專利名稱：用于防治干眼病或由其引起的疾病的藥物組合物方法和裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于防治干眼病或由其引起的疾病的藥物組合物，方法和裝置。
“干眼病”一般是指眼干燥、淚少、干性角膜結(jié)膜炎等。但由于干眼病的概念過(guò)于寬泛，并且一般不了解干眼病的病因，因此認(rèn)為干眼病并非只是單一疾病，而是一種眼表疾病，包括被稱作干眼綜合征的疾病。目前已將干眼病定義為一種與角膜結(jié)膜損傷無(wú)關(guān)的眼淚性質(zhì)和數(shù)量異常的狀(Masakazu YAMADA等，Nippon Ganka Kiyo，43，1289-1293(1992))。根據(jù)該定義，干眼病的種類包括以下疾病，如淚少、淚缺乏、眼干燥、Sjogren綜合征、干性角膜結(jié)膜炎、Stevens-Johnson綜合征、眼類天皰瘡、眼瞼炎、眼瞼閉合不全、感覺(jué)神經(jīng)麻痹等。另外，干眼病的種類還包括與過(guò)敏性結(jié)膜炎有關(guān)的干眼病、病毒感染后的結(jié)膜干眼病和白內(nèi)障手術(shù)后干眼病。
此外，由于隱形眼鏡佩戴者的增多、在空調(diào)環(huán)境中度過(guò)的時(shí)間的增長(zhǎng)、以及由于電視、計(jì)算機(jī)和字處理器的廣泛應(yīng)用造成凝視VDT(電視(視覺(jué))顯示終端)屏幕的機(jī)會(huì)的增多，以及隨著近年來(lái)促進(jìn)干眼病發(fā)生的因素的增多，與隱形眼鏡佩戴有關(guān)的干眼病和與VDT操作有關(guān)的干眼病都在增長(zhǎng)。
另外，當(dāng)患有干眼病時(shí)，多數(shù)情況下淚中會(huì)缺少油層、水層和粘蛋白層，從而造成角膜結(jié)膜損傷。尤其是當(dāng)淚中缺少粘蛋白層時(shí)，角膜損傷嚴(yán)重，不僅易造成角膜上皮損傷以及由角膜上皮細(xì)胞損傷造成的角膜上皮侵蝕，還易造成角膜潰瘍(例如角膜基質(zhì)層潰瘍)和眼部傳染病。有時(shí)甚至需要角膜移植。這些是由干眼病引起的疾病。
目前，治療干眼病的方法并非對(duì)因治療，而進(jìn)行的僅僅是對(duì)癥治療。在對(duì)癥治療中，主要采用向眼部施用含有用以替代粘蛋白的粘彈性物質(zhì)(如甲基纖維素、硫酸軟骨素和透明質(zhì)酸)的人造淚。但由于這些物質(zhì)在物理和生理上有別于粘蛋白，其治療效果有限。因此，至今還沒(méi)有令人滿意的治療干眼病的方法，也沒(méi)有治療干眼病的藥物組合物。
本發(fā)明的目的之一是提供一種用于防治干眼病或由其引起的疾病的優(yōu)良的藥物組合物。
本發(fā)明的另一目的是提供一種用于防治干眼病或由其引起的疾病的優(yōu)良方法。
本發(fā)明的另一目的是提供一種用于防治干眼病或由其引起的疾病的優(yōu)良裝置。
通過(guò)以下描述并參照附圖，這些目的和其它目的以及本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)將一目了然。
為尋找用于防治干眼病或由其引起的疾病的藥物組合物、方法和裝置，本發(fā)明人進(jìn)行了如下所述的大量研究。
如上所述，當(dāng)患有干眼病，特別是缺乏粘蛋白層時(shí)，角膜損害嚴(yán)重。粘蛋白粘附于角膜上皮細(xì)胞并使角膜具有親水性，從而使角膜表面的淚層保持穩(wěn)定。另外，由于粘蛋白中含有大量的糖，它能使角膜和結(jié)膜濕潤(rùn)，并粘附和除去外來(lái)物和細(xì)菌。因此，考慮通過(guò)向干眼病患者的淚中施用粘蛋白從而使眼表具有與生物體本身的淚更為類似的環(huán)境。
另外，粘蛋白是由結(jié)膜杯狀(goblet)細(xì)胞產(chǎn)生的，并且與健康者相比，干眼病患者的結(jié)膜杯狀細(xì)胞的功能下降(Nelson JD.等，ArohOphthalmol.，102，1049-1051(1984))。因此考慮向干眼病患者的淚中施用可改善杯狀細(xì)胞功能或提高杯狀細(xì)胞產(chǎn)生粘多糖的功能的藥，從而治療和進(jìn)一步預(yù)防干眼病。
基于這些觀點(diǎn)，本發(fā)明人研究了多種化合物。結(jié)果本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在日本公開(kāi)特許公報(bào)58-77814、日本公開(kāi)特許公報(bào)63-165361和日本公開(kāi)特許公報(bào)2-167258中描述的磺基脫氫樅酸或其可藥用鹽(以下有時(shí)稱為“本化合物”)特別是其代表性化合物磺基脫氫樅酸單鈉鹽意外地具有增進(jìn)杯狀細(xì)胞產(chǎn)生粘多糖的功能的活性以及抑制由于以上功能降低造成的角膜結(jié)膜角化損傷，從而完成了本發(fā)明。
上述日本公開(kāi)特許公報(bào)所描述的本化合物是用作一種抗?jié)兯?，而并未描述本化合物可抑制由于杯狀?xì)胞功能降低造成的角膜結(jié)膜角化損傷。本發(fā)明人首次發(fā)現(xiàn)了該抑制作用。
本發(fā)明提供一種用于防治干眼病或由其引起的疾病的藥物組合物，它含有用作活性成分的有效量的下式(I)所示的化合物磺基脫氫樅酸(化學(xué)名1，4a-二甲基-1-羧基-6-磺基-7-異丙基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫菲)或其可藥用鹽以及適于局部施用的可藥用的載體
本發(fā)明還提供一種用于防治干眼病和由其引起的疾病的方法，它包括向患者眼部施用一種藥物組合物，該組合物含有用作活性成分的有效量的下式(I)所示的化合物或其可藥用鹽以及可藥用載體
本發(fā)明還提供一種用于防治干眼病或由其引起的疾病的裝置，它包括容器；裝在所述器中的藥物組合物，該組合物含有用作活性成分的有效量的下式(I)所示的化合物或其可藥用鹽以及可藥用載體
以及該用于防治干眼病或由其引起的疾病的裝置的使用說(shuō)明，其中所述的該使用說(shuō)明實(shí)際用物理方法附在所述容器上或與所述容器包裝在一起。
本發(fā)明中的眼用溶液(以下有時(shí)指滴眼劑)中含有磺基脫氫樅酸單鈉鹽用作優(yōu)選的活性成分。該鹽濃度優(yōu)選是0.05-1.0(W/V)％。
本發(fā)明的藥物組合物可用于防治干眼病，如淚少、淚缺乏、眼干燥、Sjogren綜合征、干性角膜結(jié)膜炎、Stevens-Johnson綜合征、眼類天皰瘡、眼瞼炎、眼瞼閉合不全和感覺(jué)神經(jīng)麻痹、與過(guò)敏性結(jié)膜炎有關(guān)的干眼病、病毒感染后的結(jié)膜干眼病、白內(nèi)障手術(shù)后的干眼病、與VDT操作有關(guān)的干眼病和與隱性眼鏡佩戴有關(guān)的干眼病，以及由干眼病引起的疾病如角膜結(jié)膜上皮損傷、角膜上皮侵蝕、角膜潰瘍和眼部傳染病。


圖1所示的是未施用眼用溶液前維生素A缺乏的鼠(1號(hào))眼角膜角化情況，該眼用溶液是由以下實(shí)施例6得到的(以下稱為“0.5％本化合物A滴眼劑”)且未施用生理鹽水前其角膜角化情況的照片。根據(jù)以下的測(cè)試實(shí)施例的實(shí)驗(yàn)步驟(1)，采用裂隙燈對(duì)眼拍照。
圖2所示的是經(jīng)20天每天施用8次生理鹽水后的維生素A缺乏的鼠(4號(hào))眼角膜角化情況的照片。根據(jù)以下的測(cè)試實(shí)施例的實(shí)驗(yàn)步驟(1)，采用裂隙燈對(duì)眼拍照。
圖3所示的是經(jīng)20天每天施用8次0.5％本化合物A滴眼劑后的維生素A缺乏的鼠(2號(hào))眼角膜角化情況的照片。根據(jù)以下測(cè)試實(shí)施例的實(shí)驗(yàn)步驟(1)，采用裂隙燈對(duì)眼拍照。
圖4所示的是正常鼠鼻冠(nasal bulbar)結(jié)膜細(xì)胞的光學(xué)顯微照片，該細(xì)胞是通過(guò)細(xì)胞壓印(impreuion)法獲得的，并經(jīng)Alcian Blue-PAS法染色，且根據(jù)以下測(cè)試實(shí)施例的實(shí)驗(yàn)步驟(2)通過(guò)光學(xué)顯微鏡拍照。
圖5所示的是維生素A缺乏的鼠鼻冠結(jié)膜細(xì)胞的光學(xué)顯微照片，該細(xì)胞是通過(guò)細(xì)胞壓印法獲得的，并經(jīng)Alcian Blue-PAS法染色，且根據(jù)以下測(cè)試實(shí)施例的實(shí)驗(yàn)步驟(2)通過(guò)光學(xué)顯微鏡拍照。
圖6所示的是經(jīng)20天每天施用8次生理鹽水后的維生素A缺乏的鼠鼻冠結(jié)膜細(xì)胞的光學(xué)顯微照片，該細(xì)胞是通過(guò)細(xì)胞壓印法獲得的，并經(jīng)Alcian Blue-PAS法染色，且根據(jù)以下測(cè)試實(shí)施例的實(shí)驗(yàn)步驟(2)通過(guò)光學(xué)顯微鏡拍照。
圖7所示的是經(jīng)20天每天施用8次0.5％本化合物A滴眼劑后的維生素A缺乏的鼠鼻冠結(jié)膜細(xì)胞的光學(xué)顯微照片，該細(xì)胞是通過(guò)細(xì)胞壓印法獲得的，并經(jīng)Alcian Blue-PAS法染色，且根據(jù)以下測(cè)試實(shí)施例的實(shí)驗(yàn)步驟(2)通過(guò)光學(xué)顯微鏡拍照。
圖8所示的是正常鼠的鼻下穹(nasal inferior fornix)結(jié)膜的掃描電子顯微照片。根據(jù)以下測(cè)試實(shí)施例的實(shí)驗(yàn)步驟(3)通過(guò)掃描電子顯微鏡對(duì)細(xì)胞進(jìn)行拍照。
圖9所示的是正常鼠的鼻下穹結(jié)膜的掃描電子顯微照片。根據(jù)以下測(cè)試實(shí)施例的實(shí)驗(yàn)步驟(3)通過(guò)掃描電子顯微鏡對(duì)細(xì)胞進(jìn)行拍照，所示的為圖8的放大照片。
圖10所示的是經(jīng)20天每天施用8次生理鹽水后的維生素A缺乏的鼠的鼻下穹結(jié)膜的掃描電子顯微照片。根據(jù)以下測(cè)試實(shí)施例的實(shí)驗(yàn)步驟(3)通過(guò)掃描電子顯微鏡對(duì)細(xì)胞進(jìn)行拍照。
圖11所示的是經(jīng)20天每天施用8次生理鹽水后的維生素A缺乏的鼠的鼻下穹結(jié)膜的掃描電子顯微照片。根據(jù)以下測(cè)試實(shí)施例的實(shí)驗(yàn)步驟(3)通過(guò)掃描電子顯微鏡對(duì)細(xì)胞進(jìn)行拍照，所示的為圖10的放大照片。
圖12所示的是經(jīng)20天每天施用8次0.5％本化合物A滴眼劑后的維生素A缺乏的鼠鼻下穹結(jié)膜的掃描電子顯微照片。根據(jù)以下測(cè)試實(shí)施例的實(shí)驗(yàn)步驟(3)通過(guò)掃描電子顯微鏡對(duì)細(xì)胞進(jìn)行拍照。
圖13所示的是經(jīng)20天每天施用8次0.5％本化合物A滴眼劑后的維生素A缺乏的鼠鼻下穹結(jié)膜的掃描電子顯微照片。根據(jù)以下測(cè)試實(shí)施例的實(shí)驗(yàn)步驟(3)通過(guò)掃描電子顯微鏡對(duì)細(xì)胞進(jìn)行拍照，所示的為圖12的放大照片。
磺基脫氫樅酸是由式(I)所示的化合物。在本發(fā)明的用于防治干眼病或由其引起的疾病的組合物中應(yīng)用了有效量的式(I)所示的化合物或其可藥用鹽作為活性成分。式(I)所示的化合物是已知的，并可根據(jù)日本公開(kāi)特許公報(bào)58-77814、日本公開(kāi)特許公報(bào)63-165361和日本公開(kāi)特許公報(bào)2-167258中所述的方法或類似方法進(jìn)行制備。
式(I)所示的磺基脫氫樅酸的可藥用鹽的實(shí)例包括堿金屬如鈉、鋰、鉀等的鹽，堿土金屬如鎂、鈣等的鹽，鋁鹽等。其中優(yōu)選磺基脫氫樅酸鈉鹽，更優(yōu)選磺基脫氫樅酸單鈉鹽。優(yōu)選磺基脫氫樅酸單鈉鹽是因其較其二鈉鹽更不易吸濕且更穩(wěn)定(日本公開(kāi)特許公報(bào)63-165361)。磺基脫氫樅酸的可藥用鹽也可以水合物形式存在?；腔摎錁核釂吴c鹽的實(shí)例包括五水合物(即，磺基脫氫樅酸單鈉鹽的五水合物)等。磺基脫氫樅酸單鈉鹽的五水合物是一般稱為ecabet鈉的化合物(在本說(shuō)明書(shū)中有時(shí)稱為“本化合物A”)。
本發(fā)明的藥物組合物涉及一種可用于防治干眼病或由其引起的疾病的化合物，該化合物具有增進(jìn)產(chǎn)生粘蛋白的杯狀細(xì)胞產(chǎn)生粘多糖功能的活性。如以下測(cè)試實(shí)施例所示，它能延緩角膜結(jié)膜角化損傷的進(jìn)程。因此本發(fā)明的藥物組合物可用于防治干眼病和由其引起的疾病。
在此采用的“干眼病”是一廣義的概念，它包括淚少、淚缺乏、眼干燥、Siogren綜合征、干性角膜結(jié)膜炎、stevens-Johnson綜合征、眼類天皰瘡、眼瞼炎、眼瞼閉合不全和感覺(jué)神經(jīng)麻痹、與過(guò)敏性結(jié)膜炎有關(guān)的干眼病、病毒感染后的結(jié)膜干眼病、白內(nèi)障手術(shù)后的干眼病、與VDT操作有關(guān)的干眼病和與隱形眼鏡佩戴有關(guān)的干眼病，以及由干眼病引起的疾病如角膜結(jié)膜上皮損傷、角膜上皮潰瘍、角膜潰瘍(如角膜基質(zhì)層潰瘍)和眼部傳染病。
當(dāng)本發(fā)明的化合物用在藥物組合物中以用于防治干眼病或由其引起的疾病時(shí)，它一般與已知的可藥用載體、賦形劑、稀釋劑等相混合?？蓪⒈净衔镏瞥煞悄c道給藥的制劑如眼用溶液、眼用軟膏、注射劑，或制成口服制劑如片劑、膠囊和顆粒劑。優(yōu)選的劑型是眼用溶液。
當(dāng)本發(fā)明的用于防治干眼病或由其引起的疾病的藥物組合采用的是眼用溶液形式時(shí)，可采用的劑型例如有，含水滴眼劑如含水眼用溶液、含水混懸眼用溶液、粘性眼用溶液、增溶眼用溶液，或無(wú)水滴眼劑如無(wú)水眼用溶液、無(wú)水混懸眼用溶液。其中優(yōu)選含水眼用溶液。
當(dāng)本發(fā)明的用于防治干眼病或由其引起的疾病的藥物組合物被制成含水眼用溶液時(shí)，只要不影響本發(fā)明的目的，在含水眼用溶液中常規(guī)使用的多種添加劑都可用于其中。這些添加劑的實(shí)例包括緩沖劑、等滲劑、防腐劑、增溶劑(穩(wěn)定劑)、PH調(diào)節(jié)劑、增稠劑和螯合劑。
緩沖劑選自以下物質(zhì)，但不僅限于此磷酸鹽緩沖劑、硼酸鹽緩沖劑、檸檬酸鹽緩沖劑、酒石酸鹽緩沖劑、乙酸鹽緩沖劑(例如乙酸鈉)和氨基酸。
等滲劑選自以下物質(zhì)，但不僅限于此糖如山梨糖醇、葡萄糖和甘露糖醇，多元醇如甘油、聚乙二醇和聚丙二醇，以及鹽如氯化鈉。
防腐劑選自以下物質(zhì)，但不僅限于此苯烷酰氯、苯乙酰氯、對(duì)羥基苯甲酸烷基酯如對(duì)羥基苯甲酸甲酯和對(duì)羥基苯甲酸乙酯、芐醇、苯乙醇、山梨酸及其鹽、乙基汞硫代水楊酸鈉和氯代丁醇。
增溶劑(穩(wěn)定劑)選自以下物質(zhì)，但不僅限于此環(huán)糊精及其衍生物、水溶性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮、以及表面活性劑如脫水山梨醇單油酸酯聚乙二醇(商品名Tween80)。
PH調(diào)節(jié)劑選自以下物質(zhì)，但不僅限于此鹽酸、乙酸、磷酸、氫氧化鈉、氫氧化鉀和氫氧化銨。
增稠劑選自以下物質(zhì)，但不僅限于此羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、甲基纖維素、羥丙甲基纖維素和羧甲基纖維素及它們的鹽。
螯合劑選自以下物質(zhì)，但不僅限于此乙二胺四乙酸鈉、檸檬酸鈉和縮磷酸鈉。
當(dāng)本發(fā)明的用于防治干眼病或由其引起的疾病的藥物組合物被制成眼用軟膏時(shí)，其中應(yīng)含有基質(zhì)化合物。眼用軟膏的基質(zhì)選自以下物質(zhì)，但不僅限于此純化羊毛脂、凡士林、塑性基質(zhì)(plastibase)、液體石蠟和聚乙二醇。
本發(fā)明的用于防治干眼病或由其引起的疾病的藥物組合物除可被制成眼用溶液和眼用軟膏之外，還可制成其它非腸道給藥制劑如注射劑，以及口服制劑如片劑、膠囊和顆粒劑。
可將本發(fā)明的藥物組合物裝入一無(wú)菌容器中。將該無(wú)菌容器置于第二個(gè)容器(如盒)中。第一個(gè)容器或第二個(gè)容器上附有用于防治干眼病或由其引起的疾病的使用說(shuō)明。或者可將該使用說(shuō)明置于第二容器內(nèi)?？蓪⒃撌褂谜f(shuō)明印在標(biāo)簽上并貼在兩容器中任一個(gè)上。
無(wú)菌容器可以是套蓋上裝有眼用滴管的瓶、裝有軟膏或滴眼溶液的壓縮軟管、裝有滴眼溶液的可擠壓瓶、瓶、廣口瓶、以及旅行裝小盒。
標(biāo)簽可以是外貼式標(biāo)簽、內(nèi)貼式標(biāo)簽，以及另附的標(biāo)注清楚的說(shuō)明、內(nèi)置式標(biāo)簽等。
本發(fā)明的用于防治干眼病或由其引起的疾病的藥物組合物可施用于哺乳動(dòng)物(如人類、兔、狗、貓、家畜、馬、猴等)。本發(fā)明藥物組合物的劑量根據(jù)給藥方式、患者所表現(xiàn)出的癥狀、年齡和體重而定。例如，當(dāng)本發(fā)明的藥物組合物以眼用溶液形式用于成年干眼病患者時(shí)，最好選用含水滴眼溶液，其中含有用作活性成分的本化合物，如本化合物A的含量可為約0.001-2.5(w/v)％，優(yōu)選0.05-1.0(w/v)％，給藥劑量為一次1-若干滴，一日1-8次。該劑量也可根據(jù)所表現(xiàn)出的癥狀而定。
本發(fā)明的藥物組合物采用的是眼用軟膏形式時(shí)，最好該眼用軟膏中含有用作活性成分的本化合物A，其含量約為0.001-2.5(w/w)％，優(yōu)選0.05-1.0(w/w)％，給藥劑量為一日1-4次。該劑量也可根據(jù)所表現(xiàn)出的癥狀而定。
另外，還可向本發(fā)明的藥物組合物中加入其它可用于防治干眼病或由其引起的疾病的試劑，如人造淚，它含有粘彈性物質(zhì)如甲基纖維素、硫酸軟骨素和透明質(zhì)酸。
將通過(guò)以下實(shí)施例和測(cè)試實(shí)施例詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明，但不應(yīng)將其理解為對(duì)本發(fā)明范圍的限定。實(shí)施例1眼用溶液由常規(guī)方法根據(jù)以下配方制備眼用溶液。
本化合物A 0.5g乙酸鈉 0.1g濃縮甘油2.6g對(duì)羥基苯甲酸甲酯0.026g對(duì)羥基苯甲酸丙酯0.014g氯代丁醇0.3g聚乙烯吡咯烷酮 1.0g無(wú)菌純水加至100ml(PH5.0)實(shí)施例2眼用溶液由常規(guī)方法根據(jù)以下配方制備眼用溶液。
本化合物A0.05g乙酸鈉 0.1g濃縮甘油 2.6g對(duì)羥基苯甲酸甲酯 0.026g對(duì)羥基苯甲酸丙酯 0.014g氯代丁醇 0.3g聚乙烯吡咯烷酮 1.0g無(wú)菌純水 加至100ml(PH5.0)實(shí)施例3眼用溶液由常規(guī)方法根據(jù)以下配方制備眼用溶液。
本化合物A0.5g
乙酸鈉 0.1g濃縮甘油2.6g對(duì)羥基苯甲酸甲酯0.026g對(duì)羥基苯甲酸丙酯0.014g氯代丁醇0.3g聚乙烯吡咯烷酮 1.0g無(wú)菌純水加至100ml(PH5.0)實(shí)施例4眼用溶液由常規(guī)方法根據(jù)以下配方制備眼用溶液。
本化合物A0.5g磷酸氫二鈉十二水合物 0.1g濃縮甘油 2.6g脫水山梨醇單油酸酯聚乙二醇80 0.1g苯烷酰氯 0.005g無(wú)菌純水 加至100ml(PH7.0)實(shí)施例5眼用溶液由常規(guī)方法根據(jù)以下配方制備眼用溶液。
本化合物A 0.05g磷酸氫二鈉十二水合物 0.1g氯化鈉0.9g脫水山梨醇單油酸酯聚乙二醇80 0.1g苯烷酰氯 0.005g無(wú)菌純水 加至100ml(PH7.0)實(shí)施例6眼用溶液由常規(guī)方法根據(jù)以下配方制備眼用溶液。
本化合物A 0.5g磷酸氫二鈉十二水合物 0.1g氯化鈉油 0.9g脫水山梨醇單油酸酯聚乙二醇80 0.1g氫氧化鈉 適量無(wú)菌純水 加至100ml(PH7.0)測(cè)試實(shí)施例采用呈現(xiàn)角膜結(jié)膜角化損傷的維生素A缺乏的鼠來(lái)研究本化合物A延緩角膜結(jié)膜角化損傷進(jìn)程的活性，該角膜結(jié)膜損傷是由于杯狀細(xì)胞功能減退造成的。被測(cè)藥物采用由實(shí)施例6獲得的眼用溶液(0.5％本化合物滴眼劑)。對(duì)照組采用的是生理鹽水。所用動(dòng)物采用經(jīng)約180天缺乏維生素喂養(yǎng)的三周大標(biāo)準(zhǔn)(SD)雄鼠。正常組采用的是經(jīng)約180天正常喂養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)雄鼠。實(shí)驗(yàn)方法經(jīng)缺乏維生素A喂養(yǎng)的鼠的鼻側(cè)近中心角膜(nasal paraoentral oornea)出現(xiàn)角膜角化時(shí)，開(kāi)始向其施用被測(cè)藥物。向一只眼中施用含量為5μl的被測(cè)藥物，每日8次，施用20天。被施用被測(cè)化合物的鼠將作為以下實(shí)驗(yàn)(1)、(2)和(3)的對(duì)象。(1)用裂隙燈觀察在首次滴注被測(cè)藥物21天后采用裂隙燈觀察角膜的角化，其中角膜上皮角化部分是由0.1％熒光素鈉染色的。按表1所規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行計(jì)分從而進(jìn)行測(cè)定表1評(píng)分 標(biāo)準(zhǔn)0在角膜上未發(fā)現(xiàn)染色1在角膜上發(fā)現(xiàn)被染色的分散的點(diǎn)2在角膜上發(fā)現(xiàn)被染色的點(diǎn)群3在鼻側(cè)近中央角膜上發(fā)現(xiàn)圓形染色區(qū)域4在近中央角膜的較寬范圍內(nèi)發(fā)現(xiàn)圓形染色區(qū)域5在近中央角膜的較寬范圍內(nèi)發(fā)現(xiàn)很濃的圓形染色區(qū)域(2)經(jīng)細(xì)胞壓印法觀察杯狀細(xì)胞將MF微孔薄膜過(guò)濾器(NIPPON MILLIPORE LIMITED生產(chǎn)的薄膜過(guò)濾器，孔徑0.22μm)按壓在鼻冠結(jié)膜上，并采用細(xì)胞壓印法在過(guò)濾器的一側(cè)收集細(xì)胞。用Alcian Blue-PAS對(duì)收集的細(xì)胞進(jìn)行復(fù)染色并通過(guò)光學(xué)顯微鏡(Olympus Kogakukogyo生產(chǎn)的VANBOX)觀察結(jié)膜上皮表面杯狀細(xì)胞的形態(tài)，并拍照。(3)通過(guò)掃描電子顯微鏡(SEM)觀察下穹細(xì)膜杯狀細(xì)胞在首次滴注被測(cè)藥物21天后，將與眼球相連的眼瞼結(jié)膜分離下來(lái)。由常規(guī)方法制備成SEM樣品，并通過(guò)掃描電子顯微鏡觀察下穹結(jié)膜杯狀細(xì)胞并拍照。測(cè)試結(jié)果(1)通過(guò)裂隙燈觀察的結(jié)果根據(jù)表1所示的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)每一維生素A缺乏的鼠角膜的角化情況進(jìn)行計(jì)分和評(píng)估，結(jié)果見(jiàn)表2。表2所示的數(shù)值是角膜角化情況的分?jǐn)?shù)。相應(yīng)的值代表的是施用了含有0.5％本化合物A的滴眼劑組(以下稱為“施用0.5％本化合物A的組”)中兩試樣(1號(hào)和2號(hào))的分?jǐn)?shù)以及施用生理鹽水的組中兩試樣(3號(hào)和4號(hào))的分?jǐn)?shù)表2
施用0.5％本化合物A的組施用生理鹽水的組天 1號(hào)2號(hào)3號(hào)4號(hào)13.03.03.03.023.02.03.03.543.02.53.04.582.52.04.05.012 2.02.55.05.016 2.53.05.55.021 3.03.05.05.0由表2所示的結(jié)果，顯而易見(jiàn)與施用生理鹽水的組相比施用0.5％本化合物A的組可抑制角膜角化的進(jìn)程。
另外，圖1-3所示的是采用裂隙燈對(duì)角膜角化情況的觀察結(jié)果。
圖1所示的是未施用0.5％本化合物滴眼劑前維生素缺乏的鼠(1號(hào))眼角膜角化情況的照片或未施用生理鹽水前其角膜角化情況的照片。采用裂隙燈進(jìn)行拍照。虛線內(nèi)經(jīng)熒光素染色的角膜顯示的是角膜角化。近中央角膜的白色閃光部分是由裂隙燈的光暈造成的。
圖2所示的是經(jīng)20天每天施用8次生理鹽水后維生素缺乏的鼠(4號(hào))眼角膜角化情況的照片。采用裂隙燈進(jìn)行拍照。虛線內(nèi)經(jīng)熒光素染色的角膜顯示的是角膜角化。角化區(qū)域較施用生理鹽水前寬。近中央角膜的白色閃光部分是由裂隙燈的光暈造成的。
圖3所示的是經(jīng)20天每天施用8次0.5％本化合物A滴眼劑后維生素缺乏的鼠(2號(hào))眼角膜角化情況的照片。采用裂隙燈進(jìn)行拍照。虛線內(nèi)經(jīng)熒光素染色的角膜顯示的是角膜角化。角化區(qū)域與施用前的區(qū)域的大小相比基本相等或有所減小。近中央角膜的白色閃光部分是由裂隙燈的光暈造成的。
如圖1和2所示，施用生理鹽水組從滴注時(shí)起角膜角化損傷逐漸惡化(見(jiàn)圖1)，并發(fā)展為較寬區(qū)域(見(jiàn)圖2)。相反，施用0.5％本化合物A的組經(jīng)20天施用其癥狀與施用前的幾乎相同，由此觀察到角化損傷的進(jìn)程被抑制(見(jiàn)圖3)。(2)對(duì)經(jīng)細(xì)胞壓印的冠結(jié)膜杯狀細(xì)胞的觀察結(jié)果圖4-7所示的是對(duì)經(jīng)細(xì)胞壓印的冠結(jié)膜杯狀細(xì)胞的觀察結(jié)果。
圖4所示的是正常鼠鼻冠結(jié)膜細(xì)胞的光學(xué)顯微照片，該細(xì)胞是通過(guò)細(xì)胞壓印法獲得的，并經(jīng)Alcian Blue-PAS法染色并且通過(guò)光學(xué)顯微鏡拍照。染色區(qū)域(紫紅色)是粘多糖。未觀察到杯狀細(xì)胞。
圖5所示的是維生素A缺乏的鼠鼻冠結(jié)膜細(xì)胞的光學(xué)顯微照片，該細(xì)胞是通過(guò)細(xì)胞壓印法獲得的，并經(jīng)Alcian Blue-PAS法染色并且通過(guò)光學(xué)顯微鏡拍照。箭頭表示杯狀細(xì)胞，染色區(qū)域(紫紅色)是粘多糖。杯狀細(xì)胞中也存在粘多糖。
圖6所示的是經(jīng)20天每天施用8次生理鹽水后維生素缺乏的鼠鼻冠結(jié)膜細(xì)胞的光學(xué)顯微照片，該細(xì)胞是通過(guò)細(xì)胞壓印法獲得的，并經(jīng)AlcianBlue-PAS法染色并且通過(guò)光學(xué)顯微鏡拍照。箭頭表示杯狀細(xì)胞，染色區(qū)域(紫紅色)是粘多糖。杯狀細(xì)胞中存在少量粘多糖。
圖7所示的是經(jīng)20天每天施用8次0.5％本化合物A滴眼劑后維生素缺乏的鼠鼻冠結(jié)膜細(xì)胞的光學(xué)顯微照片，該細(xì)胞是通過(guò)細(xì)胞壓印法獲得的，并經(jīng)Alcian Blue-PAS法染色并且通過(guò)光學(xué)顯微鏡拍照。箭頭表示杯狀細(xì)胞，染色區(qū)域(紫紅色)是粘多糖。杯狀細(xì)胞中也存在粘多糖。
如這些圖所示，經(jīng)正常喂養(yǎng)的正常鼠結(jié)膜上皮表面一般不出現(xiàn)杯狀細(xì)胞(見(jiàn)圖4)。但維生素缺乏的鼠結(jié)膜表面出現(xiàn)杯狀細(xì)胞，并確定在細(xì)胞質(zhì)中存在粘多糖(見(jiàn)圖5)。在該情況下施用被測(cè)藥物20天，施用生理鹽水的組中杯狀細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中粘多糖含量減少(見(jiàn)圖6)，而相反，在施用0.5％本化合A的組中細(xì)胞質(zhì)中粘多糖含量增大。由此可見(jiàn)保持了施用前的情況不變(見(jiàn)圖7)。(3)通過(guò)掃描電子顯微鏡對(duì)下穹結(jié)膜杯狀細(xì)胞的觀察結(jié)果圖8-13所示的是通過(guò)掃描電子顯微鏡對(duì)下穹結(jié)膜杯狀細(xì)胞的觀察結(jié)果。
圖8是正常鼠的鼻下穹結(jié)膜的掃描電子顯微照片。采用掃描電子顯微鏡進(jìn)行拍照。白色箭頭是杯狀細(xì)胞的開(kāi)口。
圖9是正常鼠的鼻下穹結(jié)膜的掃描電子顯微照片。采用掃描電子顯微鏡進(jìn)行拍照，所示的為圖8的放大照片。虛線內(nèi)所示的是杯狀細(xì)胞的開(kāi)口并可觀察到粘多糖(白箭頭)。由杯狀細(xì)胞開(kāi)口的分離切片可發(fā)現(xiàn)微絨毛。
圖10是經(jīng)20天每天施用8次生理鹽水后維生素A缺乏的鼠的鼻下穹結(jié)膜的掃描電子顯微照片。采用掃描電子顯微鏡進(jìn)行拍照。未發(fā)現(xiàn)杯狀細(xì)胞的開(kāi)口，并觀察到結(jié)膜上皮區(qū)域的剝落。
圖11是經(jīng)20天每天施用8次生理鹽水后維生素A缺乏的鼠的鼻下穹結(jié)膜的掃描電子顯微照片。采用掃描電子顯微鏡進(jìn)行拍照，所示的為圖10的放大照片。未發(fā)現(xiàn)杯狀細(xì)胞的開(kāi)口且未觀察到微絨毛。
圖12是經(jīng)20天每天施用8次0.5％本化合物A滴眼劑后維生素A缺乏的鼠鼻下穹結(jié)膜的掃描電子顯微照片。采用掃描電子顯微鏡進(jìn)行拍照。白色箭頭是杯狀細(xì)胞的開(kāi)口。與正常情況相比，杯狀細(xì)胞的開(kāi)口變大。
圖13是經(jīng)20天每天施用8次0.5％本化合物A滴眼劑后維生素A缺乏的鼠鼻下穹結(jié)膜的掃描電子顯微照片。采用掃描電子顯微鏡進(jìn)行拍照，所示的為圖12的放大照片。虛線內(nèi)所示的是杯狀細(xì)胞的開(kāi)口并可觀察到粘多糖(白箭頭)。由杯狀細(xì)胞開(kāi)口的分離切片可發(fā)現(xiàn)微絨毛。
如圖8和9所示，可觀察到正常鼠鼻下穹結(jié)膜的杯狀細(xì)胞有較細(xì)的開(kāi)口并存在粘蛋白(見(jiàn)圖8和9)。而在經(jīng)缺乏維生素A喂養(yǎng)并施用生理鹽水的組中，未觀察到杯狀細(xì)胞的開(kāi)口(見(jiàn)圖10)并發(fā)現(xiàn)上皮細(xì)胞的剝落和微絨毛的消失(圖11)。反，觀察到施用0.5％本化合物A的組的下穹結(jié)膜表面杯狀細(xì)胞的開(kāi)口變大以及粘多糖的存在(見(jiàn)圖12)。另外未觀察到上皮細(xì)胞消失(見(jiàn)圖13)。測(cè)試結(jié)果討論如上所述，采用具有角膜結(jié)膜角化損傷癥狀的維生素A缺乏的鼠來(lái)研究本化合物A延緩角膜結(jié)膜角化損傷進(jìn)程的活性，該角膜結(jié)膜損傷是由于杯狀細(xì)胞功能減退造成的，結(jié)果證明施用0.5％本化合物A的組可抑制角膜角化損傷的進(jìn)程。另外，通過(guò)對(duì)結(jié)膜的組織學(xué)觀察，與正常情況相比，發(fā)現(xiàn)施用0.5％本化合物A的組的杯狀細(xì)胞的開(kāi)口更多。而且與施用生理鹽水的組相比，施用0.5％本化合物A的組在上皮細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞質(zhì)中粘多糖存在與否等方面與正常情況更為相似。
由這些發(fā)現(xiàn)，認(rèn)為本化合物可作用于杯狀細(xì)胞促進(jìn)其粘多糖的產(chǎn)生。并且認(rèn)為該活性的作用結(jié)果使上皮細(xì)胞的形態(tài)保持不變(微絨毛仍存在)并且延緩了角膜角化損傷的進(jìn)程。由此證明本化合物可增進(jìn)維生素A缺乏的鼠的杯狀細(xì)胞產(chǎn)生粘多糖的功能，從而延緩角膜角化損傷的進(jìn)程。因此認(rèn)為本化合物是防治干眼病或由其引起的疾病的有用藥物。
權(quán)利要求
1一種用于防治干眼病或由其引起的疾病的藥物組合物，它含有用作活性成分的有效量的下式(I)所示的化合物或及可藥用鹽以及適于局部施用的可藥用載體
2權(quán)利要求1的藥物組合物，其中式(I)所示的化合物的可藥用鹽是磺基脫氫樅酸單鈉鹽。
3權(quán)利要求2的藥物組合物，它被制成眼用溶液。
4權(quán)利要求3的藥物組合物，其中式(I)所示的化合物的濃度是0.05至1.0(w/v)％。
5一種用于防治干眼病和由其引起的疾病的方法，它包括向患者眼部施用一種藥物組合物，該組合物含有用作活性成分的有效量的下式(I)所示的化合物或其可藥用鹽；以及可藥用載體
6權(quán)利要求5的方法，其中所述的干眼病選自淚少、淚缺乏、眼干燥、Sjogren綜合征、干性角膜結(jié)膜炎、Stevens-Johnson綜合征、眼類天皰瘡、眼瞼炎、眼瞼閉合不全和感覺(jué)神經(jīng)麻痹。
7權(quán)利要求5的方法，其中所述的干眼病選自與過(guò)敏性結(jié)膜炎有關(guān)的干眼病、病毒感染后的結(jié)膜炎、白內(nèi)障手術(shù)后的干眼病、與VDT操作有關(guān)的干眼病和與隱形眼鏡配戴有關(guān)的干眼病。
8權(quán)利要求5的方法，其中所述的由干眼病引起的疾病選自角膜結(jié)膜上皮損傷、角膜上皮侵蝕、角膜潰瘍和眼部傳染病。
9一種用于防治干眼病或由其引起的疾病的裝置，它包括容器；裝在所述容器中的藥物組合物，該組合物含有用作活性成分的有效量的下式(I)所示的化合物或其可藥用鹽以及可藥用載體
以及該用于防治干眼病或由其引起的疾病的裝置的使用說(shuō)明，其中所述的該說(shuō)明用物理方法附在所述容器上或與所述容器一起包裝。
全文摘要
公開(kāi)了一種用于防治干眼病或由其引起的疾病的藥物組合物，該組合物含有用作活性成分的有效量的磺基脫氫樅酸或及可藥用鹽。還公開(kāi)了用于防治干眼病或由其引起的疾病的方法和裝置。
文檔編號(hào)A61P27/04GK1159323SQ96123349
公開(kāi)日1997年9月17日 申請(qǐng)日期1996年11月15日 優(yōu)先權(quán)日1995年11月15日
發(fā)明者小河貴裕, 渡邊則子, 奧村泰 申請(qǐng)人:田邊制藥株式會(huì)社, 千壽制藥株式會(huì)社