專利名稱：治療或預防前列腺癌的組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及治療或預防前列腺癌的新組合物、化合物在制備治療或預防前列腺癌的藥物制劑中的應用和通過對溫血動物給藥有效量的該化合物來治療或預防前列腺癌的方法。
背景技術：
已知睪酮5α還原酶抑制劑可作為良性前列腺肥大的治療試劑，其是通過抑制過量雄性激素(主要為二氫睪酮)引起的前列腺細胞生長的機理縮小前列腺體積。另外，睪酮5α還原酶抑制劑如非那司提在美國和歐洲作為良性前列腺肥大的治療試劑出售。還有一些睪酮5α還原酶抑制劑，為了開發(fā)它們作為前列腺癌的治療試劑，正在對它們進行臨床研究。
對前列腺的縮小作用與睪酮5α還原酶抑制劑活性的效能相對應。與良性前列腺肥大不同，對前列腺癌的治療作用不只與睪酮5α還原酶抑制劑活性的效能相對應，因為前列腺癌增生涉及到許多因素。發(fā)明公開所有本申請的化合物并不都是未知化合物；例如日本專利申請(公開)號平8-73492和日本專利申請(公告)號平8-19151公開了化合物N-[1-甲基-1-(4-甲氧基苯基)乙基]-3-氧-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺，其為睪酮5α還原酶抑制劑。
本發(fā)明的發(fā)明人對具有睪酮5α還原酶抑制劑活性的衍生物的合成及其藥理活性進行了多年認真的研究。本發(fā)明人發(fā)現正如上面提到的具有特定結構的化合物具有良好的前列腺癌治療或預防作用，從而完成了本發(fā)明。
本發(fā)明的目的是提供治療或預防前列腺癌的組合物。另外，本發(fā)明的還有一個目的是提供上述化合物在制備治療或預防前列腺癌的藥物中的應用，和通過對溫血動物給藥有效量的上述化合物來治療或預防前列腺癌的方法。
也就是說，本發(fā)明的用于治療或預防前列腺癌的新組合物含有作為活性成分的下面式(I)所示的化合物、其可藥用的鹽或者該化合物的其它衍生物，優(yōu)選的活性成分是N-[1-甲基-1-(4-甲氧基苯基)乙基]-3-氧-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺，更優(yōu)選的是口服給藥。
另外，下面式(I)所示的化合物、其可藥用的鹽或者該化合物的其它衍生物在制備治療或預防前列腺癌的藥物中的新應用，優(yōu)選N-[1-甲基-1-(4-甲氧基苯基)乙基]-3-氧-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺在制備治療或預防前列腺癌藥物中的應用，更優(yōu)選地，該藥物以口服給藥。
而且，本發(fā)明的新治療或預防方法是一種治療或預防前列腺癌的方法，包括對溫血動物給藥有效量的下面式(I)所示化合物、其可藥用的鹽或者該化合物的其它衍生物，一種優(yōu)選的治療或預防前列腺癌的方法包括對溫血動物給藥有效量的N-[1-甲基-1-(4-甲氧基苯基)乙基]-3-氧-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺，更優(yōu)選地口服給藥。

其中，R1和R2可以相同或不同，它們表示H、OH或低級烷氧基。
在式(I)中術語“低級烷氧基”表示具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基團，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、s-丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、異戊氧基、2-甲基丁氧基、新戊氧基、正己氧基、4-甲基戊氧基、3-甲基戊氧基、2-甲基戊氧基、3，3-二甲基丁氧基、2，2-二甲基丁氧基、1，1-二甲基丁氧基、1，2-二甲基丁氧基、1，3-二甲基丁氧基和2，3-二甲基丁氧基，優(yōu)選具有1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基團，更優(yōu)選甲氧基。
術語“其可藥用的鹽”表示可轉變成其鹽的本發(fā)明化合物(I)的鹽，這樣的鹽的例子優(yōu)選包括堿金屬鹽如鈉鹽、鉀鹽和鋰鹽，堿土金屬鹽如鈣鹽和鎂鹽，和金屬鹽如鋁鹽、鐵鹽和鋅鹽。
另外，本發(fā)明的化合物(I)置于空氣中時可能吸濕，因此該化合物可能含有一部分吸收水，或者它可轉變成相應的水合物。這樣的化合物也包括在本發(fā)明的范圍中。
根據下面所示的方法可以制備本發(fā)明的化合物(I)。方法A

其中的R1和R2的意義如上所述。
方法A是通過羧酸衍生物(II)和胺衍生物(III)的縮合反應制備所需要的化合物(I)的方法。
步驟A1是通過化合物(II)或其活性衍生物與化合物(III)的反應制備化合物(I)。該反應根據傳統(tǒng)的肽合成方法進行，例如疊氮化物方法、活性酯方法、混合酐方法或縮合方法。
在上述方法中，疊氮化物方法進行如下在惰性溶劑(例如二甲基甲酰胺)中，化合物(II)或其酯與肼在室溫下反應生成氨基酸酰肼。該氨基酸酰肼與亞硝酸化合物反應得到疊氮化物衍生物，然后用胺衍生物(III)處理該疊氮化物衍生物。
此處所用的亞硝酸化合物可以包括例如，堿金屬亞硝酸鹽如亞硝酸鈉或亞硝酸烷基酯如亞硝酸異戊酯。
優(yōu)選反應在惰性溶劑中進行，此處所用的溶劑可以包括例如，酰胺類如二甲基甲酰胺和二甲基乙酰胺、亞砜類如二甲亞砜和吡咯烷酮類如N-甲基吡咯烷酮。兩步反應(制備疊氮化物和酰胺衍生物(I))通常在一個反應罐中進行。前一反應的反應溫度為-50℃-0℃，反應時間為5分鐘到1小時；后一反應的反應溫度為-10-10℃，反應時間為10小時到5天。
活性酯方法如下進行化合物(II)與活性酯化試劑反應生成活性酯，然后該活性酯與胺衍生物(III)反應。
這兩個反應均優(yōu)選在惰性溶劑中進行，此處所用的溶劑可以包括例如鹵代烴類如二氯甲烷和氯仿、醚類如乙醚和四氫呋喃、酰胺類如二甲基甲酰胺和二甲基乙酰胺和腈類如乙腈。
此處所用的活性酯化試劑可以包括例如N-羥基化合物如N-羥基琥珀酰亞胺、1-羥基苯并三唑和N-羥基-5-降冰片烯-2，3-二羧酰胺或二硫化物如二硫聯(lián)吡啶?；钚怎セ磻獌?yōu)選在縮合試劑存在下進行，如在二環(huán)己基碳二亞胺、羰基二咪唑或三苯基膦存在下進行。
活性酯化反應的反應溫度為-10-100℃，活性酯與胺衍生物(III)的反應約在室溫下進行，兩個反應的反應時間均為30分鐘至80小時。
在活性酯與胺的反應中，可以把4-二甲基氨基吡啶加入到反應系統(tǒng)中。
混合酐方法進行如下制備化合物(II)的混合酐，然后該混合酐與胺衍生物反應。
制備混合酐衍生物的反應是這樣完成的化合物(II)與形成混合酐衍生物的試劑[例如，鹵代碳酸低級(C1-C4)烷基酯如氯碳酸乙酯和氯碳酸異丁酯、低級烷酰氯如新戊酰氯、低級烷基或二芳基氰基磷酸酯如氰基磷酸二乙酯和氰基磷酸二苯酯、或磺酰鹵如2，4，6-三異丙基苯磺酰氯、對甲苯磺酰氯和甲磺酰氯]在惰性溶劑(如上面所述的鹵代烴、酰胺和醚)中反應。該反應優(yōu)選在有機胺如三乙胺和N-甲基嗎啉存在下進行，反應溫度為-10℃至50℃，反應時間為30分鐘至20小時。
混合酐衍生物與胺衍生物(III)的反應優(yōu)選在惰性溶劑(例如上面所述的鹵代烴、酰胺和醚)存在下進行。反應溫度為0-80℃，反應需要的時間為1-48小時。
該反應是在化合物(II)、化合物(III)和形成混合酐衍生物的試劑的共同存在下并且在不分離混合酐衍生物的情況下進行。
縮合方法如下進行在縮合試劑如二環(huán)己基碳二亞胺、羰基二咪唑或2-氯-1-甲基吡啶噁碘化物/三乙胺存在下，化合物(II)與胺衍生物(III)直接反應。通過與制備活性酯反應中記載的相似方式進行該反應。
如果R1和R2中存在保護的羥基，可以根據傳統(tǒng)方法除去該保護基團。
原料化合物(II)或其活性酯是已知的，或者根據已知方法制備[例如，藥物化學雜志(J.Med.Chem.，)27，1690(1984)；藥物化學雜志(J.Med.Chem.，)29，2298(1986)]。
另外，化合物(III)是已知的或根據已知方法制備[例如合成(Synthesis)，593(1976)；有機化學雜志(J.Org.Chem.，)36，305(1971)Angew.Chem.，82，138(1970)；合成(Synthesis)，24(1978)；合成通迅(Synthetic Commun.，18，777(1988))；合成通迅(Synthetic Commun.，18，783(1988))；有機反應(Organic Reaction)，3，337(1946)；有機合成(Org.Synthesis)，51，48(1971)；四面體(Tetrahedron)30，2151(1974)；和有機化學雜志37，188(1972)]，和例如，根據合成(Synthesis)，P.24(1978)中記載的方法制備本發(fā)明中具有H2N-C(Me)(Me)-Ph(R1)(R2)部分的原料化合物。該反應方案表示如下

(其中R1和R2具有上面所述同樣的意義，Me表示一個甲基，Ph表示一個苯基)，和包括一個格利雅反應、一個羥基的疊氮化反應和一個還原反應。[附圖的簡要說明]


圖1表示實施例1中對人前列腺癌的抗腫瘤效應。
縱坐標 腫瘤體積的相對比例(以對數表示)橫坐標 開始給藥后的天數交叉點 對照組黑點非那司提給藥組圓點化合物I給藥組化合物IN-[1-甲基-1-(4-甲氧基苯基)乙基]-3-氧-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺[本發(fā)明的最佳實施方式]下面將以實施例和參考實施例更詳細地描述本發(fā)明，但本發(fā)明的范圍不局限于此。實施例1 抗腫瘤活性試驗1購自美國典型培養(yǎng)物中心(ATCC)的培養(yǎng)細胞系人前列腺癌細胞株LNCaP，在雄性和雌性裸鼠中再次皮下培養(yǎng)5-6次，得到能可靠地從皮下取出的實體瘤。該人前列腺癌細胞株用于本試驗。把該細胞株一個3平方毫米的實體瘤部分移植到BALB/cAJcl-nu裸鼠(Nippon Clea，雄性，已出生8星期)腋窩部分皮下。把20天后可靠地取出腫瘤的小鼠隨機指定到每組含有8-10只動物的組中。N-[1-甲基-1-(4-甲氧基苯基)乙基]-3-氧-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺(化合物I，100mg/kg)或非那司提(100mg/kg)對小鼠口服給藥，每天早晨一次，每次劑量0.1ml/10g體重，連續(xù)給藥28天。一星期測量腫瘤直徑兩次，從最大軸(a)和最小軸(b)算出腫瘤體積V(V＝ab2/2)。每只鼠的相對體積比用Vn/Vo表示。根據每只鼠的相對體積比確定腫瘤生長抑制率(％)。
腫瘤生長抑制率(％)＝(1-Vn/Vo)×100
Vn第n天的腫瘤體積Vo給藥第1天的腫瘤體積結果圖1顯示相對體積比數據。
非那司提購自美國和歐洲，其作為良性前列腺肥大的治療藥物，目前其作為治療前列腺癌藥物的臨床研究正在進行。
圖1表明非那司提不顯示任何腫瘤生長抑制活性，然而化合物1顯示腫瘤生長抑制活性，其中經28天最大的腫瘤抑制率為30％。因此，化合物1作為前列腺癌的治療試劑是有用的。實施例2抗腫瘤活性試驗2本試驗中應用沒有胸腺的雄性裸鼠(年齡約4-5星期)。在無菌條件下飼養(yǎng)裸鼠。
人前列腺癌LNCaP細胞購自美國典型培養(yǎng)物中心(ATCC)。LNCaP細胞(5×106)皮下移植到裸鼠中形成實體瘤，然后用于本試驗。
麻醉狀態(tài)下，裸鼠的下腹切開約2cm，暴露前列腺。小心切開前列腺膜，然后把LNCaP腫瘤部分插入其中。用可吸收的縫線縫合前列腺膜開口。前列腺返回至腹腔中，用可吸收的縫線縫合下腹部切口。這些小鼠隨機分配至每組20只動物的組中。這些組指定如下化合物1組給藥化合物1(20mg/kg)，非那絲提組給藥非那絲提(20mg/kg)，對照組不給藥。
當鼠的腫瘤長至能在體外測量時即可證實該移植的腫瘤已經進入到鼠中，然后開始給藥化合物1和非那司提。每天以如上所述的劑量口服給藥化合物1和非那司提。根據實施例1公式算出移植腫瘤的體積。另外，當小鼠由于癌癥死亡時立即進行尸體剖檢，對腫瘤稱重。同時確證轉移的存在。通過用10％福爾馬林固定后植入石蠟制備轉移的組織部分。用蘇木紫和曙紅對這些組織部分著色，然后檢測轉移。
對所有組的移植腫瘤重量進行“學生”t-檢驗。另外，每組的移植情況進行Fisher’s檢驗。關于壽命延長作用，將用于比較的兩組進行Mann-Whitney U-檢驗和“學生”t-檢驗。特別地，對腫瘤移植63天后的存活率進行Pearson的x2檢驗。在這些檢驗中，低于5％的危險率視為顯著。結果表1實驗組存活率(％)對照組0化合物1 56非那司提 22表1明顯表明與非那司提組相比，化合物1組顯示有高得多的存活率。參考實施例1N-[1-甲基-1-(4-甲氧基苯基)乙基]-3-氧4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺1克3-氧-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17-羧酸、1.6克三苯基膦和1.4克2，2′-二吡啶二硫化物依次加入到30毫升無水甲苯中，該混合物室溫攪拌過夜。然后反應混合物在35g硅膠上進行柱色譜，用丙酮-二氯甲烷(1∶9-1∶1)洗脫，得到1.11克2-吡啶硫代酯衍生物按照上面類似方式合成的5.0克2-吡啶硫代酯衍生物和5.0克1-(4-甲氧基苯基)-1-甲基乙基胺依次加入到30毫升無水二氯甲烷中，該混合物室溫攪拌3天。然后用100ml二氯甲烷稀釋該反應混合物，依次用1N鹽酸、水、碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉溶液洗滌。二氯甲烷層用硫酸鎂干燥，減壓濃縮。殘余物在15g硅膠上進行柱層析，用丙酮-二氯甲烷(1∶9-1∶1)洗脫。得到5.2g標題化合物。NMR譜(CDCl3)δppm0.68(3H，s)，0.98(3H，s)，0.90-2.20(16H，m)，1.70(3H，s)，1.72(3H，s)，3.35(1H，t，J＝9Hz)，3.80(3H，s)，5.48(1H，br).5.76(1H，br)，5.83(1H，d，J＝10Hz)，6.82(1H，d，J＝10Hz)，6.88(2H，d，J＝9Hz)，7.32(2H，d，J＝9Hz)IR譜vmax cm-1(KBr)2969，2938，1672，1599，1514，1455，1248，1181，1035，825[工業(yè)實用性]本發(fā)明的化合物1具有良好的抗腫瘤活性，并且其毒性低。因此它可用作治療腫瘤或預防前列腺癌的組合物。
本發(fā)明的化合物(I)或其可藥用的鹽可以用作治療或預防前列腺癌的組合物?；衔?I)本身或化合物(I)與合適的可藥用輔料和稀釋劑等組成的混合物可以作為片劑、膠囊、粒劑、粉劑或糖漿劑口服。
熟練本領域的技術人員應用添加劑通過熟知的標準技術可以制備這些藥物制劑。其中的添加劑是輔料(例如，有機輔料如糖衍生物如乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和山梨糖醇；淀粉衍生物如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、α-淀粉、糊精和羧甲基淀粉；纖維素衍生物如結晶纖維素、低取代羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈣和內橋式羧甲基纖維素鈉；阿拉伯樹膠；葡聚糖和Pullulan；和無機輔料如硅酸鹽衍生物，如輕質二氧化硅，合成硅酸鋁和鎂偏硅酸鋁酸鹽；磷酸鹽如磷酸鈣；碳酸鹽如碳酸鈣；和硫酸鹽如硫酸鈣)；潤滑劑(例如硬脂酸、硬脂酸金屬鹽如硬脂酸鈣和硬脂酸鎂；滑石粉；膠態(tài)硅；蠟如蜂蠟和鯨蠟；硼酸；己二酸；硫酸鹽如硫酸鈉；脂肪族二元醇類；富馬酸、苯甲酸鈉；DL亮氨酸；脂肪酸鈉；月桂基硫酸鹽如月桂基硫酸鈉和月桂基硫酸鎂；硅酸如硅酸酐和硅酸水合物；和上面提到的淀粉衍生物)；粘合劑(例如，聚乙烯吡咯烷酮，Macrogol和上面輔料中記載的相同化合物)；崩解劑(例如，與上面輔料中記載的相同化合物)；和化學改性淀粉和纖維素如Crosscarmelose鈉，羧甲基淀粉鈉和橋式聚乙烯吡咯烷酮)；穩(wěn)定劑(例如對羥基苯甲酸酯如對羥基苯甲酸甲酯和對羥基苯甲酸丙酯)；醇類例如氯丁醇、苯甲醇和苯乙醇；苯扎氯銨；酚類如苯酚和甲氧甲酚；硫汞撒；脫氫醋酸；和己二烯酸)；矯味劑(例如，甜味劑、致酸劑和常用的芳香化學品)；和稀釋劑。
根據患者的年齡和健康狀況，所用的劑量可以變化。例如下列劑量是可取的每次給藥下限為0.001m/Kg體重(優(yōu)選0.01mg/kg體重)，每次給藥上限為20mg/kg體重(優(yōu)選1mg/kg體重)，根據癥狀不同，一天可給藥一次到數次。
下面表示制劑實施例。然而，本發(fā)明的范圍不限于這些實施例。
制劑實施例1膠囊參考實施例1中化合物 20.0mg乳糖158.7mg玉米淀粉70.0mg硬脂酸鎂1.3mg250mg混合上面所述的粉末，用60目的篩子過篩，得到的粉末在250mg的3號明膠膠囊中包封，得到膠囊。
制劑實施例2片劑參考實施例1中化合物20.0mg乳糖 154.0玉米淀粉 25.0硬脂酸鎂 1.0200mg混合上面所述的粉劑，用壓片機制成片劑，得到200mg的片劑。如果必要，該片劑可以包糖衣。
權利要求
1.治療或預防前列腺癌的組合物，含有式(I)化合物或者具可藥用的鹽或該化合物的其它衍生物作為活性成分
其中R1和R2可以相同或不同，它們表示H、OH或低級烷氧基。
2.根據權利要求1所述的治療或預防前列腺癌的組合物，其中的活性成分為N-[1-甲基-1-(4-甲氧基苯基)乙基]-3-氧-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺。
3.根據權利要求1或2所述的治療或預防前列腺癌的組合物，其中該組合物口服給藥。
4.式(I)化合物或其可藥用的鹽或該化合物的其它衍生物在制備治療或預防前列腺癌藥物制劑中的用途，
其中R1和R2可以相同或不同，它們表示H、OH或低級烷氧基。
5.權利要求4所述的N-[1-甲基-1-(4-甲氧基苯基)乙基]-3-氧-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺在制備治療或預防前列腺癌藥物制劑中的用途。
6.根據權利要求4或5所述的化合物在制備治療或預防前列腺癌藥物制劑中的用途，其中該化合物口服給藥。
全文摘要
下式(Ⅰ)化合物用于一種新組合物;該組合物具有治療或預防前列腺癌的作用。其中R
文檔編號A61K31/58GK1252805SQ98804295
公開日2000年5月10日 申請日期1998年2月26日 優(yōu)先權日1997年2月26日
發(fā)明者小島孝一, 小林知雄 申請人:三共株式會社