則指所說基團的環(huán)部分可以選擇性地被一或兩個分別選自下列基團的取代基取代C1-6烷基，C3-8環(huán)烷基，C1-6烷基(C3-8)環(huán)烷基，C2-8鏈烯基，C2-8炔基，氰基，氨基，C1-6烷基氨基，二(C1-6)烷基氨基，芐基氨基，二芐基氨基，硝基，羧基，(C1-6)烷氧羰基，三氟甲基，鹵素，C1-6烷氧基，C6-10芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基，C6-10芳基(C1-6)烷氧基，羥基，C1-6烷硫基，C1-6烷基亞磺酰基，C1-6烷基磺酰基，C6-10芳硫基，C6-10芳基亞磺酰基，C6-10芳基磺?；?，C6-10芳基，C1-6烷基(C6-10)芳基或鹵代(C6-10)芳基。
術語“烷氧基”指連接氧原子的上述烷基。
本文所用術語“鹵素”或“鹵”，不論其自身還是作為另一基團的一部分，均指氯，溴，氟或碘。
本文所用術語“酰氨基”指甲酰氨基，烷基羰基氨基或芳基羰基氨基。用途表1提供了用本發(fā)明方法制備的裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯的藥理學數(shù)據(jù)。由于?；疿/MBI亞基的N末端蘇氨酸殘基，這些化合物都是20S蛋白體的不可逆滅活劑。Kobs/[I]值是酶滅活速率的測量值。幾種化合物表現(xiàn)出改善的活性，即相比于裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯(2)這些化合物滅活速度更快。在酶測定中最具效力的化合物是7-甲氧基衍生物(3f)。但是，如果測定在細胞培養(yǎng)物中進行，則3f比2效力差。
內(nèi)酯環(huán)不僅受到蛋白體X/MB1亞基的蘇氨酸殘基，而且受到水進行親核攻擊。水解導致羥基酸V的形成，它不具備作為蛋白體抑制劑的活性。在細胞培養(yǎng)物中的相對效力是由多種因素決定的，包括酶的效力，細胞滲透能力和水解速率。盡管3f對酶比2更有效力，但其水解也更迅速，結果，3f在細胞培養(yǎng)物中活性要弱得多。相反，不僅在酶測定中，而且在細胞培養(yǎng)物中，類似物3a-3d都表現(xiàn)出意想不到的改善的效力。
本發(fā)明公開的化合物被用于治療由蛋白體的蛋白酶解功能直接介導的疾病，如肌肉萎縮，或通過蛋白質間接介導的疾病，所說蛋白質是由蛋白體如NF-κB加工而成的。蛋白體參與細胞調(diào)節(jié)(例如，細胞周期，基因轉錄和代謝途徑)，細胞通訊及免疫反應(例如，抗原呈遞)中所涉及的蛋白質的迅速排除和轉譯后加工。具體實例包括β-淀粉樣蛋白和調(diào)節(jié)蛋白，如細胞周期蛋白和轉錄因子NF-κB。這里所說的治療包括以改善或穩(wěn)定患者病情的方式逆轉、緩解或阻止癥狀，臨床征兆和病癥的基本病狀。
本發(fā)明其它實施方案涉及噁病質和肌肉萎縮的疾病。在使網(wǎng)織紅細胞成熟和使成纖維細胞生長中蛋白體降解多種蛋白。在失去胰島素的細胞或血清中蛋白酶解速率提高將近一倍。
抑制蛋白體可以減少蛋白酶解，進而減少肌肉蛋白損失和腎或肝上氮負荷。蛋白體抑制劑被用來治療癌癥，慢性傳染病，發(fā)燒，肌肉廢用(萎縮)和去神經(jīng)，神經(jīng)損傷，禁食，與酸中毒有關的腎衰竭和肝衰竭等病癥。參見Goldberg的美國專利5,340,736(1994)。
因此，本發(fā)明實施方案包括降低細胞內(nèi)肌肉蛋白的降解速率和降低細胞內(nèi)蛋白的降解速率的方法。每種方法都包括使細胞(體內(nèi)或體外，例如，患者的肌肉)與有效量的本發(fā)明公開結構式的化合物(例如，藥物組合物)接觸的步驟。
蛋白體抑制劑阻斷遍在化的NF-κB在體外和體內(nèi)的加工。蛋白體抑制劑還阻斷IκB-α的降解和NF-κB的活化(Palombella等人；及Traenckner等人，EMBO J.，135433-5441(1994))。本發(fā)明的一個實施方案是抑制IκB-α降解的方法，包括使細胞與本文所述結構式的化合物接觸。本發(fā)明的另一個實施方案是降低NF-κB在細胞、肌肉、器官或受試對象中的細胞含量的方法，包括使細胞、肌肉、器官或受試對象與本文所述結構式的化合物接觸。另一些實施方案包括通過本文所述結構式的化合物給藥治療與變態(tài)反應，骨髓或實體器官移植，或疾病狀態(tài)有關的炎癥反應的方法，所說炎癥包括(但不限于)關節(jié)炎，腸炎，哮喘和多發(fā)性硬化。本發(fā)明一個優(yōu)選實施方案涉及通過式VI或式VII化合物，最優(yōu)選化合物3b給藥，治療哮喘。
蛋白體抑制劑還可用于治療局部缺血或再灌注損傷，特別是在血管閉塞之后，如中風或心臟病發(fā)作期間發(fā)生的血管閉塞之后，防止梗塞或減小梗塞尺寸，正如在下列文獻中所述的那樣Brand，美國專利申請?zhí)枺撸撸撸?ProScript Docket No.102.603.173)，申請日1998年2月17日；美國專利申請?zhí)?8/988,339，申請日1997年12月3日；及美國專利申請?zhí)?8/801,936，申請日1998年2月15日。蛋白體抑制劑還阻斷protazoan寄生蟲的依賴蛋白體的轉化(Gonzalez等人，《實驗醫(yī)學雜志》(J.Exp.Med.)，1841909(1996))。因此，本發(fā)明其它的實施方案包括通過這里公開的化合物給藥治療梗塞或protazoan寄生蟲病的方法。本發(fā)明優(yōu)選方面是在血管閉塞之后式VI或式VII化合物給藥可防止梗塞或減小梗塞尺寸。為了治療或減少局部缺血發(fā)作之后的神經(jīng)元損失，可在發(fā)生中風之后約0-10小時進行所說化合物的給藥?；衔?b是本發(fā)明這一方面最優(yōu)選的化合物。
蛋白體抑制劑還阻斷細胞周期調(diào)節(jié)蛋白，如細胞周期蛋白和依賴細胞周期蛋白的激酶抑制劑，及腫瘤抑制蛋白如p53的降解。因此，本發(fā)明另一些實施方案包括用本文所述結構式的化合物阻斷細胞周期和治療細胞增生疾病如癌癥，牛皮癬和再狹窄的方法。
術語“抑制劑”用來描述阻斷或降低酶(例如，蛋白體，或20S蛋白體的X/MB1亞基)活性的化合物。抑制劑可以發(fā)揮競爭性、無競爭性或非競爭性抑制作用。抑制劑可以可逆或不可逆地結合。因此，該術語包括是酶的自殺底物的化合物。抑制劑可以修飾酶活性部位上或附近的一或多個位點，或者引起酶的其他部分的構象變化。
臨床領域的普通技術人員可以很容易地確定本發(fā)明蛋白體抑制劑和組合物的給藥量和給藥方案。一般，本發(fā)明組合物的劑量要根據(jù)以下因素進行變化所用組合物的類型；年齡；健康狀況；所要治療的病情；如果有的話，同時進行的治療的種類，治療頻率和所要達到效果的本質；組織破壞的程度；性別；癥狀持續(xù)的時間；如果有的話，相反的療法，及將由各個醫(yī)生調(diào)節(jié)的其它變量。所需要的劑量可以一次或分幾次給藥以獲得所需要的效果。含有本發(fā)明蛋白體抑制劑的藥物組合物可以為單位劑量形式。
屬于本發(fā)明范圍的組合物包括含有能夠達到其預期目的的有效量的本發(fā)明化合物的所有組合物。盡管個別因素需要改變，但每種成分的有效用量的最佳范圍可以由本領域技術人員確定。通常，給哺乳動物如人施用的化合物，每日口服劑量為0.0025-50mg/kg(體重)或等同量的其可藥用鹽，這是給需要進行蛋白體介導的疾病如中風或哮喘治療的哺乳動物的用藥量。對于肌肉內(nèi)注射，劑量通常大約為口服劑量的一半。
在防止梗塞或減小梗塞尺寸的方法中本化合物可以通過靜脈內(nèi)注射給藥，給藥劑量約為0.01-10mg/kg，優(yōu)選約0.025-1mg/kg。
口服單劑可以含有約0.01-50mg，優(yōu)選約0.1-10mg化合物。單劑可以每日給藥一次或多次，每次服用一片或多片含有約0.1-10mg，通常為約0.25-50mg化合物或其溶劑化物的片劑。對于中風治療，優(yōu)選單劑給藥，在事件發(fā)生后約0-10小時，優(yōu)選約0-6小時進行給藥。
下列實施例將說明而非限制本發(fā)明的方法和組合物。對一般所遇到的和對于本領域技術人員來說是顯而易見的條件和參數(shù)多樣化的其它適當?shù)母淖兒瓦m應的均屬于本發(fā)明的精神和范圍。
流程2中所述的制備甲?；柞０稾IV的合成方法由實施例1-6加以說明。實施例1 ?；鶉f唑烷酮(IX)a.?；鶉f唑烷酮IXb(R2＝n-Pr；R8＝CH2Ph)用2.5M n-BuLi的己烷(9.1ml，22.6mmol)溶液處理冷(-78℃)(S)-(-)-4-芐基-2-噁唑烷酮(4.0g，22.6mmol)的75ml無水THF溶液15分鐘。5分鐘后，將純凈的戊酰氯(2.95ml，24.9mmol)滴加到混合物中并將混合物在-78℃攪拌45分鐘。讓混合物升至室溫，再攪拌90分鐘，然后用50ml飽和NH4Cl溶液處理。加入二氯甲烷(50ml)，用鹽水洗滌有機相(2×30ml)，MgSO4干燥，真空濃縮，得到5.94g(100％)所要的?；鶉f唑烷酮IXb為清澈的無色油。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.36-7.20(m，5H)，4.71-4.64(m，1H)，4.23-4.14(m，1H)，3.40(dd，J＝13.3，3.2Hz，1H)，3.04-2.84(m，2H)，2.77(dd，J＝13.3，9.6Hz，1H)，1.74-1.63(m，2H)，1.46-1.38(m，2H)，0.96(t，J＝7.3Hz，3H).b.?；鶉f唑烷酮IXa(R2＝Et；R8＝CH2Ph)用類似于制備?；鶉f唑烷酮IXb的方法，用丁酰氯處理(S)-(-)-4-芐基-2-噁唑烷酮的鋰陰離子，以94％產(chǎn)率得到?；鶉f唑烷酮IXa。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.37-7.20(m，5H)，4.68(ddd，J＝13.1，7.0，3.4Hz，1H)，4.23-4.13(m，2H)，3.30(dd，J＝13.3，9.6Hz，1H)，3.02-2.82(m，2H)，2.77(dd，J＝13.3，9.6Hz，1H)，1.73(q，J＝7.3Hz，2H)，1.01(t，J＝7.3Hz，3H).c.酰基噁唑烷酮IXc(R2＝n-Bu；R8＝CH2Ph)用類似于制備?；鶉f唑烷酮IXb的方法，用己酰氯處理(S)-(-)-4-芐基-2-噁唑烷酮的鋰陰離子，以96％產(chǎn)率得到?；鶉f唑烷酮IXc。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ
7.36-7.20(m，5H)，4.68(m，1H)，4.23-4.14(m，2H)，3.30(dd，J＝13.3，3.3Hz，1H)，3.02-2.83(m，2H)，2.76(dd，J＝13.3，9.6Hz，1H)，1.70(m，2H)，1.43-1.34(m，4H)，0.92(t，J＝3.3Hz，3H).d.酰基噁唑烷酮IXd(R2＝i-Bu；R8＝CH2Ph)i.4-甲基戊酰氯按下列步驟用商品4-甲基戊酸制備4-甲基戊酰氯用1.95μl草酰氯(22.5mmol)處理含10ml DMF的冷(0℃)4-甲基戊酸(1.85ml，15.0mmol)的50ml無水CH2Cl2溶液。將混合物在室溫下攪拌3小時，然后真空濃縮，過濾，得到1.65g(100％)所要的酰氯為無色液體。
ii.?；鶉f唑烷酮IXd(R2＝i-Bu；R8＝CH2Ph)用類似于制備酰基噁唑烷酮IXb的方法，用4-甲基戊酰氯處理(S)-(-)-4-芐基-2-噁唑烷酮的鋰陰離子，以85％產(chǎn)率得到?；鶉f唑烷酮IXd。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.37-7.20(m，5H)，4.70-4.63(m，1H)，4.23-4.15(m，2H)，3.30(dd，J＝13.2，3.2Hz，1H)，2.98-2.90(m，2H)，2.76(dd，J＝13.3，9.6Hz，1H)，1.68-1.54(m，3H)，0.94(d，J＝6.2Hz，3H).e.?；鶉f唑烷酮IXe(R2＝CH2Ph；R8＝CH2Ph)用類似于制備?；鶉f唑烷酮IXb的方法，用氫化肉桂酰氯處理(S)-(-)-4-芐基-2-噁唑烷酮的鋰陰離子，以82％產(chǎn)率得到?；鶉f唑烷酮IXe。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.35-7.16(m，10H)，4.70-4.63(m，1H)，4.21-4.14(m，2H)，3.38-3.19(m，3H)，3.08-2.98(m，2H)，2.75(dd，J＝13.4，9.5Hz，1H).實施例2 ?；鶉f唑烷酮(X)a.?；鶉f唑烷酮Xb(R2＝n-Pr；R8＝CH2Ph)用2.52ml TiCl4(23.1mmol)處理冷(0℃)?；鶉f唑烷酮IXb(5.74g，22.0mmol)的110ml無水CH2Cl2溶液，形成豐富的沉淀。5分鐘后，慢慢加入二異丙基乙胺(4.22ml，24.2mmol)，然后將所得深棕色溶液在室溫下攪拌35分鐘。迅速加入芐基氯甲基醚(6.0ml，44.0mmol)，然后將混合物在室溫下攪拌5小時。加入50ml CH2Cl2溶液和75ml 10％NH4Cl水溶液，形成黃色膠狀物質。劇烈攪拌該懸浮液10分鐘后，將上清液轉移到一個分液漏斗中，然后將膠狀剩余物溶解在100ml 1∶1 10％NH4Cl水溶液/CH2Cl2中。合并有機相，依次用1N HCl水溶液，飽和NaHCO3和鹽水洗滌，MgSO4干燥，真空濃縮。將粗固體產(chǎn)物從EtOAc/己烷重結晶，得到6.80g(81％)所要的酰基噁唑烷酮Xb為白色固體。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.34-7.18(m，10H)，4.77-4.69(m，1H)，4.55(s，2H)，4.32-4.23(m，1H)，4.21-4.10(m，2H)，3.80(t，J＝9.0Hz，1H)，3.65(dd，J＝9.0，5.0Hz，1H)，3.23(dd，J＝13.5，3.3Hz，1H)，2.69(dd，J＝13.5，9.3Hz，1H)，1.74-1.64(m，1H)，1.54-1.44(m，1H)，1.40-1.28(m，2H)，0.91(t，J＝7.3Hz，3H).LRMS(FAB)m/e 382(M+H+)b.?；鶉f唑烷酮Xa(R2＝Et；R8＝CH2Ph)用類似于制備?；鶉f唑烷酮Xb的方法，以80％產(chǎn)率得到?；鶉f唑烷酮Xa。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.36-7.18(m，10H)，4.55(s，2H)，4.21-4.11(m，3H)，3.81(t，J＝9.0Hz，1H)，3.66(dd，J＝9.0，5.0Hz，1H)，3.23(dd，J＝13.5，3.2Hz，1H)，2.70(dd，J＝13.5，9.3Hz，1H)，1.78-1.57(m，2H)，0.94(t，J＝7.5Hz，3H).c.?；鶉f唑烷酮Xc(R2＝n-Bu；R8＝CH2Ph)用類似于制備?；鶉f唑烷酮Xb的方法，以91％產(chǎn)率得到?；鶉f唑烷酮Xc。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.38-7.17(m，10H)，4.72(m，1H)，4.54(s，2H)，4.27-4.10(m，2H)，3.79(t，J＝8.7Hz，1H)，3.65(dd，J＝9.1，5.0Hz，1H)，3.23(dd，J＝13.5，3.3Hz，1H)，2.68(dd，J＝13.5，9.3Hz，1H)，1.75-1.68(m，1H)，1.31-1.26(m，4H)，0.87(t，J＝6.8Hz，3H).d.?；鶉f唑烷酮Xd(R2＝i-Bu；R8＝CH2Ph)用類似于制備酰基噁唑烷酮Xb的方法，以98％產(chǎn)率得到?；鶉f唑烷酮Xd。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.38-7.17(m，10H)，4.75-4.67(m，1H)，4.57(d，J＝12.0Hz，1H)，4.51(d，J＝12.0Hz，1H)，4.41-4.36(m，1H)，4.20-4.09(m，2H)，3.74(t，J＝9.0Hz，1H)，3.65(dd，J＝9.0，5.1Hz，1H)，3.23(dd，J＝13.5，3.2Hz，1H)，2.63(dd，J＝13.5，9.5Hz，1H)，1.74-1.52(m，2H)，1.35(dd，J＝13.1，6.1Hz，1H)，0.92(d，J＝2.9Hz，3H)，0.90(d，J＝2.9Hz，3H).e.酰基噁唑烷酮Xe(R2＝CH2Ph；R8＝CH2Ph)用類似于制備酰基噁唑烷酮Xb的方法，以84％產(chǎn)率得到?；鶉f唑烷酮Xe。1H NMR(300MHz，CDC13)δ7.38-7.15(m，15H)，4.62-4.50(m，4H)，4.03(dd，J＝9.0，2.7Hz，1H)，3.93-3.82(m，2H)，3.66(dd，J＝9.2，4.8Hz，1H)，3.19(dd，J＝13.5，3.2 Hz，1H)，2.98(dd，J＝13.4，8.2Hz，1H)，2.88(dd，J＝13.4，7.3Hz，1H)，2.68(dd，J＝13.5，9.3Hz，1H).實施例3 羧酸(XI)a.羧酸XIb(R2＝n-Pr)依次用6.95ml 35％H2O2水溶液和氫氧化鋰一水合物(1.46g，34.6mmol)的20ml H2O溶液處理冷(0℃)?；鶉f唑烷酮Xb(6.60g，17.3mmol)的320ml THF/H2O溶液。將混合物在0℃攪拌16小時，先用Na2SO3(10.5g)的55ml H2O溶液，再用NaHCO3(4.35g)的100ml H2O溶液細心處理。將混合物在室溫下攪拌30分鐘，然后真空濃縮除去THF。用CH2Cl2(4×75ml)洗滌所得水性混合物，冷卻到0℃，用6N HCl水溶液酸化，再用CH2Cl2萃取(1×200ml和3×100ml)。合并有機相，MgSO4干燥，真空濃縮，得到3.47g(90％)所要的酸XIb為清澈的無色油。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.38-7.26(m，5H)，4.55(s，2H)，3.67(m，1H)，3.57(dd，J＝9.2，5.2Hz，1H)，2.75(m，1H)，1.72-1.31(m，4H)，0.93(t，J＝7.2Hz，3H).LRMS(FAB)m/e 223(M+H+)b.羧酸XIa(R2＝Et)用類似于制備酰基噁唑烷酮XIb的方法，以48％產(chǎn)率得到酰基噁唑烷酮XIa。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.36-7.27(m，5H)，4.55(s，2H)，3.68(dd，J＝9.2，7.9Hz，1H)，3.59(dd，J＝9.2，5.4Hz，1H)，2.68-2.65(m，1H)，1.71-1.62(m，2H)，0.97(t，J＝7.5Hz，3H).c.羧酸XIc(R2＝n-Bu)用類似于制備酰基噁唑烷酮XIb的方法，以96％產(chǎn)率得到?；鶉f唑烷酮XIc。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.37-7.28(m，5H)，4.55(s，2H)，3.67(dd，J＝9.1，8.1Hz，1H)，3.57(dd，J＝9.2，5.3Hz，1H)，2.72(m，1H)，1.67-1.51(m，2H)，1.36-1.27(m，4H)，0.89(t，J＝6.9Hz，3H).d.羧酸XId(R2＝i-Bu)用類似于制備?；鶉f唑烷酮XIb的方法，以80％產(chǎn)率得到?；鶉f唑烷酮XId。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.37-7.28(m，5H)，4.55(s，2H)，3.64(t，J＝9.1Hz，1H)，3.54(dd，J＝9.1，5.1Hz，1H)，2.81(m，1H)，1.68-1.54(m，2H)，1.36-1.27(m，1H)，0.92(d，J＝4.9Hz，3H)，0.90(d，J＝4.9Hz，3H).e.羧酸XIe(R2＝CH2Ph)用類似于制備酰基噁唑烷酮XIb的方法，以92％產(chǎn)率得到酰基噁唑烷酮XIe。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.38-7.16(m，10H)，4.53(d，J＝12.1Hz，1H)，4.50(d，J＝12.1Hz，1H)，3.68-3.57(m，2H)，3.09-2.85(m，3H).實施例4 二乙基酰胺(XII)a.二乙基酰胺XIIb(R2＝n-Pr；R5＝R6＝Et)在1.5小時內(nèi)用二異丙基乙胺(6.7ml，38.2mmol)處理(注射泵)含有二乙胺(2.36ml，23.0mmol)和四氟硼酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓(TBTU，5.89g，18.4mmol)的羧酸XIb(3.40g，15.3mmol)的1∶1 MeCN/CH2Cl2(150ml)冷(0℃)溶液。將混合物真空濃縮，然后在乙醚(200ml)和H2O(100ml)之間分配。水相用乙醚萃取(2×100ml)，合并的有機相依次用1N HCl水溶液(3×50ml)，飽和NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，MgSO4干燥并真空濃縮。色譜純化(230-400目SiO2，用1∶3AcOEt/己烷洗脫)，得到4.24g(97％)所要的二乙基酰胺XIIb為清澈的無色油。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.35-7.23(m，5H)，4.52(d，J＝12.0Hz，1H)，4.44(d，J＝12.0Hz，1H)，3.67(t，J＝8.6Hz，1H)，3.51(dd，J＝8.7，5.5Hz，1H)，3.46-3.27(m，4H)，2.96(m，1H)，1.67-1.57(m，1H)，1.48-1.22(m，4H)，1.20-1.10(m，6H)，0.90(t，J＝7.2Hz，3H).LRMS(FAB)m/e 278(M+H+)b.二乙基酰胺XIIa(R2＝Et；R5＝R6＝Et)用類似于制備二乙基酰胺XIIb的方法，以73％產(chǎn)率得到二乙基酰胺XIIa。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.33-7.26(m，5H)，4.52(d，J＝12.0Hz，1H)，4.44(d，J＝12.0Hz，1H)，3.68(t，J＝8.6Hz，1H)，3.53-3.33(m，5H)，2.90(m，1H)，1.75-1.50(m，2H)，1.18(t，J＝7.1Hz，3H)，1.13(t，J＝7.1Hz，3H)，0.89(t，J＝7.4Hz，3H).c.二乙基酰胺XIIc(R2＝n-Bu；R5＝R6＝Et)用類似于制備二乙基酰胺XIIb的方法，以94％產(chǎn)率得到二乙基酰胺XIIc。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.35-7.25(m，5H)，4.51(d，J＝12.0Hz，1H)，4.44(d，J＝12.0Hz，1H)，3.67(t，J＝8.6Hz，1H)，3.51(dd，J＝8.8，5.5Hz，1H)，3.46-3.29(m，1H)，2.94(m，1H)，1.66-1.62(m，2H)，1.33-1.10(m，9H)，0.85(t，J＝7.0Hz，3H).d.二乙基酰胺XIId(R2＝i-Bu；R5＝R6＝Et)用類似于制備二乙基酰胺XIIb的方法，以95％產(chǎn)率得到二乙基酰胺XIId。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.35-7.23(m，5H)，4.51(d，J＝12.0Hz，1H)，4.44(d，J＝12.0Hz，1H)，3.65(t，J＝8.7Hz，1H)，3.54-3.28(m，5H)，3.03(m，1H)，1.63-1.49(m，2H)，1.33-1.24(m，1H)，1.18(t，J＝7.1Hz，3H)，1.12(t，J＝7.1Hz，3H)，0.90(t，J＝6.4Hz，3H).e.二乙基酰胺XIIe(R2＝CH2Ph；R5＝R6＝Et)用類似于制備二乙基酰胺XIIb的方法，以89％產(chǎn)率得到二乙基酰胺XIIe。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.35-7.16(m，10H)，4.53(d，J＝12.1Hz，1H)，4.47(d，J＝12.1Hz，1H)，3.77(t，J＝8.5 Hz，1H)，3.59(dd，J＝8.8，5.7Hz，1H)，3.40(m，1H)，3.22-2.89(m，5H)，2.79(dd，J＝13.0，5.1Hz，3H)，1.01(t，J＝7.1Hz，3H)，0.85(t，J＝7.2Hz，3H).實施例5 醇(XIII)a.醇XIIIb(R2＝n-Pr；R5＝R6＝Et)向二乙基酰胺XIIb(4.08g，14.7mmol)的140ml MeOH溶液中加入20％Pd(OH)2/C(400mg)，然后將懸浮液在大氣壓和室溫下氫化15小時。濾掉催化劑，真空濃縮濾液，得到2.84g(100％)所要的伯醇XIIIb。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ3.74(br.d，J＝4.2Hz，1H)，3.61-3.15(m，5H)，2.71(m，1H)，1.69-1.24(m，4H)，1.20(t，J＝7.1Hz，3H)，1.12(t，J＝7.1Hz，3H)，0.92(t，J＝7.2Hz，3H).LRMS(FAB)m/e 188(M+H+).b.醇XIIIa(R2＝Et；R5＝R6＝Et)用類似于制備醇XIIIb的方法，以100％產(chǎn)率得到醇XIIIa。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.76(m，2H)，3.58-3.19(m，4H)，2.64(m，1H)，1.71-1.65(m，2H)，1.21(t，J＝7.1Hz，3H)，1.13(t，J＝7.1Hz，3H)，0.96(t，J＝7.4Hz，3H).c.醇XIIIc(R2＝n-Bu；R5＝R6＝Et)用類似于制備醇XIIIb的方法，以100％產(chǎn)率得到醇XIIIc。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.76(d，J＝4.5Hz，2H)，3.58-3.19(m，4H)，2.72-2.65(m，2H)，1.68-1.55(m，2H)，1.40-1.24(m，4H)，1.20(t，J＝7.1Hz，3H)，1.12(t，J＝7.1Hz，3H)，0.90(t，J＝6.9Hz，3H).d.醇XIIId(R2＝i-Bu；R5＝R6＝Et)用類似于制備醇XIIIb的方法，以100％產(chǎn)率得到醇XIIId。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.78-3.68(m，2H)，3.57-3.15(m，4H)，2.81-2.73(m，1H)，1.70-1.60(m，2H)，1.40-1.28(m，1H)，1.21(t，J＝7.1Hz，3H)，1.12(t，J＝7.1Hz，3H)，0.92(m，6H).e.醇XIIIe(R2＝CH2Ph；R5＝R6＝Et)用類似于制備醇XIIIb的方法，以100％產(chǎn)率得到醇XIIIe。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.29-7.16(m，5H)，3.81-3.71(m，2H)，3.61-3.50(m，1H)，3.15-2.87(m，6H)，1.05(t，J＝7.1Hz，3H)，0.98(t，J＝7.1Hz，3H).實施例6 醛(XIV)a.醛XIVb(R2＝n-Pr；R5＝R6＝Et)向醇XIIIb(2.34g，12.7mmol)的濕CH2Cl2(125ml，將CH2Cl2與水一起攪拌，然后分離有機相制成)溶液中加入Dess-Martin全碘烷(8.06g，19.0mmol)。將混合物在室溫下攪拌40分鐘，然后倒入含有5.2g NaHCO3的5％Na2S2O3水溶液(250ml)和乙醚(200ml)的混合物中。將兩相混合物劇烈攪拌5分鐘，水相用15％CH2Cl2/Et2O萃取(2×100ml)。合并的有機相先后用H2O(3×75ml)和鹽水洗滌，MgSO4干燥，過濾然后真空濃縮，得到2.06g(88％)所要的醛XIVb為清澈的無色油。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.60(d，J＝3.5Hz，1H)，3.49-3.30(m，5H)，1.96-1.85(m，2H)，1.39-1.31(m，2H)，1.19(t，J＝7.1Hz，3H)，1.13(t，J＝7.1Hz，3H)，0.95(t，J＝7.3Hz，3H).b.醛XIVb(R2＝n-Pr；R5＝R6＝Et)向粗醇XIIIb(1.25g，6.68mmol)的甲苯(20ml)，乙酸乙酯(20ml)和水(3ml)的混合物溶液中加入2，2，6，6-四甲基-1-哌啶氧基(TEMPO)，自由基(9mg)。將混合物冷卻到0℃，然后用30分鐘時間分批加入通過在含有1.6g NaHCO3的20ml水溶液中加入4.3ml次氯酸鈉水溶液(10-13％可利用的氯)制成的次氯酸鈉溶液。加入溴化鈉(660mg)，溶液變成淡橙色。幾分鐘之內(nèi)反應混合物的顏色變回到米色。再分幾批加入次氯酸鈉(4.7ml)促使反應完成。分離出水相，用甲苯(20ml)和乙酸乙酯(2×20ml)萃取。合并的有機萃取液用KI(70mg)的10％KHSO4水溶液洗滌。然后，有機相用5％的Na2S2O3和pH7的磷酸鹽緩沖液洗滌，Na2SO4干燥，濃縮得到XIVb為淡黃色油(1.1g)。該化合物的波譜數(shù)據(jù)與上面實施例6a產(chǎn)物的波譜數(shù)據(jù)相符。c.醛XIVa(R2＝Et；R5＝R6＝Et)用類似于制備醇XIVb的方法，以80％產(chǎn)率得到醛XIVa。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.61(d，J＝3.6Hz，1H)，3.48-3.29(m，5H)，2.02-1.90(m，2H)，1.19(t，J＝7.1Hz，3H)，1.14(t，J＝7.1Hz，3H)，0.96(t，J＝7.4Hz，3H).d.醛XIVc(R2＝n-Bu；R5＝R6＝Et)用類似于制備醇XIVb的方法，以98％產(chǎn)率得到醛XIVc。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ9.59(d，J＝3.6Hz，1H)，3.48-3.29(m，5H)，1.97-1.87(m，2H)，1.39-1.22(m，4H)，1.18(t，J＝7.2Hz，3H)，1.13(t，J＝7.2Hz，3H)，0.90(t，J＝7.0Hz，3H).e.醛XIVd(R2＝i-Bu；R5＝R6＝Et)用類似于制備醇XIVb的方法，以96％產(chǎn)率得到醛XIVd。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.57(d，J＝3.7Hz，1H)，3.51-3.27(m，5H)，1.83(t，J＝7.1Hz，3H)，1.66-1.55(m，1H)，1.20(t，J＝7.1Hz，3H)，1.13(t，J＝7.1Hz，3H)，0.93(d，J＝6.6Hz，6H).f.醛XIVe(R2＝CH2Ph；R5＝R6＝Et)用類似于制備醇XIVb的方法，以97％產(chǎn)率得到醛XIVe。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ9.69(d，J＝2.9Hz，1H)，7.29-7.16(m，5H)，3.65(m，1H)，3.53-3.42(m，1H)，3.30(dd，J＝13.5，9.3Hz，1H)，3.23-3.13(m，2H)，3.06-2.91(m，2H)，1.04(t，J＝7.1Hz，3H)，0.93(t，J＝7.1Hz，3H).
流程1概括的制備裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯及其類似物的合成方法由實施例7-9加以說明。實施例7 醛醇加合物(II)a.醛醇加合物IIb(R2＝n-Pr；R1＝i-Pr；R3＝Me；R4＝Ph；R5＝R6＝Et)向反-噁唑啉Ia(R1＝i-Pr；R4＝Ph)的乙醚(35ml)冷(-78℃)溶液中加入雙(三甲基甲硅烷基)氨基化鋰(2.17ml的1M己烷溶液，2.17mmol)。30分鐘后，滴加氯化二甲基鋁(4.55ml，4.55mmol)的1M己烷溶液處理所得橙色溶液，在冷卻到-85℃(將液氮加到干冰/丙酮浴中)之前將混合物再攪拌60分鐘。然后用10分鐘把醛XIVb(420mg，2.27mmol)的乙醚(4ml)溶液沿著燒瓶壁加到混合物中。允許用2.5小時時間將混合物升溫至-40℃，然后通過加入35ml飽和NH4Cl水溶液和25ml AcOEt淬滅反應。加入足夠的2N HCl(約加入15ml)直到得到兩個清楚的相。水相用AcOEt萃取(2×20ml)，合并的有機相依次用0.5N HCl水溶液(20ml)，H2O(20ml)，0.5M NaHSO3水溶液(2×15ml)，飽和NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，Na2SO4干燥，然后真空濃縮，得到879mg(＞100％)粗醛醇產(chǎn)物IIb，其純度足以直接用于下步反應。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.02-7.97 and 7.53-7.39(m，5H)，6.58(d，J＝9.9Hz，1H)，4.82(d，J＝2.4Hz，1H)，3.73(s，3H)，3.69-3.61(m，2H)，3.49-3.39(m，2H)，3.24-3.16(m，1H)，3.05(m，1H)，2.89(m，1H)，2.28-2.23(m，1H)，1.98-1.91(m，1H)，1.37-1.20(m，6H)，1.19-1.06(m，6H)，0.87(t，J＝7.1Hz，3H)，0.70(d，J＝6.7Hz，3H).
還可以用與上述方法類似的方法，但用順-噁唑啉Ib(見下文)代替反噁唑啉Ia，以100％產(chǎn)率得到醛醇產(chǎn)物IIb。b.醛醇加合物IIb(R2＝n-Pr；R1＝i-Pr；R3＝Me；R4＝Ph；R5＝R6＝Et)向反噁唑啉Ia(R1＝i-Pr；R4＝Ph)(20.74g)的THF(280ml)冷(-78℃)溶液中加入雙(三甲基甲硅烷基)氨基化鋰(92.4ml的1M己烷溶液)。30分鐘后，滴加氯化二甲基鋁的1M己烷(202ml)溶液處理所得橙色溶液，在冷卻到-85℃(將液氮加到干冰/丙酮浴中)之前將混合物再攪拌40分鐘。用45分鐘加入醛XIVb(19.43g)的THF(50ml)溶液。允許用40分鐘時間將混合物升溫至-50℃，再用25分鐘升溫至-20℃。再次將黃色反應混合物冷卻到-78℃，然后小心加入40ml飽和NH4Cl水溶液淬滅反應。將反應混合物慢慢倒入460ml飽和NH4Cl水溶液。加入500ml AcOEt并在充分攪拌下，用6N HCl酸化反應混合物，得到兩個清楚的相。水相用AcOEt萃取(2×200ml)，合并的有機相依次用H2O(2×200ml)，飽和NaHCO3水溶液(2×200ml)和鹽水(2×300ml)洗滌。有機萃取液用Na2SO4和MgSO4干燥，然后真空濃縮，得到41.55g粗醛醇產(chǎn)物IIb，其純度足以直接用于下步反應。該化合物的波譜數(shù)據(jù)與上面實施例7a產(chǎn)物的波譜數(shù)據(jù)相符。c.醛醇加合物IIa(R2＝Et；R1＝i-Pr；R3＝Me；R4＝Ph；R5＝R6＝Et)
用類似于制備醛醇加合物IIb的方法，依次用氯化二甲基鋁和醛XIVa處理反噁唑啉Ia(R1＝i-Pr；R4＝Ph)的鋰陰離子，以95％產(chǎn)率得到醛醇加合物IIa。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.00-7.97和7.51-7.39(m，5H)，6.50(d，J＝9.9Hz，1H)，4.80(d，J＝2.4Hz，1H)，3.81-3.64(m，2H)，3.74(s，3H)，3.45(m，2H)，3.19(m，2H)，2.93-2.84(m，2H)，2.24(m，1H)，1.89(m，1H)，1.73-1.64(m，4H)，1.29(t，J＝7.2Hz，3H)，1.12(d，J＝6.9Hz，3H)，1.07(d，J＝7.2Hz，3H)，0.70(d，J＝6.7Hz，3H).d.醛醇加合物IIc(R2＝n-Bu；R1＝i-Pr；R3＝Me；R4＝Ph；R5＝R6＝Et)用類似于制備醛醇加合物IIb的方法，依次用氯化二甲基鋁和醛XIVc處理反-噁唑啉Ia(R1＝i-Pr；R4＝Ph)的鋰陰離子，以100％產(chǎn)率得到醛醇加合物IIc。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.02-7.98和7.53-7.33(m，5H)，6.57(d，J＝10.0Hz，1H)，4.81(d，J＝2.3Hz，1H)，3.73(s，3H)，3.68-3.60(m，2H)，3.49-3.17(m，2H)，3.00(m，1H)，2.90(m，1H)，1.98-1.87(m，2H)，1.38-0.83(m，16H)，0.70(d，J＝6.7Hz，3H).e.醛醇加合物IId(R2＝i-Bu；R1＝i-Pr；R3＝Me；R4＝Ph；R5＝R6＝Et)用類似于制備醛醇加合物IIb的方法，依次用氯化二甲基鋁和醛XIVd處理反噁唑啉Ia(R1＝i-Pr；R4＝Ph)的鋰陰離子，以100％產(chǎn)率得到醛醇加合物IId。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.01-7.80和7.55-7.20(m，5H)，4.87(d，J＝2.3Hz，1H)，3.73(s，3H)，3.69-3.58(m，2H)，3.51-3.32(m，2H)，2.98-2.87(m，1H)，2.33-2.24(m，1H)，2.12-2.02(m，1H)，1.83(t，J＝7.1Hz，1H)，1.35(t，J＝7.1Hz，3H)，1.25-1.05(m，5H)，0.93(d，J＝6.6Hz，3H)，0.89(d，J＝6.5Hz，3H)，0.80(d，J＝6.5Hz，3H)，0.69(d，J＝6.7Hz，3H).f.醛醇加合物IIe(R2＝CH2Ph；R1＝i-Pr；R3＝Me；R4＝Ph；R5＝R6＝Et)用類似于制備醛醇加合物IIb的方法，依次用氯化二甲基鋁和醛XIVe處理反-噁唑啉Ia(R1＝i-Pr；R4＝Ph)的鋰陰離子，以100％產(chǎn)率得到醛醇加合物IIe。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.01-7.93和7.54-7.10(m，10H)，4.71(d，J＝2.5Hz，1H)，3.73(s，3H)，3.68-3.58(m，2H)，3.48-2.79(m，6H)，2.17(m，1H)，1.12-0.91(m，9H)，0.68(d，J＝6.7Hz，3H).實施例8 γ-內(nèi)酰胺(IV)a.γ-內(nèi)酰胺IVb(R2＝n-Pr；R1＝i-Pr；R3＝Me)在醛醇加合物IIb(4.72g，10.9mmol)的100ml 1∶9 AcOH/MeOH溶液中加入4.8g 20％Pd(OH)2/C，然后在55psi的H2中劇烈搖動60小時。過濾前將混合物降到常溫，然后真空濃縮。將所得固體用快速色譜純化(SiO2，用1％AcOH的1∶1 AcOEt/己烷洗脫)，得到2.23g(75％)所要γ-內(nèi)酰胺IVb為白色固體。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.89(br.s，1H)，4.77(br.d，J＝11.5Hz，1H)，4.47(dd，J＝11.5，5.6Hz，1H)，4.08(dd，J＝9.4，5.0Hz，1H)，3.83(s，3H)，2.93(m，1H)，1.78-1.39(m，6H)，1.02-0.88(m，9H).b.γ-內(nèi)酰胺IVa(R2＝Et；R1＝i-Pr；R3＝Me)用類似于制備γ-內(nèi)酰胺IVb的方法，在55psi下氫化醛醇加合物IIa 48小時，以72％產(chǎn)率得到γ-內(nèi)酰胺IVa。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.79(br.s，1H)，4.62(br.d，J＝11.2Hz，1H)，4.51(dd，J＝11.2，5.4Hz，1H)，3.83(s，3H)，2.85(m，1H)，1.77-1.64(m，3H)，1.01(t，J＝7.4Hz，3H)，0.98(d，J＝6.9Hz，3H)，0.95(d，J＝6.9Hz，3H).c.γ-內(nèi)酰胺IVc(R2＝n-Bu；R1＝i-Pr；R3＝Me)在醛醇加合物IIc(361mg，0.80mmol)的6ml 1∶9 AcOH/MeOH溶液中加入250mg 20％Pd(OH)2/C，然后在50psi的H2中劇烈搖動24小時。再加入100mg催化劑，并將混合物在50psi的H2中再搖動24小時。在此之后將混合物降到常溫，然后過濾。將濾液加熱回流30分鐘，冷卻到室溫，然后真空濃縮。將所得固體與甲苯共蒸發(fā)一次，用快速色譜純化(SiO2，用4％MeOH/CHCl3洗脫)，得到140mg(61％)所要的γ-內(nèi)酰胺IVc為白色固體。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.02(br.s，1H)，4.93(br.d，J＝11.3Hz，1H)，4.46(dd，J＝11.3，5.5Hz，1H)，4.15-4.08(m，1H)，3.83(s，3H)，2.94-2.87(m，1H)，1.80-1.34(m，6H)，0.94(d，J＝6.9Hz，3H)，0.89(t，J＝7.2Hz，3H).d.γ-內(nèi)酰胺IVd(R2＝i-Bu；R1＝i-Pr；R3＝Me)用類似于制備γ-內(nèi)酰胺IVc的方法，在50psi下氫化醛醇加合物IId 40小時并加熱回流30分鐘，以61％產(chǎn)率得到γ-內(nèi)酰胺IVd。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.92(br.s，1H)，4.81(br.d，J＝11.5Hz，1H)，4.46(m，1H)，4.09(m，1H)，3.83(s，3H)，3.04-2.98(m，1H)，1.78-1.73(m，2H)，1.66-1.47(m，3H)，1.00-0.90(m，12H).e.γ-內(nèi)酰胺IVe(R2＝CH2Ph；R1＝i-Pr；R3＝Me)用類似于制備γ-內(nèi)酰胺IVc的方法，在50psi下氫化醛醇加合物IIe 24小時并加熱回流30分鐘，以71％產(chǎn)率得到γ-內(nèi)酰胺IVe。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.01(br.s，1H)，7.35-7.15(m，5H)，5.02(br.d，J＝11.7Hz，1H)，4.40-4.34(m，1H)，4.06-4.01(m，1H)，3.84(s，3H)，3.34-3.27(m，1H)，3.10-3.04(m，2H)，1.84-1.72(m，1H)，0.98(d，J＝6.7Hz，3H)，0.93(d，J＝6.9Hz，3H).實施例9 β-內(nèi)酯(VII)a.β-內(nèi)酯VIIb(R2＝n-Pr；R1＝i-Pr)在γ-內(nèi)酰胺IVb(2.20g，8.06mmol)的100ml EtOH冷(0℃)溶液中加入0.1N NaOH水溶液(100ml，10.0mmol)。將混合物在室溫下攪拌15小時，然后加入H2O(50ml)和AcOEt(100ml)。水相用AcOEt(2×50ml)洗滌，6N HCl水溶液酸化，真空濃縮至約60ml體積。冷凍該溶液并凍干。將所得固體懸浮于THF，濾掉氯化鈉，然后真空濃縮，得到2.05g(98％)所要的二羥酸為白色固體。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.42(d，J＝5.8Hz，1H)，3.90(d，J＝6.5Hz，1H)，2.84(m，1H)，1.70-1.24(m，6H)，0.95-0.84(m，9H).
在二羥基酸(1.90g，7.33mmol)的無水THF(36ml)溶液中加入四氟硼酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓(TBTU，2.59g，8.06mmol)的無水MeCN(36ml)溶液，然后加入三乙胺(0.72ml，22.0mmol)。室溫下攪拌70分鐘后，加入一些甲苯，將混合物真空濃縮，再與甲苯共蒸發(fā)兩次?？焖偕V純化(SiO2，用2∶3 AcOEt/己烷洗脫)，得到1.44g(81％)所要的β-內(nèi)酯VIIb為白色固體。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.07(br.s，1H)，5.26(d，J＝6.1Hz，1H)，3.97(dd，J＝6.4，4.4Hz，1H)，2.70-2.63(m，1H)，2.03(d，J＝6.4Hz，3H)，1.93-1.44(m，5H)，1.07(d，J＝7.0Hz，3H)，0.99(d，J＝7.3Hz，3H)，0.91(d，J＝6.7Hz，3H).LRMS(FAB)m/e 242(M+H+).b.β-內(nèi)酯VIIa(R2＝Et；R1＝i-Pr)用類似上面處理IVb的方法水解IVa，以100％產(chǎn)率得到相應的二羥基酸。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.45(d，J＝5.8Hz，1H).3.90(d，J＝6.4Hz，1H)，2.74(m，1H)，1.71-1.53(m，3H)，0.94(t，J＝7.4Hz，3H)，0.92(d，J＝6.8Hz，3H)，0.88(d，J＝6.8Hz，3H).
用類似于制備β-內(nèi)酯VIIb的方法，以79％產(chǎn)率得到β-內(nèi)酯VIIa。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.17(br.s，1H)，5.30(d，J＝6.0Hz，1H)，3.98(dd，J＝6.4，4.4Hz，1H)，2.60(m，1H)，2.08(d，J＝6.4Hz，3H)，1.97(m，2H)，1.75(m，1H)，1.12(t，J＝7.5Hz，3H)，1.07(d，J＝6.8Hz，3H)，0.92(d，J＝6.8Hz，3H).c.β-內(nèi)酯VIIc(R2＝n-Bu；R1＝i-Pr)用類似上面處理IVb的方法水解IVc，以100％產(chǎn)率得到相應的二羥酸。1HNMR(300MHz，CD3OD)δ4.42(d，J＝5.8Hz，1H)，3.90(d，J＝6.4Hz，1H)，2.86-2.79(m，1H)，1.70-1.24(m，8H)，0.97-0.86(m，9H).
用類似于制備β-內(nèi)酯VIIb的方法，以40％產(chǎn)率得到β-內(nèi)酯VIIc。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.14(br.s，1H)，5.27(d，J＝6.1Hz，1H)，3.97(d，J＝4.4Hz，1H)，2.68-2.61(m，1H)，1.94-1.86(m，2H)，1.72-1.36(m，7H)，1.07(d，J＝7.0Hz，3H)，0.93(t，J＝7.1Hz，3H)，0.91(d，J＝6.8Hz，3H).LRMS(FAB)m/e 256(M+H+)d.β-內(nèi)酯VIId(R2＝i-Bu；R1＝i-Pr)用類似上面處理IVb的方法水解IVd，以100％產(chǎn)率得到相應的二羥酸。1HNMR(300MHz，CD3OD)δ4.50(d，J＝5.8Hz，1H)，4.00(d，J＝6.5Hz，1H)，3.09-3.02(m，1H)，1.90-1.61(m，3H)，1.49-1.40(m，2H)，1.02(d，J＝6.7Hz，3H)，0.98(d，J＝6.5Hz，3H)，0.97(d，J＝6.7Hz，3H).
用類似于制備β-內(nèi)酯VIIb的方法，以62％產(chǎn)率得到β-內(nèi)酯VIId。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.16(br.s，1H)，5.25(d，J＝6.1Hz，1H)，3.97(d，J＝4.4Hz，1H)，2.71(dd，J＝15.1，6.2Hz，1H)，1.95-1.66(m，5H)，1.08(d，J＝6.9Hz，3H)，0.99(d，J＝6.3Hz，3H)，0.98(d，J＝6.3Hz，3H)，0.92(d，J＝6.7Hz，3H).LRMS(FAB)m/e 256(M+H+).e.β-內(nèi)酯VIIe(R2＝CH2Ph；R1＝i-Pr)用類似上面處理IVb的方法水解IVe，以88％產(chǎn)率得到相應的二羥酸。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.25-7.04(m，5H)，4.29(d，J＝5.7Hz，1H)，3.83(d，J＝6.4Hz，1H)，3.01-2.82(m，3H)，1.65(m，1H)，0.90(d，J＝6.6Hz，3H)，0.86(d，J＝6.8Hz，3H).
用類似于制備β-內(nèi)酯VIIb的方法，以77％產(chǎn)率得到β-內(nèi)酯VIIe。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.36-7.20(m，5H)，6.57(br.s，1H)，5.08(d，J＝5.4Hz，1H)，3.94(d，J＝4.5Hz，1H)，3.25(d，J＝10.1Hz，1H)，3.01-2.89(m，2H)，1.92-1.81(m，1H)，1.05(d，J＝6.9Hz，3H)，0.86(d，J＝6.7Hz，3H).LRMS(FAB)m/e 290(M+H+).
流程3和4概括的制備順-噁唑啉和反-噁唑啉的合成方法由實施例10和11加以說明。實施例10 順-噁唑啉(Ia)a.3-(異丙基)丙烯酸乙酯(XV；R1＝i-Pr；R3＝Me)在0℃向攪拌的甲氧羰基亞甲基三苯基膦(56.04g，167.6mmol)的無水CH2Cl2(168ml)溶液中滴加異丁醛(17.4ml，191.6mmol)。5分鐘后，將反應混合物升至室溫，并攪拌24小時。真空除去溶劑，在白色油狀固體中加入戊烷，產(chǎn)生氧化三苯基膦沉淀。濾除固體，真空濃縮濾液。再重復此過程一次，得到粗烯烴(20.00g，93％)為黃色油，其純度足以直接用于下步反應。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.95(dd，J＝15.7，6.6Hz，1H)，5.77(dd，J＝15.7，1.5Hz)，3.72(s，3H)，2.44(m，1H)，1.06(d，J＝6.7Hz，6H).b.(2S，3R)-2，3-二羥基-3-(異丙基)丙酸甲酯(XVIa；R1＝i-Pr；R3＝Me)將AD-混合-β(100.00g)，甲磺酰胺(6.78g，71.3mmol)和叔丁醇-水(1∶1，720ml)在室溫下劇烈攪拌5分鐘，然后將反應混合物冷卻到0℃。用Pasteur吸移管加入α，β-不飽和酯XV(R1＝i-Pr；R3＝Me)(9.14g，71.3mmol)。在0℃攪拌96小時后，加入Na2SO3(3.0g)，然后在室溫攪拌1小時。用乙酸乙酯(200ml)稀釋混合物，然后將其轉移到分液漏斗中。除去有機相，水相用乙酸乙酯萃取(2×100ml)。合并的有機相經(jīng)干燥(Na2SO3)、過濾和真空濃縮后得到黃色油。使其通過硅膠墊板，用1∶1己烷/乙酸乙酯洗脫，得到二醇XVIa(R1＝i-Pr；R3＝Me)(11.48g，94％)為黃色固體。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ4.28(dd，J＝5.6，1.8Hz，1H)，3.80(s，3H)，3.48(m，1H)，3.28(m，1H)，2.33(d，J＝9.3Hz，1H)，1.87(m，1H)，1.02(d，J＝6.7Hz，3H)，0.95(d，J＝6.7Hz，3H).c.(2R，3R)-2-溴-3-二羥基-3-(異丙基)丙酸甲酯(XVIIa；R1＝i-Pr；R3＝Me)將(2S，3R)-2，3-二羥基-3-(異丙基)丙酸甲酯XVIa(R1＝i-Pr；R3＝Me)(1.0g，6.17mmol)和原苯甲酸三甲酯(1.02ml，80.1mmol)溶解于CH2Cl2(20ml)，并用BF3·OEt2(40.0μl，0.32mmol)處理。攪拌75分鐘后，將混合物在高真空(0.05mmHg)下濃縮35分鐘。將混合物重新溶解于CH2Cl2(20.0ml)，冷卻到0℃，依次用Et3N(43.0μl，0.31mmol)和乙酰溴(0.48ml，6.49mmol)處理。在0℃攪拌4小時后，反應混合物用飽和NaHCO3溶液(12ml)處理，并允許升至室溫。分離各相，水相用CH2Cl2(2×20ml)萃取。合并的有機相經(jīng)干燥(Na2SO3)、過濾和真空濃縮后得到粗α-溴-β-苯甲酸酯XVIIa(R1＝i-Pr；R3＝Me)(1.36g，85％)為清澈無色油。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.05-8.00(m，2H)，7.47-7.40(m，3H)，5.57(dd，J＝8.8，3.9Hz，1H)，4.47(d，J＝8.8Hz，1H)，3.67(s，3H)，2.45(m，1H)，1.01(d，J＝6.8Hz，6H).d.(2S，3R)-2-偶氮-3-二羥基-3-(異丙基)丙酸甲酯(XVIIIa；R1＝i-Pr；R3＝Me)將(2R，3R)-2-溴-3-二羥基-3-(異丙基)丙酸甲酯XVIIa(R1＝i-Pr；R3＝Me)(2.00g，6.07mmol)的15ml DMSO溶液用疊氮化鈉(790.0mg，12.2mmol)處理。在室溫攪拌12小時后，將混合物在H2O和乙酸乙酯(各50ml)之間分配。水相用乙酸乙酯萃取，合并的有機相用MgSO4干燥，并真空濃縮，得到所要的α-偶氮-β-苯甲酸酯(1.55g，87％)為黃色油。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.07-8.02(m，2H)，7.55-7.43(m，3H)，5.40(dd，J＝8.8，2.8Hz，1H)，3.73(s，3H)，2.24(m，1H)，1.04(d，J＝5.8Hz，3H)，0.98(d，J＝5.8Hz，3H).
重復上述過程，只是用DMF作為溶劑代替DMSO，以85％產(chǎn)率得到所要的α-偶氮-β-苯甲酸酯。e.苯甲酰基甲酰胺XIXa(R1＝i-Pr；R3＝Me)將(2S，3R)-2-偶氮-3-二羥基-3-(異丙基)丙酸甲酯XVIIIa(R1＝i-Pr；R3＝Me)(1.50g，5.15mmo1)的25ml乙酸乙酯溶液用200mg 20％Pd(OH)2/C處理，并將懸浮液在H2中及膨脹壓力下劇烈攪拌。12小時后，過濾混合物，回流4小時以完成苯甲?；倪w移。將混合物冷卻到室溫，真空濃縮，得到所要的苯甲?；柞０?1.25g，92％)為黃色油。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.85-7.83(m，2H)，7.46-7.40(m，3H)，6.99(br.d，J＝9.1Hz，1H)，5.05(dd，J＝9.1，1.9Hz，1H)，3.77(s，3H)，1.79(m，1H)，1.03(d，J＝6.7Hz，3H).0.99(d，J＝6.7Hz，3H).f.順-噁唑啉Ia(R1＝i-Pr；R3＝Me)將苯甲?；柞０稾IXa(R1＝i-Pr；R3＝Me)(500mg，18.8mmol)的CH2Cl2(20ml)溶液用4.50ml亞硫酰氯(61.7mmol)處理。在室溫攪拌24小時后，將混合物用CH2Cl2稀釋，飽和NaHCO3溶液洗滌，Na2SO4干燥，然后真空濃縮。經(jīng)色譜純化(硅膠，1∶1己烷/乙酸乙酯)，得到所要的順-噁唑啉(248mg，53％)為淡黃色油。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.01-7.97(m，2H)，7.52-7.38(m，3H)，4.94(d，J＝9.8Hz，1H)，4.53(dd，J＝9.8，7.8Hz，1H)，3.76(s，3H)，2.09(m，1H)，1.05(d，J＝6.5Hz，3H)，1.01(d，J＝6.7Hz，3H).實施例11 反-噁唑啉(Ib)a.3-(異丙基)丙烯酸乙酯(XV；R1＝i-Pr；R3＝Me)在0℃向攪拌的甲氧羰基亞甲基三苯基膦(56.04g，167.6mmol)的無水CH2Cl2(168ml)溶液中滴加異丁醛(17.4ml，191.6mmol)。5分鐘后，將反應混合物升至室溫，并攪拌24小時。真空除去溶劑，在白色油狀固體中加入戊烷，產(chǎn)生氧化三苯基膦沉淀。濾除固體，真空濃縮濾液。再重復此過程一次，得到粗烯烴(20.00g，93％)為黃色油，其純度足以直接用于下步反應。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.95(dd，J＝15.7，6.6Hz，1H)，5.77(dd，J＝15.7，1.5Hz)，3.72(s，3H)，2.44(m，1H)，1.06(d，J＝6.7Hz，6H).b.(2R，3S)-2，3-二羥基-3-(異丙基)丙酸甲酯(XVIb；R1＝i-Pr；R3＝Me)在25℃用注射泵(注射器連接一個管子，在整個反應期間注射器頭始終浸在溶液中)經(jīng)過48小時將純凈的烯烴XV(R1＝i-Pr；R3＝Me)(9.0g，70.2mmol)加到含有K2OsO2(OH)4(246.1mg，0.67mmol，0.95mol％)，氫化奎寧1，4-二氮雜萘二基二醚(555.1mg，0.71mmol，1.01mol％)，N-甲基嗎啉N-氧化物(水中50wt％，25.0ml，0.106mol，1.51當量)，t-BuOH(84ml)和H2O(58ml)的清澈黃色溶液中。將所得清澈的橙色溶液再攪拌60分鐘，之后加入乙酸乙酯(200ml)和Na2SO3(15.0g)的H2O(150ml)溶液，并將所得混合物攪拌4小時。分離各相，水相用乙酸乙酯萃取(2次)。合并有機相，用0.3M H2SO4的飽和Na2SO4溶液萃取(2×100ml)。再次分離各相，水相用乙酸乙酯萃取(1次)。合并有機相，Na2SO4干燥，過濾和真空濃縮，得到11.4g(約100％)的白色油狀固體。用1H NMR在1∶1摩爾的二醇和三[3-(七氟丙基羥基亞甲基)-(-)-樟腦酸]銪溶液的C6D6中進行測定，結果顯示該固體為70％e.e。從35-60℃石油醚中重結晶，得到6.8g(60％)(2S，3R)-2，3-二羥基-3-(異丙基)丙酸甲酯(XVIb；R1＝i-Pr；R3＝Me)，約為100％e.e，為白色晶體。mp＝32-34℃；＝-110.6°(c1.04，CHCl3)].1H NMR(300MHz，CDCl3)δ4.28(dd，J＝5.6，1.8Hz，1H)，3.80(s，3H)，3.48(m，1H)，3.28(m，1H)，2.33(d，J＝9.3Hz，1H)，1.87(m，1H)，1.02(d，J＝6.7Hz，3H)，0.95(d，J＝6.7Hz，3H).c.(2S，3S)-2-溴-3-二羥基-3-(異丙基)丙酸甲酯(XVIIb；R1＝i-Pr；R3＝Me)將(2R，3S)-2，3-二羥基-3-(異丙基)丙酸甲酯XVIb(R1＝i-Pr；R3＝Me)(30.0g，185.2mmol)和原苯甲酸三甲酯(41.3ml，240.7mmol)溶解于CH2Cl2(400ml)，并用BF3-OEt2(1.16ml，9.25mmol)處理。2小時后，加入三乙胺(1.8ml，13mmol)，真空濃縮混合物并將其置于高真空(0.05mmHg)下70分鐘。將剩余物重新溶解于CH2Cl2(400ml)，冷卻到0℃，滴加乙酰溴(14.3ml，194.5mmol)處理。2小時后，再加入乙酰溴(0.68ml，9.25mmol)。30分鐘后，加入飽和NaHCO3溶液(500ml)，并將混合物劇烈攪拌5-10分鐘。分離各相，水相用CH2Cl2(2×20ml)萃取。合并的有機相經(jīng)干燥(Na2SO3)、過濾和真空濃縮后得到粗α-溴-β-苯甲酸酯XVIIb(R1＝i-Pr；R3＝Me)(66.23g)為清澈無色油，含有約9.3wt％苯甲酸甲酯。對于產(chǎn)物1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.05-8.00(m，2H)，7.47-7.40(m，3H)，5.57(dd，J＝8.8，3.9Hz，1H)，4.47(d，J＝8.8Hz，1H)，3.67(s，3H)，2.45(m，1H)，1.01(d，J＝6.8Hz，6H).d.(2R，3S)-2-偶氮-3-二羥基-3-(異丙基)丙酸甲酯(XVIIIb；R1＝i-Pr；R3＝Me)將疊氮化鈉(24g，370mmol)加到230ml DMSO中，并將混合物在室溫下攪拌過夜。在所得溶液中加入(2S，3S)-2-溴-3-二羥基-3-(異丙基)丙酸甲酯(XVIIb；R1＝i-Pr；R3＝Me)(61g，185mmol)的20ml DMSO溶液。在室溫攪拌11小時后，將混合物倒入H2O(1.5L)和乙醚(200ml)中，劇烈攪拌10-15分鐘。加入乙醚(100ml)，分離各相。水相用乙醚萃取(2×100ml)，合并的有機相用水(2×100ml)和鹽水(100ml)洗滌，MgSO4干燥，并真空濃縮，得到粗產(chǎn)物(57.5g)，含有約3％起始原料和8％要除去的副產(chǎn)物。對于產(chǎn)物1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.07-8.02(m，2H)，7.55-7.43(m，3H)，5.40(dd，J＝8.8，2.8Hz，1H)，3.73(s，3H)，2.24(m，1H)，1.04(d，J＝5.8Hz，3H)，0.98(d，J＝5.8Hz，3H).e.苯甲?；柞０稾IXb(R1＝i-Pr；R3＝Me)在(2R，3S)-2-偶氮-3-二羥基-3-(異丙基)丙酸甲酯XVIIIb(R1＝i-Pr；R3＝Me)(55g)的甲醇(300ml)冷(0-5℃)溶液中加入94ml 4M HCl/二噁烷和2.75g Pd(OH)2/C。用氫氣吹洗混合物，并在室溫下攪拌。每30分鐘用氫氣吹洗混合物一次以除去釋放的氮氣。4小時后，用氮氣吹洗反應混合物，并再加入1.3g Pd(OH)2/C。再用氫氣每4小時吹洗反應混合物一次。過濾混合物并真空濃縮。將剩余物溶解于水，用EtOAc萃取。水相用NaHCO3堿化，然后再用EtOAc萃取。合并的有機萃取液用鹽水洗滌，Na2SO4干燥，然后濃縮，得到N-和O-苯甲?；a(chǎn)物的混合物，它被直接用于下步反應。f.反噁唑啉Ib(R1＝i-Pr；R3＝Me)將上面實施例10e得到的粗產(chǎn)物IXb(37.3g，141mmol)溶解于甲苯(350ml)。加入對甲苯磺酸(2.68g，14.1mmol)，將混合物加熱回流。用Dean Stark阱除去水。3小時后，收集到約2.5ml水。冷卻反應混合物，用EtOAc(100ml)稀釋，依次用飽和NaHCO3(2×100ml)和鹽水(100ml)洗滌，MgSO4干燥，然后濃縮。剩余物在硅膠墊板(約400g)上純化，用25-30％EtOAc/己烷洗脫，得到反噁唑啉Ib(R1＝i-Pr；R3＝Me)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.01-7.97(m，2H)，7.52-7.38(m，3H)，4.68(表觀t，J＝7Hz，1H)，4.57(d，J＝7Hz，1H)，3.81(s，3H)，2.00-1.93(m，1H)，1.04(d，J＝6.7Hz，3H)，1.00(d，J＝6.8Hz，3H).實施例12 蛋白體活性的鈍化20S蛋白體和蛋白體活化劑PA28的純化過程可以按照前面所述的方法(Dick等人，《生物化學雜志》，2717273(1996))進行。
將2ml測定緩沖液(20mM HEPES，0.5mM EDTA，pH8.0)和Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC的二甲亞砜加到3ml熒光比色杯中，然后將小杯放在Hitachi F-2000熒光分光光度計的套盒座上。用循環(huán)水浴保持溫度在37℃。加入0.34mg PA28，通過監(jiān)視伴隨游離AMC產(chǎn)生而發(fā)生的在440nm(λex＝380nm)處熒光的增加來監(jiān)視反應進程。該進展曲線表現(xiàn)出一個持續(xù)1-2分鐘的滯后期，這是由20S-PA28復合物慢慢形成造成的。底物水解達到穩(wěn)定態(tài)后，加入乳胱氨酸使最終濃度達到1mM，并監(jiān)視反應1小時。在微型計算機上用LAB CALC(Galactic)軟件收集熒光(F)與時間(t)關系的數(shù)據(jù)，通過下列的一次方程對數(shù)據(jù)進行非線性最小二乘方法近似，估算出Kinact值F＝A(1-e-kt)+C其中，C＝Ft＝0及A＝Ft＝∞-Ft＝0。實施例13 抑制C2C12細胞中細胞內(nèi)蛋白的降解用35S-蛋氨酸標記C2C12細胞(鼠成肌細胞系)48小時。洗滌這些細胞，在補充有2mM未標記的蛋氨酸的相同培養(yǎng)基中預溫育2小時。倒掉該培養(yǎng)基，換上含有50％血清和一定濃度的待測化合物的一份新制備的預溫育培養(yǎng)基。倒掉該培養(yǎng)基，配制成10％的TCA，然后離心。對TCA可溶性放射性進行計數(shù)。用TCA可溶性放射性減小的百分比計算蛋白酶解的抑制作用。從這個數(shù)據(jù)計算出每個化合物的IC50。實施例14 內(nèi)酯水解β-內(nèi)酯類似物水解成相應的二羥酸的半衰期(t1/2)的測量是在37℃下以200mM的濃度在20mM HEPES，0.5mM EDTA，pH7.8中進行的。在230nm處的吸收至少要測量5個半衰期(約1小時)，在此波長下內(nèi)酯和二羥基的消光系數(shù)之差最大。用Guggenheim分析(Gutfreund，《酶物理原理》(EnzymesPhysical Principle)；Wiley & SonsNew York，1975，pp118-119)計算半衰期。實施例12-14的結果示于表1。
表1抑制20S蛋白體和抑制細胞內(nèi)蛋白降解的動力學
化合物R2Kobs/[I](M-1s-1)aIC50(μM)bt1/2minc2 Me 20,000 0.7-1.1 133a Et 39,000 0.32 15.33b n-Pr 46,500 0.29 15.33c n-Bu 38,000 0.33 173d i-Bu 17,000 0.51 16.83e CH2Ph 6,400 - 6.83f OMe82,200 863.7aPA28活化的20S蛋白體的胰凝乳蛋白酶樣活性的鈍化。b抑制C2C12細胞中細胞內(nèi)蛋白的降解c水解半衰期。實施例15 梗塞尺寸和神經(jīng)元損失的減少方法用鹵代乙烷將雄性Sprague Dawly大鼠(250-400g)麻醉，并用尼龍絲結扎大腦中動脈(MCA)2小時。除去尼龍絲，在大鼠被處死前將梗塞組織再灌注24小時。
除掉尼龍絲之后立即用神經(jīng)病學評分系統(tǒng)給大鼠打分。神經(jīng)病學評分用0至10十個尺度表示，0表示沒有神經(jīng)病學缺陷，而10表示有嚴重的神經(jīng)病學缺陷。24小時后和處死前，用同樣的神經(jīng)病學評分系統(tǒng)第二次給動物打分。
用氯化三苯基四唑鎓(TTC)給整個大腦的冠狀切面(2.0mm×7-8)染色的情況在盲試條件下利用圖象分析進行評價以確定梗塞尺寸。給藥方案結扎MCA后2小時用注射器給大鼠靜脈內(nèi)注射(1.0ml/kg)載體(50％丙二醇/鹽水；n＝8)或7-正丙基-裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯(3b)(0.3mg/kg；n＝7)。另外兩組大鼠在結扎MCA后0分鐘，2小時和6小時靜脈內(nèi)注射3b(1.0mg/kg)。一組(0.1mg/kg×3；n＝6)在每一個時間點接受一次0.1mg/kg的注射，而另一組(0.3mg/kg×3；n＝7)在三個時間點的每一個接受一次0.3mg/kg的注射。結果在用單劑7-正丙基-裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯(3b)治療的動物中，梗塞體積減小50％(圖1，0.3×1)。而在0.1mg/kg×3劑量組或0.3mg/kg×3劑量組中，梗塞體積沒有明顯減小(圖1)。
在2小時局部缺血期后所有動物的即刻神經(jīng)病學評分為10±0。在24小時后，用載體處理的大鼠的平均分為8.7±0.6，而用7-正丙基-裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯(3b)0.3mg/kg單劑處理的鼠的平均分為4±1(圖2)。這些數(shù)據(jù)表明藥物治療后的動物得到60％神經(jīng)病學改善。而在0.1mg/kg×3劑量組或0.3mg/kg×3劑量組中沒有觀察到神經(jīng)病學評分的明顯改善(圖2)。結論7-正丙基-裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯，一旦在局部缺血后給藥，將在神經(jīng)病學缺陷和梗塞大腦損傷兩方面提供顯著保護。從這些初步數(shù)據(jù)來看，單劑方案顯然比多劑方案更優(yōu)選。
通過以上對本發(fā)明的充分描述，本領域普通技術人員都應該理解，在不影響本發(fā)明范圍或其任何實施方案情況下，可以在某些條件、配方和其它參數(shù)的寬廣且等價的范圍內(nèi)實施本發(fā)明。本文所引用的所有專利和出版物在此全部引作參考。
權利要求
1.制備式Vγ-內(nèi)酰胺或其鹽的方法，
其中R1是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R2是烷基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，烷氧基，羥基，烷氧基烷基或酰氨基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；及該方法包括(a)通過用強堿處理式I取代的芳基-或雜芳基噁唑啉，
其中R1定義如上，R3是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，其中任何一個可以選擇性地被取代；及R4是芳基或雜芳基，二者都可以選擇性地被取代；將所說取代的芳基-或雜芳基噁唑啉脫質子化，形成烯醇化物；(b)用下列金屬之一將所說烯醇化物進行金屬轉移鈦，鋁，錫，鋅，鎂和硼，然后用式XIV甲酰基甲酰胺處理，
其中R2的定義如上；及R5和R6各是烷基或烷芳基之一；或R5和R6與其相連的氮原子一起形成一個可以選擇性地被取代的5-7員環(huán)，該環(huán)可以選擇性地含有另一個氧原子或氮原子，形成式II加合物，
其中R1-R6定義如上；(c)催化氫化所說式II加合物，形成式IVγ-內(nèi)酰胺，
其中R1，R2和R3定義如上；(d)皂化所說式IVγ-內(nèi)酰胺，形成式V羧酸。
2.權利要求1的方法，進一步包括用環(huán)化劑處理式V羧酸，形成式VII裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯，
其中R1和R2定義同權利要求1。
3.權利要求2的方法，其中所說的環(huán)化可由下列試劑進行芳基磺酰氯，六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)鏻，四氟硼酸O-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓和烷基、芳基或鏈烯基氯甲酸酯。
4.權利要求2的方法，進一步包括式VII裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯與硫醇R7SH反應，形成式VI乳胱氨酸，
其中R1和R2定義同權利要求1；及R7是烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所說的烷基，芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個可以選擇性地被取代。
5.權利要求4的方法，通過用N-乙?；腚装彼崽幚恙?內(nèi)酯將裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯轉變成乳胱氨酸。
6.權利要求1的方法，其中式V羧酸中間體直接與硫醇R7SH偶合，形成式VI乳胱氨酸
其中R1和R2定義同權利要求1；及R7是烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所說的烷基，芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個可以選擇性地被取代。
7.權利要求1的方法，其中步驟(a)中所說強堿為以下化合物受阻酰胺堿；堿金屬六甲基二硅氮化物；或受阻烷基鋰試劑。
8.權利要求1的方法，其中步驟(a)中的反應是在低溫下在醚溶劑中進行。
9.權利要求8的方法，其中步驟(a)中所說的醚溶劑選自乙醚，四氫呋喃和二甲氧基乙烷，所說反應溫度從約-100℃至約-30℃。
10.權利要求1的方法，其中步驟(b)中所說烯醇化物用鈦或鋁或它們的混合物進行金屬轉移。
11.權利要求1的方法，其中步驟(b)中所說烯醇化物通過與Me2AlCl反應進行金屬轉移。
12.權利要求10的方法，其中使用了1-3個摩爾當量的所說金屬。
13.權利要求1的方法，其中步驟(c)中所說的加合物II經(jīng)過催化氫解反應，得到所要的γ-內(nèi)酰胺(IV)與氨基二醇III的混合物，
其中R1-R6定義同權利要求1。
14.權利要求13的方法，其中所說的氫解反應在下列催化劑之一存在下鈀黑，鈀/活性炭和氫氧化鈀/炭，及在下列有機溶劑之一存在下進行低級鏈烷醇，低級鏈烷酸酯，低級鏈烷酸，或它們的混合物。
15.權利要求14的方法，其中所說有機溶劑選自甲醇，乙醇，異丙醇，乙酸乙酯，乙酸，及其混合物。
16.權利要求13的方法，其中所說粗產(chǎn)物混合物經(jīng)過加熱將氨基二醇III轉變成γ-內(nèi)酰胺IV。
17.權利要求1的方法，其中R1是C1-12烷基，C3-8環(huán)烷基，C2-8鏈烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基；R2是C1-8烷基，C3-8環(huán)烷基，C2-8鏈烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基；R3是C1-8烷基，C3-8環(huán)烷基，C2-8鏈烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基；R4是C6-10芳基，或下列雜芳基，包括噻吩基，苯并[b]噻吩基，呋喃基，吡喃基，異苯并呋喃基，苯并噁唑基，2H-吡咯基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，吡啶基，吡嗪基，嘧啶基，噠嗪基，中氮茚基，異吲哚基，3H-吲哚基，吲哚基，吲唑基，嘌呤基，4H-喹嗪基，異喹啉基，喹啉基或三唑基；及R5和R6分別是C1-6烷基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，或與其相連的氮原子一起形成一個5-7員雜環(huán)，該雜環(huán)可以選擇性地被取代，并且可以選擇性地含有另一個氧原子或氮原子。
18.權利要求17的方法，其中R1是C1-6烷基，C3-6環(huán)烷基，或C6-10芳基；R2是甲基，乙基，丙基，丁基，甲氧基，或乙氧基；R3是甲基，乙基，叔丁基或芐基；R4是苯基或被鹵素，C1-6烷基，C1-6烷氧基，羧基或氨基取代的苯基；及NR5R6是下列基團之一二甲氨基，二乙氨基，吡咯烷基，哌啶子基，嗎啉代，被鹵素，C1-6烷基，C6-10芳基(C1-6)烷基，C1-6烷氧基，羧基，或氨基取代的噁唑烷酮。
19.制備式II取代的噁唑啉化合物的方法，
該方法包括(a)通過用強堿處理式I取代的芳基-或雜芳基噁唑啉，
將所說取代的芳基-或雜芳基噁唑啉脫質子化，形成烯醇化物；及(b)用下列金屬之一將所說烯醇化物進行金屬轉移鈦，鋁，錫，鋅，鎂和硼，然后用式XIV甲酰基甲酰胺處理，
其中，對于式I，II和XIV中的每一個R1是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R2是烷基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，烷氧基，羥基，烷氧基烷基或酰氨基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R3是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，其中任何一個可以選擇性地被取代；R4是選擇性地取代的芳基或選擇性地取代的雜芳基；及R5和R6分別是烷基或烷芳基之一；或R5和R6與其相連的氮原子一起形成一個可以選擇性地被取代的5-7員環(huán)，該環(huán)可以選擇性地含有另一個氧原子或氮原子。
20.權利要求19的方法，進一步包括催化氫化所說式II噁唑啉化合物，然后任選回流所得反應混合物，因此形成式IVβ-內(nèi)酰胺，
其中R1，R2和R3定義同權利要求19。
21.權利要求20的方法，進一步包括皂化所說式IV化合物，然后進行環(huán)化，形成式VII裂-乳胱氨酸-β-內(nèi)酯化合物，
其中R1和R2定義同權利要求19。
22.制備式Ia取代的芳基噁唑啉化合物的方法，
其中R1是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R3是烷基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，其中任何一個可以選擇性地被取代；及R4是選擇性地取代的芳基或選擇性地取代的雜芳基；所說方法包括(a)不對稱二羥基化式XV烯烴中間體，
形成式XVIa光學活性的二醇，
(b)將所說式XVIa光學活性的二醇與原酸酯在酸催化作用下反應，得到混合原酸酯，然后，在堿存在下將所得混合原酸酯中間體與下列試劑反應酰基鹵，HCl，HBr，HI，Me3SiCl，Me3SiI，Me3SiBr和含鹵素Lewis酸，形成式XVIIa鹵代酯衍生物，
其中X是Cl，Br或I；(c)將所說鹵代酯衍生物與堿金屬疊氮化物反應，形成式XVIIIa疊氮化物，
(d)催化氫化所說疊氮化物，形成式XIXa化合物，
(e)將式XIXa化合物置于閉環(huán)條件下，形成所說的式Ia取代的苯基噁唑啉；其中對于每個式XVa，XVIa，XVIIa，XVIIIa和XIXa，R1，R3和R4同式Ia中定義。
23.權利要求22的方法，其中步驟(a)中的二羥基化反應在甲磺酰胺存在下用AD-混合-β進行，立體有擇地得到式XVIa二醇。
24.權利要求22的方法，其中步驟(a)中的二羥基化反應用N-氧化物作再氧化劑進行。
25.權利要求22的方法，其中步驟(b)中所說的式XVIa二醇用原酸酯在Lewis或Bronsted酸催化作用下進行處理，得到混合原酸酯，通過用乙酰溴處理可以將混合原酸酯當場轉化為其中X是Br的式XVIIa的鹵代酯。
26.權利要求25的方法，其中用于此反應的原酸酯是芳族羧酸原酸酯。
27.權利要求26的方法，其中原酸酯是原苯甲酸三甲基酯。
28.權利要求25的方法，其中所說酸催化劑是HBr，SnCl4，TiCl4，BBr3或三氟化硼。
29.權利要求22的方法，其中步驟(c)中式XVIIa粗鹵代酯通過在極性非質子傳遞有機溶劑中用堿金屬疊氮化物處理被轉化成式XVIIIa疊氮化物。
30.權利要求22的方法，其中步驟(d)中所說的式XVIIIa疊氮化物的催化氫化反應在加有鈀催化劑的乙酸乙酯中進行。
31.權利要求30的方法，其中所說催化氫化反應伴隨著芳?；倪w移進行，得到式XIXa羥基酰胺。
32.權利要求22的方法，其中步驟(e)中所說式XIXa羥酰胺用亞硫酰氯在二氯甲烷中處理，以隨著羥基逆轉進行環(huán)閉塞，生成式Ia順-取代的噁唑啉。
33.權利要求32的方法，其中順-噁唑啉在平衡條件下通過酯取代基構型的逆轉被轉化成反-噁唑啉。
34.制備式Ib取代的芳基噁唑啉化合物的方法，
其中R1是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R3是烷基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，其中任何一個可以選擇性地被取代；及R4是選擇性地取代的芳基或選擇性地取代的雜芳基；所說方法包括(a)不對稱二羥基化式XV烯烴中間體，
形成式XVIb光學活性的二醇，
(b)將所說式XVIb光學活性的二醇與原酸酯在酸催化作用下反應，得到混合原酸酯，然后，在堿存在下將所得混合原酸酯中間體與下列試劑反應?；u，HCl，HBr，HI，Me3SiCl，Me3SiI，Me3SiBr和含鹵素Lewis酸，形成式XVIIb鹵代酯衍生物，
其中X是Cl，Br或I；(c)將所說鹵代酯衍生物與堿金屬疊氮化物反應，形成式XVIIIb疊氮化物，
(d)氫化所說疊氮化物，形成式XIXb化合物，
(e)將式XIXb化合物置于閉環(huán)條件下，形成所說的式Ib取代的苯基噁唑啉；其中對于每個式XVb，XVIb，XVIIb，XVIIIb和XIXb，R1，R3和R4同式Ib中定義。
35.權利要求34的方法，其中步驟(a)中的二羥基化反應在甲磺酰胺存在下用AD-混合-α進行，立體有擇地得到式XVIb二醇。
36.權利要求34的方法，其中步驟(a)中的二羥基化反應用N-氧化物作再氧化劑進行。
37.權利要求34的方法，其中步驟(b)中所說的式XVIb二醇用原酸酯在Lewis或Brnsted酸催化作用下進行處理，得到混合原酸酯，通過用乙酰溴處理可以將混合原酸酯當場轉化為其中X是Br的式XVIIb的鹵代酯。
38.權利要求37的方法，其中用于反應的原酸酯是芳族羧酸原酸酯。
39.權利要求38的方法，其中原酸酯是原酸苯甲酸三甲基酯。
40.權利要求37的方法，其中所說酸催化劑是HBr，SnCl4，TiCl4，BBr3或三氟化硼。
41.權利要求34的方法，其中步驟(c)中式XVIIb粗鹵代酯通過在極性非質子傳遞有機溶劑中用堿金屬疊氮化物處理被轉化成式XVIIIb疊氮化物。
42.權利要求34的方法，其中步驟(d)中所說的式XVIIIb疊氮化物的催化氫化反應在鈀催化劑的乙酸乙酯中進行。
43.權利要求42的方法，其中所說催化氫化反應伴隨著芳?；倪w移進行，得到式XIXb羥基酰胺。
44.權利要求34的方法，其中步驟(e)中所說式XIXb羥酰胺用亞硫酰氯在二氯甲烷中處理，隨著羥基逆轉進行環(huán)閉塞，生成式Ib順-取代的噁唑啉。
45.制備式XIXa化合物的方法，
所說方法包括氫化式XVIIIa疊氮化物化合物，
其中，在式XIXa和XVIIIa中，R1是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R3是烷基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，其中任何一個可以選擇性地被取代；及R4是芳基或雜芳基，二者可以選擇性地被取代。
46.權利要求45的方法，進一步包括將式XIXa化合物置于閉環(huán)條件下，形成式Ia取代的噁唑啉化合物，
其中R1，R3和R4定義同權利要求45。
47.制備式XIXb化合物的方法，
所說方法包括氫化式XVIIIb疊氮化物化合物，
其中，在式XIXb和XVIIIb中，R1是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R3是烷基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，其中任何一個可以選擇性地被取代；及R4是芳基或雜芳基，二者可以選擇性地被取代。
48.權利要求47的方法，進一步包括將式XIXb化合物置于閉環(huán)條件下，形成式Ib取代的噁唑啉化合物，
其中R1，R3和R4定義同權利要求47。
49.式VI或VII化合物或它們的鹽，
其中R1是C1-12烷基，C3-8環(huán)烷基，C2-8鏈烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基；R2是C2-6烷基；及R7是烷基，芳基，芳烷基，烷芳基，其中任何一個可以選擇性地被取代。
50.權利要求49的化合物，其中R1是C1-4烷基。
51.權利要求50的化合物，其中R1是異丙基。
52.權利要求49的化合物，其中R2是乙基，正丙基，正丁基或異丁基。
53.權利要求52的化合物，其中R2是乙基。
54.權利要求52的化合物，其中R2是正丙基。
55.權利要求52的化合物，其中R2是正丁基。
56.權利要求52的化合物，其中R2是異丁基。
57.式XIV對映體富集的甲?；柞０坊蚱潲}，
其中R2是C1-8烷基，C3-8環(huán)烷基，C2-8鏈烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基；及R5和R6分別是C1-6烷基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，或與其相連的氮原子一起形成一個5-7員雜環(huán)，該雜環(huán)可以選擇性地被取代，而且可以選擇性地含有另一個氧原子或氮原子。
58.一種藥物組合物，包含權利要求49-56之一的化合物和可藥用載體或稀釋劑。
59.式II化合物或其鹽，
其中R1是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R2是烷基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，烷氧基，羥基，烷氧基烷基或酰氨基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R3是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，其中任何一個可以選擇性地被取代；R4是選擇性地取代的芳基或選擇性地取代的雜芳基；及R5和R6分別是烷基或烷芳基之一；或R5和R6與其相連的氮原子一起形成一個可以選擇性地被取代的5-7員環(huán)，該環(huán)還選擇性地含有另一個氧原子或氮原子。
60.權利要求59的化合物，其中R1是C1-12烷基，C3-8環(huán)烷基，C2-8鏈烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，其中所說芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R2是C1-8烷基，C3-8環(huán)烷基，C2-8鏈烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，其中所說芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R3是C1-8烷基，C3-8環(huán)烷基，C2-8鏈烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，其中任何一個可以選擇性地被取代；R4是選擇性地被取代的C6-10芳基，或下列選擇性地被取代的雜芳基噻吩基，苯并[b]噻吩基，呋喃基，吡喃基，異苯并呋喃基，苯并噁唑基，2H-吡咯基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，吡啶基，吡嗪基，嘧啶基，噠嗪基，中氮茚基，異吲哚基，3H-吲哚基，吲哚基，吲唑基，嘌呤基，4H-喹嗪基，異喹啉基，喹啉基或三唑基；及R5和R6分別是C1-6烷基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，或與其相連的氮原子一起形成一個5-7員雜環(huán)，該雜環(huán)可以選擇性地被取代，并且可以選擇性地含有另一個氧原子或氮原子。
61.式III化合物或其鹽，
其中R1是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R2是烷基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，烷氧基，羥基，烷氧基烷基或酰氨基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R3是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，其中任何一個可以選擇性地被取代；及R5和R6分別是烷基或烷芳基之一；或R5和R6與其相連的氮原子一起形成一個可以選擇性地被取代的5-7員雜環(huán)，該雜環(huán)可以選擇性地含有另一個氧原子或氮原子。
62.權利要求61的化合物，其中R1是C1-12烷基，C3-8環(huán)烷基，C2-8鏈烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，其中所說芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R2是C1-8烷基，C3-8環(huán)烷基，C2-8鏈烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，其中所說芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R3是C1-8烷基，C3-8環(huán)烷基，C2-8鏈烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，其中任何一個可以選擇性地被取代；及R5和R6分別是C1-6烷基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，或與其相連的氮原子一起形成一個5-7員雜環(huán)，該雜環(huán)可以選擇性地被取代，并且可以選擇性地含有另一個氧原子或氮原子。
63.式XVIIa或XVIIb化合物或其鹽，
其中R1是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R2是Cl，Br或I；R3是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，其中任何一個可以選擇性地被取代；及R4是選擇性地取代的芳基或選擇性地取代的雜芳基。
64.式XVIIIa或XVIIIb化合物或其鹽，
其中R1是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；R3是烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，其中任何一個可以選擇性地被取代；及R4是選擇性地取代的芳基或選擇性地取代的雜芳基。
65.式XIV對映體富集的甲?；柞０坊蚱潲}的制備方法，
其中R2是烷基，環(huán)烷基，芳基，烷芳基，芳烷基，烷氧基，羥基，烷氧基烷基或酰氨基，其中所說的芳基，芳烷基或烷芳基中任何一個的環(huán)部分可以選擇性地被取代；及R5和R6分別是烷基或烷芳基之一；或R5和R6與其相連的氮原子一起形成一個可以選擇性地被取代的5-7員雜環(huán)，該雜環(huán)可以選擇性地含有另一個氧原子或氮原子；所說方法包括(a)用R2CH2COCl酰化式VIII化合物的陰離子，
其中R8是異丙基或芐基，形成式IX?；鶉f唑烷酮，
其中R2和R8定義如上；(b)將式IX酰基噁唑烷酮與芐氧基甲基氯進行立體有擇反應，形成式X保護的醇，
其中R2和R8定義如上；(c)水解式X保護的醇，形成式XI羧酸，
其中R2定義如上；(d)將所說式XI酸與酰胺R5R6NH2偶合，得到式XII酰胺，
其中R2，R5和R6定義如上；(e)催化氫化式XII酰胺，形成式XIII醇，
其中R2，R5和R6定義如上；及(f)氧化所得的式XIII醇，得到式XIV甲?；柞０?。
66.權利要求65的化合物，其中R2是C1-8烷基，C3-8環(huán)烷基，C2-8鏈烯基，C2-8炔基，C6-14芳基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基；及R5和R6分別是C1-6烷基，C6-10芳基(C1-6)烷基或C1-6烷基(C6-10)芳基，或與其相連的氮原子一起形成一個5-7員雜環(huán)，該雜環(huán)可以選擇性地被取代，并且可以選擇性地含有另一個氧原子或氮原子。
67.抑制細胞內(nèi)蛋白體功能的方法，包括將所說細胞與權利要求49的化合物接觸。
68.抑制哺乳動物中蛋白體功能的方法，包括給所說哺乳動物施用抑制蛋白體功能有效量的權利要求49的化合物。
69.治療炎癥的方法，包括給患者施用抗炎癥有效量的權利要求的49化合物。
70.治療癌癥的方法，包括給患者施用抗腫瘤或抗轉移有效量的權利要求49的化合物。
71.治療哺乳動物局部缺血或再灌注損傷的方法，包括給所說哺乳動物施用有效量的權利要求49的化合物。
72.權利要求71的方法，其中局部缺血是血管閉塞的結果。
73.權利要求71的方法，其中所說血管閉塞發(fā)生在中風期間。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種改進的合成裂—乳胱氨酸－β－內(nèi)酯及其類似物的方法,它比現(xiàn)有技術中的合成方法步驟少,但總產(chǎn)率卻高很多。該合成途徑依賴于噁唑啉中間體的新的立體有擇合成和甲?；柞０返絿f唑啉唯一的立體有擇加成。本發(fā)明還描述了新的裂－乳胱氨酸－β－內(nèi)酯及其類似物,以及它們作為蛋白體抑制劑的用途。
文檔編號A61P29/00GK1271342SQ98809526
公開日2000年10月25日 申請日期1998年8月14日 優(yōu)先權日1997年8月15日
發(fā)明者F·索西, L·普拉蒙當, M·比恩克, W·羅史 申請人:F·索西, L·普拉蒙當, M·比恩克, W·羅史