專利名稱：用于抑制疼痛、炎癥、痙攣和再狹窄的供血管內(nèi)應(yīng)用的沖洗液和方法
有關(guān)申請的相關(guān)參照本申請是1995年12月12日提出申請的共同未決的國際專利申請PCT/US95/16028的延續(xù)部分，后者指定美國，并是1994年12月12日提出申請的共同未決的美國專利申請系列號08/353,775的延續(xù)部分，每次申請?zhí)岢鋈掌诘膬?yōu)先權(quán)特此要求在35 U.S.C.§120下得到。1. 本發(fā)明涉及的領(lǐng)域本發(fā)明涉及外科用沖洗液和方法，特別是用于抗炎，抗疼痛，抗痙攣和抗再狹窄的外科用沖洗液。2. 本發(fā)明的背景關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡檢查是一項外科檢查，其操作方法是，通過復(fù)蓋層皮膚和關(guān)節(jié)囊中的一小切口，將與遠(yuǎn)端光源和視頻監(jiān)視器相連的照相機放入解剖學(xué)意義上的關(guān)節(jié)(例如，膝，肩等)中。通過相似的切口，也可將外科儀器放入關(guān)節(jié)內(nèi)，在關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡指導(dǎo)下進(jìn)行應(yīng)用。隨著關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡檢查醫(yī)師技術(shù)素質(zhì)的提高，許多過去需要通過“開放式”外科技術(shù)進(jìn)行的手術(shù)操作現(xiàn)在借助關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡檢查就能完成。這樣的操作包括，例如，膝關(guān)節(jié)部分半月板切除術(shù)和韌帶重建，肩肩峰成形術(shù)和回旋肌套口(rotator cuff)清創(chuàng)術(shù)以及肘滑膜切除術(shù)。作為外科適應(yīng)癥擴大以及小直徑關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡的開發(fā)的結(jié)果，腕和踝關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡檢查也已成為常規(guī)。
在每一次關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡檢查期間，生理沖洗液(例如生理鹽水或加乳酸鹽的林格氏液)連續(xù)沖洗關(guān)節(jié)，使關(guān)節(jié)囊擴張，帶走手術(shù)碎片，從而提供較清楚的關(guān)節(jié)內(nèi)視野。授予馬紹爾的美國專利4,504,493公開一種等克分子的甘油水溶液，作為關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡檢查用的非電導(dǎo)的和視覺上透明的沖洗液。
沖洗技術(shù)也可用于其他類型的操作，例如，心血管和一般血管內(nèi)診斷和治療操作，泌尿科操作以及手術(shù)傷口的處理。在各自的情況下，生理性液體被用于沖洗傷口，或體腔，或通道。傳統(tǒng)的生理性沖洗液并不能提供鎮(zhèn)痛，抗炎，抗痙攣和抗再狹窄作用。
緩解手術(shù)后病人的疼痛和痛苦是臨床醫(yī)學(xué)中，尤其在每年手術(shù)門診病人的數(shù)量不斷增加的情況下的一個令人關(guān)注的方面。目前最廣泛應(yīng)用的鎮(zhèn)痛劑，環(huán)氧合酶抑制劑(如異丁苯丙酸)和類阿片(如嗎啡，芬太尼)具有明顯的副作用，包括胃腸道刺激或出血以及呼吸抑制。手術(shù)后期間與類阿片有關(guān)的惡心嘔吐高發(fā)生率更是一個難題。以治療手術(shù)后疼痛而避免損害性副作用為目的的治療藥并不是容易開發(fā)的，原因是這些鎮(zhèn)痛劑的分子靶遍布全身并介導(dǎo)廣泛的生理作用。盡管抑制疼痛和炎癥以及血管痙攣，平滑肌痙攣和血管再狹窄的臨床需要是顯而易見的，但是能以有效劑量供給疼痛、痙攣和再狹窄抑制藥而最低限度地降低全身性副作用的方法還未開發(fā)出來。作為舉例，阿片制劑激動劑在治療劑量下以傳統(tǒng)方法(例如靜注、口服或肌注)給予，常常與幾種明顯的有害副作用有關(guān)，包括嚴(yán)重的呼吸抑制，情緒改變，精神模糊以及深度的惡心嘔吐。
以往的研究業(yè)已證明，某些內(nèi)緣性物質(zhì)如5-羥色胺(本文有時簡稱“5-HT”)，舒緩激肽和組織胺具有產(chǎn)生疼痛和炎癥的能力。Sicuteri，F(xiàn).，et.a1.，5-羥色胺-舒緩激肽對人痛覺受體的增強作用，生命科學(xué)(Life Sci)4，pp.309-316(1965)；Rosenthal，S.R.，組織胺作為皮疼覺的化學(xué)介導(dǎo)物，皮膚研究雜志(J.Invest.Dermat.)69，pp.98-105(1977)；Richardson，B.P.，et.al.，5-羥色胺M-受體亞群的鑒定以及一類新型藥物對其特異的阻斷作用，自然(Nature)316，pp.126-131(1985)；Whalley，E.T.et.al.，激肽激動劑和拮抗劑的作用，Naunyn-Schmiedeb藥理學(xué)文獻(xiàn)(Naunyn-Schmiedeb ArchPharmacol.)36，pp.652-57(1987)；Lang，E.et.al.，在體外自大鼠皮膚精細(xì)傳入的化學(xué)敏感性。神經(jīng)生理學(xué)雜志(J.Neurophysiol)63，pp.887-901(1990)。
例如，業(yè)已證實5-HT應(yīng)用于人水皰(剝脫性皮膚)可引起能被5-HT3受體拮抗劑抑制的疼痛，Richardson et.al.1985。同樣，外周應(yīng)用舒緩激肽產(chǎn)生能被舒緩激肽受體拮抗劑阻斷的疼痛，Sicuteri et al.，1965；Whalley et.al.，1987；Dray，A.，et al.，舒緩激肽和炎性疼痛、神經(jīng)科學(xué)動向(Trends Neurosci.16，pp.99-104(1993))。外周應(yīng)用組織胺產(chǎn)生可被組織胺受體拮抗劑抑制的血管擴張，瘙癢和疼痛。Rosenthal，1977；Douglas，W.W.，“組織胺和5-羥色胺及其拮抗劑”，在Goodman，L.S.，et.al.，ed.，治療的藥理學(xué)基礎(chǔ)(The PharmacologycalBasis of Thorapeutics)，MacMillan Publishing Company，New York，pp.605-638(1985)；Rumore，M.M.，et.al.，抗組織胺藥物的鎮(zhèn)痛作用，生命科學(xué)(Life Sci)36，pp.403-416(1985)。已經(jīng)證明，這三種激動劑(5-HT舒緩激肽和組織胺)聯(lián)合應(yīng)用產(chǎn)生一種引起協(xié)同性疼痛的作用，產(chǎn)生一種持久的強烈的疼痛信號，Sicuteri et.al.，1965；Richardson et.al.，1985；Kessler，W.，et.al.，炎性介導(dǎo)物體外聯(lián)合應(yīng)用引起的皮膚傳入神經(jīng)終端的激動以及P物質(zhì)的調(diào)制作用。實驗性大腦研究，(Exp.BrainRes.)91，pp.467-476(1992)。
在體內(nèi)，5-HT位于血小板和中樞神經(jīng)元中，組織胺發(fā)現(xiàn)于肥大細(xì)胞中，舒緩激肽則是在組織創(chuàng)傷，pH改變和溫度改變期間，自大的前體分子產(chǎn)生。因為5-HT可以從組織損傷部位的血小板中大量釋放出來，導(dǎo)致血漿5-HT水平比靜止水平高20倍(Ashton，J.H.et.al.，5-羥色胺作為患血管狹窄癥狗冠狀動脈中循環(huán)流速變化的介導(dǎo)物，循環(huán)(Circulation)73，pp.572-578(1986))，內(nèi)緣性5-HT在產(chǎn)生手術(shù)后疼痛，痛覺過敏和炎癥方面起作用是可能的。事實上已經(jīng)證明，活化后的血小板在體外可激發(fā)外周性傷害感受器。Ringkamp，M.，et.al.，活化的人血漿血小板在體外激發(fā)大鼠皮膚傷害感受器，神經(jīng)科學(xué)通訊(Neurosci.Lett.)170，pp.103-106(1994)。同樣，組織胺和舒緩激肽也在組織損傷期間釋放到組織中。Kimura，E.et.al.，實驗性冠狀動脈阻塞后冠狀竇血中舒緩激肽水平的變化，美國心臟病雜志(Am HeartJ.)85，pp.635-647(1973)；Douglas，1985；Dray et.al.(1993)。
此外，已知前列腺素也可引起疼痛和炎癥。環(huán)氧合酶抑制劑如異丁苯丙酸通常用于阻斷前列腺素的產(chǎn)生，從而減少前列腺素介導(dǎo)的疼痛和炎癥，F(xiàn)lower，R.J.，et.al.，鎮(zhèn)痛解熱藥和抗炎藥；痛風(fēng)治療中所用的藥物，見Goodman，L.S.，等主編，治療的藥理學(xué)基礎(chǔ)(ThePharmacological Basis of Therapeutics)，MacMillan Publishing Company，New York，pp.674-715(1985)。環(huán)氧合酶抑制劑按常規(guī)方法使用時，與某些有害的全身副作用有關(guān)。例如，消炎痛或在酮咯酸已公認(rèn)具有胃腸道和腎不良副作用。
正如所討論的，5-HT，組織胺，舒緩激肽和前列腺素可引起疼痛和炎癥。人們認(rèn)識和討論這些物質(zhì)介導(dǎo)對其周圍組織作用所借助的各種受體已有20年。大多數(shù)研究已在大鼠或其他動物模型上進(jìn)行過。但是，人和動物之間在藥理學(xué)和受體序列方面存在著差別。迄今尚無研究總結(jié)性地明確證明5-HT，舒緩激肽或組織胺在產(chǎn)生人手術(shù)后疼痛方面的重要性。
況且這些介質(zhì)的拮抗劑目前并沒有用于手術(shù)后疼痛的治療。稱為5-HT和去甲腎上腺素吸收拮抗劑的一類藥物，包括阿米替林，已應(yīng)用于口服治療慢性疼痛，具有中等度療效。但是，一般認(rèn)為慢性與急性疼痛狀態(tài)的機制有著相當(dāng)大的差別。事實上，圍術(shù)期使用阿米替林治療急性疼痛的二項研究中并沒有證明阿米替林具有減輕疼痛的作用。Levine，J.D.，et.al.，去郁敏增強阿片制劑對手術(shù)后疼痛的鎮(zhèn)痛作用。疼痛(Pain)27，pp.45-49(1986)；Kerrick，J.M.，et.al.，低劑量阿米替林作為類阿片的輔助藥品治療矯正外科手術(shù)后疼痛以安慰劑作對照的臨床試驗，疼痛(Pain)52，pp.325-30(1993)。在二項研究中藥物都口服給予。第二項研究指出，口服阿米替林實際上降低了手術(shù)后病人的全身感覺，這可能是由于這種藥物對腦中多胺受體的親和力所致。
阿米替林除能阻斷5-HT和去甲腎上腺素的吸收外，還是一個強效的5-HT受體拮抗劑。所以，前面提到的研究中在減輕手術(shù)后疼痛方面缺乏療效這一點似乎與急性疼痛中內(nèi)源性5-HT所起作用的提法相矛盾。有幾個理由可以解釋在這二個研究中所發(fā)現(xiàn)的阿米替林不能減輕急性疼痛的原因。(1).第一個研究(Levine，等，1986)中阿米替林在手術(shù)前一周開始使用，直到手術(shù)前一天晚上結(jié)束，而在第二個研究(Kerrick，等，1993)中，阿米替林僅僅在手術(shù)后使用。所以在實際的組織損傷期，也就是據(jù)稱5-HT被釋放出來的時期，手術(shù)部位組織中不存在阿米替林。(2)，一般認(rèn)為，阿米替林可被肝臟徹底代謝。采用口服給予的方法，手術(shù)部位組織中阿米替林的濃度在相當(dāng)長的時間內(nèi)，也許不能保持在足夠高的水平，以抑制在第二個研究中手術(shù)后所釋放的5-HT。(3)，鑒于存在多種炎癥介導(dǎo)物，而研究已證明各種炎癥介導(dǎo)物之間存在協(xié)同效應(yīng)，因此只阻斷一種炎癥介導(dǎo)物(5-HT)并不能足以抑制對組織損傷的炎癥反應(yīng)。
有幾項研究已經(jīng)證實，極高濃度(1％～3％溶液，即10～30mg/ml)的組織胺1(H1)受體拮抗劑具有充當(dāng)外科手術(shù)用局麻劑的能力。一般認(rèn)為這種麻醉作用并不經(jīng)由H1受體介導(dǎo)，而是由于與神經(jīng)元膜鈉通道(與利多卡因的作用相似)非特異性相互作用的結(jié)果。由于可產(chǎn)生與這些高“麻醉”濃度的組織胺受體拮抗劑有關(guān)的副作用(例如鎮(zhèn)靜作用)，組織胺受體拮抗劑的局部應(yīng)用目前并不用在圍術(shù)期的處置方面。
III.發(fā)明概述本發(fā)明提供一種由多種成分的混合物組成的低濃度溶液，目的在于在生理性的電解質(zhì)載體液中局部地抑制疼痛，炎癥，痙攣和再狹窄的介導(dǎo)物。本發(fā)明還提供一種直接向手術(shù)部位圍術(shù)期施用含這些成分的中洗液的使用方法，在該手術(shù)部位，該沖洗液在受體和酶水平上局部地發(fā)揮作用，以預(yù)先控制該部位的疼痛，炎癥，痙攣和再狹窄。由于采用本發(fā)明的局部圍術(shù)期給藥方法，在此采用比其他給藥方法(即靜脈，肌內(nèi)，皮下和口服給藥)所必需藥物劑量較小的藥物劑量下就能獲得所希望的治療作用。在該溶液中的抗痛/抗炎劑包括從如下諸類受體拮抗劑，受體激動劑和酶抑制劑中挑選出來的藥物，其中每一類藥物通過不同的分子作用機制發(fā)揮抑制疼痛和炎癥的作用(1).5-羥色胺受體拮抗劑；(2).5-羥色胺受體激動劑；(3).組織胺受體拮抗劑；(4).舒緩激肽受體拮抗劑；(5).激肽釋放酶抑制劑；(6).速激肽受體拮抗劑，包括神經(jīng)激肽1和神經(jīng)激肽2受體亞型拮抗劑；(7).降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)受體拮抗劑；(8).白細(xì)胞介素受體拮抗劑；(9).作用于花生四烯酸代謝物合成通路的酶抑制劑，包括(a)磷酸酯酶抑制劑，包括PLA2同型抑制劑和PLCγ同型抑制劑，(b)環(huán)氧合酶抑制劑，和(c)脂氧酶(lipooxygenase)抑制劑；(10).前列腺素類受體拮抗劑，包括類花生酸EP-1和EP-4受體亞型拮抗劑和凝血噁烷受體亞型拮抗劑；(11).白細(xì)胞三烯受體拮抗劑包括白細(xì)胞三烯B4受體亞型拮抗劑和白細(xì)胞三烯D4受體亞型拮抗劑；(12).類阿片受體激動劑，包括μ-阿片制劑，δ-阿片制劑和κ-阿片制劑受體亞型激動劑；(13).嘌呤受體(purinoceptor)激動劑和拮抗劑，包括P2X受體激動劑和P2Y受體激動劑；(14).三磷酸腺苷(ATP)敏感的鉀通道開放劑。以上藥物中的每一種作為抗炎劑和抗感受傷害即抗痛或鎮(zhèn)痛劑而發(fā)揮作用。為滿足特殊應(yīng)用，需要從這些類型的化合物中選擇藥物。
本發(fā)明的溶液中的幾個優(yōu)選實施方案還包括供特殊應(yīng)用的抗痙攣劑。例如，抗痙攣劑可能單用或與抗疼痛/抗炎癥劑伍用(incombination)，包含在供血管操作所用的溶液中，以控制血管痙攣，抗痙攣劑也可能包含在供泌尿道手術(shù)所用的溶液中以控制泌尿道和膀胱壁的痙攣。就這樣的應(yīng)用而言，抗痙攣劑以本發(fā)明的溶液形式加以利用。
例如，該溶液中可能包含還可作為抗痙攣劑的抗痛/抗炎劑。還可作為抗痙攣劑的適宜的抗炎/抗痛劑包括5-羥色胺受體拮抗劑，速激肽受體拮抗劑，ATP敏感的鉀通道開放劑。根據(jù)其抗痙攣性質(zhì)可明確地以本發(fā)明的溶液形式加以利用的其他抗痛/抗炎劑包括鈣通道拮抗劑，內(nèi)皮素受體拮抗劑和一氧化氮供體(酶激活劑)。
經(jīng)過特別優(yōu)選的用于心血管和一般血管操作的本發(fā)明溶液的實施方案包括抗再狹窄藥物，后者以與抗痙攣藥伍用最可取。適宜的抗再狹窄藥包括(1)抗血小板藥，包括(a)凝血酶抑制劑和受體拮抗劑，(b)二磷酸腺苷(ADP)受體拮抗劑(也稱為嘌呤受體1受體拮抗劑，(c)凝血噁烷抑制劑和受體拮抗劑，以及(d)血小板膜糖蛋白受體拮抗劑；(2)細(xì)胞粘附因子抑制劑，包括(a)選擇蛋白抑制劑和(b)整聯(lián)蛋白抑制劑；(3)抗趨化性藥；(4)白細(xì)胞介素受體拮抗劑(該藥也可作為抗疼痛/抗炎癥藥)；以及(5)細(xì)胞內(nèi)信號抑制劑，包括(a)蛋白激酶C(PKC)抑制劑和蛋白酪氨酸激酶抑制劑，(b)細(xì)胞內(nèi)蛋白酪氨酸磷酸酶的調(diào)節(jié)劑，(c)src同系物2(SH2)結(jié)構(gòu)域的抑制劑；以及(d)鈣通道拮抗劑。這類藥物用于防止經(jīng)血管成形術(shù)，rotational atherectomy或其他心血管或一般血管治療性或診斷性操作處理過的動脈的再狹窄。
本發(fā)明還提供制備藥劑的方法，所述藥劑調(diào)配成稀沖洗液，供手術(shù)操作期間連續(xù)沖洗手術(shù)部位或傷口使用。該方法包括把多種抗痛/抗炎劑溶于生理的電解質(zhì)載體液中，對于某些應(yīng)用還可加入抗痙攣劑和(或)抗再狹窄劑，每一種藥物成分濃度優(yōu)選不超過100,000nmol，最優(yōu)選不超過10,000noml。
本發(fā)明的方法可在治療性或診斷性操作期間直接向傷口或手術(shù)部位施用一種低濃度的由多種受體拮抗劑和激動劑以及酶抑制劑和激活劑組成的復(fù)合溶液，用于抑制疼痛，炎癥，痙攣和再狹窄。由于該溶液的活性成分以連續(xù)的方式局部地直接應(yīng)用于手術(shù)組織，因此與相同的藥物在口服，肌內(nèi)，皮下和靜脈內(nèi)給予時產(chǎn)生治療作用所需要的劑量相比，這些藥物可以極低的濃度有效地使用。正如本說明書所采用的，術(shù)語“局部”一詞包括藥物在傷口或其他手術(shù)部位內(nèi)和周圍應(yīng)用，排除口服，皮下，靜脈和肌內(nèi)途徑給藥。這里所用的術(shù)語“連續(xù)”包括以常見的間隔不間斷地施用，反復(fù)施用(例如，以內(nèi)部操作常用的間隔作反復(fù)的血管內(nèi)快速推注)，以及除短暫停止施用以便導(dǎo)入其他藥物或制劑或操作設(shè)備以外的不間斷施用，這樣，在傷口或手術(shù)部位局部基本上保持恒定的預(yù)先確定的藥物濃度。
低劑量藥物的優(yōu)點有三點。最重要的一點是沒有常常限制這些藥物應(yīng)用的全身副作用。本發(fā)明的溶液中所用的低治療劑量藥物可把被攝入的藥物在血管內(nèi)的吸收減到最小，因而也就將全身副反應(yīng)降低到最低程度。其次，本發(fā)明的溶液中為特殊應(yīng)用而選擇的藥物對其賴以發(fā)揮作用的(疼痛和炎癥)介導(dǎo)物具有高度特異性。這種特異性靠所用的低劑量藥物得以保持。最后一點，每升這些活性藥物的成本是極低的。
這些藥物經(jīng)腔內(nèi)沖洗或其他液態(tài)方式施用這樣一種局部給藥方法具有以下優(yōu)點(1)經(jīng)沖洗局部給予這些藥物還能保證在外周靶部位有一定濃度，而不管病人之間代謝，血流等的差別如何。(2)因為是直接給予的方式，可以獲得恒定的治療濃度。這樣，劑量的控制得到改善。(3)這些有藥理活性的藥物局部直接應(yīng)用于傷口或手術(shù)部位還明顯減少這些藥物通過細(xì)胞外過程如首過及二過效應(yīng)所引起的降解，如果這些藥物以口服，靜脈，皮下，或肌內(nèi)途徑給予，這種降解可能會出現(xiàn)。這種情況對那些有(鎮(zhèn)痛和抗炎)活性的肽類藥物尤其適用，這類藥物可迅速被代謝。因此，局部給藥使得有可能利用從治療角度不能采用其他途徑給藥的化合物或制劑。例如，下面幾類中的某些藥物都是肽舒緩激肽受體拮抗劑；速激肽受體拮抗劑；類阿片受體激動劑；CGRP受體拮抗劑；以及白細(xì)胞介素受體拮抗劑；傷口或手術(shù)部位局部連續(xù)應(yīng)用把藥物降解或代謝減到最小程度，盡管還需要不斷補充可能被降解的那部分藥物，以保證足以維持受體占有率的局部治療濃度在整個手術(shù)操作過程中始終得以保持。
按照本發(fā)明，整個圍術(shù)期外科手術(shù)過程中局部應(yīng)用該溶液產(chǎn)生搶先鎮(zhèn)痛、抗炎、抗痙攣和抗再狹窄作用。正如本說明書所采用的，術(shù)語“圍術(shù)期”一詞包括手術(shù)期間應(yīng)用，手術(shù)前和手術(shù)期間聯(lián)合應(yīng)用以及手術(shù)前，手術(shù)期間和手術(shù)后聯(lián)合應(yīng)用。為了最大程度地獲得預(yù)先的抗炎，鎮(zhèn)痛(對某些應(yīng)用而言)，抗痙攣(對某些應(yīng)用而言)和抗再狹窄(對某些應(yīng)用而言)作用，最好在手術(shù)前，手術(shù)期間和手術(shù)后都使用本發(fā)明的溶液。借助在出現(xiàn)明顯的手術(shù)創(chuàng)傷之前局部地占據(jù)靶受體或使以靶目標(biāo)的酶失活，本發(fā)明溶液中的藥物能調(diào)節(jié)信號傳遞，以搶先抑制靶部位的病理過程。如果把炎癥介質(zhì)和病理過程在其能引起組織損傷之前加以抑制，其好處與如果損傷已開始后才給藥相比，更為顯著。
業(yè)已證明，通過應(yīng)用本發(fā)明的含多種藥物的溶液。抑制一種以上的炎癥介質(zhì)，能夠明顯減輕炎癥，疼痛和痙攣的程度，而且理應(yīng)減輕再狹窄。本發(fā)明的沖洗液包括藥物的組合物，其每一種成分有效地對抗多種解剖學(xué)上的受體或酶。這樣，多種藥物可同時有效地對抗復(fù)合的病理過程，包括疼痛和炎癥，血管痙攣，平滑肌痙攣以及再狹窄。一般認(rèn)為這些介導(dǎo)物的作用是協(xié)同性質(zhì)的，因為本發(fā)明的多種受體拮抗劑和抑制性的激動劑以組合形式應(yīng)用，顯示出與單個藥物的作用相比不成比例的增效作用。本發(fā)明的藥物中的幾個藥物的協(xié)同作用通過實例加以討論，下面是對這些藥物的詳細(xì)介紹。
除關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡外，本發(fā)明的溶液也可以局部應(yīng)用于其他的人體腔或通道，手術(shù)傷口，創(chuàng)傷傷口或能夠進(jìn)行沖洗的任何手術(shù)或介入性操作。這些操作包括，但不僅限于這些，泌尿科操作，介入性心血管和一般血管的診斷操作和治療操作，以及內(nèi)窺鏡檢查操作。正如本文始終所用的那樣，術(shù)語“傷口”一詞，除非另有說明，規(guī)定為包括手術(shù)傷口，手術(shù)/介入部位，創(chuàng)傷傷口。
如果本發(fā)明的溶液在圍術(shù)期中使用，該溶液與目前所用的沖洗液相比，應(yīng)導(dǎo)致臨床上手術(shù)部位疼痛和炎癥的明顯減輕，從而減少病人在手術(shù)后的鎮(zhèn)痛藥(如阿片制劑)的需要量，在適宜的場合，可允許病人較早活動手術(shù)部位。在外科和手術(shù)室工作人員方面，與經(jīng)典的沖洗液相比，并不需要額外的努力就可應(yīng)用本發(fā)明的溶液。
IV.圖的簡要說明現(xiàn)在將更詳細(xì)地通過實例，并參考相應(yīng)的附圖，闡述本發(fā)明，其中

圖1提供一般血管細(xì)胞的圖解性說明，顯示導(dǎo)致收縮，分泌和/或增生的分子靶和信號傳輸信息的流向。外來信號通過受體，離子通道和其他膜蛋白而實現(xiàn)的匯集(integratioon)為血小板，嗜中性白細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞所共有。作為在本發(fā)明的溶液中所含藥物的治療目標(biāo)的主要分子類型，圖內(nèi)含有代表性的靶分子的例子。
圖2提供信號傳送通路的詳細(xì)圖解，說明在血管平滑肌細(xì)胞中G-蛋白偶聯(lián)的受體(GPCR)通路和受體酪氨酸激酶(RTK)通路之間的“交談”(“crosstalk”)。為了簡化信息的流向，圖中只列出了每一通路中有代表性的蛋白。GPCRs的活化導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣和增高過的蛋白激酶C(PKC)活性的升高，從而引起平滑肌收縮或痙攣。此外，通過PYK2(一種新發(fā)現(xiàn)的酪氨酸激酶)和PTK-X(一種未定義的蛋白酪氨酸激酶)的活化，可出現(xiàn)與RTK信號傳送通路的“交談”，結(jié)果觸發(fā)(平滑肌細(xì)胞的)增生。相反，雖然RTKs的活化可直接引發(fā)增生，但是，與GPCR通路的“交談”在PKC活性和鈣水平上出現(xiàn)。LGR稱為配體控制(ligandgated)的受體，MAPK稱為促細(xì)胞分裂劑活化的蛋白激酶。這些相互作用為介導(dǎo)痙攣和再狹窄的靶分子之間的協(xié)同相互作用建立了基礎(chǔ)。GPCR信號傳輸通路還介導(dǎo)其他類型細(xì)胞(例如神經(jīng)元)中導(dǎo)致痛覺傳輸?shù)男盘栟D(zhuǎn)導(dǎo)。
圖3提供G蛋白偶聯(lián)的受體(GPCR)通路圖。給在本發(fā)明的優(yōu)選關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡溶液中的部分藥物的特定分子作用部位作出標(biāo)志。
圖4提供G蛋白偶聯(lián)的受體(GPCR)通路，其中包括同與生長因子受體信號傳送通路“交談”有關(guān)的信號傳送蛋白。給在本發(fā)明的優(yōu)選心血管和一般血管溶液中的部分藥物的特定分子作用部位作出標(biāo)志(也可參見圖5)。
圖5提供生長因子受體信號傳輸通路的圖解，其中包括同與G蛋白偶聯(lián)的受體信號傳輸通路“交談”有關(guān)的信號傳輸?shù)鞍?。給在本發(fā)明的優(yōu)選心血管和一般血管溶液中的部分藥物的特定分子作用部位作出標(biāo)志(也可參見圖4)。
圖6提供G蛋白偶聯(lián)的受體通路的圖解，其中包括同與生長因子受體信號傳輸通路“交談”有關(guān)的信號傳輸?shù)鞍?。給在優(yōu)選的泌尿道溶液中的部分藥物的特定分子作用部位作出標(biāo)志。
圖7提供G蛋白偶聯(lián)的受體通路的圖解，給在優(yōu)選的本發(fā)明的普通外科傷口溶液的某些藥的特異分子作用位點作出標(biāo)志。
圖8提供一氧化氮(NO)供體藥物和引起血管平滑肌松弛的作用機理圖解。生理學(xué)上，某些激素和遞質(zhì)通過升高胞內(nèi)鈣水平，能活化內(nèi)皮細(xì)胞中的一種NO合成酶，導(dǎo)致NO合成增加。NO供體可在胞外產(chǎn)生NO，或在平滑肌細(xì)胞內(nèi)，經(jīng)過代謝生成NO。胞外NO可跨過內(nèi)皮細(xì)胞擴散，或直接進(jìn)入平滑肌細(xì)胞。NO的原始靶(分子)是可溶性鳥苷酸環(huán)化酶(GC)，導(dǎo)致cGMP依賴的蛋白激酶(PKG)的活化，接著鈣從平滑肌細(xì)胞經(jīng)膜泵流出。NO也可通過開放鉀通道使細(xì)胞過度極化，鉀通道的開放又引起電壓敏感的鈣通道的關(guān)閉。因此，從上述的信號傳導(dǎo)通路中可以看出，鈣通道拮抗劑，鉀通道開放劑和NO供體之間的協(xié)同性相互作用是顯而易見的。
圖9，10A和10B提供本文實施例VII中所述動物研究的結(jié)果，分別顯示對照動脈，受試動物動脈近端段和受試動物動脈遠(yuǎn)端段經(jīng)過血管收縮的百分比。該研究證明，在氣囊血管成形術(shù)期間，本發(fā)明溶液中所用的組織胺拮抗劑和5-羥色胺拮抗劑灌注對血管收縮的影響。
圖11和圖12提供在本發(fā)明的溶液中所用阿米替林分別作靜注和膝關(guān)節(jié)內(nèi)給予條件下，實施例VIII中所述動物研究中由導(dǎo)入5-羥色胺業(yè)已引起的膝關(guān)節(jié)中血漿外滲量與阿米替林劑量之間的關(guān)系圖。
圖13，14和15提供平均血管收縮量(負(fù)值)或擴張量(正值)±平均值的1個標(biāo)準(zhǔn)誤，分別代表在本說明書中所闡述的實施例XIII的動物研究中，可旋轉(zhuǎn)關(guān)節(jié)切除術(shù)后立即和15min二個時間點上，用生理鹽水(n＝4)或根據(jù)本發(fā)明配制的溶液處理過的動脈近端(圖13)中部(圖14)和遠(yuǎn)端(圖15)。
V.優(yōu)選實施方案的詳細(xì)說明本發(fā)明的沖洗液是一種在生理載體中含多種具有抑制疼痛/炎癥作用的藥物和抗痙攣和抗再狹窄藥物的稀溶液。該載體是一種液體。本發(fā)明所采用的這種液體要求可包含生物相容的溶劑、混懸劑，聚合的和非聚合的凝膠，糊劑和油膏劑，優(yōu)選地，載體是含水溶液，其包括生理性電解液，如生理鹽水或加入乳酸鹽的林格氏溶液。
這些抗炎/抗痛藥物選自由下列諸類藥物組成的一組藥物(1).5-羥色胺受體拮抗劑；(2).5-羥色胺受體激動劑；(3).組織胺受體拮抗劑；(4).舒緩激肽受體拮抗劑；(5).激肽釋放酶抑制劑；(6).速激肽受體拮抗劑，包括神經(jīng)激肽1和神經(jīng)激肽2受體亞型拮抗劑；(7).降鈣素基因相關(guān)的肽(CGRP)受體拮抗劑；(8).白細(xì)胞介素受體拮抗劑；(9).花生四烯酸代謝物合成通路中活性酶抑制劑，包括(a)磷酸脂酶抑制劑，包括PLA2同型抑制劑和PLCγ同型抑制劑，(b)環(huán)氧合酶抑制劑和(c)脂氧酶抑制劑；(10).前列腺素類受體拮抗劑，包括類花生酸EP-1和EP-4受體亞型拮抗劑和凝血噁烷受體亞型拮抗劑；(11).白細(xì)胞三烯受體拮抗劑包括白細(xì)胞三烯B4受體亞型拮抗劑和白細(xì)胞三烯D4受體亞型拮抗劑；(12)類阿片受體激動劑，包括μ-阿片制劑，δ-阿片制劑和κ-阿片制劑受體亞型激動劑；(13).嘌呤受體激動劑和拮抗劑，包括P2X受體拮抗劑和P2Y受體激動劑；(14).三磷酸腺苷(ATP)敏感的鉀通道開放劑。
也可當(dāng)作抗痙攣藥的適當(dāng)?shù)目寡?抗痛藥包括5-羥色胺受體拮抗劑，速激肽受體拮抗劑，ATP敏感的鉀通道開放劑以及鈣通道拮抗劑。根據(jù)其抗痙攣性質(zhì)而可專用于本發(fā)明溶液的其他藥物包括內(nèi)皮素受體拮抗劑和一氧化氮供體(酶激活劑)。
經(jīng)過專門優(yōu)選的用于心血管和一般血管操作的本發(fā)明的溶液的實施方案包括抗再狹窄藥，該藥最好與抗痙攣藥聯(lián)合使用。適宜的抗再狹窄藥包括(1)抗血小板藥，包括(a)凝血酶抑制劑和受體拮抗劑，(b)二磷酸腺苷(ADP)受體拮抗劑(也稱為嘌呤受體1受體拮抗劑)，(c)凝血噁烷抑制劑和受體拮抗劑以及(d)血小板膜糖蛋白受體拮抗劑；(2)細(xì)胞粘附分子抑制劑，包括(a)選擇蛋白抑制劑和(b)整聯(lián)蛋白抑制劑；(3)抗化學(xué)趨化性藥物；(4)白細(xì)胞受體拮抗劑(其也可當(dāng)作抗痛/抗炎藥)；以及(5)細(xì)胞內(nèi)信號傳輸抑制劑，包括(a)蛋白激酶C(PKC)抑制劑和蛋白酪氨酸磷酸酶，(b)細(xì)胞內(nèi)蛋白酪氨酸激酶的調(diào)節(jié)劑，(c)src同系物2(SH2)domains的抑制劑，以及(d)鈣通道拮抗劑。這樣的藥物有助于防止經(jīng)血管成形術(shù)，旋轉(zhuǎn)式關(guān)節(jié)切除術(shù)或其他心血管或一般血管治療性操作處理引起的動脈再狹窄。
在每一種本發(fā)明外科用溶液中，摻入低濃度的藥物，與傳統(tǒng)的給藥方法中為達(dá)到期望的治療效果所需要的藥物濃度和劑量相比，這些藥物以低劑量供局部應(yīng)用。相似劑量的藥物經(jīng)其他給藥途徑(例如靜脈內(nèi)、皮下，肌肉內(nèi)或口服)給予，不可能獲得同等的治療效果，因為全身給藥易受首過和二過效應(yīng)的影響。每種藥物的濃度部分地根據(jù)其解離常數(shù)Kd值確定。正如本說明書所采用的，術(shù)語解離常數(shù)是指包括平衡解離常數(shù)和平衡抑制常數(shù)，前者是對各自的激動劑-受體或拮抗劑-受體相互作用而言，后者則是對各自的激活劑-酶或抑制劑-酶相互作用而言。除環(huán)氧合酶抑制劑依據(jù)所選擇的特定抑制劑，可能需要較高濃度外，每種藥物最好以0.1-10,000倍于Kd的納摩爾低濃度摻入到溶液中。更可取的是，每種藥物以1.0～1000倍于Kd值的nmol濃度摻入，而最佳的摻入濃度約100倍于Kdnmol。按照需要調(diào)整這些濃度，當(dāng)在局部運輸位點不存在代謝轉(zhuǎn)化時，同于(account for)稀釋。正如下面所闡明的，為用于本發(fā)明溶液而選擇的確切的藥物，以及這些藥物的濃度依據(jù)特定的應(yīng)用而有所不同。
本發(fā)明的溶液可以低濃度地只含一種或多種具有疼痛/炎癥抑制作用的藥物，只含一種或多種抗痙攣藥物，或含從諸多類型的藥物中挑選出來的抗痙攣和疼痛/炎癥抑制藥物或抗再狹窄藥物的組合物。然而，鑒于前面提及的多種藥物的協(xié)同作用，以及希望廣泛地阻斷疼痛和炎癥，痙攣和再狹窄，最好采用多種藥物。
該外科用溶液通過將作用于獨特的受體和酶分子靶的多種具有藥理活性藥物聯(lián)合應(yīng)用，構(gòu)成一種新穎的治療方法。到目前為止，藥理學(xué)的戰(zhàn)略重點已集中在開發(fā)選擇性地作用于個別的受體亞型或酶同型—其介導(dǎo)對單一神經(jīng)遞質(zhì)和激素傳送信號的反應(yīng)—的具有高度特異性的藥物。作為一個例子，內(nèi)皮素肽是已知的最強效的血管收縮劑中的一部分。目前多家制藥公司正在尋找對內(nèi)皮素(ET)受體亞型特異的選擇性拮抗劑，用于治療涉及體內(nèi)內(nèi)皮素水平升高的多種疾病。由于認(rèn)識到該受體亞型ETA對高血壓的增強作用，這些制藥公司正在把目標(biāo)集中在開發(fā)選擇性ETA受體亞型拮抗劑，用于預(yù)先治療冠狀血管痙攣。這種標(biāo)準(zhǔn)的藥理學(xué)策略雖然得到公認(rèn)，但并不是盡善盡美的，因為多種血管收縮劑(例如5-羥色胺，前列腺素，類花生酸，等)可能同時造成血管痙攣的引發(fā)和保持(見圖2和4)。而且，不管單個受體亞型或酶失活如何，其他受體亞型或酶的活化以及由此而產(chǎn)生的信號傳遞常常能觸發(fā)一種聯(lián)鎖反應(yīng)。這可以解釋使用單一的受體特異的藥物十分難以阻斷多種遞質(zhì)在其內(nèi)起作用的病理過程的原因。所以，把目標(biāo)僅僅定在特異的個別受體亞型如ETA上看來是無效的。
與標(biāo)準(zhǔn)的藥理學(xué)治療方法相反，本發(fā)明的外科溶液的治療方法是基于這樣一個原理，即同時作用于獨特分子靶的藥物組合要求抑制構(gòu)成病理生理狀態(tài)發(fā)展的所有各個環(huán)節(jié)。況且，本發(fā)明的外科溶液是由以一般的分子機制為目標(biāo)而不是僅僅以某一特異的受體亞型為目標(biāo)這樣的藥物組成的，即控制在疼痛，炎癥，血管痙攣，平滑肌痙攣以及再狹窄(見圖1)的發(fā)生中所涉及的不同的細(xì)胞生理過程。用這種方法，本發(fā)明的外科溶液可把感受傷害的，炎癥的，痙攣的以及再狹窄的通路中外加的受體和酶的聯(lián)鎖反應(yīng)減到最少。在這些病理生理通路中，本發(fā)明的外科溶液可抑制“上游”和“下游”二個方面的聯(lián)鎖影向。
“上游”抑制的一個例子是環(huán)氧合酶拮抗劑在消除疼痛和炎癥方面的作用。環(huán)氧合酶(COX1和COX2)催化花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素H，后者是包括前列腺素，白細(xì)胞三烯和凝血噁烷在內(nèi)的炎癥和感受傷害的介導(dǎo)物生物合成過程中的中間產(chǎn)物。環(huán)氧合酶抑制劑“上游”阻斷這些炎癥的和感受傷害的介導(dǎo)物的形成。這種策略排除了阻斷7種所報道的前列腺素類受體亞型與其天然配體相互作用的必要性。本發(fā)明的外科溶液中所含的類似“上游”抑制劑有抑肽酶，這是一種激肽釋放酶抑制劑。激肽釋放酶這一酶是一種絲氨酸蛋白酶，能裂解血漿中高分子量的激肽原，生成舒緩激肽，后者是疼痛和炎癥的重要介導(dǎo)物。通過抑制激肽釋放酶，抑肽酶可有效地抑制舒緩激肽的合成，從而對這些炎癥介導(dǎo)物產(chǎn)生有效的“上游”抑制作用。
本外科溶液還利用“下游”抑制劑來控制這些病理生理通路。在用冠狀血管痙攣中涉及的多種神經(jīng)遞質(zhì)(如5-羥色胺，組織胺，內(nèi)皮素和凝血噁烷)預(yù)先收縮的血管平滑肌標(biāo)本中，ATP-敏感的鉀通道開放劑(KCOs)產(chǎn)生濃度依賴的平滑肌松馳(Quast et al.，1994；Kashiwabara et al.，1994)。所以在解除血管痙攣和平滑肌痙攣方面，KCOs通過產(chǎn)生與引發(fā)痙攣的生理性聯(lián)合激動劑無關(guān)的“下游”抗痙作用，為本發(fā)明的外科溶液提供明顯的好處(見圖2和圖4)。同樣，一氧化氮供體和電壓門控的鈣通道拮抗劑能減少多種通過已知早期作用于痙攣病理過程的介質(zhì)而引發(fā)的血管痙攣和平滑肌痙攣。
下面是對在前面提到的諸類抗炎/抗痛劑范圍范圍內(nèi)的本發(fā)明的適當(dāng)?shù)乃幬锛捌湟匀芤盒问绞褂玫倪m當(dāng)濃度的描述。在不希望受理論的限制的同時，也說明了選擇各種藥物類型的理由，據(jù)信這使得所述藥物有效。
A.5-羥色胺受體拮抗劑據(jù)認(rèn)為，5-羥色胺(5-HT)是通過刺激外周傷害感受性神經(jīng)元上的5-羥色胺2(5-HT2)和/或5-羥色胺3(5-HT3)受體而產(chǎn)生疼痛的。大多數(shù)研究人員同意外周傷害感受器上的5-HT受體介導(dǎo)由5-HT產(chǎn)生的直接痛覺(Richardson et al.，1985)。5-HT受體拮抗劑除抑制5-HT引起的疼痛外，還可通過抑制傷害感受器活化，抑制神經(jīng)原性炎癥。Barnes P.J.et.al.，神經(jīng)原性炎癥的調(diào)節(jié)，藥理學(xué)科動向，11，pp.185-189(1990)。但是，大鼠踝關(guān)節(jié)的研究聲稱5-HT2受體是造成由5-HT引起的傷害感受器活化的原因。Grubb，B.D.，et.al.，與定位于正常的和炎性大鼠踝關(guān)節(jié)的傳入神經(jīng)有關(guān)的5-HT受體的研究，藥物作用(Agents Action)25，pp.216-18(1988)。因此，5-HT2受體的活化也可能在外周性疼痛和神經(jīng)原性炎癥中發(fā)揮作用。
本發(fā)明溶液的目的之一是要阻斷疼痛和多種炎癥過程。因此，正如后面將要論述的，在本發(fā)明的溶液中適當(dāng)?shù)夭捎昧?-HT2和5-HT3受體拮抗劑，或單獨使用或配伍使用。阿米替林(ElavilTM)在本發(fā)明中被采用，它是一種合適的5-HT受體拮抗劑。阿米替林作為一種抗憂郁藥在臨床上已使用多年，并發(fā)現(xiàn)它對某些慢性疼痛病人也有好的作用，胃復(fù)安(ReglanTM)臨床上作為抗嘔吐藥使用，但它對5-HT3受體顯示中等度親和力，故能抑制5-HT對該受體的作用，故可能抑制由于5-HT從血小板釋放所引起的疼痛。
其他合適的5-HT2受體拮抗劑包括丙咪嗪，曲唑酮，去郁敏和酮色林。酮色林就其抗高血壓作用已用于臨床。Hedner，T.，et.al.，新型5-羥色胺拮抗劑酮色林對實驗性和臨床高血壓的作用，美國高血壓雜志(Am J.Hypertension，pp.317s-23s(Jul.1988))。心血管和一般血管溶液也可以含5-羥色胺1B(也稱為5-羥色胺1Dβ)拮抗劑，因為已證明在人類，5-羥色胺通過活化5-羥色胺1B受體，產(chǎn)生顯著的血管痙攣作用。Kaumann，AJ，等，在5-羥色胺誘導(dǎo)的人離體冠狀動脈收縮中5-HT1樣受體和5-HT2受體的不同程度參與，循環(huán)(Circulation)90，pp1141-53(1994)。其他合適的5-HT3受體拮抗劑包括西沙必利和奧丹亞龍。合適的5-羥色胺1B受體拮抗劑包括育享賓，N-[甲氧基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基]-2′-甲基-4′-(5-甲基)-1，2，4-噁二唑-3-基)[1，1-聯(lián)苯]-4-羧酰胺(“GR 127935)和甲硫噻庚嗪。本發(fā)明溶液中這些藥物所用的治療濃度和優(yōu)選濃度列于表1。
表1疼痛/炎癥抑制藥物的治療濃度和優(yōu)選濃度治療濃度優(yōu)選濃度藥物類型(nmol)(nmol)5-羥色胺2受體拮抗劑阿米替林 0.1-1,000 50-500丙米嗪0.1-1,000 50-500曲唑酮0.1-2,000 50-500去甲丙米嗪0.1-1,000 50-500酮色林0.1-1,000 50-5005-羥色胺3受體拮抗劑曲匹西龍 0.01-100甲氧氯普胺10-10,000 200-2,000西沙必利 0.1-1,000 20-200奧丹亞龍 0.1-1,000 20-2005-羥色胺1B(人1Dβ)拮抗劑育享賓0.1-1,000 50-500GR 127935 0.1-1,000 10-500甲硫噻庚嗪0.1-500 1-100B.5-羥色胺受體激動劑有人認(rèn)為5-HT1A，5-HT1B和5-HT1D受體可抑制腺苷酸環(huán)化酶活性。因此，本發(fā)明溶液中加入低劑量的5-羥色胺1A，5-羥色胺1B和5-羥色胺1D受體激動劑理應(yīng)抑制由神經(jīng)元介導(dǎo)的疼痛和炎癥，從5-羥色胺1E和5-羥色胺1F受體激動劑期望能獲得與此相同的作用，因為這些受體也抑制腺苷酸環(huán)化酶。
丁螺環(huán)酮是一種供本發(fā)明應(yīng)用的合適的1A受體激動劑。Sumatriptan則是合適的1A，1B，1D和1F受體激動劑。合適的1B和1D受體激動劑是二氫麥角胺。合適的1E受體激動劑是麥角新堿。這些受體激動劑的治療濃度和優(yōu)選濃度列于表2。
表2疼痛/炎癥抑制藥物的治療濃度和優(yōu)選濃度治療濃度優(yōu)選濃度藥物類型(nmol)(nmol)5-羥色胺1A激動劑丁螺環(huán)酮 1-1,000 10-200sumatriptan 1-1,000 10-2005-羥色胺1B激動劑二氫麥角胺0.1-1,00010-100sumatriptan 1-1,000 10-2005-羥色胺1D激動劑二氫麥角胺0.1-1,00010-100sumatriptan 1-1,000 10-2005-羥色胺1E激動劑麥角新堿 10-2,000 100-1,0005-羥色胺1F激動劑sumatriptan 1-1,000 10-200C.組織胺受體拮抗劑組織胺受體通常分為組織胺1(H1)和組織胺2(H2)亞型。外周給予組織胺所引起的典型炎癥反應(yīng)是經(jīng)由H1受體介導(dǎo)的。Douglas，1985。所以，本發(fā)明溶液優(yōu)選組織胺H1受體拮抗劑。異丙嗪(商品名PhenerganTM)是一個常用的有效阻斷H1受體的抗嘔吐劑，因而適用于本發(fā)明。有趣的是，該藥已證明還具有局部麻醉作用，不過產(chǎn)生這種作用所需要的濃度比阻斷H1受體所需要的大幾個數(shù)量級，因此這些作用被認(rèn)為是以不同的機制出現(xiàn)的。本發(fā)明溶液中所用的組織胺受體拮抗劑濃度足以抑制涉及傷害感受器活化的H1受體，但并不產(chǎn)生“局麻”作用，因而消除某些有關(guān)的全身副反應(yīng)。
有人宣稱組織胺受體還具有調(diào)節(jié)冠狀動脈中血管張力的作用。離體人心臟的體外研究證實，組織胺1受體亞型介導(dǎo)冠狀動脈平滑肌的收縮。Ginsburg，R.，et.al.，組織胺對臨床冠狀動脈痙攣的激惹；各種心絞痛與合并癥有關(guān)的發(fā)病機理，美國心臟病雜志(American Heart J.)，V.102，pp.819-822(1980)。某些研究表明，組織胺引起的人冠脈系統(tǒng)的過度收縮在粥樣硬化和有相關(guān)的動脈上皮剝脫發(fā)生的近端動脈中最為顯著。Keitoku，M.et.al.，組織胺對體外人近端和遠(yuǎn)端冠狀動脈的不同作用，心血管研究(Cardiovascular Research)24，pp.614-622(1990)。所以，組織胺受體拮抗劑可以加到心血管沖洗液中。
其他合適的H1受體拮抗劑包括特非那定，苯海拉明，阿米替林，新安替根和tripolidine。因為阿米替林作為一種5-羥色胺受體拮抗劑也是有效的，故其用于本發(fā)明具有雙重功能。這些H1受體拮抗劑中每一種的合適治療濃度和優(yōu)選濃度列于表3。
表3疼痛/炎癥抑制藥物的治療濃度和優(yōu)選濃度治療濃度優(yōu)選濃度藥物類型(nmol)(nmol)組織胺受體拮抗劑異丙嗪 0.1-1,000 50-200苯海拉明 0.1-1,000 50-200阿米替林 0.1-1,000 50-500特非那定 0.1-1,000 50-500新安替根 O.1-1,000 5-200tripolidine0.01-100 5-20
D.舒緩激肽受體拮抗劑舒緩激肽受體通常分為舒緩激肽1(B1)和舒緩激肽2(B2)亞型。研究證明，由舒緩激肽產(chǎn)生的急性外周性疼痛和炎癥是由B2亞型介導(dǎo)的，而在慢性炎癥形成中舒緩激肽引起的疼痛則是經(jīng)由B1亞型介導(dǎo)的。Peikins，M.N.et.al.，在大鼠二種持久性痛覺過敏模型上舒緩激肽B1和B2受體拮抗劑des-Arg9，[Leu8]-BK和HOE 140的抗感受傷害活性。疼痛(Pain)53，pp.191-97(1993)；Dray，A.，et.al.，舒緩激肽和炎性疼痛、神經(jīng)科學(xué)動向(Trends Neurosci)16，pp.99-104(1993)，這二篇文獻(xiàn)均引入本文作為參考。
目前舒緩激肽受體拮抗劑尚未用于臨床。這些藥物都是肽(小分子量蛋白)，因此不能口服給予，因為它們可能會被消化?？笲2受體拮抗劑阻斷舒緩激肽引起的急性疼痛和炎癥。Dray et.al.，1993，在慢性炎癥條件下B1受體拮抗劑抑制疼痛。Perkins et.al.，1993；Dray et.al.，1993。所以，根據(jù)應(yīng)用，本發(fā)明溶液優(yōu)先摻入B1和B2受體拮抗劑之一種或二種。例如，急性和慢性關(guān)節(jié)疼痛和炎癥都要做關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡檢查，故用于關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡檢查的沖洗液應(yīng)包括B1和B2二種受體拮抗劑在內(nèi)。
用于本發(fā)明的合適的舒緩激肽受體拮抗劑包括下面的舒緩激肽1受體拮抗劑D-Arg-(Hyp3-Thi5-D-Tic7-Oic8)-BK的[des-Arg10]衍生物(HOE 140的[des-Arg10]衍生物，可從Hoechst制藥廠購得)；以及[Leu8]des-Arg9-BK。合適的舒緩激肽2受體拮抗劑包括[D-Phe7]-BK；D-Arg-(Hyp3-Thi5，8-D-Phe7)-BK(“NPC 349”)；D-Arg-(Hyp3-D-Phe7)-BK(“NPC 567”)；和D-Arg-(Hyp3-Thi5-D-Tic7-Oic8)-BK(“HOE 140”)。這些化合物在前面提到的Perkins等(1993)和Dray等(1993)的文獻(xiàn)中得到更充分的描述。適宜的治療及優(yōu)選的濃度示于表4。
表4疼痛/炎癥抑制藥物的治療濃度和優(yōu)選濃度治療濃度優(yōu)選濃度藥物類型(nmol)(nmol)舒緩激肽1受體拮抗劑[Leu8]des-Arg9-BK 1-1,000 50-500HOE 140的[des-Arg10]衍生物1-1,000 50-500[Leu9][des-Arg10]Kalliden0.1-500 10-200舒緩激肽2受體拮抗劑[D-Phe7]-BK 100-10,000 200-5,000NPC 349 1-1,00050-500NPC 567 1-1,00050-500HOE 140 1-1,00050-500E.激肽釋放酶抑制劑正如前面所指出的，肽舒緩激肽是疼痛和炎癥的重要介導(dǎo)物。舒緩激肽作為一種裂解產(chǎn)物，是由激肽釋放酶作用于血漿中的高分子量激肽原而生成。因此有人認(rèn)為激肽釋放酶在抑制舒緩激肽產(chǎn)生以及由此產(chǎn)生的疼痛和炎癥方面，具有治療價值。適合于本發(fā)明應(yīng)用的激肽釋放酶抑制劑是抑肽酶。供本發(fā)明溶液使用的該藥適宜濃度列于下面的表5。
表5疼痛/炎癥抑制藥物的治療濃度和優(yōu)選濃度治療濃度優(yōu)選濃度藥物類型(nmol)(nmol)激肽釋放酶抑制劑抑肽酶 0.1-1,000 50-500F.速激肽受體拮抗劑速激肽(TKs)是一種結(jié)構(gòu)上有關(guān)聯(lián)的肽，其中包括P物質(zhì)，神經(jīng)激肽A(NKA)和神經(jīng)激肽B(NKB)。神經(jīng)元是外周TKs的主要來源。TKs的一個重要的全身性作用是神經(jīng)元刺激，而其他的作用包括上皮依賴的血管擴張，血漿蛋白外滲，肥大細(xì)胞脫顆粒和復(fù)原以及刺激炎癥細(xì)胞。Maggi，C.A.，一般藥理學(xué)(Gen.Pharmacol.)22，pp.1-24(1991)。鑒于由TK受體活化所介導(dǎo)的上述綜合生理作用，把TK受體作為促進(jìn)止痛和治療神經(jīng)性炎癥的目標(biāo)。
1.神經(jīng)激肽1受體亞型拮抗劑P物質(zhì)活化被稱為NK-1的神經(jīng)激肽受體亞型。P物質(zhì)是一種十一碳肽，存在于感覺神經(jīng)終板中。有人認(rèn)為P物質(zhì)具有在C-纖維活化后產(chǎn)生外周性炎癥和炎癥的多種作用，包括血管擴張，血漿外滲和肥大細(xì)胞脫顆粒。Levine，J.D.，et.al.，肽和原始傳入傷害感受器，神經(jīng)科學(xué)雜志(J.Neurosci)13，p.2273(1993)。一種適合的P物質(zhì)是([D-Pro9[spiro-gamma-lactam]Leu10，Trp11]physalaemin-(1-11))(“GR 82334”)。其他適用于本發(fā)明，作用于NK-1受體的拮抗劑有1-亞氨基-2-(2-甲氧-苯基)-乙基)-7，7聯(lián)苯-4-全氫異吲哚酮(3aR，7aR)(“RP 67580”)；以及2s，3s-順式-3-(2-甲氧芐基氨基)-2-二苯甲基奎寧環(huán)(“CP 96,345”)。這些藥物適合的濃度列于表6。
表6疼痛/炎癥抑制藥物的治療濃度和優(yōu)選濃度治療濃度優(yōu)選濃度藥物類型(nmol)(nmol)神經(jīng)激肽1受體亞型抑制劑GR 82334 1-1,000 10-500CP 96,345 1-10,000 100-1,000RP 67580 0.1-1,000 100-1,0002.神經(jīng)激肽2受體亞型拮抗劑神經(jīng)激肽A是一種肽，與P物質(zhì)一起，集聚于感覺神經(jīng)元中，它能促進(jìn)炎癥和痛覺。神經(jīng)激肽A活化稱之為NK2的特異神經(jīng)激肽受體。Edmonds-Alt，S.，et.al.，一種有效的選擇性非肽神經(jīng)激肽A(NK2)受體拮抗劑，生命科學(xué)(Life Sci)50PL 101(1992)。在泌尿道中，TKs是強有力的致痙原，只通過人膀胱以及尿道和輸尿管中的NK-2受體起作用。Maggi，C.A.，一般藥理學(xué)(Gen.Pharmacol)22，pp.1-24(1991)。因此，供外科操作使用的外科溶液中所希望的藥物應(yīng)當(dāng)含有NK-2受體拮抗劑，以減輕痙攣。適合的NK-2拮抗劑的例子包括((S)-N-甲基-N-[4-(4-乙酰胺基-4-苯哌啶子基)-2-(3，4-二氯苯)苯酰胺(“(±)-SR 48968”)；Met-Asp-Trp-Phe-Dap-Leu(“MEN 10,627”)；以及cyc(Gln-Trp-Phe-Gly-Leu-Met)(“L 659,877”)。這些藥物適宜的濃度列于表7。
表7疼痛/炎癥抑制藥物的治療濃度和優(yōu)選濃度治療濃度優(yōu)選濃度藥物類型(nmol)(nmol)神經(jīng)激肽2受體亞型抑制劑MEN 10,627 1-1,000 10-1,000L 659,877 10-10,000 100-10,000(±)-SR 48968 10-10,000 100-10,000G.CGRP受體拮抗劑降鈣素基因相關(guān)的肽(CGRP)是一種也與P物質(zhì)一起集聚于感覺神經(jīng)元中的肽，其作為血管擴張劑而發(fā)揮作用，并可增強P物質(zhì)的作用。Brain，S.D.，et.al.，降鈣素基因相關(guān)的肽(CGRP)和增高血管通透性的介導(dǎo)物的協(xié)同效應(yīng)所引起的炎性水腫。英國藥理學(xué)雜志(Br.J.Pharmacol.)99，p.202(1985)。適合的CGRP受體拮抗劑的例子是α-CGRP-(8-37)，CGRP的縮短形式。這種多肽抑制CGRP受體的活化。該藥的適合濃度列于表8。
表8疼痛/炎癥抑制藥物的治療濃度和優(yōu)選濃度治療濃度優(yōu)選濃度藥物類型(nmol)(nmol)CGRP受體拮抗劑α-CGRP-(8-37)1-1,000 10-500H.白細(xì)胞介素受體拮抗劑白細(xì)胞介素是一族肽，歸入細(xì)胞因子，由白細(xì)胞和對炎性介導(dǎo)物敏感的其他細(xì)胞所產(chǎn)生。白細(xì)胞介素(IL)可能是有力的外周痛覺過敏劑。Ferriera，S.H.，et.al.，白細(xì)胞介素1β作為可被一種三肽類似物對抗的強有力的痛覺過敏劑，自然(Nature)334，p.698(1988)。一種適合的IL-1β受體拮抗劑的例子是Lys-D-Pro-Thr，它是IL-1β的縮短形式。該三肽抑制IL-1β受體的活化。該藥的適宜濃度列于表9。
表9疼痛/炎癥抑制藥物的治療濃度和優(yōu)選濃度治療濃度優(yōu)選濃度藥物類型(nmol)(nmol)白細(xì)胞介素受體拮抗劑Lys-D-Pro-Thr1-1,000 10-500I.花生四烯酸代謝物合成途徑中酶活性的抑制劑1.磷脂酶抑制劑經(jīng)磷脂酶A2(PLA2)作用所產(chǎn)生的花生四烯酸導(dǎo)致級聯(lián)反應(yīng)，后者產(chǎn)生多種炎性介導(dǎo)物，稱為類花生酸。在整個該通路中，許多階段都可受到抑制，從而減少這些炎性介導(dǎo)物的產(chǎn)生。在這些不同階段抑制作用的例子列舉如下。
PLA2同型酶的抑制作用抑制從細(xì)胞膜釋放花生四烯酸，所以也就抑制前列腺素和白細(xì)胞三烯的生成，從而導(dǎo)致炎癥和疼痛的減輕。Glaser，K.B.，磷脂酶A2諸酶的調(diào)控選擇性抑制劑及其藥理學(xué)增強作用，藥理學(xué)進(jìn)展(Adv.Pharmacol.32，p.31(1995))。一種適合的PLA2同型酶激動劑的例子是Monoalide。該藥適宜的使用濃度列于表10。PLCγ同型酶的抑制作用也會造成前列腺素類和白細(xì)胞三烯的生成減少，所以也會導(dǎo)致疼痛和炎癥減輕。PLCγ同型酶抑制劑的例子是1-[6-((17β-3-甲氧雌甾-1，3，5(10)-三烯-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮。
表10疼痛/炎癥抑制藥物的治療濃度和優(yōu)選濃度治療濃度優(yōu)選濃度藥物類型(nmol)(nmol)PLA2同型酶抑制劑manoalide 100-100,000500-10,0002.環(huán)氧合酶抑制劑非甾體抗炎藥(NSAIDs)作為抗炎，抗發(fā)熱，抗血栓和鎮(zhèn)痛藥廣泛得到應(yīng)用。Lewis，R.A.，前列腺素和白細(xì)胞三烯，見風(fēng)濕病學(xué)教科書，第三版(Kelley W，N.，等主編)p.258(1989)。這些藥物的靶分子為I型和II型環(huán)氧合酶(COX-1和COX-2)。這些酶也稱為前列腺素H合成酶(PGHS)-1(組成酶)和-2(誘導(dǎo)酶)。可催化花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素H，后者是前列腺素和凝血噁烷生物合成中的中間產(chǎn)物。COX-2酶在內(nèi)皮細(xì)胞，巨噬細(xì)胞和成纖維細(xì)胞中已得到確認(rèn)。該酶由IL-1和內(nèi)毒素誘導(dǎo)，在炎癥部位，其表達(dá)是上調(diào)的。COX-1的組成酶活性和COX-2的誘導(dǎo)酶活性二者都導(dǎo)致合成能產(chǎn)生疼痛和炎癥的前列腺素。
目前在市場上銷售的NSAIDs(雙氯滅痛，萘普生，消炎痛和異丁苯丙酸等)一般都是二種COX同型酶的非選擇性抑制劑，但對COX-1可能顯示出比COX-2較大的選擇性，雖則對不同化合物而言，這種比率有所不同。與試圖阻斷天然配體與7種所闡述的前列腺素類受體亞型的相互作用相比，用COX-1和2抑制劑阻斷前列腺素形成這種做法代表一種較佳的治療策略。所報告的前列腺素類受體(EP1，EP2和EP3)的拮抗劑十分罕見，只有特異的，高親和力的凝血噁烷A2受體拮抗劑業(yè)已報道。Wallace，J.和Cirino，G.藥理學(xué)動向(Trends in Pharm.Sci)，15，pp.405-406(1994)。
在有潰瘍病，胃炎或腎病的病人，環(huán)氧合酶抑制劑口服，靜脈或肌內(nèi)應(yīng)用是受到禁忌的。在美國，唯一能供應(yīng)的這類藥物的注射劑型是酮咯酸(商品名為ToradolTM)，可從Syntex制藥廠購得，該藥通常供手術(shù)后病人肌注或靜注使用，但上面提到的諸類病人也是禁用的。本發(fā)明溶液中酮咯酸或其他環(huán)氧合酶抑制劑以明顯低于目前供圍術(shù)期所用的劑量應(yīng)用，這一點可能允許該藥用于有其他禁忌癥的病人。本發(fā)明溶液中環(huán)氧合酶抑制劑的加入為關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡檢查或其他治療性或診斷性操作期間抑制疼痛和炎癥產(chǎn)生增添了一種獨特的機制。
供本發(fā)明應(yīng)用的優(yōu)選環(huán)氧合酶抑制劑是酮咯酸和消炎痛。這二種藥物中，消炎痛因其需要相當(dāng)高的劑量而較少被優(yōu)先選用。供本發(fā)明溶液應(yīng)用的治療濃度和優(yōu)選濃度列于表11。
表11疼痛/炎癥抑制藥物的治療濃度和優(yōu)選濃度治療濃度優(yōu)選濃度藥物類型(nmol)(nmol)環(huán)氧合酶抑制劑酮咯酸 100-10,000 500-5,000消炎痛 1,000-500,000 10.000-200,0003.脂氧酶抑制劑脂氧酶的抑制抑制了被認(rèn)為是炎癥和疼痛重要介導(dǎo)物的白細(xì)胞三烯如白細(xì)胞三烯B4的生成。Lewis，R.A.，前列腺素和白細(xì)胞三烯，見風(fēng)濕病學(xué)教科書，第三版(Kelley W.N.，等主編)，p.258(1989)。脂氧酶拮抗劑的一個例子是2，3，5三甲基-6-(12-羥基-5，10-十二碳二炔基)-1，4-苯醌(AA 861)，其適宜的濃度列于表12。
表12疼痛/炎癥抑制藥物的治療濃度和優(yōu)選濃度治療濃度優(yōu)選濃度藥物類型(nmol)(nmol)脂氧酶抑制劑AA 861 100-10,000 500-5,000J.前列腺素類受體拮抗劑作為花生四烯酸代謝產(chǎn)物而產(chǎn)生的特定前列腺素類通過活化前列腺素類受體介導(dǎo)其致炎作用。各種類型的特定前列腺素類拮抗劑的例子有類花生酸EP-1和EP-2受體亞型以及凝血噁烷受體亞型拮抗劑。一個適合的前列腺素E2受體拮抗劑是8-氯二苯并[b，f][1，4]噁唑嗪-10(11H)-羧酸，2-乙酰酰肼(“SC 19220”)。一種適宜的凝血噁烷受體亞型拮抗劑是[15-[1α，2β(5Z)，3β，4α]-7-[3-[2-(苯氨基)-羧基]肼基]甲基]-7-氧代二環(huán)-[2，2，1]-庚-2-基]-5-庚酸(“SQ 29548”)。這些藥物的適宜濃度列于表13。
表13疼痛/炎癥抑制藥物的治療濃度和優(yōu)選濃度治療濃度優(yōu)選濃度藥物類型(nmol)(nmol)類花生酸EP-1拮抗劑SC 19220100-10,000 500-5,000K.白細(xì)胞三烯受體拮抗劑血細(xì)胞三烯(LTB4，LTC4和LTD4)是花生四烯酸代謝中5-脂氧酶通路的產(chǎn)物，由酶作用產(chǎn)生，具有重要的生物學(xué)性質(zhì)。白細(xì)胞三烯涉及包括炎癥在內(nèi)的病理狀態(tài)。目前多家制藥公司正在尋找特異的拮抗劑，作為有力的治療手段干預(yù)這些病理狀態(tài)。Halushka，P.V.，et.al.，藥理學(xué)和毒理學(xué)評論年鑒(Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.)29213-239(1989)；Ford-Hutchinson，A.免疫學(xué)鑒定評論(Crit.Rev.Immunol.101-12(1990))。在包括嗜伊紅粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞在內(nèi)的某些免疫細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)有LTB4受體。LTB4與這些受體結(jié)合，導(dǎo)致趨化性和溶酶體釋放，從而引起炎癥過程。與LTB4受體活化有關(guān)的信號傳遞過程包括G-蛋白介導(dǎo)的磷脂基(P1)代謝刺激以及胞內(nèi)鈣水平的升高(見圖2)。
一個適宜的白細(xì)胞三烯B4受體拮抗劑的例子是SC(±)-(S)-7-(3-(2-環(huán)丙甲基)-3-甲氧基-4-[(甲氨基)-羰基]苯氧基)丙氧基)-3，4-二氫-8-丙基-2H-1-苯并吡喃-2-丙酸(“SC 53228”)。適用于本發(fā)明的該藥濃度列于表14。其他適宜的白細(xì)胞三烯B4受體拮抗劑包括[3-[-2(7-氯-2-喹啉基)乙烯基]苯基][3-二甲氨基-3-氧代丙基)硫基]甲基]硫基丙酸(“MK 0571”)以及藥物L(fēng)Y 66071和ICI 20，3219。MK 0571也可當(dāng)作LTD4受體亞型拮抗劑。
表14疼痛/炎癥抑制藥物的治療濃度和優(yōu)選濃度治療濃度優(yōu)選濃度藥物類型(nmol)(nmol)白細(xì)胞三烯B4拮抗劑SC 53228 100-10,000 500-5,000L.類阿片受體激動劑類阿片受體的活化產(chǎn)生抗傷害感受(anti-nociceptive)作用，故對這些受體的激動劑是所希望的。類阿片受體包括μ-，δ-和κ-阿片受體亞型。μ受體定位于外周感覺神經(jīng)元終板上，這些受體的活化抑制感覺神經(jīng)元活性。Basbaum，A.I.，et.al.，阿片制劑鎮(zhèn)痛劑外周靶是如何成為中心的(How Centralis a Peripheral Target？，新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志(N.Engl.J.Med)，3251168(1991)。δ-和κ-受體定位于交感神經(jīng)的傳出終板，能抑制前列腺素的釋放從而抑制疼痛和炎癥。Taiwo，Y.O.et.al.，κ和δ阿片制劑阻斷交感神經(jīng)依賴的痛覺過敏，神經(jīng)科學(xué)雜志(J.Neurosci)11卷，p.928(1991)類阿片受體亞型是G-蛋白偶聯(lián)的受體超家族的成員。所以，所有類阿片受體激動劑通過其有關(guān)聯(lián)的G-蛋白偶聯(lián)的受體，產(chǎn)生相互作用并觸發(fā)信號傳輸(見圖3和圖7)。合適的μ-類阿片受體激動劑的二個例子是芬太尼和Try-D-Ala-Gly-[N-MePhe]-NH(CH2)2(DAMGO)。合適的δ-類阿片受體激動劑的例子是[D-Pen2，D-Pen5]腦啡肽(“DPDPE”)。合適的κ-類阿片受體激動劑的例子是(反式)-3，4-二氯-N-甲基-N-[2-(1-吡咯烷基)環(huán)己基]-苯乙酰胺(“U 50,488”)。這些藥物每種的適宜濃度列于表15。
表15疼痛/炎癥抑制藥物的治療濃度和優(yōu)選濃度治療濃度優(yōu)選濃度藥物類型(nmol)(nmol)Mu-類阿片激動劑DAMGO 0.1-100 0.5-20sufentanyl 0.01-50 1-20芬太尼 0.1-100 0.5-20PLO17 0.05-50 0.25-10Delta-類阿片激動劑DPDPE 0.1-500 1.0-100Kappa-類阿片激動劑U 50,488 0.1-500 1.0-100M.嘌呤受體拮抗劑和激動劑胞外ATP通過與P2嘌呤受體的相互作用，起信號分子的作用。嘌呤受體的一個主要類型是P2X嘌呤受體，這是一些能控制可滲透Na+，K+和Ca++的內(nèi)在離子通道的配體控制的離子通道。在感覺神經(jīng)元中發(fā)揮作用的P2X受體對原始傳入神經(jīng)傳遞和痛覺感受是重要的。已知道ATP能使感覺神經(jīng)元去極化，并在傷害感受器活化方面起作用，因為從受損細(xì)胞所釋放的ATP刺激P2X受體具有導(dǎo)致受感傷害的神經(jīng)纖維終板去極化。P2X受體具有高度嚴(yán)格的分布(Chen，C.C.，et.al.，自然(Nature)V.377，pp.428-431(1995)，因為這種受體在進(jìn)入脊髓的感覺的C-纖維神經(jīng)中選擇性地被表達(dá)，這些C-纖維中不少已知能攜帶可疼痛刺激的受體。因此，P2X3受體亞型的這種高度嚴(yán)格的表達(dá)場所使這些受體亞型成為鎮(zhèn)痛藥作用的極好目標(biāo)(見圖3和圖7)。
作為舉例，適合于本發(fā)明應(yīng)用的P2X/ATP嘌呤受體拮抗劑包括蘇拉明和磷酸吡哆醛-6-偶氮苯-2，4-二磺酸(“PPADS”)。這些藥物的適宜濃度列于表16。
P2Y受體即與G蛋白偶聯(lián)的受體的激動劑，已知是通過IP3水平的升高以及隨后的胞內(nèi)鈣升高而影響平滑肌松弛的。P2Y受體激動劑的一個例子是2-me-S-ATP。
表16疼痛/炎癥抑制藥物的治療濃度和優(yōu)選濃度治療濃度優(yōu)選濃度藥物類型(nmol)(nmol)嘌呤受體拮抗劑蘇拉明100-10,000 10,000-100,000PPADS 100-10,000 10,000-100,000N.三磷酸腺苷(ATP)敏感的鉀通道開放劑業(yè)已發(fā)現(xiàn)在包括血管和非血管平滑肌以及大腦在內(nèi)的多種組織中存在ATP-敏感的鉀通道，用放射標(biāo)記配體所做的結(jié)合研究已證實其存在。這些通道的開放引起鉀(K+)外流以及使細(xì)胞膜過度極化(見圖2)。這種過度極化通過抑制電壓依賴的鈣(Ca2+)通道和受體操縱的Ca2+通道，引起胞內(nèi)游離鈣的減少。這種聯(lián)合的作用迫使細(xì)胞(例如平滑肌細(xì)胞進(jìn)入松馳狀態(tài)，或較能抵抗活化的狀態(tài)，以及在血管平滑肌的情況下，導(dǎo)致血管舒張。已經(jīng)證明，K+通道開放劑(KCOs)的特點為，在體內(nèi)具有強抗高血壓活性，而在體外具有血管松馳活性(見圖4)。還已證明，K+通道開放劑(KCO3)可阻止刺激偶聯(lián)的(Ca2+)分泌，有人認(rèn)為這些KCOs作用于突觸前神經(jīng)元受體，從而會抑制由于神經(jīng)刺激和炎性介導(dǎo)物釋放所產(chǎn)生的作用。Quast，U.et.al.，血管平滑肌中鉀通道開放劑的細(xì)胞藥理學(xué)，心血管研究(Cardiovasc Res.)V.28，pp.805-810(1994)。
在達(dá)到血管松馳或平滑肌松馳方面，內(nèi)皮素(ETA)拮抗劑和ATP-敏感的鉀通道(KCOs)之間的協(xié)同相互作用是所希望的。配伍應(yīng)用的原理是基于這些藥物在促進(jìn)平滑肌松馳和防止血管痙攣方面具有不同的分子作用機制這樣一個事實。由ETA受體誘導(dǎo)的平滑肌細(xì)胞中早期胞內(nèi)鈣的升高接著引發(fā)電壓依賴的通道的活化以及收縮所需要的胞外鈣的進(jìn)入。ETA受體拮抗劑會特異地阻斷該受體所介導(dǎo)的作用，但不能阻斷由肌細(xì)胞上別的與G-蛋白偶聯(lián)的受體活化而引發(fā)的鈣升高。
鉀通道開放藥如吡那地爾會開放引起K外流和細(xì)胞膜過度極化的這些通道。這種過度極化可減少通過如下的機制由其他受體所介導(dǎo)的收縮(1).它將通過由減少L-型如T-型鈣通道開放概率而引起的電壓依賴鈣通道的抑制，誘導(dǎo)胞內(nèi)游離鈣水平的降低，(2).它將通過抑制肌醇三磷酸鹽(IP3)形成，阻止激動劑誘導(dǎo)的(受體操縱的通道)Ca2+從胞內(nèi)內(nèi)源釋放。(3).它將降低鈣作為收縮蛋白激活劑的作用。因此，這二類藥物的聯(lián)合作用迫使靶細(xì)胞處于松馳狀態(tài)或?qū)罨挚沽^大的狀態(tài)。
適合本發(fā)明應(yīng)用的ATP-敏感的K+通道開放劑包括(-)吡那地爾Cromakalin；尼可地爾；米諾地爾；N-氰基-N′-[1，1-二甲基[2，2，3，3-3H]丙基]-N″-(3-吡啶基)胍(“P1075”)；以及N-氰基-N′-(2-硝酰乙基)-3-吡啶羧酰脒單甲磺酸鹽(“KRN 2391”)。這些藥物的濃度列于表17。
表17疼痛/炎癥抑制藥物的治療濃度和優(yōu)選濃度治療濃度優(yōu)選濃度藥物類型(nmol)(nmol)ATP-敏感的K+通道開放劑cromakalin 10-10,000 100-10,000尼可地爾 10-10,000 100-10,000米諾地爾 10-10,000 100-10,000P 1075 0.1-1,000 10-1,000KRN 2391 1-10,000100-1,000(-)吡那地爾1-10,000100-1,000
O.抗痙攣藥1.多功能藥物上面所述的幾種抗痛和抗炎藥物還具有抑制血管收縮或平滑肌痙攣的作用。正因為這樣，這些藥物還行使抗痙攣劑的功能，因此，有益地應(yīng)用于血管和泌尿道適應(yīng)癥。還可作為抗痙攣藥的抗炎和抗痛藥包括5-羥色胺受體拮抗劑，尤其是5-羥色胺2受體拮抗劑；速激肽受體拮抗劑，ATP敏感的鉀通道開放劑。
2.一氧化氮供體氧化氮供體特別就其抗痙攣活性而言，可以加到本發(fā)明的溶液中。一氧化氮(NO)作為多種生理過程的分子介導(dǎo)物起著重要作用，包括血管擴張和控制正常的血管張力。在內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)，稱為NO合成酶(NOS)的一種酶催化L-精氨酸轉(zhuǎn)化成NO，后者起可擴散的第二信使的作用，介導(dǎo)相鄰平滑肌細(xì)胞中的反應(yīng)(見圖8)。在抑制收縮和控制基礎(chǔ)冠狀動脈張力的基本條件下，NO由血管內(nèi)皮細(xì)胞連續(xù)地形成和釋放，并可在對各種拮抗劑(例如乙酰膽堿)和其他內(nèi)皮細(xì)胞依賴的血管擴張劑敏感的內(nèi)皮細(xì)胞中產(chǎn)生。因此，NO合成酶活性的調(diào)控和作為結(jié)果的NO水平就成為控制血管張力的關(guān)鍵分子靶(見圖8)。Muramatsu，等，冠狀動脈疾病(Coron.Artery.Dis.)，5815-820(1994)。
NO供體和ATP-敏感的鉀通道(KCOs)之間的協(xié)同性相互作用是所希望的，以達(dá)到血管松弛或平滑肌松馳。聯(lián)合應(yīng)用的原理基于這樣一個事實在促進(jìn)平滑肌松馳和防止血管痙攣方面，這些藥物具有不同的分子作用機制。從培養(yǎng)的冠狀動脈平滑肌細(xì)胞獲得的證據(jù)表明，各種縮血管劑包括后葉加壓素。血管緊張素II和內(nèi)皮素，都能通過抑制蛋白激酶A抑制KATP流。此外，據(jù)報道膀胱平滑肌中的KATP流被蕈毒堿激動劑所抑制。NO在介導(dǎo)平滑肌松馳方面的作用通過涉及蛋白激酶G的獨立分子通路(上面所敘述的)實現(xiàn)(見圖8)。這表明這二種藥物的配伍應(yīng)用在松弛平滑肌方面比單藥使用更有效。
適合于本發(fā)明應(yīng)用的一氧化氮供體包括硝酸甘油，亞硝基鐵氰化鈉，藥物FK 409 FR144420，3-嗎啉代斯德酮亞胺，或linsidominechlorohydrate(“SIN-1”)；以及S-亞硝基-N-乙酰青霉素胺(“SNAP”)。這些藥物的合適濃度列于表18。
表18疼痛/炎癥抑制藥物的治療濃度和優(yōu)選濃度治療濃度優(yōu)選濃度藥物類型(nmol)(nmol)氧化氮供體硝酸甘油 10-10,000100-1,000亞硝基鐵氰化鈉10-10,000100-1,000SIN-1 10-10,000100-1,000SNAP 10-10,000100-1,000FK 409(NOR-3) 1-1,000 10-100FR 144420(NOR-4) 10-10,000100-50003.內(nèi)皮素受體拮抗劑內(nèi)皮素是由21種氨基酸組成的多肽，它是已知最強的血管收縮劑之一。已報道三種不同的人內(nèi)皮素多肽，分別命名為ET1，ET2和ET3，通過至少二種稱為ETA和ETB受體的受體亞型介導(dǎo)其生理作用。心臟和血管平滑肌含有占支配地位的ETA受體，此受體亞型司這些組織的收縮。因此，針對ETA受體的拮抗劑在抑制圍術(shù)期的冠狀痙攣方面從治療角度看應(yīng)當(dāng)是有益的，此外，其在泌尿科用藥中抑制平滑肌收縮方面可能也是有用的。Miller，R.C.，等，藥理科學(xué)動向(Trends in Pharmacol.Sci)，1454-60(1993)。
適合的內(nèi)皮素受體拮抗劑包括環(huán)(D-Asp-Pro-D-Val-Leu-D-Trp)(“BQ 123”)；(N，N-六亞甲基)-氨基甲?；?Leu-D-Trp-(CHO)-D-Trp-OH(“BQ 610”)(R)2-([R-2[(S)-2-([1-六氫-1H-吖庚因基]-羰基]氨基-4-甲基-戊酰基)氨基-3-(3[1-甲基-1H-吲哚基])丙酰氨基-3-(2-吡啶基)丙酸(“FR 139317”)；環(huán)(D-Asp-Pro-D-Ile-Leu-D-Trp)(“JKC 301”)；環(huán)(D-Ser-Pro-D-Val-Leu-D-Trp)(“JK302”)；以及5-(二甲氨基)-N-(3，4-二甲基-5-異噁唑基)-1-萘磺酰胺(“BMS 182874”)；以及N-[1-甲酰-N-[N-六氫-1H吖庚因-1-基]羰基]-L-白氨酰]-D-色氨酰]-D-色氨酸(“BQ 610”)。這些藥物中二種有代表性的藥物的濃度列于表19。
表19疼痛/炎癥抑制藥物的治療濃度和優(yōu)選濃度治療濃度優(yōu)選濃度藥物類型(nmol)(nmol)內(nèi)皮素受體拮抗劑BQ 123 0.01-1,00010-1,000FR 1393171-100,000 100-10,000BQ 610 0.01-10,000 10-1,0004.Ca2+通道拮抗劑鈣通道拮抗劑是一組特殊的藥物，可干擾鈣離子跨膜通量，后者是活化介導(dǎo)神經(jīng)炎癥的細(xì)胞反應(yīng)所需要的。鈣進(jìn)入血小板和白細(xì)胞是在這些細(xì)胞中介導(dǎo)活化反應(yīng)的關(guān)鍵步驟。而且，舒緩激肽受體和神經(jīng)激肽受體(NK1和NK2)在介導(dǎo)神經(jīng)炎癥，信號傳遞通路中的作用包括胞內(nèi)鈣的增加，從而導(dǎo)致漿膜上鈣通道的活化。在許多組織中，鈣通道拮抗劑如硝苯吡啶能減少由各種刺激激發(fā)的花生四烯酸，前列腺素和白細(xì)胞三烯的釋放。Moncada，S.，F(xiàn)lower，R.和Vane，J.見Goodman和Gilman氏治療的藥理學(xué)基礎(chǔ)(第七版)MacMillan Publ.inc.pp.660-5(1995)。
鈣通道拮抗劑也干擾血管平滑肌收縮所需要的鈣離子跨膜通量。這種作用為提出在目標(biāo)是減輕血管痙攣和松弛平滑肌的圍術(shù)期操作期間使用鈣拮抗劑，提供了理論根據(jù)。二氫吡啶包括尼索地平可作為L型亞型鈣通道電壓依賴閥門的特異性抑制劑(拮抗劑)。心臟手術(shù)期間全身給予鈣通道拮抗劑硝苯吡啶一直預(yù)先用于防止或減少冠狀動脈血管痙攣。Seiteberger，R.，et al.循環(huán)(Circulation)，83460-468(1991)。
屬于在本發(fā)明中有用的抗痙攣藥的鈣通道拮抗劑，與本發(fā)明的其他藥物聯(lián)合使用時顯示出協(xié)同作用。鈣(Ca2+)通道拮抗劑和一氧化氮(NO)供體在達(dá)到血管松弛或平滑肌松弛即在抑制痙攣活性方面相互配合。聯(lián)合應(yīng)用的原理基于這樣一個事實這二類藥物具有不同的分子作用機制，單獨應(yīng)用在達(dá)到松弛方面可能不完全有效，而且可能有不同的作用時間周期。事實上，不少研究顯示，鈣通道拮抗劑單獨應(yīng)用并不能使已用一種受體激動劑預(yù)先收縮的血管肌完全松弛。
尼索地平單用和與硝酸甘油伍用對乳腺內(nèi)動脈(IAM)作用顯示，二藥伍用在防止收縮方面，產(chǎn)生明顯的正向協(xié)同作用(Liu等，1994)。這些研究為鈣通道拮抗劑和一氧化氮供體(NO)配伍應(yīng)用于最有效地防止血管痙攣以及使平滑肌松弛方面，提供了科學(xué)依據(jù)。心臟外科期間全身給予硝酸甘油和硝苯吡啶以防止和治療心肌缺血或冠狀動脈血管痙攣這樣的應(yīng)用例子已有報道(Cohen等，1983；Seiteberger等，1991)。
鈣通道拮抗劑與內(nèi)皮素受體亞型A(ETA)拮抗劑也顯示協(xié)同作用。Yanagisawa及其同事觀察到，二氫吡啶拮抗劑，鈣通道拮抗劑阻斷內(nèi)源性激動劑ET-11對冠狀動脈平滑肌中ETA受體的作用。據(jù)此推測ET1是電壓敏感的鈣通道的內(nèi)源性激動劑。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，平滑肌細(xì)胞中由ETA受體激活所誘導(dǎo)的胞內(nèi)鈣升高的保持階段需要胞外鈣，而且這種保持至少可部分地被尼卡地平阻斷。因此，在外科溶液中ETA拮抗劑配伍使用時，應(yīng)當(dāng)希望加入鈣通道拮抗劑以協(xié)同增強ETA拮抗劑的作用。
鈣通道拮抗劑和ATP-敏感的鉀通道開放劑同樣顯示協(xié)同作用。ATP-敏感的鉀通道(KATP)經(jīng)對腺苷核苷酸致敏，使細(xì)胞的膜電位與細(xì)胞的代謝狀態(tài)相偶聯(lián)。胞內(nèi)ATP抑制KATP通道，而胞內(nèi)二磷酸核苷酸則使該通道興奮。這些通道的活性受對鉀的電化學(xué)驅(qū)動力和細(xì)胞內(nèi)信號(例如ATP或G蛋白)控制，但不受每秒膜電位控制。KATP通道使膜過度極化，從而讓其控制細(xì)胞的靜止電位。在骨骼肌，大腦，血管和非血管平滑肌中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)ATP-敏感的鉀流。用放射標(biāo)記配體所作的結(jié)合研究已證實作為鉀通道開放劑藥物如吡那地爾的受體靶的ATP-敏感的鉀通道的存在。這些通道的開放引起鉀外流和使細(xì)胞膜過度極化。這種過度極化(1)通過減少L-型和T-型鈣通道二者的開放概率，抑制電壓依賴的鈣通道，引起胞內(nèi)游離鈣水平降低，(2)通過抑制三磷酸肌醇(IP3)形成，阻止激動劑誘導(dǎo)的(在受體操縱的通道)Ca2+從胞內(nèi)源釋放，(3)降低鈣作為收縮蛋白激活劑的效能。這二類藥物(ATP-敏感的鉀通道開放劑和鈣通道拮抗劑)的這些綜合的作用會迫使靶細(xì)胞處于松弛狀態(tài)或?qū)せ畹挚沽^大的狀態(tài)。
最后，鈣通道拮抗劑和速激肽拮抗劑以及舒緩激肽拮抗劑在介導(dǎo)神經(jīng)炎癥方面顯示協(xié)同作用。神經(jīng)激肽在介導(dǎo)神經(jīng)炎癥方面的作用業(yè)已得到確認(rèn)。神經(jīng)激肽1(NK1)和神經(jīng)激肽2(NK2)受體(與G蛋白結(jié)合的超級家族的成員)信號傳遞通路包括胞內(nèi)鈣增高，從而導(dǎo)致漿膜上鈣通道的活化。同樣，舒緩激肽2(BK2)受體的活化與胞內(nèi)鈣水平增高相關(guān)聯(lián)。因此，鈣通道拮抗劑干擾涉及部分通過L型通道進(jìn)入的胞內(nèi)鈣水平升高的一般機制。這是鈣通道拮抗劑和對神經(jīng)激肽和舒緩激肽2受體的拮抗劑之間協(xié)同性相互作用的基礎(chǔ)。
適合于本發(fā)明應(yīng)用的鈣通道拮抗劑包括尼索地平，硝苯地平，尼莫地平，拉西地平以及伊拉地平。這些藥物的適宜濃度列于表20。
表20疼痛/炎癥抑制藥物的治療濃度和優(yōu)選濃度治療濃度優(yōu)選濃度藥物類型(nmol)(nmol)鈣通道拮抗劑尼索地平 1-10,000 100-1,000硝苯地平 1-10,000 100-5,000尼莫地平 1-10,000 100-5,000拉西地平 1-10,000 100-5,000伊拉地平 1-10,000 100-5,000氨氯地平 1-10,000 100-5,000P.抗再狹窄藥用于心血管和一般血管操作的本發(fā)明溶液也可以任選地包含抗再狹窄藥，專用于血管成形術(shù)，旋轉(zhuǎn)式atherectomy以及其他介入性血管操作。在指出再狹窄范圍的情況下，下面的藥物適合于加到前述的心血管和一般血管沖洗液中。下面的抗再狹窄藥最好與本發(fā)明溶液中的抗痙藥伍用，更可取的是，還可與本發(fā)明溶液中的抗痛/抗炎藥伍用。
1.抗血小板藥在動脈損害部位，血小板通過特異的細(xì)胞表面受體，粘附到膠原蛋白和纖維蛋白原上，然后被幾種獨立的介質(zhì)激活。多種激動劑能活化血小板，包括膠原蛋白，ADP，凝血噁烷A2，腎上腺素和凝血酶。膠原蛋白和凝血酶在血管損傷部位起主要激活劑的作用，而ADP和凝血噁烷A2的作用則是將其他血小板募集到正在形成中的血小板栓上?；罨蟮难“瀹a(chǎn)生脫顆粒作用，釋放其他起化學(xué)粘附劑和血管收縮劑作用的物質(zhì)，從而激發(fā)血管痙攣和血小板積聚。因此，抗血小板藥物可能就是從上述任何激動劑-受體靶中得到的拮抗劑。
由于血小板在血凝固進(jìn)程中起這樣一種重要作用，給接受血管操作的病人一直常規(guī)口服抗血小板藥。實際上，鑒于激活劑的多樣性以及單用抗血小板藥無效這樣的結(jié)論，某些研究者已得出結(jié)論，聯(lián)合治療方案對于有效治療是必需的。近來，Willerson及其同事報告，靜脈途徑聯(lián)合應(yīng)用三種藥物，即利多瑞爾(一種凝血噁烷A2的拮抗劑)，酮舍林(一種5-羥色胺拮抗劑)和氯吡格雷(一種ADP拮抗劑)。他們發(fā)現(xiàn)，在狗冠狀動脈血管成形術(shù)模型上3種拮抗劑的聯(lián)合應(yīng)用抑制幾種相關(guān)的血小板功能，并減少新內(nèi)膜增生(JACC摘要，F(xiàn)eb.1995)。尚不能肯定的是，哪一種冠狀動脈血栓形成的治療方法將是最有效的。一種可能性是，在本發(fā)明的心血管和一般血管溶液中加進(jìn)抗血小板藥和抗血栓藥。
a.凝血酶抑制劑和受體拮抗劑凝血酶在血管損傷形成中起核心作用，并被認(rèn)為是血栓形成的主要介導(dǎo)物。因此，在經(jīng)皮下透照法冠狀動脈成形術(shù)(PTCA)或其他血管操作期間或后，血管損傷部位血栓形成是引起急性血管再閉塞和慢性再狹窄的重要原因。通過應(yīng)用直接的抗血栓藥，包括水蛭素及其合成肽類似物，以及凝血酶受體拮抗劑肽，可以阻斷這一過程(Harker等，1995，美國心臟病雜志(Am.J.Cardiol)75，12B)。凝血酶還是一種強效生長因子，可引發(fā)血管損傷部位平滑肌細(xì)胞增生。此外，凝血酶在調(diào)整其他生長因子如PDGF(血小板衍生的生長因子)的作用方面也起作用，而且已經(jīng)證明，凝血酶抑制劑減少由氣囊血管成形術(shù)引起的血管損傷后的PDGF mRNA的表達(dá)。
水蛭素是一種原型直接抗凝血酶藥，因為它結(jié)合到凝血酶的催化部位和基質(zhì)識別部位(外部位)。采用氣囊的動物研究已證實，應(yīng)用重組水蛭素(Ciba-Geigy藥廠)可使這種增生性反應(yīng)減少80％。Hirulog(Biogen藥廠)是一種模擬水蛭素設(shè)計的十二肽，它經(jīng)Phe-Pro-Arg連接分子，結(jié)合到凝血酶的活性部位。水蛭素和Hirulog的大規(guī)模臨床試驗正在進(jìn)行之中，以試驗它們在PTCA后減少血管損傷方面的療效，迄今為止，這些抑制劑的II期臨床試驗數(shù)據(jù)是肯定的。相信這二個藥物都適合在本發(fā)明的溶液中應(yīng)用。在6個月的反復(fù)血管造影術(shù)評價以檢查血管再狹窄情況的1200例病人試驗的初步結(jié)果表明，與肝素相比，使用水蛭素缺血消除時間明顯縮短。該法的優(yōu)點在于，據(jù)報道無明顯的出血合并癥。研究發(fā)現(xiàn)，水蛭素局部持續(xù)釋放療法可減少豬動脈變狹窄后早期血栓形成，但新內(nèi)膜并不增厚。Muller，D等，水蛭素局部持續(xù)釋放療法減少動脈變狹窄后早期血栓形成但不使新內(nèi)膜增厚，美國心臟病雜志(Am.Heart J.1996；133(2)211-218)。在此研究中，水蛭素從置于動脈周圍的浸漬多聚物中釋放出來。
其他正在試驗的有活性的抗凝血酶藥有阿加曲班(TexasBiotechnology)和efegatran(Lilly制藥廠)，這些藥物推測適合于本發(fā)明。
表21血管再狹窄抑制劑的治療濃度和優(yōu)選濃度治療/優(yōu)選濃度更優(yōu)選濃度藥物類型(nmol)(nmol)凝血酶抑制劑和受體拮抗劑水蛭素 0.00003-3/0.0003-0.3 0.03hirulog0.2-20,000/2-2,000200b.ADP受體拮抗劑(嘌呤受體拮抗劑)ADP類似物ticlopidine抑制凝血噁烷和ADP二者引起的血小板凝集。ticlopidine很可能阻斷ADP與其受體的相互作用，從而抑制血小板膜表面上由此G-蛋白偶聯(lián)受體進(jìn)行的信號傳輸。初步研究表明，在與潘生丁的伍用方面，該藥比阿斯匹林更有效。但是，由于Ticlopidine可引起中性白細(xì)胞減少癥，其臨床應(yīng)用一直受到限制。有人認(rèn)為，ticlopidine的類似物氯吡格雷(clopidogrel)的有害副作用比ticlopidine小，目前正在研究其用于防止缺血。據(jù)推測，這些藥物適合用于本發(fā)明的溶液中。
c.凝血噁烷抑制劑和受體拮抗劑目前常規(guī)方法治療血栓形成所利用的藥物依賴阿斯匹林，肝素和纖維蛋白溶酶原。阿斯匹林不可逆地使環(huán)氧合酶乙酰化，并抑制凝血噁烷A2和前列腺環(huán)素的合成。雖然資料支持阿斯匹林對PTCA有好處，但一般認(rèn)為，阿斯匹林的基礎(chǔ)療效只是部分的，或一般的。這可能是由于血小板通過凝血噁烷A2獨立通路活化，該通路不能被阿斯匹林誘導(dǎo)的環(huán)氧化酶的乙酰化所阻斷。盡管采用阿斯匹林治療，還是可能出現(xiàn)血小板聚集和血栓形成。業(yè)已證明，阿斯匹林與潘生丁伍用減少PTCA期間急性并發(fā)癥的發(fā)生率，但不能減少血管再狹窄的發(fā)生率。
兩種凝血噁烷受體拮抗劑看來比阿斯匹林更有效，并被認(rèn)為適合應(yīng)用于本發(fā)明的溶液和方法中。ticlopidine抑制凝血噁烷和ADP引起的血小板聚集。利多瑞爾(R68060)是凝血噁烷B2合成酶抑制劑和凝血噁烷-前列腺素內(nèi)過氧化物受體阻斷劑的組合物。在一項正在進(jìn)行PTCA的病人接受ridogrel、肝素聯(lián)合治療的開放式試驗研究中，已經(jīng)將ridogrel療法與水楊酸鹽療法作了比較。Timmermans，C.等，ridogrel在經(jīng)皮透照冠狀動脈血管成形術(shù)中的地位，美國心臟病雜志(Am.J.Cardiol.)1991；68463-466。治療方案組成如下在正要做PTCA操作前慢速靜脈注射300mg，12小時后以300mg/2次/天的劑量作口服。從這一研究中發(fā)現(xiàn)ridogrel基本上是成功的，因為30例病人中沒有發(fā)生早期急性血管再閉塞。出血并發(fā)癥在相當(dāng)數(shù)量的病例(34％)中出現(xiàn)，這可能是一種需要特別注意的并發(fā)因素。該研究證實，ridogrel是一種強效和長效的凝血噁烷B2合成酶抑制劑。
2.細(xì)胞粘附分子抑制劑a.選擇蛋白抑制劑選擇蛋白抑制劑阻斷選擇蛋白與其同源配體或受體的相互作用。這些抑制劑可能作用的選擇蛋白靶有代表性的例子包括，但不限于此，E-選擇蛋白和P-選擇蛋白受體。Upjohn公司已準(zhǔn)許對Cytel公司開發(fā)的抑制P-選擇蛋白活性的單克隆抗體的權(quán)利。潛在的適應(yīng)癥為血管再狹窄的產(chǎn)品CY 1748目前正處于臨床前開發(fā)之中。
b.整聯(lián)蛋白抑制劑血小板糖蛋白IIb/IIIa復(fù)合體存在于休止的以及活化的血小板表面。在血小板活化期間，這種復(fù)合體看來經(jīng)受某種轉(zhuǎn)化，這種轉(zhuǎn)化使它能夠作為纖維蛋白原和其他粘附蛋白的結(jié)合位點。很有希望的新抗血小板藥都是以這種代表血小板凝聚最終共同通路的氧基哌吲哚細(xì)胞表面受體為目標(biāo)的。
幾種類型藥物歸入GP IIb/IIIa 整聯(lián)蛋白拮抗劑類。迄今為止，單克隆抗體c7E3(CentoRx；Centocor，Malvern PA)在一項3000病人PTCA研究中，一直在緊張地加以研究。它是一種嵌合的人/小白鼠雜種。c7E3以0.25mg/kg劑量先靜脈快速推注，接著以10μg/min速度作靜脈輸注，連續(xù)12hrs，在整個輸注過程中，該給藥方案可阻斷80％以上的GP IIb/IIIa受體。這與血小板凝聚抑制率大于80％相關(guān)聯(lián)。該抗體曾與肝素一起使用，有人指出這使出血危險性增加。從EPIC試驗得到的其他信息證明，primary end point，綜合死亡率、非致命心肌梗塞發(fā)生率以及冠狀血管再形成的必要性均明顯減少，提示一種長期的好處。Tcheng，(1995)美國心臟病雜志(Am.Heart J.)130673-679。IV期(臨床)研究(EPILOG)被列入計劃或在進(jìn)行之中，目的是要解決c7E3 Fab的安全和療效問題。
血小板糖蛋白IIb/IIIa受體阻斷劑，intigrelin是一種環(huán)庚肽，其對此分子靶具高度特異性。與抗體相反，它有一個短的生物半衰期(約10min)。在II期IMPACT試驗中首次評價了intigrelin的安全性和療效。采用以1.0μg/kg/min的速度，靜脈輸注intigrelin 4或12h(Topol，E 1995，美國心臟病雜志Am.J.Cardiol，27B-33B)。4000例病人的III期研究和IMPACT II期試驗證明，intigrelin顯著減少已經(jīng)受旋轉(zhuǎn)式atherectomy的病人中缺血發(fā)生(JACC摘要，1996)。供本發(fā)明應(yīng)用的c7E3和intigrelin二個藥的合適濃度列于下面。
此外，二個peptidomimetic藥MK-383(Merck)和RO 4483(Hoffmann-LaRoche)已在II期臨床試驗中得到研究。由于這二個藥物都是小分子，它們具有半衰期短和強效的特點。但是看來它們也有特異性較差的問題，可與其他密切有關(guān)的intigrelin相互作用。據(jù)推測，這些peptidomimetic藥也適合應(yīng)用于本發(fā)明。
表22血管再狹窄抑制劑的治療和優(yōu)選濃度治療/優(yōu)選濃度更優(yōu)選的濃度藥物類型(nmol)(nmol)細(xì)胞粘附抑制劑c7E3 0.5-50,000/5-5,000 500Integrelin 0.1-10,000/1-1000×Kd100×Kd3.抗趨化性的藥物抗趨化性藥物阻斷炎癥細(xì)胞的趨藥性。這些藥物可能作用的抗趨化性靶的有代表性實例包括，但不限于這些，F(xiàn)-Met-Leu-Phe受體，IL-8受體，MCP-1受體和MIP-I-α/RANTES受體。這一類藥物范圍內(nèi)的若干藥物目前正處于早期開發(fā)階段，但據(jù)推測，這些藥物可能適用于本發(fā)明。
4.白細(xì)胞介素受體拮抗劑白細(xì)胞介素受體拮抗劑是阻斷白細(xì)胞介素與其同源配體或受體相互作用的一類藥物?？苟喾N白細(xì)胞受體中任一種的特異受體拮抗劑目前下處于早期開發(fā)階段。這類受體拮抗劑的一個例外情況是分泌型IL-1受體的天然存在，稱之為IL-l拮抗劑蛋白(IL-1AP)。該拮抗劑結(jié)合IL-1，并已被證明它抑制IL-1的生物學(xué)作用，據(jù)推測該拮抗劑適合應(yīng)用于本發(fā)明。
5.細(xì)胞內(nèi)信號傳輸抑制劑a.蛋白激酶抑制劑I.蛋白激酶C(PKC)抑制劑蛋白激酶C(PKC)在細(xì)胞表面為多種生理過程的信號傳輸中起著關(guān)鍵作用。由于G-蛋白偶聯(lián)的受體(例如，5-羥色胺，內(nèi)皮素等)或生長因子受體如PDGF的最初活化，PKC同I酶作為下游靶得以被活化。這兩類受體在冠狀動脈血管成形術(shù)操作后介導(dǎo)血管痙攣和再狹窄方面都起著重要作用。
分子克隆分析已顯示，PKC以一大族存在，至少由8個亞種(同I酶)組成。這些同I酶在結(jié)構(gòu)以及在把受體活化到特定細(xì)胞增殖反應(yīng)的變化相連接的機理方面是不相同的。在多種類型的細(xì)胞中都發(fā)現(xiàn)特定同I酶的表達(dá)，包括血小板，嗜中性白細(xì)胞，骨髓細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞。所以PKC的抑制可能影響多種類型細(xì)胞中的信號傳輸，除非該抑制劑顯示同I酶特異性。因此可以預(yù)測，PKC的抑制在阻斷平滑肌細(xì)胞的增殖反應(yīng)反面是有效的，而且在阻斷嗜中性白細(xì)胞活化和隨后的附著方面還可能具有抗炎作用。業(yè)已報道了幾種抑制劑，初步報告表明，Calphoslin C抑制活性的IC50值為50nM。G-6203(也稱為Go 6976)是一種新型的強效PKC抑制劑，對某些PKC同I酶具有高度選擇性，其IC50范圍為2-10nM。這些抑制劑以及另一個藥物GF 109203X的濃度列于表23，GF 109203X也稱之為Go 6850或雙吲哚基馬來酸亞胺I(從Warner-Lambert獲得)，據(jù)說該藥適合應(yīng)用于本發(fā)明。
表23血管再狹窄抑制劑的治療和優(yōu)選濃度治療/優(yōu)選濃度更優(yōu)選的濃度藥物類型(nmol)(nmol)蛋白激酶C抑制劑Calphostin C0.5-50,000/100-5,000 500GF109203 X 0.1-10,000/1-1,000 100G-6203(Go 6976) 0.1-10,000/1-1,000 100ii蛋白酪氨酸激酶抑制劑雖然許多受體酪氨酸激酶(RTK)家族人員之間存在巨大的差異，然而這些受體所采用的信號傳輸機制卻有許多共同特征。生化和分子遺傳研究已經(jīng)證實，配體與RTK胞外疇的結(jié)合迅速活化胞內(nèi)疇的內(nèi)在酪氨酸激酶催化活性(見圖5)。該酶活性的增高導(dǎo)致含有共同序列圖譜的許多胞內(nèi)基質(zhì)的酪氨酸特異的磷酸化。這就必然引起許多“下游”信號傳輸分子的活化，以及細(xì)胞內(nèi)控制磷脂代謝，花生四烯酸代謝，蛋白磷酸化(涉及除蛋白激酶以外的機理)，鈣代謝和轉(zhuǎn)錄活化這樣一些通路的級聯(lián)(圖5)。RTK胞漿功能區(qū)的生長因子依賴的酪氨酸激酶活性是產(chǎn)生導(dǎo)致細(xì)胞增殖的胞內(nèi)信號傳輸?shù)闹饕獧C理。因此，(蛋白酪氨酸激酶)抑制劑具有強效來阻斷這種信號傳輸，從而阻止增殖反應(yīng)(見圖5)。
就心血管范圍內(nèi)抑制作用的目標(biāo)而言，血小板衍生的生長因子(PDGF)具有重要意義，因為一般認(rèn)為，它在動脈粥樣硬化和血管再狹窄形成方面都起重要作用。由血管內(nèi)受損傷內(nèi)皮細(xì)胞表面處的血小板所釋放的PDGF導(dǎo)致血管平滑肌細(xì)胞上PDGF受體的興奮。如上所述，這就引發(fā)導(dǎo)致增生作用加強和新內(nèi)膜變厚的一系列細(xì)胞內(nèi)事件。所希望的PDGF激酶活性抑制劑應(yīng)當(dāng)能阻止增生并提高心血管和一般血管操作后的成功率。幾種有關(guān)的tyrphostin化合物中的任一種作為PDGF受體酪氨酸激酶活性的特異抑制劑，都具有強效作用(在體外的IC50值范圍為0.5～1.0μM)，因為它們對其他的蛋白激酶和其他信號傳輸系統(tǒng)幾乎都沒有影響。目前在許多tyrphostin化合物中只有幾個能從市場上買得到。本發(fā)明所用的這些藥物的適宜濃度列于表24。此外，已有報道證明，星型孢菌素對src亞族系中的幾種蛋白酪氨酸激酶具有強抑制作用。該藥在本發(fā)明中應(yīng)用的適宜濃度也列于表24。
表24血管再狹窄抑制劑的治療和優(yōu)選濃度治療/優(yōu)選濃度 更優(yōu)選濃度藥物類型(nmol)(nmol)蛋白激酶C抑制劑lavendustin A10-100,000/100-10,00010,000tyrphostin 10-100,000/100-20,00010,000AG1296tyrphostin 10-100,000/100-20,00010,000AG1295星型孢菌素 1-100,000/10-10,000 1,000b.細(xì)胞內(nèi)蛋白酪氨酸磷酸酶的調(diào)制劑含src-同系物2(SH2)功能區(qū)的非跨膜蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPase)能加以識別，命名為SH-PTP1和SH-PTP2。此外，SH-PTP1也稱為PTP1C，HCP或SHP、SH-PTP2也稱為PTP1D或PTP2C。SH-PTP1在所有譜系和所有各個分化階段的造血細(xì)胞中都能以高水平表達(dá)，而且業(yè)已確認(rèn)SH-PTP1基因?qū)otheaten(me)。mouse表現(xiàn)型負(fù)責(zé)，這就為預(yù)測抑制劑的作用應(yīng)當(dāng)是阻斷SH-PTP1與其胞內(nèi)基質(zhì)相互作用，提供了根據(jù)。有人認(rèn)為，含趨化性肽的嗜中性白細(xì)胞的興奮可導(dǎo)致介導(dǎo)嗜中性白細(xì)胞反應(yīng)的酪氨酸激酶的興奮(Cui等，1994，J.Immunol)，PTPase活性可通過逆轉(zhuǎn)細(xì)胞興奮初期被活化的酪氨酸激酶的作用，調(diào)整激動劑所誘導(dǎo)的活性。那些可能興奮PTPase活性的藥物作為抗炎介質(zhì)，可能具有潛在的治療應(yīng)用價值。
還已經(jīng)證明，這些相同的PTPase可調(diào)節(jié)某些RTKs活性。它們看來像是抗衡被活化受體激酶的作用，因此可能代表重要的藥物靶。體外實驗證明，注射PTPase可阻斷內(nèi)源性蛋白上胰島素刺激所致酪氨酰殘基的磷酸化。因此，在血管再狹窄中。PTPase活性的激活劑可能用來逆向激活PDGF-受體作用，有人認(rèn)為這種激活劑在本發(fā)明溶液中是有用的。此外，受體連接的PTPase也起胞外配體的作用，類似于細(xì)胞粘連分子的那些。配體與胞外功能區(qū)結(jié)合的功能序列目前尚未確定，但有理由假設(shè)，這種結(jié)合在細(xì)胞內(nèi)可能起調(diào)整磷酸酶活性的作用(Fashena和Zinn，1995，當(dāng)前生物學(xué)Current Biology，5，1367-1369)。這樣的作用可能阻斷由其他細(xì)胞表面粘連分子(NCAM)所介導(dǎo)的粘連，并提供抗炎作用。供這些應(yīng)用的藥物目前還沒有開發(fā)出來。
c.SH2功能區(qū)(src同系物2功能區(qū))的抑制劑原本被看作屬于蛋白酪氨酸激酶(PTKs)的src亞族系的SH2功能區(qū)是無催化活性的蛋白質(zhì)序列，它由約100個氨基酸組成，后者保存在多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白中(Cohen，等1995)。SH2功能區(qū)起磷酸酪氨酸-結(jié)合組件的作用，所以它在細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中介導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)的蛋白-蛋白聯(lián)結(jié)(Pawson，Nature，573-580，1995)。尤其是，已經(jīng)明確地規(guī)定SH2功能區(qū)的作用為受體酪氨酸激酶(RTK)介導(dǎo)的信號傳輸?shù)臉?biāo)準(zhǔn)，例如在血小板衍生的生長因子(PDGF)受體的情況下。自體磷酸化的RTKs上含磷酸酪氨酸的部位作為SH2蛋白的結(jié)合部位，因而可介導(dǎo)生化信號傳輸通路的活化(見圖2)(Carpenter，G.，F(xiàn)ASEB J.63283-3289，1992，Sierke，S.and Koland，J.Biochem.3210102-10108,1993)。SH2功能區(qū)的作用是使活化了的生長因子受體與細(xì)胞反應(yīng)相結(jié)合，包括基因表達(dá)的交換，最終細(xì)胞增殖(見圖5)。這樣就可預(yù)測，選擇性阻斷在血管平滑肌細(xì)胞表面所表達(dá)的特異性RTKs活化作用的那些抑制劑，在阻斷PTCA或其他血管操作后的增殖和再狹窄方面，將是有效的。目前有研究興趣的一個RTK靶是PDGF受體。
業(yè)已鑒別，至少20種胞質(zhì)溶質(zhì)蛋白含SH2功能區(qū)并在細(xì)胞內(nèi)信號傳輸方面起作用。SH2功能區(qū)的分布并不局限于特定的蛋白族系，而是在蛋白激酶，脂激酶，蛋白磷酸酶，磷酸脂酶，Ras-控制的蛋白以及某些轉(zhuǎn)錄因子等幾類蛋白中都有發(fā)現(xiàn)。含SH2蛋白中的許多蛋白已知具酶活性，而其他含SH2蛋白在細(xì)胞表面受體和“下游”效應(yīng)分子之間起“接頭”和“連結(jié)”的作用(Marengere，L.等Nature 369502-505，1994)。在信號傳輸過程中被激活，具有酶活性的含SH2功能區(qū)的蛋白的實例包括，但不限于這些，蛋白酪氨酸激酶src亞族系(src(pp60c-src)，abl，lck，fyn，fgr及其他)，磷酸脂酶Cγ(PLCγ)，磷脂酰肌醇3-激酶(PI-3激酶)，p21-ras GTPase活化蛋白(GAP)和含SH2蛋白酪氨酸磷酸酶(SH-PTPase)(Songyang，等，Cell.72，767-778，1993)。鑒于這些不同的SH2蛋白在把信號從經(jīng)過活化的細(xì)胞表面受體傳送到另外的分子相互作用級聯(lián)，最終限制細(xì)胞反應(yīng)方面具有重要作用，可阻斷特異SII2蛋白結(jié)合的抑制劑期望能成為各種潛在治療應(yīng)用的藥物。
此外，許多免疫/炎性反應(yīng)的調(diào)節(jié)是通過經(jīng)含SH2功能區(qū)的非受體酪氨酸激酶傳遞信號的受體介導(dǎo)的。經(jīng)抗原特異的T-細(xì)胞受體(TCR)活化的T-細(xì)胞引發(fā)信號傳遞級聯(lián)，導(dǎo)致淋巴因子分泌和T-細(xì)胞增生。TCR活化后最早發(fā)生的生化反應(yīng)中的一個反應(yīng)是酪氨酸激酶活性的增高。尤其嗜中性白細(xì)胞的活化部分地通過細(xì)胞表面免疫球蛋白G受體的反應(yīng)，加以控制。這些受體的活化介導(dǎo)未經(jīng)過鑒定的已知具SH2功能區(qū)的酪氨酸激酶的活化。補充的證據(jù)表明，幾種src-族系激酶(lck.blk，fyn)參與由細(xì)胞因子和整聯(lián)蛋白受體引導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，并因此而可能起整合從幾種獨立受體結(jié)構(gòu)所接收的興奮作用。因此，特異性SH2功能區(qū)抑制劑具強效，以阻斷許多嗜中性白細(xì)胞功能，并可作為抗炎介質(zhì)。
從體外生化和細(xì)胞水平上開發(fā)以SH2功能區(qū)為目標(biāo)的藥物的努力目前正在進(jìn)行之中。這樣的努力應(yīng)是成功的，據(jù)推測，開發(fā)出來的藥物在本發(fā)明的實際應(yīng)用中或許是有用的。
d.鈣通道拮抗劑先前所闡述的與痙攣抑制功能有關(guān)的鈣通道拮抗劑在本發(fā)明的心血管和一般血管溶液中，也可以作為抗再狹窄藥使用。一般認(rèn)為，生長因子受體如PDGF的活化導(dǎo)致胞內(nèi)鈣的增高(見圖2)。在細(xì)胞水平上的研究已證明，在抑制血管平滑肌細(xì)胞的有絲分裂發(fā)生方面，鈣通道拮抗劑的作用是有效的。
6.心血管和一般血管溶液中所用的抗再狹窄藥和其他藥物治療性伍用所衍生的協(xié)同相互作用。
鑒于已知與PTCA或其他心血管或一般血管治療性操作后的血管再狹窄有關(guān)的疾病過程的復(fù)雜性和所涉及的分子靶的多樣性，單一分子靶的阻斷或抑制未必能在防止血管痙攣和再狹窄方面提供適當(dāng)?shù)男Ч?見圖2)。事實上，把目標(biāo)指向不同的個別分子受體或酶的許多動物研究在動物模型上尚未證明是有作用的，或在到目前為止的臨床試驗中尚未產(chǎn)生對二種病理表現(xiàn)的療效(Freed，M等，預(yù)防血管再狹窄的強化多藥聯(lián)用方法，洛伐他汀，Ace抑制劑和秋水仙堿的小規(guī)模試驗，J.Am.Coll.of Cardiol 21，p33A(1993)，Serruys，P.等PARK血管成形術(shù)后再狹窄，酮舍林試驗，J.Am.Coll.of Cardiol 21，p322A(1993)。所以，作用于不同分子靶的藥物治療性任用和局部給藥，對臨床上痙攣和再狹窄治療方法的有效性，看來是必要的。正如下面所述，這種協(xié)同性的以分子為靶的療法的基本原理是從近年在了解基本的生化機制方面所取得的進(jìn)展推論出來的，根據(jù)該機制，血管壁的血管平滑肌細(xì)胞傳導(dǎo)并匯集在PTCA或其他血管介入性操作期間所受到的刺激。
a.主要信號傳輸通路中的“交談”和趨同習(xí)慣上把負(fù)責(zé)細(xì)胞信號傳輸?shù)姆肿娱_關(guān)分成二條獨立的信號傳輸通路，每條通路由一組充當(dāng)細(xì)胞對一群特定興奮轉(zhuǎn)導(dǎo)物的不同蛋白族系組成，并介導(dǎo)不同細(xì)胞反應(yīng)。一條這樣的通路采用胞內(nèi)靶三聚G蛋白和Ca2+，通過G-蛋白偶聯(lián)的受體，傳遞來自神經(jīng)遞質(zhì)和激素的信號(見圖2)。在PTCA或其他心血管或一般血管治療性或診斷性操作的情況下，這些刺激及其相關(guān)受體介導(dǎo)平滑肌收縮，并可能引起血管痙攣。通過GPCR通路介導(dǎo)痙攣所涉及的信號傳輸分子的例子是已納入拮抗劑范圍的，經(jīng)由其相關(guān)G蛋白偶聯(lián)的受體而起作用的5-HT和內(nèi)皮素。
第二條主要通道把來自一些生長因子如PDGF的信號，通過酪氨酸激酶，接合體蛋白和Ras蛋白，轉(zhuǎn)導(dǎo)為調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和分化(見圖2和圖5)。在PTCA或其他心血管或一般血管操作期間，這條通路也可能被激活，導(dǎo)致血管平滑肌細(xì)胞增殖的高發(fā)生率。血管再狹窄藥物靶的一個舉例是PDGF受體。
從神經(jīng)遞質(zhì)和激素所傳送的信號刺激二類受體中的任何一類由7-螺旋跨膜區(qū)所構(gòu)成的G-蛋白偶聯(lián)受體，或由配體門控的離子通道構(gòu)成的G蛋白偶聯(lián)受體。從二類受體傳送來的“下游”信號集中在控制可觸發(fā)平滑肌細(xì)胞收縮作用的胞漿Ca2+濃度上(見圖2)。每一種GPCR跨膜受體激活一特定類型的三聚G蛋白，包括Gq，Gi或許多其他三聚G蛋白。Gα和/或Gβγ亞單位活化磷脂酶Cβ，導(dǎo)致蛋白激酶C(PKC)的活化和由于鈣自胞內(nèi)庫釋放引起的血漿鈣水平增高。
生長因子信號傳輸，例如由PDGF介導(dǎo)的信號傳輸，集中在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長上面。這條通路取決于受體酪氨酸激酶和“下游”酶(上面關(guān)于酪氨酸激酶所討論的磷脂酶Cγ)中酪氨酸殘基的磷酸化。PDGF受體的活化也導(dǎo)致PKC的興奮和胞內(nèi)鈣的升高，即與由GPCR所參與的(信號傳輸)步驟相同(見圖2)。目前一般認(rèn)為，配體無關(guān)的“交談”為響應(yīng)GPCR的興奮，可以反式激活(transactivate)酪氨酸激酶受體通路。近來的研究已證實，酪氨酸激酶/Ras通路中的一種接合體蛋白Shc，作為一種關(guān)鍵中間蛋白，可把來自上面所述的GPCR通路的信息轉(zhuǎn)遞給酪氨酸激酶通路(見圖2)(Lev.等，1995，Nature 376737)。Shc的活化是鈣依賴的。因此，阻斷導(dǎo)致血管平滑肌細(xì)胞增殖的共同信號傳輸通道轉(zhuǎn)活化的選擇性抑制劑的伍用將會協(xié)同發(fā)揮作用，從而防止PTCA或其他心血管或一般血管操作后痙攣和血管再狹窄發(fā)生。若干特例簡述如下。
b.PKC抑制劑和鈣通道拮抗劑之間的協(xié)同相互作用在這種情況下，由于GPCR和酪氨酸激酶信號傳輸通道之間的“交談”(見圖2)，在達(dá)到血管擴張和增殖抑制方面，產(chǎn)生PKC抑制劑和鈣通道拮抗劑之間的協(xié)同相互作用。聯(lián)合應(yīng)用的基本原理是基于這些藥物具有不同的分子作用機理這樣一個事實。如前所述，GPCR興奮導(dǎo)致蛋白激酶C的活化以及由于鈣從胞內(nèi)庫釋放而引起的胞漿鈣水平增高。鈣活化的PKC在細(xì)胞內(nèi)反應(yīng)的轉(zhuǎn)導(dǎo)方面，是一種中心控制點。從GPCR激動通路經(jīng)PKC引起的“交談”可引起血管平滑肌細(xì)胞的有絲分裂發(fā)生，因此鈣通道拮抗劑起直接阻斷痙攣并通過抑制She活化進(jìn)一步防止增殖的活化這樣二種雙重作用。相反，PKC抑制劑作用于該通路的部分，導(dǎo)致收縮。
c.PKC抑制劑，5-HT2拮抗劑和ETA拮抗劑的協(xié)同作用5-HT2受體族系含三個成員，命名為5-HT2A，5-HT2B和5-HT2C，它們都具有這樣的共同性質(zhì)；與磷脂酰肌醇更新和細(xì)胞內(nèi)鈣濃度增高相關(guān)聯(lián)(Hoyer等，1988；Hartig，等，1989)。這些受體的分布包括血管平滑肌和血小板，鑒于其定位特點，這些5-TH受體在介導(dǎo)痙攣，栓塞和再狹窄方面是重要的。業(yè)已發(fā)現(xiàn)，由ETA受體活化引起的平滑肌細(xì)胞中胞內(nèi)鈣水平升高的維持期需要胞外鈣，并至少部分地被地平所阻斷。由于5-HT2受體和ETA受體的活化都是通過鈣介導(dǎo)的，當(dāng)外科溶液中這兩種受體拮抗劑伍用時，為了協(xié)同增強拮抗劑對這二種受體的作用，PKC抑制劑的加入是所希望的(見圖2和圖4)。
d.蛋白酪氨酸激酶抑制劑和鈣通道拮抗劑的協(xié)同作用。
PDGF(或堿性成纖維細(xì)胞生長因子或胰島素樣生長因子-1)的有絲分裂作用是通過具有內(nèi)在蛋白酪氨酸激酶活性的受體介導(dǎo)的。供PDGF磷酸化的底物很多，這些底物可導(dǎo)致有絲分裂活化的蛋白激酶(MAPK)的活化并最終導(dǎo)致增殖(見圖5)。內(nèi)皮素，5-HT和凝血酶受體屆于G蛋白偶聯(lián)的超族系的成員，可觸發(fā)包括胞內(nèi)鈣增加在內(nèi)的信號傳送通路，導(dǎo)致漿膜上鈣通道的活化。這樣，鈣通道拮抗劑就干擾由這里GPCR所采用的共同機制。近年已證明，包括內(nèi)皮素和舒緩激肽在內(nèi)的某些GPCRs的活化，導(dǎo)致許多胞內(nèi)蛋白中酪氨酸磷酸化的迅速增加。一部分磷酸化的蛋白類似于已知為有絲分裂刺激所必須的那些蛋白。該過程如此迅速，以至在數(shù)秒鐘內(nèi)就能檢查出變化，而且受作用的(分子)靶看來在有絲分裂發(fā)生中起作用。這些酪氨酸磷酸化過程不能被選擇性PKC抑制劑所阻斷，表觀上也不受胞內(nèi)鈣增加介導(dǎo)。這樣，由于GPCR通道和酪氨酸磷酸化通過這樣二條獨立通道能促使血管平滑肌細(xì)胞進(jìn)入增殖狀態(tài)，因此阻斷二條獨立的信號傳送臂是必要的。這就是外科溶液中鈣通道拮抗劑和酪氨酸激酶抑制劑之間協(xié)同相互作用的基礎(chǔ)。因為蛋白酪氨酸激酶抑制劑在防止血管平滑肌細(xì)胞增殖方面的作用經(jīng)由鈣和蛋白激酶C參與的通道，通過獨立的分子通道(前面所述的)而產(chǎn)生，預(yù)測鈣通道拮抗劑和蛋白酪氨酸激酶抑制劑二類藥物伍用在抑制痙攣和再狹窄方面的效果比二類藥物中的一種單用好。
c.蛋白質(zhì)酪氨酸激酶抑制劑和凝血酶受體拮抗劑的協(xié)同作用凝血酶通過GPCR超族系的另一個成員凝血酶受體，介導(dǎo)其作用。與該受體的結(jié)合促進(jìn)血小板凝聚，平滑肌細(xì)胞收縮和有絲分裂發(fā)生。信號傳送通過多通道實現(xiàn)；經(jīng)由G蛋白的磷脂酶(PLC)活化通道和酪氨酸激酶活化通道。酪氨酸激酶活性的活化也為血管平滑肌細(xì)胞的有絲分裂發(fā)生所必須。實驗已證明，采用特異性酪氨酸激酶抑制劑的抑制作用有效地阻斷凝血酶引起的有絲分裂，雖然由測定胞內(nèi)鈣含量所監(jiān)測到的，其對PLC通路無作用。(Weiss和Nucitelli，1992；J.Biol.Chem.2675608-5613)。因為蛋白酪氨酸激酶抑制劑防止血管平滑肌細(xì)胞增殖這種作用經(jīng)由鈣和蛋白激酶C參與的途徑，通過獨立的分子通道(前面所述的)而產(chǎn)生，預(yù)測蛋白酪氨酸激酶抑制劑和凝血酶受體拮抗劑的伍周在抑制血小板凝聚痙攣和再狹窄方面的效果會比二類藥物中的一種單獨應(yīng)用好。
VI.施用的方法本發(fā)明的溶液有多種施用，供包括手術(shù)的，診斷的和治療技術(shù)在內(nèi)的各種手術(shù)和介入操作使用。該中洗液供圍術(shù)期在解剖學(xué)上關(guān)節(jié)的內(nèi)窺鏡外科，泌尿科操作和心血管和一般血管內(nèi)診斷和治療操作期間使用，并供普通外科使用。正如本文始終所采用的那樣，術(shù)語“圍術(shù)期”是想包括操作期間應(yīng)用，操作前和操作期間聯(lián)合應(yīng)用，操作期間和操作后聯(lián)合應(yīng)用，操作前，操作期間和操作后聯(lián)合應(yīng)用。該溶液最好在操作前和(或)操作后以及操作期間一起使用。這樣的操作通常采用生理沖洗液，如生鹽水或加入乳酸鹽的林格氏溶液，由本領(lǐng)域的技術(shù)人員用到外科部位。本發(fā)明的方法涉及用本發(fā)明的抗痛/抗炎/抗痙攣/抗再狹窄的沖洗液替代普通的沖洗液。在外科操作開始之前將該沖洗液應(yīng)用到傷口或外科部位，最好在組織創(chuàng)傷之前就施用，并一直持續(xù)到操作結(jié)束，以搶先阻斷疼痛和炎癥，痙攣和再狹窄。正如本文自始至終所采用的，“沖洗液”一詞是想表示用液流沖洗傷口或解剖學(xué)結(jié)構(gòu)。術(shù)語“應(yīng)用”一詞是想把局部導(dǎo)入本發(fā)明溶液的沖洗和其他方法都包括在內(nèi)，例如，把該溶液的一種可形成膠體的劑型導(dǎo)入到手術(shù)部位，于是在整個操作過程中該膠化的溶液保留在該部位。正如本文自始至終所采用的，“連續(xù)地”一詞是想把以足以維持預(yù)先確定的所用藥物局部治療濃度的用藥頻率反復(fù)地經(jīng)常地沖洗傷口；這種情況，以及可能有手術(shù)方法本身需要采取的中途停止沖洗液沖洗這種用法也考慮進(jìn)去。
本發(fā)明溶液中所列的每種藥物的濃度，就是該藥在沒有代謝性轉(zhuǎn)化的條件下，局部地輸送到手術(shù)部位，以達(dá)到預(yù)先確定的該手術(shù)部位的效應(yīng)水平所采用的濃度。據(jù)了解，某一溶液中的藥物濃度可能需要調(diào)整，以便達(dá)到(account for)輸注時的局部稀釋度。例如，心血管應(yīng)用中，如果假設(shè)人冠狀動脈的平均血流量為每分鐘80ml，而該溶液經(jīng)由局部輸注導(dǎo)管的平均輸注速度為每分鐘5ml(即血液流速與溶液輸注速度比率為16∶1)，那么就需要把該溶液中的藥物濃度比所希望的體內(nèi)藥物濃度增高16倍。不需要根據(jù)全身分布情況調(diào)整溶液濃度來達(dá)到代謝性轉(zhuǎn)化或稀釋度，因為與口服，靜脈，皮下或肌內(nèi)應(yīng)用相反，局部給藥可避免這些情況。
可以使用本發(fā)明溶液的關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡檢查技術(shù)，作為非限定的舉例，包括膝部分半月板切除術(shù)和韌帶重建，肩肩峰整形術(shù)，rotator cuff清創(chuàng)術(shù)，肘滑膜切除術(shù)，以及腕和踝關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡檢查。本發(fā)明溶液以足以使關(guān)節(jié)腔膨脹的流速連續(xù)供給作內(nèi)部手術(shù)的關(guān)節(jié)，以移走手術(shù)碎片并能使關(guān)節(jié)內(nèi)部視野不受阻礙。
下面的實施例1中提供一種在這樣的關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡檢查期間適合于控制疼痛和水腫的沖洗液。對關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡檢查來說，優(yōu)選的溶液包括如下藥物的配伍應(yīng)用，最好全部藥物聯(lián)合應(yīng)用，或單用5-羥色胺2受體拮抗劑，5-羥色胺3受體拮抗劑，組織胺1受體拮抗劑，作用于1A，1B，1D，1F和/或1E受體的5-羥色胺受體激動劑，舒緩激肽1受體拮抗劑，舒緩激肽2受體拮抗劑，以及環(huán)氧合酶抑制劑。
由于這些疼痛/炎癥抑制藥物在圍術(shù)期直接局部應(yīng)用于手術(shù)部位，故該溶液所用的這些藥物的濃度極低。例如，每升沖洗液需要小于0.05mg阿米替林(一種適合的5-羥色胺2和組織胺1雙重受體拮抗劑)，以提供可抑制5-HT2和H1受體的局部組織所希望的有效藥物濃度。該劑量與阿米替林口服常用的起始劑量10-25mg相比，是極低的。這一基本原理同樣適用于抗痙攣藥和抗血管再狹窄藥，本發(fā)明的溶液中所采用的這二類藥用來減輕與泌尿道，心血管和一般血管操作有關(guān)的痙攣，抑制與心血管和一般血管操作有關(guān)的血管再狹窄。例如，每升沖洗液需要小于0.2mg尼索地平(一種合適的鈣通道拮抗劑)，以提供可抑制電壓依賴門控的L-亞型鈣通道所要求的局部組織有效藥物濃度。與尼索地平口服單一劑量20-40mg相比，此劑量是極低的。
在每一種本發(fā)明的外科用溶液中，各種藥物以低濃度加入，與用傳統(tǒng)的給藥方法為獲得所希望的治療效果所需要的藥物濃度和劑量相比，這些藥物以低劑量局部給予。經(jīng)其他給藥途徑(例如靜脈內(nèi)，皮下，肌內(nèi)或口服)給予相似劑量的藥物，獲得相等的治療效果是不可能的，因為所給的藥物經(jīng)受全身首過和二過代謝。
例如，采用大鼠關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡模型，本發(fā)明人按照本發(fā)明，檢查了5-HT2拮抗劑阿米替林抑制5-HT誘導(dǎo)的大鼠膝關(guān)節(jié)內(nèi)血漿外滲物的能力。在下面實施例VIII中更詳細(xì)敘述的這一研究比較了阿米替林在膝部位局部應(yīng)用(例如關(guān)節(jié)內(nèi))以及靜脈內(nèi)給予的治療劑量。結(jié)果證明，阿米替林關(guān)節(jié)內(nèi)給予所需要的劑量水平比經(jīng)靜脈途徑給予達(dá)到相同的治療效果所需要的劑量小約200倍。由于關(guān)節(jié)內(nèi)給予的藥物中只有一小部分被滑液組織吸收，二種給藥途徑之間血漿藥物水平的差別比阿米替林總劑量水平的差別大得多。
本發(fā)明的實施與關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡檢查或“開放”關(guān)節(jié)(如膝、肩等)的操作完成時向關(guān)節(jié)內(nèi)注射阿片制劑和/或局部麻藥的傳統(tǒng)做法相區(qū)別。本發(fā)明的溶液用于在整個外科操作過程中作連續(xù)灌注，以搶先抑制疼痛和炎癥。相反，局麻藥如利多卡因(0.5-2％溶液)恒速灌注獲得治療效果所必需的高濃度會造成明顯的全身毒性。
一旦本發(fā)明的操作完成，最好在手術(shù)部位注射或換句話說供應(yīng)高濃度的與本發(fā)明沖洗液中所采用的相同疼痛和炎癥抑制劑，作為阿片制劑的替代品或輔助用藥。
本發(fā)明的溶液在心血管和一般血管內(nèi)診斷和治療操作方面也有應(yīng)用，以有效地減少由血管損傷所產(chǎn)生的血管壁痙攣，血小板凝集，血管平滑肌細(xì)胞增殖和傷害感受器活化。此中提到動脈處理是想把在動脈系統(tǒng)中收獲和放置的移植物的處理包括在內(nèi)。適用于這樣的操作技術(shù)的溶液在本文下面的實施例II中公開。該心血管和一般血管溶液最好包括下列藥物的任意配伍，最好全部采用5-羥色胺2受體拮抗劑(Saxena，等，抑制5-羥色胺的激動劑和拮抗劑的心血管作用，心血管藥理學(xué)雜志(J.Cardiovasc Parmacol)15(Suppl 7)S17-S34(1990)；Douglas，1985)；5-羥色胺3受體拮抗劑，用以阻斷血管壁中交感神經(jīng)元和C-纖維傷害感受神經(jīng)元上這些受體的活化，這些受體的活化已證明能產(chǎn)生心動過緩和心動過速(Saxena，等1990)；舒緩激肽1受體拮抗劑；以及環(huán)氧合酶抑制劑，用以阻斷組織損傷部位前列腺素的產(chǎn)生，從而減輕疼痛和炎癥。此外，該心血管和一般血管溶液最好還含有5-羥色胺1B(也稱作5-羥色胺1Dβ)拮抗劑，因為已經(jīng)證明，5-羥色胺通過活化人5-羥色胺1B受體，產(chǎn)生明顯的血管痙攣。Kaumann，A.J.等，5-羥色胺1樣受體和5-羥色胺2受體不同程度參與5-羥色胺引起的離體人冠狀動脈收縮，循環(huán)(Circulation)901141-53(1994)。血管壁上5-羥色胺1B受體的激動作用導(dǎo)致血管收縮，這與前面所討論的神經(jīng)元中5-羥色胺1B受體的抑制作用正好相反。本發(fā)明的該心血管和一般血管溶液也可適當(dāng)?shù)負(fù)饺胍环N或多種本說明書所公開的抗再狹窄藥，后者可減少例如由血管成形術(shù)或旋轉(zhuǎn)式atherectomy所致的操作后血管再狹窄的發(fā)生率和嚴(yán)重性。
本發(fā)明溶液也用于減輕與用激光經(jīng)尿道行前列腺切除術(shù)和類似的泌尿科操作這樣一類泌尿科操作有關(guān)的疼痛和炎癥。此中提到溶液應(yīng)用于泌尿道或泌尿結(jié)構(gòu)，是想把應(yīng)用于泌尿道本身，膀胱、前列腺以及有關(guān)的結(jié)構(gòu)，包括在內(nèi)。研究業(yè)已證明，5-羥色胺，組織胺和舒緩激肽在下泌尿道組織中產(chǎn)生炎癥。Schwarta，M.M.，等，腎和下泌尿道血管滲漏組織胺，5-羥色胺和舒緩激肽的作用，實驗生物醫(yī)學(xué)學(xué)會會報(Proc.Soc.Exp.Biol Med)140535-539(1972)。適合于泌尿科操作使用的沖洗液在本文下面的實施例III中加以討論。該沖洗液最好包括下列藥物的配伍應(yīng)用，最好全部采用組織胺1受體拮抗劑，用以抑制組織胺引起的疼痛和炎癥；5HT3受體拮抗劑，用以阻斷外周C-纖維傷害感受神經(jīng)元上這些受體的活化；舒緩激肽1拮抗劑；舒緩激肽2拮抗劑；以及環(huán)氧合酶抑制劑，用以減輕組織損傷部位由前列腺素產(chǎn)生的疼痛和炎癥。該沖洗液中最好還加入抗痙藥，以防止尿道痙攣和膀胱壁痙攣。
本發(fā)明溶液中的部分溶液也可適當(dāng)?shù)負(fù)饺胍环N膠化劑，以產(chǎn)生稀凝膠。例如，這種可形成膠體的溶液可在泌尿道或動脈血管內(nèi)應(yīng)用，以輸送連續(xù)的，稀釋的，預(yù)先確定的局部藥物濃度。
本發(fā)明的溶液也可用于圍術(shù)期抑制外科傷口的疼痛和炎癥。實施例1中所公開的用于關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡檢查的溶液也可適用于傷口，用以控制疼痛和炎癥，并可用于外科操作，例如關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡檢查。實施例I溶液中的藥物也可二者挑一地?fù)饺牒齽┗蚋鄤┲?，供?yīng)用于傷口。
VII.實施例下面是按照本發(fā)明研制的沖洗液制劑，適用于某些手術(shù)操作，接著是利用本發(fā)明的藥物所作的三項臨床研究概述。
A.實施例I關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡檢查用沖洗液下面的制劑適用于關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡檢查期間解剖學(xué)關(guān)節(jié)的沖洗。與下面的實施例中陳述的其他沖洗液一樣，每種藥物溶于含生理電解質(zhì)的載體溶液中，如生理鹽水或加入乳酸鹽的林格氏液。藥物類型藥物濃度(nmol)治療優(yōu)選最優(yōu)選5-羥色胺2拮抗劑阿米替林0.1-1,000 50-500 1005-羥色胺3拮抗劑甲氧氯普胺 10-10,000 200-2,0001,000組織胺1拮抗劑 阿米替林0.1-1,000 50-500 2005-羥色胺1A，1B， 舒馬坦 1-1,00010-200 501D，1F抑制激動劑舒緩激肽1拮抗劑HOE140的1-1,00050-500 200[des-Arg10]衍生物舒緩激肽2拮抗劑 HOE 1401-1,00050-500 200B.實施例II心血管和一般血管治療性和診斷性操作用沖洗液生理性載體溶液中如下藥物及其濃度適用于心血管和一般血管操作期間沖洗手術(shù)部位。藥物類型藥物濃度(nmol)治療優(yōu)選最優(yōu)選5-羥色胺2拮抗劑 曲唑酮 0.1-2,000 50-500 2005-羥色胺3拮抗劑 甲氧氯普胺 10-10,000 200-2,000 1,0005-羥色胺1B拮抗劑 育享賓 0.1-1,000 50-500 200舒緩激肽1拮抗劑 HOE 140的 1-1,00050-500 200[des-Arg10]衍生物環(huán)氧合酶抑制劑 酮咯酸 100-10,000 500-5,000 3,000C.實施例III泌尿科操作用沖洗液生理載體溶液中如下藥物及其濃度適用于在泌尿科操作期間沖洗手術(shù)部位。藥物類型藥物濃度(nmol)治療優(yōu)選最優(yōu)選組織胺1拮抗劑特非那定 0.1-1,00050-500 2005-羥色胺3拮抗劑 甲氧氯普胺 10-10,000200-20001,000舒緩激肽1拮抗劑 HOE 140的1-1,000 50-500 200[des-Arg10]衍生物舒緩激肽2拮抗劑 HOE 140 1-1,000 50-500 200環(huán)氧合酶抑制劑 酮咯酸 100-10,000 500-5,000 3,000D.實施例IV供關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡和一般外科傷口應(yīng)用的沖洗液優(yōu)選如下藥物供關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡檢查和普通外科傷口的處理使用。雖然實施例1中列舉的溶液適合于本發(fā)明應(yīng)用，但下面的溶液因其預(yù)期的高效價更得到優(yōu)選。藥物類型藥物濃度(nmol)治療優(yōu)選最優(yōu)選5-羥色胺2拮抗劑阿米替林 0.1-1,00050-5002005-羥色胺3拮抗劑甲氧氯普胺 10-10,000200-2,000 1,000組織胺1拮抗劑 阿米替林 0.1-1,00050-5002005-羥色胺1A，1B， 舒馬坦 1-1,000 10-2001001D，1F抑制激動劑環(huán)氧合酶抑制劑 酮咯酸 100-10,000 500-5,000 3,000神經(jīng)激肽1拮抗劑GR 82334 1-1,000 10-500 200神經(jīng)激肽2拮抗劑(±)SR 48968 1-1,000 10-500 200嘌呤2X拮抗劑 PPADS100-100,000 10,000-50,000100,000ATP敏感的K+(-)吡那地爾 1-10,000100-1,000 500通道激動劑Ca2+通道拮抗劑硝苯地平 1-10,000100-5,000 1,000激肽釋放酶 抑肽酶 0.1-1,000 50-500 200E.實施例V供心血管和一般血管治療性和診斷性操作使用的備用沖洗液優(yōu)選出生理性載體溶液中如下的藥物和濃度范圍，供心血管和一般血管操作期間沖洗手術(shù)部位使用。同樣，該溶液與上面實施例II所列舉的溶液相比，因其效價更高而得到優(yōu)選。藥物類型藥物濃度(nmol)治療優(yōu)選最優(yōu)選5-羥色胺2拮抗劑 曲唑酮 0.1-2,00050-500 200環(huán)氧合酶抑制劑酮咯酸 100-10,000 500-5,000 3,000內(nèi)皮素拮抗劑 BQ 123 0.01-1,000 10-1,000 500ATP-敏感的K+(-)吡那地爾 1-10,000 100-1,000 500通道激動劑Ca2+通道拮抗劑 尼索地平 1-10,000 100-1,000 500一氧化氮供體 SIN-110-10,000100-1,000 500
F.實施例VI供泌尿科操作使用的備用沖洗液優(yōu)選出生理性載體溶液中如下的藥物和濃度范圍，供泌尿科操作期間沖洗手術(shù)部位使用。相信該溶液的效價比前面的實施例III中所列舉的溶液更高。藥物類型藥物濃度(nmol)治療優(yōu)選最優(yōu)選5-羥色胺2拮抗劑 LY53857 0.1-500 1-100 50組織胺1拮抗劑 特非那定0.1-1,00050-500 200環(huán)氧合酶抑制劑酮咯酸 100-10,000 500-5,000 3,000神經(jīng)激肽2拮抗劑 SR 489681-1,000 10-500 200嘌呤2X拮抗劑 PPADS 100-100,000 10,000-50,000100,000ATP-敏感的K+(-)吡那地爾 1-10,000 100-1,000 500通道激動劑Ca2+通道拮抗劑 硝苯吡啶1-10,000 100-5,000 1,000激肽釋放酶抑制劑 抑肽酶 0.1-1,00050-500 200一氧化氮供體 SIN-1 10-10,000100-1,000 500G.實施例VII心血管和一般血管抗再狹窄沖洗液優(yōu)選出生理載體溶液中如下的藥物和濃度范圍，供心血管和一般血管治療性和診斷性操作期間沖洗用。此優(yōu)選的溶液中的藥物也可以相同濃度加入到上面述及的實施例II和V或下面述及的實施例VIII中的心血管和一般血管沖洗液中，作為優(yōu)選的抗痙，抗再狹窄，抗疼痛/抗炎癥溶液。藥物類型藥物濃度(nmol)治療優(yōu)選最優(yōu)選凝血酶抑制劑 hirulog 0.2-20,000 2-2,000 200糖蛋白IIb/IIIa integrelin 0.1-10,000×Kd 1-1000×Kd 100×Kd受體阻斷劑PKC抑制劑 GF 109203X*0.1-10,000×Kd 1-1,000 200蛋白酪氨酸 tyrphostin 10-100,000 100-20,000 10,000激酶抑制劑 AG1296*也稱為Go 6850或Bisindoylmaleimide I(可從Warner-Lambert得到)H.實施例VIII供心血管和一般血管治療性和診斷性操作使用的備用沖洗液供心血管和一般血管治療性和診斷性操作使用的一種補加的優(yōu)選溶液的配方與前面所述實施例V中的配方相同，只是以下表所列濃度，F(xiàn)K 409(NOR-3)和FR 144420(NOR-4)二藥伍用替代一氧化氮(NO供體)SIN-1藥物類型藥物濃度(nmol)治療優(yōu)選最優(yōu)選NO供體 FK 409(NOR-3) 1-1,000 10-500 250NO供體 FR 144420(NOR-4) 10-10,000100-5000 1000I.實施例IX供關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡檢查和普通外科傷口使用的備用沖洗液供關(guān)節(jié)內(nèi)窺鏡檢查和普通外科沖洗用的可選擇的優(yōu)選溶液的配方與前面所述實施例IV中的溶液配方相同，只是按下表所列濃度作如下的替代，取消和補加1)用作為H1拮抗劑的新安替根替代阿米替林；2)取消激肽釋放酶抑制劑，抑肽酶；3)加入舒緩激肽1拮抗劑，[Leu9][des-Arg10]緩激肽；4)加入舒緩激肽2拮抗劑，HOE 140；5)加入μ-類阿片激動劑，芬太尼。藥物類型藥物濃度(nmol)治療優(yōu)選最優(yōu)選H1拮抗劑 新安替根0.1-1,0005-200100舒緩激肽1拮抗劑 [Leu9][des-Arg10] 0.1-500 10-200 100舒緩激肽2拮抗劑 HOE 140 1-1,000 50-500 200μ-類阿片激動劑 芬太尼 0.1-500 10-200 100J.實施例X泌尿道操作備用沖洗液泌尿道操作期間沖洗用的備用優(yōu)選溶液的配方與前面實施例VI中所述的相同，只是按下表所列濃度作如下的替代，取消和添加1)下列二藥伍用替代NO供體SIN-Ia.FK 409(NOR-3)b.FR 144490(NOR-4)2)取消激肽釋放酶抑制劑，抑肽酶；3)加入舒緩激肽1拮抗劑，[Leu9][des-Arg10]緩激肽；4)加入舒緩激肽2拮抗劑HOE 140。藥物類型藥物濃度(nmol)治療優(yōu)選最優(yōu)選NO供體FK 409(NOR-3)1-1,000 10-500250NO供體FR 1.444.20 10-10,000100-5000 1000(NOR-4)舒緩激肽1拮抗劑 [Leu9][des-Arg10] 0.1-500 10-200100緩激肽舒緩激肽2拮抗劑 HOE 140 1-1,000 50-500200K.實施例XI新西蘭大耳白兔正常Iliac動脈的氣囊擴張和組織胺和5-羥色胺受體阻斷對氣囊擴張反應(yīng)的影響本研究的目的有二點、首先，采用一種新的在體模型供研究動脈張力。氣囊擴張法血管成形術(shù)前后動脈直徑變化的時間過程在下面加以闡述。第二，然后通過在血管成形術(shù)前后選擇性地往動脈中灌注組織胺和5-羥色胺受體阻斷劑，研究組織胺和5-羥色胺聯(lián)合在調(diào)控該實驗裝置中的動脈張力方面的作用。
1.設(shè)計根據(jù)本研究是要說明在一組動脈中動脈腔直徑變化的時間過程，以及評價組織胺和5-羥色胺受體阻斷對第二組相似動脈中這些變化的影響。為了有利于兩個不同的組之間的比較，實驗期間二個組都用同樣的方法處理，只是所采用的灌注液的成分不同。在對照動物(動脈)，灌注液為生理鹽水(作為受試溶液的賦形劑)。組織胺和5-羥色胺受體阻斷處理過的動脈以與對照動物相同的速率和在相同的方案部分接受含阻斷藥的生理鹽水。特別的是，受試溶液包括(a)5-羥色胺3拮抗劑甲氧氯普胺，濃度為16.0μM；(b)5-羥色胺2拮抗劑曲唑酮，濃度為1.6μM；以及(c)組織胺拮抗劑異丙嗪，濃度為1.0μM。所有這些阻斷藥都溶于生理鹽水。受試溶液中的藥物濃度比輸注到手術(shù)部位的藥物濃度大16倍，這是由于髂動脈(每分鐘80ml)和溶液輸注導(dǎo)管(每分鐘5ml)之間的流速比為16∶1。該研究采用前瞻的，隨機的和設(shè)盲的方式進(jìn)行特定的動物組的分配是隨機的，灌注溶液的成分(單純的生理鹽水或含組織胺和5-羥色胺受體拮抗劑)對研究者是保密的，直至血管圖象分析完成。
2.動物方案該方案得到西雅圖退伍軍人事務(wù)醫(yī)學(xué)中心動物應(yīng)用委員會批準(zhǔn)，實驗設(shè)施得到美國實驗動物管理鑒定協(xié)會完全認(rèn)可。喂以普通兔飼料的3-4kg重雄性新西蘭白兔的髂動脈被用來研究。靜脈注射甲苯噻嗪(5mg/kg)和氯胺酮(35mg/kg)使動物鎮(zhèn)靜，切開頸部腹側(cè)正中線，以分離出頸動脈。結(jié)扎該動脈的遠(yuǎn)端，作動脈切開術(shù)，把French度標(biāo)為5號的導(dǎo)管插入降主動脈。記錄基線血壓和心率，然后以手工注射方式把76％碘帕醇(Squibb Diagnostics，Princeton，NJ)注入降主動脈，在35mm電影膠片(攝片頻率為每秒15張)上記錄遠(yuǎn)端主動脈和雙側(cè)髂動脈和血管造影。對于每張血管圖像，在放射照像的視場內(nèi)放置一校正物鏡，以便在作血管直徑測量時，供放大的校正之用。French標(biāo)度為2∶5號的灌注導(dǎo)管(Advanced Cardiovascular Systems，Santa Clara.CA)通過頸動脈鞘置入，固定于主動脈杈之上1-2cm。受試溶液-單純生理鹽水或含組織胺和5-羥色胺受體拮抗劑的生理鹽水-以每分鐘5ml的速率開始灌注，連續(xù)15分鐘。在進(jìn)入灌注5分鐘時，用前面描述的技術(shù)作第二次血管造影，然后在熒光鏡引導(dǎo)下將2.5mm氣囊血管成形術(shù)導(dǎo)管(the Lightning，Cordis Corp.，Miami，F(xiàn)L)迅速插入左髂動脈，接著插入右髂動脈。在每根髂動脈中，用骨狀界標(biāo)將氣囊導(dǎo)管小心定位于近端和遠(yuǎn)端深部股骨之間，將氣囊充氣30秒鐘，使壓力達(dá)12ATM。用放射照像反差劑的稀溶液充盈氣囊導(dǎo)管，以便充氣后的氣囊直徑能夠被記錄在電影膠片上。在灌注開始后平均為8分鐘時，迅速移除血管成形術(shù)導(dǎo)管，并將另一張血管造影照片記錄在電影膠片上。灌注一直持續(xù)到15分鐘時間點，并拍另一張血管造影照片(第4張)。然后停止灌注(已灌注總量為75ml溶液)，并將灌注導(dǎo)管移除。在30分鐘時間點(即灌注停止后15分鐘)，如前述記錄最后一張血管造影照片。在血管造影照相前15和30分鐘時間點時立即記錄血壓和心率。在最后一張血管造影照片后，靜脈注射過量麻醉藥將動物處死，取出髂動脈，浸入福爾馬林溶液中固定，供作組織學(xué)分析。
3.血管造影照片分析以每秒15張的攝片頻率將血管造影照片記錄在35mm電影膠片上。為了分析，將血管投影照片以5.5英尺的距離，從Vanquard投影儀上作投影。根據(jù)通過測量校正物為放大校正后手持圓規(guī)所作的測量，把相對于氣囊血管成形術(shù)部位的預(yù)先指定的位置處的髂動脈直徑記錄下來。分別在基線(受試溶液灌注開始前)，進(jìn)入灌注5分鐘，氣囊血管成形術(shù)后立即(受試溶液灌注開始后平均8分鐘)，在15分鐘(灌注剛結(jié)束前)和在30分鐘(灌注結(jié)束后15分鐘)諸時間點上作測量。在每根髂動脈的三個不同部位處作血管直徑測量氣囊充氣部位的近端，氣囊充氣部位，以及氣囊充氣部位的遠(yuǎn)端。
然后根據(jù)下面的公式將直徑測量轉(zhuǎn)換成面積測量面積＝(Pi)(直徑2)/4為了計算血管收縮，基線值用來表示最大動脈面積，血管收縮百分率按下式計算
血管收縮(％)＝[(基線面積-后來的時間點面積)÷基線面積]×1004.統(tǒng)計學(xué)方法所有數(shù)據(jù)都表達(dá)為平均值±平均值的1個標(biāo)準(zhǔn)誤差。對照動脈血管運動反應(yīng)的時間過程用具有重復(fù)測量校正的一元差分析(one wayanalysis ofvariance)作評價。在這以后用Scheffe檢測作各特定時間點之間數(shù)據(jù)的比較。一旦對照動脈中出現(xiàn)顯著血管收縮的時間點得到確定，則用多組方差分析法，在對照動脈出現(xiàn)顯著血管收縮的時間點上，以處理組為自變量，將對照動脈和用組織胺/5-羥色胺受體拮抗劑處理的動脈加以比較。為了否定事先提出的無差別假設(shè)，p值＜0.01被認(rèn)為差別顯著。統(tǒng)計學(xué)處理采用Windows 4.5版統(tǒng)計軟件(Statsoft.Tulsa，UK)進(jìn)行。
5.結(jié)果接受生理鹽水灌注的正常動脈氣囊血管成形術(shù)前后動脈直徑變化的時間過程在8只動物的16根動脈中加以評價(表23)。每根動脈分三個區(qū)段加以研究緊接來自氣囊充脹區(qū)段上游的近端區(qū)段，氣囊充脹區(qū)段以及緊接來自氣囊充脹區(qū)段下游的遠(yuǎn)端區(qū)段。近端和遠(yuǎn)端區(qū)段證明二者具有相似的動脈直徑變化圖譜在每一區(qū)段，各時間點加以比較時，動脈直徑都有顯著變化(近端區(qū)段，p＝0.0002；遠(yuǎn)端區(qū)段，p＜0.001，ANOVA)。Post hoc試驗的結(jié)果表明，在緊接血管成形術(shù)后的時間點，其血管直徑明顯小于每一區(qū)段在基線或在30分鐘時間點的血管直徑。另一方面，在5分鐘，15分鐘和30分鐘時間點每一區(qū)段的動脈直徑與基線直徑相似。氣囊充氣區(qū)段的動脈直徑變化比近端和遠(yuǎn)端區(qū)段小。該區(qū)段的基線直徑為1.82±0.05mm；用于血管成形術(shù)的氣囊充氣后的名義直線為2.5mm，實際測得的充氣氣囊直徑為2.20±0.03mm(p＜0.0001，與氣囊處理的區(qū)段的基線直徑相比)。因此，充氣后的氣囊引起氣囊充氣節(jié)段血管圓周的伸展，但從基線至30分鐘時間點血管腔直徑只有輕微的增加(1.82±0.05mm至1.94±0.07mm，根據(jù)Post hoc檢測，p＝NS)。
表23正常髂動脈氣囊充脹前后在特定時間點由血管造影照片測得的管腔直徑區(qū)段 基線5分鐘 PTA后立即 15分鐘 3分鐘近端12.18±0.7 2.03±0.7 1.81±0.08*2.00±0.08 2.23±0.08氣囊21.82±0.05 1.77±0.03 1.79±0.05 1.70±0.04 1.94±0.07遠(yuǎn)端31.76±0.04 1.68±0.04**1.43±0.04*1.54±0.03 1.69±0.06所有測量均以mm表示，平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差(Means±SEM)，PTA經(jīng)皮血管腔內(nèi)成形術(shù)。1P＝0.0002(ANOVA，組內(nèi)比較)。
2P＝0.03(ANOVA，組內(nèi)比較)。3P＜0.0001(ANOVA，組內(nèi)比較)，各時間點n＝16。
*p＜0.01，與基線和30分鐘時間點直徑測量比(Scheffe test供posthoc檢測比較)。
**p＜0.01，與PTA后即刻測量比(Scheffe test供posthoc檢測比較)。所有其他的post hoc比較用p＜0.01概率水平，都無明顯變化。
利用動脈腔直徑計算腔面積，然后通過5分鐘，血管成形術(shù)后即刻，15和30分鐘時間點的面積測量數(shù)據(jù)與基線測量數(shù)據(jù)比較，求出血管收縮百分率。以血管收縮百分率表達(dá)的近端和遠(yuǎn)端區(qū)段的數(shù)據(jù)在圖9中顯示；血管收縮量的經(jīng)時變化是顯著的(在近端區(qū)段，p＝0.0008；在遠(yuǎn)端區(qū)段，p＝0.0001，ANOVA)。post hoc試驗發(fā)現(xiàn)，血管成形術(shù)后即刻時間點上的血管收縮與30分鐘時間點上的收縮相比，差別顯著(在二個區(qū)段，p＜0.01)。在遠(yuǎn)端區(qū)段，血管成形術(shù)后即刻的血管收縮也明顯小于5分鐘時間點(p＜0.01)；采用post hoc試驗，其他各時間點內(nèi)的比較無明顯差別。
對照動脈的管腔變化可概括如下(1).在氣囊充氣后即刻，近端和遠(yuǎn)端動脈區(qū)段中出現(xiàn)基礎(chǔ)腔面積約比氣囊擴張區(qū)段損失約30％。這種程度的血管收縮。存在這樣一種傾向擴張前以及在15分鐘時間點(擴張后約7分鐘)，近端和遠(yuǎn)端區(qū)段血管收縮程度較小，但是到30分鐘時間點(擴張后約22分鐘)時，血管擴張的趨勢已替代前面的血管收縮；(2).在氣囊擴張區(qū)段，只存在較小的血管腔面積變化，而且盡管由于氣囊的應(yīng)用使擴張后的血管直徑明顯大于該區(qū)段的基礎(chǔ)直徑，但該擴張后的區(qū)段的管腔直徑并沒有明顯增加。這些發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致這樣一個結(jié)論這種假定的組織胺/5-羥色胺處理的影響可能只有在血管收縮存在的時間點上在近端和遠(yuǎn)端區(qū)段才是可檢出的。
這種組織胺/5-羥色胺受體阻斷溶液被灌注入16根動脈中(8只動物)。在12根動脈的所有各時間點上都獲得了血管造影圖像資料。在實驗動物各時間點上都測量了心率和收縮壓(表24)。在特定時間點內(nèi)二組動物作比較時，心率和收縮壓無差別。組織胺/5-羥色胺處理的動物基線收縮壓與30分鐘相比(-13±5mmHg，p＝0.04)有下降趨勢，心率與30分鐘相比(-26±10，p＝0.05)有減少趨勢。整個實驗期間對照動物內(nèi)心率和收縮壓都無改變。
表24對照和組織胺/5-羥色胺處理的動物收縮壓和心率測定組別基線 5分鐘 15分鐘 30分鐘(n) (n)(n)(n)收縮壓對照83±4(8)84±4(8) 82±6(8) 80±4(8)組織胺/5-羥色胺 93±5(6)87±9(4) 82±9(6) 80±8(6)心率對照221±18(5) 234±18(4) 217±23(5)227±22(5)組織胺/5-羥色胺 232±8(5) 232±8(5) 209±14(5)206±12(5)**收縮壓以mmHg表示，心率以每分鐘博動數(shù)表示。Mean±SEM。
組織胺/5-羥色胺處理動物內(nèi)基線收縮壓與30分鐘比，*p＝0.04，呈下降趨勢，基線心率與30分鐘比，**p＝0.05，呈下降趨勢。
用血管收縮百分率測量這一參數(shù)，將組織胺/5-羥色胺處理過的動脈近端和遠(yuǎn)端區(qū)段與對照動脈作了比較。圖10A顯示與對照動脈存在的血管收縮相比，組織胺/5-羥色胺灌注對近端區(qū)段血管收縮的影響。當(dāng)將二種處理的動物組在血管成形術(shù)后即刻基線處和15分鐘時間點處加以比較時，與生理鹽水對照相比，組織胺/5-羥色胺灌注導(dǎo)致血管收縮明顯減少(p＝0.003，2-way ANOVA)。二種處理的動物組遠(yuǎn)端區(qū)段的比較在圖10B中加以說明。盡管觀察到遠(yuǎn)端區(qū)段中平均血管直徑測量的差別，藥物溶液處理過的血管顯示其血管收縮程度在基線，血管成形術(shù)后即刻和15分鐘時間點上，小于生理鹽水處理過的對照血管，但是，這種差別并沒有達(dá)到統(tǒng)計學(xué)顯著水平(p＝0.32，2-way ANOVA)。無統(tǒng)計學(xué)顯著差別的原因可能是由于對照血管中血管收縮程度比預(yù)料的小。
L.實施例XII阿米替林對5-羥色胺誘導(dǎo)的膝關(guān)節(jié)血漿外滲的抑制作用-關(guān)節(jié)內(nèi)給藥與靜脈途徑給藥的比較為了比較5-羥色胺2受體拮抗劑阿米替林二種途徑給藥，進(jìn)行了下面的試驗在大鼠膝滑液炎癥模型上，(1)連續(xù)關(guān)節(jié)內(nèi)灌注，(2)作為對比，作靜脈注射。通過比較阿米替林經(jīng)以上二種途徑給予的效價和總用藥劑量，確定阿米替林抑制5-HT誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)血漿外滲的能力。
1.動物這些研究得到圣費蘭西斯科(舊金山)加利福尼亞大學(xué)研究所動物管理委員會的批準(zhǔn)。體重為300-450g的雄性Sprague-Dawley大鼠(Bantin和Kingman，F(xiàn)remont，CA)用于這些研究。在光照得到控制的條件下(光照從6AM到6PM)籠養(yǎng)大鼠，飼料和飲水不限。
2.血漿外滲用苯巴比妥鈉(65mg/kg)使大鼠麻醉后，尾靜脈注射伊文氏蘭(50mg/kg，注射體積為2.5ml/kg)，后者作為血漿蛋白外滲的標(biāo)記物。切開表層皮膚，暴露膝關(guān)節(jié)腔，把一30號針頭插入關(guān)節(jié)中，用作灌注液體。用Sag Instruments Syringe泵(341B型，Orion Reserch公司，波士頓，MA)控制灌注速度(250μl/分鐘)。在關(guān)節(jié)腔內(nèi)還插入一25號針頭，并以250μl/每分鐘的速度，用Sag Instruments Syringe泵(351型)作控制，將灌注液抽出。
將大鼠隨機分為三組(1)一部分大鼠只關(guān)節(jié)內(nèi)(IA)接受5-HT(1μlM)，(2)一部分大鼠靜脈內(nèi)(IV)接受阿米替林(劑量范圍為0.01-1.0mg/kg)，接著接受IA 5HT(1μM)，以及(3)一部分大鼠關(guān)節(jié)內(nèi)(IA)接受阿米替林(濃度范圍為1～100nM)，繼之以接受IA 5HT(1μM)加IA阿米替林。所有各組，每個實驗開始，通過關(guān)節(jié)內(nèi)灌注0.9％生理鹽水，在15分鐘內(nèi)收集三個灌注液樣品(每5分鐘一個)，取得基礎(chǔ)血漿外滲水平數(shù)據(jù)。然后給第一組經(jīng)IA給予5-HT，灌注全程25分鐘。每5分鐘收集一個灌注液樣品，共25分鐘。然后用分光光度計測定620nm波長處的吸光度—其與染料濃度成線性關(guān)系(Carr和Wilhelm，1964)-，求出樣品中伊文氏染料濃度。IV阿米替林組動物在尾靜脈注射伊文氏蘭期間給予阿米替林。然后膝關(guān)節(jié)灌以生理鹽水(基礎(chǔ))15分鐘，接著灌以5-HT(1μM)25分鐘。每5分鐘收集一次灌注液樣品，共25分鐘。然后用分光光度法分析樣品。在IA阿米替林組，于15分鐘生理鹽水灌注后，關(guān)節(jié)內(nèi)灌注阿米替林10分鐘，接著阿米替林與5-HT聯(lián)合灌注25分鐘。每5分鐘收集一管灌洗液，按同上分析方法加以分析。
某些大鼠膝關(guān)節(jié)由于下列原因被剔除出本研究膝關(guān)節(jié)的生理性損傷，或流入和流出配比不當(dāng)(灌注液中可查出有血液存在，血漿外滲基礎(chǔ)水平高，或由于針頭安置不當(dāng)引起的關(guān)節(jié)腫脹)。
a.5-HT誘導(dǎo)的血漿外滲在所有受試膝關(guān)節(jié)F(總數(shù)n＝22)中都測定了基礎(chǔ)血漿外滲值?；A(chǔ)血漿外滲水平是低的，620nm處的平均吸光度單位為0.022±0.003(平均值±平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤)。該基礎(chǔ)外滲水平在圖11和圖12中顯示，以虛線表示。
5-HT(1μM)灌注入大鼠膝關(guān)節(jié)產(chǎn)生基礎(chǔ)水平之上時間依賴的血漿外滲增加。在5-HT關(guān)節(jié)內(nèi)灌注25分鐘期間，15分鐘時達(dá)到血漿外滲最大值，并一直持續(xù)到25分鐘時灌注結(jié)束(未發(fā)表資料)。所以，所報告的5-HT引起的血漿外滲水平是每一實驗期間15，20和25分鐘三個時間點的平均值。5-HT引起的血漿外滲平均值為0.192±0.011，約為基礎(chǔ)外滲水平的8倍。此數(shù)據(jù)在圖11和圖12中以圖解表示，分別相當(dāng)于IV阿米替林的“0”劑量以及IA阿米替林的“0”劑量。
b.靜脈內(nèi)給予阿米替林對5-HT誘導(dǎo)的血漿外滲的影響如圖11所示，經(jīng)尾靜脈注射給予阿米替林產(chǎn)生劑量依賴的5-HT所誘導(dǎo)的血漿外滲的降低。IV阿米替林抑制由5-HT誘導(dǎo)的血漿外滲的IC50值約為0.025mg/kg。5-HT所誘導(dǎo)的血漿外滲可被IV1mg/kg阿米替林劑量完全抑制，平均血漿外滲為0.034±0.010。
c.關(guān)節(jié)內(nèi)給予阿米替林對5-HT誘導(dǎo)的血漿外滲的影響與基礎(chǔ)外滲水平相比，以增加關(guān)節(jié)內(nèi)濃度的方式單獨給予阿米替林并不影響血漿外滲水平，其血漿外滲平均為0.018±0.002(資料未發(fā)表)。阿米替林以增加濃度的方式與5-HT聯(lián)合灌注，如圖12所示，可產(chǎn)生濃度依賴的由5-HT所誘導(dǎo)的血漿外滲的減少。在3nM IA阿米替林存在下，5-HT所誘導(dǎo)的血漿外滲與單獨由5-HT所產(chǎn)生的相比，并無明顯差別，但是，30nM阿米替林與5-HT聯(lián)合灌注產(chǎn)生大于50％的抑制，而100nM阿米替林與5-HT聯(lián)合灌注使由5-HT所誘導(dǎo)的血漿外滲完全抑制。IA阿米替林抑制5-HT所誘導(dǎo)的血漿外滲的IC50值約為20nM。
本研究的主要發(fā)現(xiàn)是(1).大鼠膝關(guān)節(jié)內(nèi)灌注5-HT(1μM)可刺激血漿外滲，其血漿外滲量約為基礎(chǔ)水平的8倍。(2).不論靜脈內(nèi)還是關(guān)節(jié)內(nèi)給予5-HT受體拮抗劑阿米替林都能抑制由5-HT所誘導(dǎo)的血漿外滲。但是，二種給藥方法之間所給阿米替林總劑量是截然不同的。IV阿米替林抑制5-HT所誘導(dǎo)的血漿外滲的IC50為0.025mg/kg，或一只300g的成年大鼠需要7.5×10-3mg，IA阿米替林抑制5-HT所誘導(dǎo)的血漿外滲的IC50為20nM。由于該溶液每5分鐘灌注1ml，共25分鐘，故灌注入膝關(guān)節(jié)的總劑量為7ml，相當(dāng)于總劑量4.4×10-5mg阿米替林灌注入膝關(guān)節(jié)。該IA阿米替林劑量比IV阿米替林劑量低約200倍。而且，可能只有一小部分IA灌注的藥物被全身吸收，故導(dǎo)致(二種給藥途徑)給予的藥物總劑量差別甚至更大。
鑒于5-HT在外科性疼痛和炎癥方面可能起著重要作用，故像阿米替林這樣的5-HT拮抗劑如果在圍術(shù)期使用，可能是有益的。近來一次研究試圖確定口服阿米替林對手術(shù)后矯形外科性疼痛的影響(Kerrick等，1993)。低至50mg的口服劑量產(chǎn)生所不希望的CNS副反應(yīng)，如“身體健康感降低”。此外該研究還證明，口服阿米替林在手術(shù)后病人中產(chǎn)生的疼痛得分?jǐn)?shù)高于安慰劑(P0.05)。這是否是由于口服阿米替林所產(chǎn)生的全部不愉快，尚不清楚。相反，關(guān)節(jié)內(nèi)給藥途徑可以將極低的藥物劑量局部應(yīng)用到炎癥部位，故可能產(chǎn)生最大的療效，最小的副反應(yīng)。
M.實施例XIII心血管和一般血管溶液對兔動脈中旋轉(zhuǎn)式atherectomy引起的血管痙攣的影響1.受試溶液本研究采用一種沖洗液，其組成除下面二個藥外，同實施例V所提出的藥物。硝普鹽代替SIN-1作為一氧化氮供體，尼卡地平(nicardipine)代替尼索地平作為鈣通道拮抗劑。
根據(jù)以前所確定的硝普鹽藥理活性(EC50)，選擇該藥的濃度。該受試溶液中其他藥物的濃度以這些藥物與其同類受體的結(jié)合常數(shù)為基礎(chǔ)確定。而且以兔遠(yuǎn)端主動脈中血液流速80ml/分鐘和溶液輸送導(dǎo)液管中流速為5ml/分鐘這樣的條件為基礎(chǔ)，調(diào)整所有藥物濃度。把3種藥物混合在1ml或少于1ml的DMSO中，然后把這三種藥物連同其余三種藥物按其終濃度混合到生理鹽水中。所用的對照溶液由生理鹽水組成。受試溶液或?qū)φ杖芤阂?ml/分鐘的速率，連續(xù)20分鐘進(jìn)行輸注。在作血壓測量的時候短暫停止輸注是必要的。故在20分鐘給藥期內(nèi)，每只動物接受約95ml溶液。
2.動物方案該方案得到處置退伍軍人事務(wù)醫(yī)學(xué)中心動物利用委員會(SeatlleVeteran Affairs Medical Center Committee on Animal Use)的批準(zhǔn)，而該委員會是得到美國實驗動物管理鑒定協(xié)會(AAALAC)的認(rèn)可的。3-4公斤重雄性新西蘭白兔，喂以含2％膽固醇的兔飼料，共3-4周，然后其髂動脈加以研究。靜脈注射有效劑量的甲苯噻嗪(5mg/kg)和氯胺酮(35mg/kg)，使動物鎮(zhèn)靜，然后從頸前正中線向下切開，以分離頸動脈。結(jié)扎頸動脈遠(yuǎn)端，進(jìn)行動脈切開術(shù)，把5 French sheath插入降主動脈并定位于腎動脈水平。記錄基礎(chǔ)血壓和心率。把76％iopamidol(Squibb Diagnostics，Princeton，NJ)手工注入降主動脈，將遠(yuǎn)端主動脈和雙側(cè)髂動脈的血管造影圖像記錄在35mm電影膠片上(幀率5幀/秒)。
對每一幀血管造影圖像，在測量其直徑時，在X射線圖視野內(nèi)置一校準(zhǔn)物體，以便校正放大。通過the 5 French sheath的側(cè)臂，開始輸注前面所述的受試溶液或生理鹽水對照溶液(并傳送到遠(yuǎn)端主動脈)，輸注速度為5ml/分鐘，連續(xù)20分鐘。輸注進(jìn)行到5分鐘時，采用前述技術(shù)作第二次血管造影。然后把1.25mm或1.50mm的旋轉(zhuǎn)式atherectomy鉆(Heart Technology/Boston Scientific Inc)送入髂動脈。把旋轉(zhuǎn)式atherectomy鉆以150,000～200,000轉(zhuǎn)/分鐘(RPM)的轉(zhuǎn)速，3倍于準(zhǔn)線深度，送入每條髂動脈。在每條髂動脈，把旋轉(zhuǎn)式atherectomy鉆從遠(yuǎn)端主動脈送入到位于第一和第二深股骨分支之間的髂動脈中部。迅速移去旋轉(zhuǎn)式atherectomy鉆，在輸注開始后以平均8分鐘的速度把另一次血管造影記錄在電影膠片上。
輸注一直持續(xù)到20分鐘時間點，并進(jìn)行另一次血管造影(第四次)。然后停止輸注。總量約為95ml的對照或受試溶液已被輸注。在30分鐘時間點(停止輸注后15分鐘)按前述方法記錄最后的血管造影。在15和30分鐘二個時間點上，在臨做血管造影前，記錄血壓和心率。在最后一次血管造影后，靜脈注射大劑量麻醉藥，將動物行安樂死。
3.血管造影分析血管造影以每秒15幀的速度被記錄在35mm電影膠片上。在不知道處理安排的情況下，隨機復(fù)查血管造影。為便于分析，用一臺Vanguard投影儀，相距5.5英尺，將血管造影圖像作投影放大處理。每只動物的全部血管造影圖像都加以復(fù)檢，以確定髂動脈的解剖學(xué)，并確認(rèn)髂動脈中最大痙攣發(fā)生的部位。準(zhǔn)備一張動脈解剖圖，以幫助可靠地確定測量的位置。先對15分鐘時間點旋轉(zhuǎn)式atherectomy血管造影圖像作測量，接著以隨機次序?qū)δ侵粍游锏钠溆嘌茉煊斑M(jìn)行測量。采用手持電子測徑器(Brown & Sharps，Inc.N.Kingston.RI)作測量。在以下三個部位上測量髂動脈直徑髂動脈的近端至第一個深股動脈分支；痙攣最嚴(yán)重的部位(就所有情況而言，這種情況發(fā)生在第一和第二個深股動脈分支之間)；以及在遠(yuǎn)端部位(接近或遠(yuǎn)離髂動脈第二個深股動脈分支的起始部)。在下列各時間點上作血管直徑測量在基線處(受試溶液輸注開始前；開始輸注后5分鐘；行旋轉(zhuǎn)式atherectomy后即刻(受試溶液輸注開始后平均8分鐘)；輸注結(jié)束后剛好20分鐘(這是旋轉(zhuǎn)式atherectomy開始后15分鐘)；輸注結(jié)束后15分鐘(旋轉(zhuǎn)式atherectomy開始后30分鐘)。在每一幀血管造影圖像中，校準(zhǔn)物體都加以測量。
然后按下面的公式將直徑測量值轉(zhuǎn)換成面積測量值面積＝(Pi)(直徑2)/4
為了計算血管收縮，基線值用于代表最大動脈面積，并按下式計算出血管收縮百分率血管收縮％＝[(基線面積-較遲時間點面積)/基線面積]×1004.統(tǒng)計學(xué)方法所有數(shù)據(jù)以平均值±平均值的1個標(biāo)準(zhǔn)誤表示。對照動脈反復(fù)測量并經(jīng)校正的血管運動反應(yīng)的時間過程采用一元方差分析加以評價。特定時間點之間數(shù)據(jù)的特定后比較用Scheffe試驗進(jìn)行。在髂動脈特定部位上和在特定的時間點上，用多元方差分析(MANOVA)，把受試溶液處理的動脈與生理鹽水處理的動脈加以比較。為彌補沒有單一先驗假設(shè)，P＜0.01被認(rèn)為差別顯著。統(tǒng)計學(xué)分析用Windows修正版4.5統(tǒng)計軟件(Statsoft，Tulsa，OK)進(jìn)行。
5.結(jié)果4只動物的8條動脈接受生理鹽水溶液，7只動物的13條動脈接受受試溶液。在每條動脈中，不管接受的是何種溶液，都采用把旋轉(zhuǎn)錐從遠(yuǎn)端主動脈送到髂動脈中部的方法，進(jìn)行旋轉(zhuǎn)式atherectomy。這樣，近端髂動脈段和指定為最大血管收縮部位的髂動脈段都處于旋轉(zhuǎn)錐的作用之下。旋轉(zhuǎn)式atherectomy導(dǎo)管的準(zhǔn)線通過遠(yuǎn)端段，但旋轉(zhuǎn)式atherectomy導(dǎo)管本身的旋轉(zhuǎn)鉆并不進(jìn)入遠(yuǎn)端段。
用生理鹽水處理過的動脈在三個特定節(jié)段上的髂動脈直徑扼要列于表25。在近端節(jié)段中，髂動脈直徑在實驗的整個時間過程中均無明顯變化(P＝0.88，ANOVA)。在最大血管收縮的中部髂動脈中，血管直徑顯著縮小，最大縮小出現(xiàn)于進(jìn)行旋轉(zhuǎn)式atherectomy后15分鐘時間點上(比較全部5個時間點的測量結(jié)果，P＜0.0001，ANOVA)。在實驗的整個時間過程中，遠(yuǎn)端節(jié)段直徑無顯著變化(比較所有5個時間點，P＝0.19，ANOVA)，盡管在旋轉(zhuǎn)式atherectomy后即刻和15分鐘二個時間點上有血管直徑變得較小的趨勢。
表25生理鹽水處理的動脈特定時間點髂動脈腔直徑節(jié)段基線 開始輸注后RA后 RA后RA后5分鐘 即刻 15分鐘 30分鐘(n＝8) (n＝8)(n＝8) (n＝8) (n＝8)近端12.40±1.82.32±0.142.32±0.132.38±0.13 2.34±0.07*中端22.10±0.81.84±0.091.57±0.151.24±0.13 1.87±0.06**遠(yuǎn)端32.01±0.11.86±0.081.79±0.081.81±0.09 1.96±0.06***RA＝旋轉(zhuǎn)式1.近端髂動脈測量部位，靠近第一深股動脈分支2.處于最大血管收縮部位的中部髂動脈3.遠(yuǎn)端髂動脈測量部位，靠近或遠(yuǎn)離第二深股動脈分支*用ANOVA軟件，比較5個時間點上近端節(jié)段直徑，P＝0.88。
**用ANOVA軟件，比較5個時間點上出現(xiàn)最大血管收縮部位的血管直徑，P＝0.000007。
***用ANOVA軟件，比較5個時間點上遠(yuǎn)端節(jié)段的直徑，P＝0.19。
用受試溶液處理過的髂動脈直徑列于表26。13條動脈中有3條在輸注開始后5分鐘時間點上其血管造影相片未記錄下來，2條動脈(同一動物)在旋轉(zhuǎn)式atherectomy后30分鐘時間點上的血管造影相片資料被剔除，原因是這只動物在血管造影15分鐘時產(chǎn)生空氣栓，導(dǎo)致血液動力學(xué)不穩(wěn)定。因為在5個時間點上觀察的動脈數(shù)不等，這種數(shù)據(jù)的分析采用非ANOVA統(tǒng)計方法。還有顯而易見的一點是，受試溶液處理過的動脈不同節(jié)段內(nèi)直徑測量的變化程度在該實驗的整個時間過程中都小于在生理鹽水處理過的動脈中所見到的。
表26生理鹽水處理的動物特定時間點髂動脈腔直徑節(jié)段基線 開始輸注后RA后RA后 RA后(n＝13) 5分鐘 即刻15分鐘 30分鐘(n＝10) (n＝13) (n＝13) (n＝11)近端12.28±0.62.0±0.7 2.22±0.52.42±0.62.39±0.8*中端21.97±0.61.79±0.61.74±0.41.95±0.71.93±0.8**遠(yuǎn)端32.00±0.61.92±0.41.90±0.42.00±0.62.01±0.7***RA＝旋轉(zhuǎn)式1.近端髂動脈測量部位，靠近第一深股動脈分支2.處于最大血管收縮部位的中部髂動脈3.遠(yuǎn)端髂動脈測量部位，靠近或遠(yuǎn)離第二深股動脈分支本研究的基本目的是，生理鹽水處理的和受試溶液處理的動脈中的血管收縮的大小。血管收縮建立在從動脈直徑測量推導(dǎo)出來的動脈腔面積上。在(輸注開始后)5分鐘，旋轉(zhuǎn)式atherectomy后即刻及后面的幾個時間點上測得的腔面積值與基線面積值作比較，以計算面積的相對變化。如果后一時間上的血管腔面積小于基線腔面積，則此結(jié)果稱之為“血管收縮”，如果后一時間點上的血管腔面積比基線腔面積大，則稱之為“血管擴張”(表27，表28)。為了便于以二個處理組中都可能存在的最大觀察數(shù)作統(tǒng)計學(xué)分析，在旋轉(zhuǎn)式atherectomy后即刻和15分鐘二個時間點上把受試溶液和生理鹽水處理的動脈數(shù)據(jù)加以比較。
在近端段(圖13)，在旋轉(zhuǎn)式atherectomy后即刻時間點上，兩種處理方法的血管腔面積均無實質(zhì)性變化，但是在旋轉(zhuǎn)式atherectomy后15分鐘時間點上該節(jié)段血管稍微擴張。與該節(jié)段中生理鹽水處理相比，受試溶液處理并沒有改變旋轉(zhuǎn)式atherectomy造成的結(jié)果。但是在最大血管收縮部位的中段血管中(圖14)，受試溶液明顯減輕在生理鹽水處理的動脈中由旋轉(zhuǎn)式atherectomy所引起的血管收縮(P＝0.0004，為重復(fù)測量校準(zhǔn)過的MANOVA)。在遠(yuǎn)端段(圖15)，生理鹽水處理的動脈中幾乎沒有血管收縮反應(yīng)，受試溶液并沒有明顯改變對旋轉(zhuǎn)式atherectomy的應(yīng)答。
表27生理鹽水處理的動脈中在特定時間點上的血管收縮量(負(fù)值)或血管擴張量(正值)節(jié)段 輸注開始后 RA后RA后 RA后5分鐘 即刻15分鐘 30分鐘(n＝8)(n＝8) (n＝8) (n＝8)近端1-3％±.8％-1％±10％3％±8％3％±13％中端2-14％±7％-35％±10％ -58％±7％ -11％±.9％遠(yuǎn)端3-9％±.10％ -14％±.14％ -14％±10％ 2％±.12％1.近端髂動脈測量部位，靠近第一深股動脈分支2.處于最大血管收縮部位的中部髂動脈3.遠(yuǎn)端髂動脈測量部位，靠近或遠(yuǎn)離第二深股動脈分支表28受試溶液處理的動脈中在特定時間點上的血管收縮量(負(fù)值)和血管擴張量(正值)節(jié)段 輸注開始后 RA后RA后RA后5分鐘 即刻15分鐘 30分鐘(n＝10) (n＝13) (n＝13) (n＝11)近端1-17％±.5％-4％±3％14％±6％7％±9％中端2-14％±5％-20％±5％0.3％±7％ -5％±..5％遠(yuǎn)端3-8％±..4％-9％±..4％ 1％±4％ 3％±..6％1.近端髂動脈測量部位，靠近第一深股動脈分支2.處于最大血管收縮部位的中部髂動脈3.遠(yuǎn)端髂動脈測量部位，靠近或遠(yuǎn)離第二深股動脈分支生理鹽水和受試溶液處理的動脈中的血液動力學(xué)反應(yīng)摘要列于表29。與生理鹽水處理的動物相比，受試溶液處理的動物在溶液輸注期間維持相當(dāng)顯著的低血壓和明顯的心動過速。到輸注完成后15分鐘為止(或在旋轉(zhuǎn)式atherectomy后30分鐘時間點上，受試溶液處理的動物顯示，其血壓部分地，但不是全部地恢復(fù)到基線水平。
表29方案實施期間的血壓和心率組別 基線5分鐘 15分鐘 30分鐘(N) (N) (N) (N)心臟收縮血壓生理鹽水 83±9(4)93±6(3)92±11(4)83±10(4)*受試溶液 92±5(7)35±5(7)35±5(7) 46±5(7)**心率生理鹽水 202±16(3) 204±3(3) 198±22(3) 193±29(3)*受試溶液 187±111(7) 246±11(7) 240±5(7)247±16(7)***該組的收縮壓和心率無顯著變化(收縮壓的P值＝0.37，心率的P值＝0.94，ANOVA)**該組的收縮壓和心率呈非常顯著的變化(收縮壓的P值＜0.001，心率的P值＝0.002，ANOVA)。
6.研究摘要1.在高膽固醇血癥新西蘭白兔條件下作旋轉(zhuǎn)式atherectomy導(dǎo)致經(jīng)受旋轉(zhuǎn)錐的髂動脈中段明顯痙攣。在作旋轉(zhuǎn)式atherectomy后15分鐘痙攣最顯著，截止旋轉(zhuǎn)式atherectomy后30分鐘，在沒有藥物介入的條件下，血管痙攣已幾乎完全消退。
2.在本研究方案中所研究的旋轉(zhuǎn)式atherectomy處理的條件下，按照本發(fā)明用受試溶液處理幾乎完全消除中段髂動脈經(jīng)受旋轉(zhuǎn)鉆后所看到的血管痙攣。
3.在本研究方案所采用的給定藥物濃度下，用本發(fā)明的受試溶液處理導(dǎo)致在溶液輸注期間明顯的低血壓。在嚴(yán)重低血壓存在下，旋轉(zhuǎn)式atherectomy后的血管痙攣靠受試溶液的作用而減輕。
盡管對本發(fā)明的優(yōu)選實施方案已經(jīng)作了說明和闡述，但是，應(yīng)當(dāng)明白，在不違反本發(fā)明的精神和范圍的條件下，可以對公開的溶液和方法作各種改變。例如，根據(jù)在本文的公開內(nèi)容，可能找到作為替代的疼痛抑制藥物以及抗炎和抗痙攣藥物。所以打算只通過所附的權(quán)利要求的詳細(xì)說明來限定授權(quán)的專利證書的范圍。
權(quán)利要求
1.在血管操作期間搶先抑止血管再狹窄并選擇性地?fù)屜纫种铺弁?、炎癥和痙攣的方法，包括血管操作期間動脈內(nèi)輸注一種溶液，該溶液由多種藥物組成，而這些藥物是從存在于液體載體，由疼痛/炎癥抑制藥，痙攣抑制藥和血管再狹窄抑制藥組成的一組藥物中挑選出來的，這些藥物由于作用于多種不同的分子靶而被選擇，該溶液含有至少一種血管再狹窄抑制藥物，其中該溶液作局部應(yīng)用，并在圍術(shù)期應(yīng)用于手術(shù)的血管部位。
2.權(quán)利要求1中的方法，包括把該溶液連續(xù)地供給手術(shù)的血管部位。
3.權(quán)利要求2中的方法，包括用該溶液連續(xù)地沖洗手術(shù)的血管部位。
4.權(quán)利要求1中的方法，其中該溶液靠沖洗手術(shù)的血管部位而得以施用。
5.權(quán)利要求1中的方法，其中所施用的這種溶液至少含有一種痙攣抑制藥。
6.權(quán)利要求5中的方法，其中所施用的這種溶液還至少含有一種疼痛/炎癥抑制藥。
7.權(quán)利要求1中的方法，其中所施用的該溶液至少含有一種疼痛/炎癥抑制藥。
8.權(quán)利要求1中的方法，其中該溶液在不存在代謝性轉(zhuǎn)化的條件下，局部施用到手術(shù)的血管部位。
9.權(quán)利要求1中的方法，其中該溶液的圍術(shù)期施用包括該溶液的操作期間施用與操作前施周或操作后施用相結(jié)合。
10.權(quán)利要求9中的方法，其中該溶液的圍術(shù)期施用包括該溶液的操作前，操作期間和操作后施用。
11.權(quán)利要求9中的方法，其中該溶液被連續(xù)地施用到手術(shù)的血管部位。
12.權(quán)利要求1中的方法，其中該溶液中多種藥物中的每一種藥物以不大于100,000nmol的濃度局部給予。
13.權(quán)利要求12中的方法，其中該溶液中多種藥物中的每一種以不超過10,000nmol的濃度局部給予。
14.權(quán)利要求1的方法，其中施用的溶液中的多個藥劑之每一個以這樣的濃度被加入當(dāng)局部施用、無代謝轉(zhuǎn)化時，足以在手術(shù)血管部位提供預(yù)定的抑制效應(yīng)水平，該濃度低于假如以引起藥劑代謝轉(zhuǎn)化的方式施用，而在手術(shù)血管部位達(dá)到同樣預(yù)定的抑制效應(yīng)水平所需的濃度。
15.權(quán)利要求1中的方法，其中疼痛/炎癥抑制藥，如果選擇，選自由下列藥物所組成的一組藥物5-羥色胺受體拮抗劑；5-羥色胺受體激動劑；組織胺受體拮抗劑；舒緩激肽受體拮抗劑；激肽釋放酶抑制劑；速激肽受體拮抗劑，包括神經(jīng)激肽1受體亞型拮抗劑和神經(jīng)激肽2受體亞型拮抗劑；降鈣素基因相關(guān)肽受體拮抗劑；白細(xì)胞介素受體拮抗劑；磷脂酶抑制劑，包括PLA2同種型抑制劑和PLCY異形酶抑制劑；環(huán)氧合酶抑制劑；脂氧酶抑制劑；前列腺素類受體拮抗劑，包括類花生酸EP-1受體亞型拮抗劑和EP-4受體亞型拮抗劑以及凝血噁烷受體亞型拮抗劑；白細(xì)胞三烯受體拮抗劑，包括白細(xì)胞三烯B4受體亞型拮抗劑和D4受體亞型激動劑，類阿片受體激動劑，包括μ-阿片制劑受體亞型激動劑，δ-阿片制劑受體亞型激動劑以及κ-阿片制劑受體亞型激動劑；嘌呤受體激動劑和拮抗劑，包括P2Y受體激動劑和P2X受體拮抗劑；ATP-敏感的鉀通道開放劑；痙攣抑制藥，如果選擇，則選自由下列藥物組成的一組藥物；5-羥色胺2受體亞型拮抗劑，速激肽受體拮抗劑，一氧化氮供體，ATP-敏感的鉀通道開放劑，鈣通道拮抗劑，以及內(nèi)皮素受體拮抗劑；血管再狹窄抑制藥選自由下列藥物組成的一組藥物抗血小板藥，包括凝血酶抑制劑及其受體拮抗劑，嘌呤受體拮抗劑，凝血噁烷抑制劑及其受體拮抗劑以及血小板膜糖蛋白受體拮抗劑；細(xì)胞粘附分子拮抗劑，包括選擇蛋白抑制劑和整聯(lián)蛋白抑制劑；抗趨化劑；白細(xì)胞介素受體拮抗劑；以及細(xì)胞內(nèi)信號傳輸抑制劑，包括蛋白激酶C抑制劑和蛋白酪氨酸激酶抑制劑，細(xì)胞內(nèi)蛋白酪氨酸磷酸酶的調(diào)節(jié)劑，src同系物2domains以及鈣通道拮抗劑。
16.權(quán)利要求15中的方法，其中該溶液中多種藥物中的每一種以0.1～10,000倍于該藥解離常數(shù)的nmol濃度作局部用藥。
17.權(quán)利要求16中的方法，其中該溶液中多種藥物中的每一種以1.0～1000倍于該藥解離常數(shù)的nmol濃度作局部用藥。
18.權(quán)利要求17中的方法，其中該溶液中多種藥物中的每一種以100倍于該藥解離常數(shù)的nmol濃度作局部用藥。
19.權(quán)利要求15中的方法，其中疼痛/炎癥抑制藥，如果加以選擇，則以下列濃度作局部給予5-羥色胺受體拮抗劑0.1～10,000nmol；5-羥色胺受體激動劑0.1～2000nmol；組織胺受體拮抗劑0.01～1000nmol；舒緩激肽受體拮抗劑0.1～10,000nmol；激肽釋放酶抑制劑0.1～1000nmol；神經(jīng)激肽受體1受體亞型拮抗劑0.1～10,000nmol；神經(jīng)激肽2受體亞型拮抗劑1.0～10,000nmol；降鈣素基因相關(guān)肽拮抗劑1～1000nmol；白細(xì)胞介素受體拮抗劑1～1000nmol；PLA2同種型抑制劑100～100,000nmol；環(huán)氧合酶抑制劑100～200,000nmol；脂氧酶抑制劑100～10,000nmol；類花生酸EP-1受體亞型拮抗劑100～10,000nmol；白細(xì)胞三烯B4受體亞型拮抗劑100～10,000nmol；μ-阿片制劑受體亞型激動劑0.1～500nmol，δ-阿片制劑受體亞型激動劑0.1～500nmol；κ-阿片制劑受體亞型激動劑0.1～500nmol；嘌呤受體拮抗劑100～100,000nmol，ATP-敏感的鉀通道開放劑0.1～10,000nmol；所選擇的痙攣抑制藥，如加以選擇，則以下列濃度作局部給予5-羥色胺2受體拮抗劑0.1～10,000nmol；速激肽受體拮抗劑0.1～10,000nmol；一氧化氮供體1.0～10,000nmol；ATP-敏感的鉀通道開放劑0.1～10,000nmol；鈣通道拮抗劑1.0～10,000nmol；以及內(nèi)皮素受體拮抗劑0.01～100,000nmol；所選擇的再狹窄抑制藥，如加以選擇，則以下列濃度局部給予抗血小板藥0.00003～20,000nmol；細(xì)胞粘附分子抑制劑0.1～10,000nmol×Kdnmol；蛋白激酶C抑制劑0.1～50,000nmol；蛋白酪氨酸激酶抑制劑0.1～100,000nmol；鈣通道拮抗劑1.0～10,000nmol。
20.權(quán)利要求1中的方法，其中所施用的溶液由以下藥物組成5-羥色胺2受體亞型拮抗劑以50～500nmol濃度加入；環(huán)氧合酶抑制劑以50～500nmol濃度加入；內(nèi)皮素受體拮抗劑10～1000nmol濃度加入；ATP-敏感的鉀通道開放劑以100～1000nmol濃度加入；鈣通道拮抗劑以100～1000nmol濃度加入；一氧化氮供體以10～5000nmol濃度加入。
21.權(quán)利要求20中的方法，其中所施用的溶液還至少含有另外一種補加的再狹窄抑制藥。
22.權(quán)利要求21中的方法，其中所施用的溶液還包括以下另外加入的藥物凝血酶抑制劑或受體拮抗劑以2.0～2000nmol濃度加入；血小板膜糖蛋白受體拮抗劑以1.0～1000Kdnmol濃度加入；蛋白激酶C抑制劑以1～1000nmol濃度加入；蛋白酪氨酸激酶抑制劑以100～20,000nmol濃度加入。
23.在血管操作中搶先抑制再狹窄和選擇性地?fù)屜纫种铺弁?、炎癥和痙攣的方法，包括在血管操作期間，動脈內(nèi)輸注一種溶液，該溶液含有多種藥物，選自存在于液體介質(zhì)中的由疼痛/炎癥抑制藥，痙攣抑制藥和再狹窄抑制藥所組成的一組藥物，這些藥物由對多種不同的分子靶有作用而被選擇，該溶液至少含一種再狹窄抑制藥，其中該溶液在圍術(shù)期和不存在代謝性轉(zhuǎn)化的條件下在手術(shù)的血管部位使用。
24.在血管操作期間用于搶先抑制再狹窄，選擇性地?fù)屜纫种铺弁?、炎癥和痙攣的一種溶液，該溶液含有多種藥物，選自存在于液體介質(zhì)的由疼痛和炎癥抑制藥，痙攣抑制藥和血管再狹窄抑制藥所組成的一組藥物，該溶液至少含一種再狹窄抑制藥。為了達(dá)到預(yù)先確定的手術(shù)的血管部位抑制作用程度，該溶液中每種藥物的濃度就是該藥在不存在代謝性轉(zhuǎn)化的條件下局部地輸注到手術(shù)的血管部位所要求的濃度。
25.權(quán)利要求24中的溶液，其中該溶液至少含有一種痙攣抑制藥。
26.權(quán)利要求25中的溶液，而該溶液進(jìn)一步含有至少一種疼痛/炎癥抑制劑。
27.權(quán)利要求24中的溶液，其中該溶液至少含有一種疼痛/炎癥抑制藥。
28.權(quán)利要求24中的溶液，其中該溶液中多種藥物中的每一種以不超過100,000nmol濃度加入，在不存在代謝性轉(zhuǎn)化的條件下，調(diào)整其在其意欲局部輸注部位使用的稀釋度。
29.權(quán)利要求28中的溶液，其中該溶液中多種藥物中的每一種以不大于10,000nmol濃度加入，在不存在代謝性轉(zhuǎn)化的條件下，調(diào)整其在其試圖局部輸注部位使用的稀釋度。
30.權(quán)利要求24的溶液，其中該溶液中的多個藥劑之每一個以這樣的濃度被加入該濃度低于假如以引起藥劑代謝轉(zhuǎn)化的方式施用，而在手術(shù)血管部位達(dá)到同樣預(yù)定的抑制效應(yīng)水平所需的濃度。
31.權(quán)利要求24中的溶液，其中疼痛/炎癥抑制藥，如果加以選擇，則選自由下列藥物組成的一組藥物5-羥色胺受體拮抗劑；5-羥色胺受體激動劑；組織胺受體拮抗劑；舒緩激肽受體拮抗劑；激肽釋放酶抑制劑；速激肽受體拮抗劑，包括神經(jīng)激肽1受體亞型拮抗劑和神經(jīng)激肽2受體亞型拮抗劑；降鈣素基因相關(guān)肽拮抗劑；白細(xì)胞介素拮抗劑；磷脂酶抑制劑，包括PLA2同種型抑制劑和PLCY異形酶抑制劑；環(huán)氧合酶抑制劑；脂氧酶抑制劑；前列腺素類受體拮抗劑，包括類花生酸EP-1受體亞型拮抗劑和類花生酸EP-4受體亞型拮抗劑和凝血噁烷受體亞型拮抗劑；白細(xì)胞三烯受體拮抗劑，包括白細(xì)胞三烯B4受體亞型拮抗劑和D4受體亞型拮抗劑，類阿片受體激動劑，包括μ-阿片制劑受體亞型激動劑，δ-阿片制劑受體亞型激動劑和κ-阿片制劑受體亞型激動劑；嘌呤受體激動劑和拮抗劑，包括P2Y受體激動劑和P2X受體拮抗劑；ATP-敏感的鉀通道開放劑；痙攣抑制藥，如果加以選擇，則選自由下列藥物組成的一組藥物5-羥色胺2受體亞型拮抗劑；速激肽受體拮抗劑；一氧化氮供體；ATP-敏感的鉀通道開放劑；鈣通道拮抗劑；以及內(nèi)皮素受體拮抗劑；血管再狹窄藥選自由下列藥物組成的一組藥物抗血小板藥，包括凝血酶抑制劑和受體拮抗劑，嘌呤受體拮抗劑，凝血噁烷抑制劑和受體拮抗劑，以及血小板膜糖蛋白受體拮抗劑；細(xì)胞粘附分子抑制劑，包括選擇蛋白抑制劑和整聯(lián)蛋白抑制劑；抗趨化性的藥物；白細(xì)胞介素受體拮抗劑；和細(xì)胞內(nèi)信號傳輸抑制劑，包括蛋白激酶C抑制劑和蛋白酪氨酸激酶抑制劑，細(xì)胞內(nèi)蛋白酪氨酸磷酸酶的調(diào)節(jié)劑，sro同系物2domains和鈣通道拮抗劑。
32.權(quán)利要求31中的溶液，其中該溶液中多種藥物中的每一種以0.1～10,000倍于該藥解離常數(shù)的nmol濃度加入，在不存在代謝性轉(zhuǎn)化的條件下，調(diào)整其在試圖局部輸注部位使用的稀釋度。
33.權(quán)利要求32中的溶液，其中該溶液中多種藥物中的每一種以1.0～1000倍于該藥解離常數(shù)的nmol濃度加入，在不存在代謝性轉(zhuǎn)化的條件下，調(diào)整其在試圖的局部輸注部位使用的稀釋度。
34.權(quán)利要求33中的溶液，其中該溶液中多種藥物中的每一種以100倍于該藥解離常數(shù)的nmol濃度加入。在不存在代謝性轉(zhuǎn)化的條件下，調(diào)整其在試圖局部輸注部位使用的稀釋度。
35.權(quán)利要求31中的溶液，其中疼痛/炎癥抑制藥，如果加以選擇，則以下藥物濃度加入5-羥色胺受體拮抗劑0.1～10,000nmol；5-羥色胺受體激動劑0.1～2,000nmol；組織胺受體拮抗劑0.01～1000nmol；舒緩激肽受體拮抗劑0.11～10,000nmol；激肽釋放酶抑制劑0.1～1000nmol；神經(jīng)激肽受體1受體亞型拮抗劑0.1～10,000nmol；神經(jīng)激肽2受體亞型拮抗劑1.0～10,000nmol；降鈣素基因相關(guān)的肽受體拮抗劑1～1000nmol；白細(xì)胞介素受體拮抗劑1～1000nmol；PLA2同種型抑制劑100～100,000nmol；環(huán)氧合酶抑制劑100～200,000nmol；脂氧酶抑制劑100～10,000nmol；類花生酸EP-1受體亞型拮抗劑100～10,000nmol；白細(xì)胞三烯B4受體亞型拮抗劑100～10,000nmol；μ-阿片制劑受體亞型激動劑0.1～500nmol，δ-阿片制劑受體亞型激動劑0.1～500nmol；κ-阿片制劑受體亞型激動劑0.1～500nmol；嘌呤受體拮抗劑100～100,000nmol，ATP-敏感的鉀通道開放劑0.1～10,000nmol。痙攣抑制藥，如果加以選擇，則以以下藥物濃度加入5-羥色胺受體拮抗劑0.1～10,000nmol；速激肽受體拮抗劑0.1～10,000nmol；一氧化氮供體1.0～10,000nmol；ATP-敏感的鉀通道開放劑0.1～10,000nmol；鈣通道拮抗劑1.0～10,000nmol；以及內(nèi)皮素受體拮抗劑0.01～100,000nmol；和再狹窄抑制劑，如果加以選擇，則以下列藥物濃度加入抗血小板藥0.00003～20,000nmol；細(xì)胞粘附分子抑制劑0.1～10,000nmol×Kdnmol；蛋白激酶C抑制劑0.1～50,000nmol；蛋白酪氨酸激酶抑制劑0.1～100,000nmol；和鈣通道拮抗劑1.0～10,000nmol。
36.權(quán)利要求24中的溶液，其中該溶液的組成如下5-羥色胺受體亞型拮抗劑以50～500nmol的濃度加入；環(huán)氧合酶抑制劑以500～5000nmol濃度加入；內(nèi)皮素受體拮抗劑以10～1000nmol的濃度加入；ATP-敏感的鉀通道開放劑以100～1000nmol濃度加入；鈣通道拮抗劑以100～1000nmol的濃度加入；以及一氧化氮供體以10～5000nmol的濃度加入。
37.權(quán)利要求36中的溶液，其中該溶液進(jìn)一步含有至少一種補加的再狹窄抑制藥。
38.權(quán)利要求37中的方法，其中該至少一種補加的再狹窄藥包括凝血酶抑制劑或受體拮抗劑以2.0～2000nmol的濃度加入；血小板膜糖蛋白受體拮抗劑以1.0～1000×Kdnmol的濃度加入；蛋白激酶C抑制劑以10～5000nmol濃度加入；和蛋白酪氨酸激酶抑制劑以10～20,000nmol的濃度摻入。
全文摘要
用圍術(shù)期用于抑制由心血管或一般血管治療性和診斷性操作引起的各種疼痛、炎癥、痙攣和再狹窄等病理過程的方法和溶液,該溶液優(yōu)先入選多種疼痛/炎癥抑制藥和痙攣抑制藥物,用生理性載體如生理鹽水或加入乳酸鹽的林格氏溶液,配制成稀濃度藥物溶液。經(jīng)過特別優(yōu)選的用于心血管和一般血管操作的本發(fā)明溶液的實施方案還包括抗再狹窄藥物。本溶液經(jīng)血管腔導(dǎo)入,用于手術(shù)或介入性或診斷性操作期間連續(xù)沖洗傷口,以搶先抑制疼痛和炎癥,血管和非血管平滑肌痙攣以及血管再狹窄,從而避免與這些藥物大劑量口服,肌肉內(nèi),皮下,或靜脈內(nèi)應(yīng)用有關(guān)的不良副反應(yīng)。一種用于抑制疼痛、炎癥、血管痙攣和再狹窄的優(yōu)選溶液包括與－羥色胺2拮抗劑,環(huán)氧酶抑制劑,內(nèi)皮素拮抗劑,ATP敏感的K
文檔編號A61P29/00GK1209066SQ96199973
公開日1999年2月24日 申請日期1996年6月26日 優(yōu)先權(quán)日1995年12月12日
發(fā)明者G·A·德莫普羅斯, P·A·皮爾斯, J·M·赫爾茲 申請人:奧默羅斯醫(yī)學(xué)系統(tǒng)有限公司