專利名稱：引導(dǎo)癌細(xì)胞分化之藥物及其在癌癥之治療與預(yù)防上的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療和預(yù)防癌癥藥劑的制備致癌基因是人類細(xì)胞基因的一部分，有人類以來即有癌癥，到目前為止，還沒有很好的克服方法，可以說這是有史以來持續(xù)最久但卻仍無法解決的頑疾。癌癥之所以難以治療，癌細(xì)胞本身的組成復(fù)雜是一個(gè)原因，而未找到妥善的防治對(duì)策倒是更重要的因素。癌細(xì)胞會(huì)持續(xù)不斷地分裂，侵入正常的器管及組織，最后造成病害而致死。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)界向來把癌細(xì)胞持續(xù)分裂當(dāng)作癌癥的最根本癥結(jié)，進(jìn)而尋求細(xì)胞毒來中止DNA合成以防止細(xì)胞分裂，細(xì)胞毒療法源由于此。近四十年來治療癌癥的方針都著重于發(fā)展細(xì)胞毒療法。癌癥醫(yī)療市場(chǎng)亦被這種藥物所壟斷。二十多年前，甚至說服尼克松總統(tǒng)動(dòng)用美國總統(tǒng)權(quán)威向癌癥宣戰(zhàn)，投入無數(shù)資源，動(dòng)員美全國醫(yī)學(xué)界人力，期在短期內(nèi)克服這難癥，但癌癥并沒有被制服。所以單靠財(cái)力和人力是無法解決癌癥問題，必須尋求突破性的新療法。
隨著醫(yī)學(xué)的進(jìn)步，壽命的延長，加上工業(yè)發(fā)達(dá)促成環(huán)境的污染，世界癌癥的發(fā)生率和死亡率節(jié)節(jié)上升，每年死亡于癌癥的人數(shù)高達(dá)數(shù)百萬人，實(shí)際上癌癥在中年時(shí)代(30-60歲)的死亡率已高居首位，目前尋求有效的新療法已刻不容緩。
本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)異常的甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素才是癌癥最根本的癥結(jié)，因?yàn)檫@復(fù)合酵素的異常才導(dǎo)致了癌細(xì)胞的持續(xù)分裂。甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素在細(xì)胞的分裂以及分化扮演著很重要的主導(dǎo)角色，這些酵素活性高時(shí)細(xì)胞就進(jìn)行分裂，活性由高轉(zhuǎn)低時(shí)，細(xì)胞會(huì)合成缺甲基核酸，結(jié)果細(xì)胞就被導(dǎo)引進(jìn)行分化而變成不再分裂的終末分化細(xì)胞。所有的癌細(xì)胞甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素都有異常的甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素，把這些酵素固定在活性很高又穩(wěn)定的狀態(tài)，因而細(xì)胞不斷地分裂，所以異常的甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素是癌癥的病因，持續(xù)的細(xì)胞分裂是癌癥的癥狀。一般說來，要醫(yī)療一個(gè)疾病，從消除病因著手要比消除癥狀有效得多。中國醫(yī)學(xué)有這樣一個(gè)金科玉律，即“上醫(yī)醫(yī)病于未發(fā)，中醫(yī)治本，下醫(yī)治標(biāo)”。就是說最好的醫(yī)療策略是預(yù)防疾病的發(fā)生，預(yù)防尤其適合于極困難治療的疾病，象癌癥、心血管病、愛滋病等；次好的醫(yī)療策略是消除致病的根本原因；最下策才從消除疾病癥狀治病。人們用治標(biāo)的下策和癌癥斗爭(zhēng)四十多年，并沒有制服這個(gè)病。
其實(shí)正常人體內(nèi)有足夠的化學(xué)物質(zhì)抑制這些異常甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素的形成，這說明發(fā)癌的過程要經(jīng)過漫長的促成時(shí)間，在這期間病人加速排泄抗癌化學(xué)物質(zhì)，到這些抗癌物質(zhì)減低到不足以抑制異常甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素時(shí)，癌細(xì)胞才開始生根繁殖，病癥才被發(fā)現(xiàn)。
細(xì)胞分化劑發(fā)展過程要解決癌癥問題必須先要掌握致病的根本原因，找出癌細(xì)胞和正常細(xì)胞根本的差異，對(duì)癥下藥才能解決這個(gè)難題。本發(fā)明人在1977年發(fā)現(xiàn)諾比可夫肝癌細(xì)胞的甲硫胺酸腺苷轉(zhuǎn)移酵素(MethionineAdenosyltransferase，MAT)和正常細(xì)胞的酵素不相同(文獻(xiàn)19)，其相異之處不僅是量的差異，還有質(zhì)的不同。這發(fā)現(xiàn)對(duì)癌癥的治療有不可磨滅的貢獻(xiàn)，雖然重要性在那個(gè)時(shí)候并沒有被肯定，因?yàn)榧谆D(zhuǎn)移最重要的DNA甲基轉(zhuǎn)移的功能在當(dāng)時(shí)還沒有被發(fā)現(xiàn)出來。一旦DNA甲基轉(zhuǎn)移在調(diào)節(jié)基因表現(xiàn)的功能被確定后(文獻(xiàn)12、15)，異常MAT的重要性就凸顯出來。因?yàn)檫@種酵素有重要的功能，癌細(xì)胞的酵素和正常細(xì)胞的酵素又有質(zhì)的差異，我們可以利用這種差異找到理想有選擇性的抗癌藥物。
甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素的功能MAT是甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素三個(gè)成員酵素之一，另外兩個(gè)成員酵素是甲基轉(zhuǎn)移酵素和SAHH。甲基轉(zhuǎn)移酵素有許多種，(各色各樣都有)而且互不相干，因?yàn)槊恳粋€(gè)酵素都有特異的基質(zhì)選擇性，不過由于和相同的MAT和SAHH形成復(fù)合酵素，這些功能殊異的甲基轉(zhuǎn)移酵素卻接受同一機(jī)理在調(diào)節(jié)活性。這三個(gè)成員酵素要結(jié)合在一起才能發(fā)揮甲基轉(zhuǎn)移的功能。在正常細(xì)胞內(nèi)，復(fù)合酵素的結(jié)合需要依賴外來的促進(jìn)因素，辟如固醇激素即是這激素靶組織之復(fù)合酵素的促進(jìn)因素。有固醇激素時(shí)，這三個(gè)成員酵素會(huì)結(jié)合在一起形成穩(wěn)定而有活性的復(fù)合酵素。一旦固醇激素不復(fù)存在，復(fù)合酵素就分離成單獨(dú)成員酵素，單獨(dú)成員酵素穩(wěn)定性不好，會(huì)立即遭受破壞而失去活性(文獻(xiàn)23)。非固醇激素靶組織的細(xì)胞中，甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素的形成則有賴于生長激素的刺激，使該細(xì)胞產(chǎn)生類似固醇激素的促進(jìn)因素?？偠灾?，正常細(xì)胞的甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素的活性是完全受制于外來的促進(jìn)因素。
核酸的甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素在細(xì)胞的分裂以及分化上扮演著很重要的主導(dǎo)角色，其必要性與生長激素不相上下。核酸的甲基轉(zhuǎn)移種類繁多，然而其中只有兩種對(duì)細(xì)胞分裂以及分化特別有關(guān)聯(lián)，這兩種甲基轉(zhuǎn)移是DNA的5-甲基胞苷(5-mC)，和RNA的2′-氧甲基核糖。DNA的5-甲基胞苷發(fā)生在DNA雙股序列的對(duì)應(yīng)位置上。
當(dāng)一個(gè)基因的啟動(dòng)子序列有這種甲基時(shí)，這個(gè)基因就被抑制而不能表現(xiàn)出來。人體內(nèi)每一個(gè)細(xì)胞都有相同的基因，但是各種不同的細(xì)胞都只有一小部分不同的基因被表現(xiàn)出來而形成各種不同功能的細(xì)胞。DNA的甲基就是扮演選擇基因表現(xiàn)的角色(文獻(xiàn)12、15)。每一器官或組織都有其特殊的基礎(chǔ)細(xì)胞，這些基礎(chǔ)細(xì)胞已分化至某種程度，但是并未達(dá)到終末程度，所以還有分裂能力，但是有特殊功能的分化基因在基礎(chǔ)細(xì)胞仍然藉甲基的引入而處于被抑制的狀態(tài)。當(dāng)基礎(chǔ)細(xì)胞受到生長激素刺激進(jìn)行分裂時(shí)，甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素的活性隨著生長激素而提高，DNA甲基的分布照樣復(fù)制，所以分裂出來的子細(xì)胞和母細(xì)胞相同，都是基礎(chǔ)細(xì)胞。等到生長激素不復(fù)存在時(shí)，甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素的活性立即下降，可是DNA合成酵素是相當(dāng)穩(wěn)定，這時(shí)會(huì)合成缺甲基的DNA，經(jīng)過兩個(gè)細(xì)胞分裂周期的缺甲基DNA合成，往往會(huì)使特殊和分化有關(guān)的基因表現(xiàn)出來而變成有特殊功能的終末分化細(xì)胞，這種細(xì)胞就不再具有分裂能力。缺甲基之DNA合成作用可以說是細(xì)胞分化的一個(gè)很重要的機(jī)理(文獻(xiàn)28)。
rRNA的甲基絕大部分發(fā)生在核糖這單位的2′氧位置，這種甲基的引入對(duì)核糖體的制造有很重要的調(diào)節(jié)作用(文獻(xiàn)18)。細(xì)胞在制造核糖體的過程是先合成分子量大于最后產(chǎn)物約兩倍的先驅(qū)RNA，這先驅(qū)RNA在細(xì)胞核內(nèi)經(jīng)過RNA分解酵素的剪修，把不用的序列剪修分解掉，有用的序列則保留下來形成核糖體。甲基的分布全部著落在有用的序列上，如果這部分序列缺乏甲基，則這部分有用序列也和無用的序列一樣會(huì)被分解掉。所以甲基化如果進(jìn)行的完整就可以產(chǎn)生有用的核糖體；如果進(jìn)行的不完整，就不能產(chǎn)生核糖體。換句話說，核糖體之生產(chǎn)取決于甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素的活性。核糖體的增產(chǎn)是細(xì)胞進(jìn)入DNA合成前的必備要件，有核糖體的增產(chǎn)細(xì)胞才能提供用以復(fù)制DNA的必要蛋白質(zhì)，包括核酸合成酵素、染色體蛋白質(zhì)和細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)等。如果沒有核糖體的增產(chǎn)，則這些必需蛋白質(zhì)無法產(chǎn)生足夠的量，細(xì)胞也就不能進(jìn)行DNA合成。核糖體的增產(chǎn)對(duì)細(xì)胞分裂的重要性可從兩個(gè)簡單的實(shí)驗(yàn)證明。第一個(gè)實(shí)驗(yàn)利用放射線菌素D的特殊敏感度，細(xì)胞經(jīng)生長激素刺激8小時(shí)后，核糖體的生產(chǎn)才會(huì)提升上來，如果在這個(gè)時(shí)候加入微量的放射線菌素D選擇性地抑制核糖體的生產(chǎn)，則發(fā)現(xiàn)細(xì)胞停止在G1階段(文獻(xiàn)13)，另一個(gè)實(shí)驗(yàn)利用特殊溫度的敏度細(xì)胞，這種細(xì)胞的rRNA的加工分解酵素在39℃完全失去活性，所以如果在生長激素刺激8小時(shí)后將溫度從37℃提升到39℃，核糖體的生產(chǎn)便停不來，細(xì)胞也隨著停止在G1階段(文獻(xiàn)41)。這個(gè)實(shí)驗(yàn)很清楚地證明核糖體的增產(chǎn)是細(xì)胞分裂的一個(gè)必要因素，那么調(diào)節(jié)核糖體生產(chǎn)有決定性關(guān)聯(lián)的甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素當(dāng)然對(duì)于細(xì)胞的生長也有決定性的影響。一旦生長激素不復(fù)存在，細(xì)胞就會(huì)停止分裂而不需大量的核糖體，甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素率先失去活性，但是細(xì)胞在短時(shí)間內(nèi)仍繼續(xù)合成缺甲基的rRNA先驅(qū)產(chǎn)物，這種產(chǎn)物不能夠產(chǎn)生有用的核糖體，故相關(guān)蛋白質(zhì)減產(chǎn)，細(xì)胞朝向分化的過程前進(jìn)，終于變成終末分化細(xì)胞。可見甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素在細(xì)胞的生長與分化扮演著很重要的主導(dǎo)角色。
異常甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素在癌癥所扮演的角色異常的MAT是由干癌細(xì)胞產(chǎn)生一種特殊的蛋白質(zhì)因素，這因素和正常的MAT結(jié)合而造成異常癌細(xì)胞酵素(文獻(xiàn)21)這一結(jié)合把原來正常酵素的活性和調(diào)節(jié)機(jī)理完全改觀，癌細(xì)胞的特殊蛋白質(zhì)因素有如固醇激素對(duì)正常復(fù)合酵素的作用，將三個(gè)成員酵素結(jié)合成非常穩(wěn)定有活性的復(fù)合酵素，因?yàn)橛羞@種特殊蛋白質(zhì)因素，癌細(xì)胞復(fù)合酵素的穩(wěn)定性和活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過正常細(xì)胞的復(fù)合酵素(文獻(xiàn)21)。正常酵素和癌細(xì)胞的特殊蛋白質(zhì)因素的結(jié)合不只改變了復(fù)合酵素的調(diào)節(jié)功能，單獨(dú)成員酵素的動(dòng)力性能也起了變化，正常MAT和異常MAT的Km(methionine)值不相同，前者為3μM而后者為20μM。為區(qū)別相異，前者定名為MATL后者為MATLT，T代表一個(gè)特殊的癌因素。癌細(xì)胞的MAT和正常酵素相異已被其他研究者證實(shí)。癌細(xì)胞的S-腺苷高胱胺酸水解酶S-adenosylhomocysteine hydrolase，SAHH)也有同樣或類似的因素改變其動(dòng)力性能(文獻(xiàn)24)。因?yàn)榘┘?xì)胞自行產(chǎn)生甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素的促進(jìn)因素，癌細(xì)胞這種酵素的活性就不需依賴外來的因素而能自行維持高的活性，這高活性促成癌細(xì)胞在分裂周期運(yùn)轉(zhuǎn)不息，所以異常的甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素是癌癥的根本病因。
所有癌細(xì)胞都有這種異常的甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素，包括動(dòng)物的初發(fā)癌、移殖癌，移殖在無胸線無毛老鼠的各種人類癌組織，外科手術(shù)和組織培養(yǎng)的人類癌細(xì)胞等(文獻(xiàn)21、22)。這種復(fù)合酵素活性的高低和癌組織的成長率有很明顯的對(duì)應(yīng)關(guān)系。正常組織不管有無積極的進(jìn)行細(xì)胞分裂，都沒有異常的甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素。所以異常的甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素可以說是構(gòu)成正常生長和異常的癌生長之間很特殊的差別，我們可以利用這種顯著的差別探求藥物有選擇地抑制異常甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素。事實(shí)上早期的實(shí)驗(yàn)也證實(shí)可以抑制癌細(xì)胞甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素的化合物，如寡核苷酸類，對(duì)正常酵素作用相對(duì)的很微弱，甚至毫無作用；相反地，可以促進(jìn)正常復(fù)合酵素活性的化合物對(duì)異常癌復(fù)合酵素卻不能產(chǎn)生同樣的效果(文獻(xiàn)18、20)。這些實(shí)驗(yàn)一再闡明癌細(xì)胞的異常的甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素是癌癥化學(xué)療法一個(gè)最恰當(dāng)?shù)尼t(yī)療靶。
異常甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素作為醫(yī)療靶化學(xué)療法如上所述異常的甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素是癌癥的根本病因，如果消除這些異常酵素之后，癌細(xì)胞應(yīng)該可以像正常細(xì)胞那樣被引導(dǎo)進(jìn)行分化而變成不再分裂的終末分化細(xì)胞。事實(shí)證明這種假設(shè)是正確的，諾比可夫腹水肝癌經(jīng)poly(I)(C)處理后，異常的甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素會(huì)變成正常酵素，經(jīng)過一段時(shí)間的延遲后，核酸的合成迅速減低，終于細(xì)胞停止分裂(文獻(xiàn)17、18)。poly(I)(C)不能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，因而poly(I)(C)的效果很可能是間接的，先由poly(I)(C)引導(dǎo)癌細(xì)胞產(chǎn)生寡異腺苷基酯(oligoisoadenylate)合成酵素(文獻(xiàn)9)，然后透過這個(gè)酵素的產(chǎn)物，寡異腺苷基酯把異常甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素改變成正常酵素。寡異腺苷基酯是分化細(xì)胞的產(chǎn)物。類似寡異腺苷基酯可以將異常甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素改變成正常酵素的，還有寡肽類和某些有機(jī)酸等(文獻(xiàn)27)。Burzynski把這些具有抗癌的天然人體產(chǎn)物命名為抗癌素(Antineoplastons)(文獻(xiàn)4)。這些抗癌物質(zhì)大半是低分子量的代謝產(chǎn)物，所以在腎臟過濾后經(jīng)過再吸收才能回歸血液維持一定濃度，再吸收往往不能完全，因此正常人也經(jīng)常由尿排泄少量有用的抗癌物質(zhì)，不過正常人能夠維持得失平衡，因此體內(nèi)總有足夠量的抗癌物質(zhì)來抑制癌細(xì)胞的形成，廖氏等人把這種天然的化學(xué)抗癌作用稱之為化學(xué)監(jiān)察(文獻(xiàn)26)。正常人尿中的抗癌物質(zhì)經(jīng)過提煉精制后，有兩種主要成份對(duì)異常的MAT有顯著的抑制作用，主要是針對(duì)異常的癌蛋白質(zhì)因子使其消失作用，藉此抑制的結(jié)果，異常酵素會(huì)變成正常酵素(文獻(xiàn)28)。這兩種主要成份之一是與色素結(jié)合的酸性肽類，另一則是有機(jī)酸(文獻(xiàn)27、29)。正常酵素因?yàn)闆]有異常因子，所以絲毫不受這些抗癌物質(zhì)的影響，這也是為什么天然的化學(xué)抗癌物質(zhì)具有特異的選擇性，因?yàn)橛羞x擇性，人類的健康才不致于受到影響。癌細(xì)胞經(jīng)過這些精制的有效成分處理后，會(huì)被導(dǎo)引進(jìn)行分化而變成終末分化細(xì)胞(文獻(xiàn)28)。從酵素的研究得知，異常的甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素變成正常酵素是引導(dǎo)癌細(xì)胞進(jìn)行終末分化的一個(gè)轉(zhuǎn)折點(diǎn)。分析細(xì)胞內(nèi)AdoMet和AdoHcy的量也證實(shí)酵素的變化在癌細(xì)胞分化所扮演的重要角色。癌細(xì)胞的AdoMet量遠(yuǎn)比正常細(xì)胞為高(文獻(xiàn)11)，因?yàn)榘┘?xì)胞的MATLT比正常細(xì)胞的MATLKm值高出許多。癌細(xì)胞一旦分化變成終末分化細(xì)胞，AdoMet和AdoHcy的量同時(shí)減低很多，正好說明MATLT和SAHHLT同時(shí)失去致癌因子而變成MATL和SAHHL。
天然化學(xué)監(jiān)察與癌癥的形成既然人體內(nèi)有天然的抗癌物質(zhì)，為什么會(huì)有癌癥發(fā)生？分析一下癌癥患者，我們發(fā)現(xiàn)這些病人的絕大部分較正常人從尿排泄過多的低分子量代謝物質(zhì)，持久的過量消失造成體內(nèi)缺乏抗癌物質(zhì)，因而無法抑制癌細(xì)胞的繁殖，終于出現(xiàn)臨床癥狀。越嚴(yán)重的病人缺乏得越厲害(文獻(xiàn)25、26)。很明顯的這是一種惡性循環(huán)，由于某種原因造成病人過度排泄抗癌物質(zhì)，因此提供機(jī)會(huì)使癌細(xì)胞生根繁殖，癌細(xì)胞繁殖的結(jié)果更促使多量的排泄，到后來完全失去監(jiān)察能力，這時(shí)癌細(xì)胞可以毫不受約束地繁殖下去?？梢姲┌Y的臨床病害，異常的甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素是一個(gè)很重要的因素，但是天然化學(xué)監(jiān)察能力的破壞也是一個(gè)很重要的因素。所以要有效的克服癌癥必須要同時(shí)顧及這兩種因素，即要抑制異常甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素，也得減低病人過度排泄天然抗癌化學(xué)物質(zhì)，這樣才會(huì)收到事倍功半的效果。從尿精制的抗癌制劑，細(xì)胞分化劑[(Cell Differentia-tionAgent)簡稱CDA]很明顯兼顧到這兩種因素，病人過量排泄低分子量代謝物慢慢減少，等到病情好轉(zhuǎn)也就恢復(fù)到正常人的狀態(tài)(文獻(xiàn)25)。病人之所以排泄過量低分子量代謝物質(zhì)可能是發(fā)炎的結(jié)果，有發(fā)炎的癥狀就有過度排泄現(xiàn)象(文獻(xiàn)2、3、10)。發(fā)炎的結(jié)果促使巨噬細(xì)胞產(chǎn)生惡病質(zhì)素(cachectin)，惡病質(zhì)素的生理作用導(dǎo)致病人過度排泄。急性發(fā)炎因?yàn)楹芸旎謴?fù)正常，對(duì)癌癥的形成沒有很大關(guān)系。慢性發(fā)炎持久的影響才會(huì)幫助促成癌癥，愛滋病人及B型肝炎病人到后來往往會(huì)變成癌癥病人原因在此。癌細(xì)胞本身也構(gòu)成慢性發(fā)炎的病源，癌細(xì)胞越繁殖，發(fā)炎的現(xiàn)象越厲害，過度排泄的結(jié)果也就明顯。有效控制過度排泄對(duì)癌癥的治療實(shí)際上是一個(gè)重要的課題，但是完全被忽略了。已知的細(xì)胞毒藥物本身會(huì)促進(jìn)過度排泄(文獻(xiàn)26)，對(duì)天然監(jiān)察沒有保護(hù)反而有破壞作用，不難想象細(xì)胞毒療法的成功需要依賴把所有癌細(xì)胞消除干凈，否則病人經(jīng)長期細(xì)胞毒藥物的破壞，沒有自衛(wèi)能力去抑制殘余的癌細(xì)胞。相反的，從尿精制的抗癌制劑其中有效成分可以改善癌癥病人的過度排泄，病人的天然化學(xué)監(jiān)察能力恢復(fù)后，就可以依賴本身的自衛(wèi)能力來消除殘余的癌細(xì)胞，不用清除所有的癌細(xì)胞即可痊愈。這種尿精制抗癌制劑中的苯基谷氨酰胺就有改善癌癥病人過度的排泄的功能。雖然這個(gè)化合物本身對(duì)異常甲基轉(zhuǎn)移酵素沒有作用，對(duì)癌細(xì)胞也沒有直接抑制作用，但是由于能夠防止過度排泄抗癌物質(zhì)，對(duì)人或動(dòng)物的天然化學(xué)監(jiān)察能力起到保護(hù)作用，對(duì)癥狀較輕的癌癥病人也有醫(yī)療效果(文獻(xiàn)25)。另外，對(duì)動(dòng)物的癌癥形成有顯著的預(yù)防作用(文獻(xiàn)16、35)。動(dòng)物細(xì)胞的癌癥形成過程在細(xì)胞培養(yǎng)液比在動(dòng)物體內(nèi)容易完成(文獻(xiàn)36、39)，因?yàn)閯?dòng)物有天然的化學(xué)監(jiān)察能力，要一段很長的促進(jìn)時(shí)期消磨這種自衛(wèi)能力，癌細(xì)胞才可以繁殖起來。一般來說，像巴豆油這種發(fā)炎促進(jìn)物質(zhì)可以縮短促進(jìn)時(shí)期，像苯基谷氨酰胺可以保護(hù)化學(xué)監(jiān)察的則可預(yù)防癌癥的發(fā)生。
分化輔助劑分化引導(dǎo)劑可以直接或間接將癌甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素的異常因素消除，因而引導(dǎo)癌細(xì)胞進(jìn)行終末分化。甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素是由三個(gè)成員酵素結(jié)合而成的，我們發(fā)現(xiàn)各成員酵素的抑制劑往往可以增進(jìn)分化引導(dǎo)劑消除異常因素的功能，雖然這些抑制劑本身沒有明顯的分化促進(jìn)作用，廖氏等人把這種化合物命名為分化輔助劑(Helper Inducer)(文獻(xiàn)32)。MAT的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑如正丁酸、苯丁酸、苯醋酸等都有明顯的分化幫助劑活性。一般來說分化輔助劑如苯醋酸是很容易得到，毒性又低，用于減低分化引導(dǎo)劑的需求量，是有醫(yī)療效益的，因?yàn)榉只龑?dǎo)劑實(shí)在很珍貴且不容易大量制取。早期的癌癥患者體內(nèi)原有的分化引導(dǎo)劑成份還未消失太多，單單用分化輔助劑也可達(dá)到醫(yī)療效果。用以治療腦癌尤其適當(dāng)，腦部結(jié)構(gòu)上比較特殊，有血腦障礙保護(hù)內(nèi)在的分化引導(dǎo)劑成份的消失不致很快，所以單用苯醋酸這種容易通過血腦障礙的分化輔助劑就會(huì)有很好的醫(yī)療效果(文獻(xiàn)38)。分化輔助劑之用于治療腦癌值得推薦，因?yàn)榧?xì)胞毒藥物大部分不能達(dá)到腦部。
分化療法的醫(yī)療效果由臨床經(jīng)驗(yàn)得知，分化療法是相當(dāng)值得追求的療法。抗癌素(Antineoplastons)在1985年前，Burzynski曾經(jīng)用來醫(yī)治晚期癌癥病人，60％的病人有好轉(zhuǎn)現(xiàn)象，其中三分之一生命期超出五年進(jìn)入無病狀態(tài)(文獻(xiàn)5、6、7)，這類藥物最主要的優(yōu)點(diǎn)是沒有不良的副作用。其實(shí)所有分化治療劑原始的醫(yī)療靶或許不盡相同，到后來仍然要透過修正異常甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素達(dá)到引導(dǎo)癌細(xì)胞分化的結(jié)果，比如干擾素和維生素甲酸就是依賴這些藥物引導(dǎo)癌細(xì)胞產(chǎn)生類似抗癌素產(chǎn)物來作用在異常甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素而達(dá)成癌細(xì)胞的終末分化，這種類似抗癌素之產(chǎn)物很可能是寡腺嘌呤核苷酸(oligoisoadenylate)。干擾素對(duì)多毛白血病(文獻(xiàn)37)和維生素甲酸對(duì)急性早幼粒細(xì)胞白血病(文獻(xiàn))是公認(rèn)這些癌癥的最好療劑，雖然復(fù)發(fā)的問題還沒有完全解決(文獻(xiàn)1、34)。
本發(fā)明的目的在于基于癌癥是一系列相當(dāng)復(fù)雜的疾病，但其有一共同特征，即所有的癌細(xì)胞都具有持續(xù)不斷的分裂能力，且無法進(jìn)行終末分化，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)異常甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素是構(gòu)成癌癥這一共同特征的最主要病因。針對(duì)這病因?qū)で蟀┌Y的治療與預(yù)防，即利用正常人體本能具有抗癌能力的物質(zhì)制備抗癌、防癌的藥物，改變異常甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素之異常性達(dá)到引導(dǎo)癌細(xì)胞終末分化而不再繼續(xù)分裂直至死亡，且不具備不良的副作用。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，基于人類多年采取相對(duì)下策的辦法治療癌癥而效果不顯著，應(yīng)該把治療的目標(biāo)放在“甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素“這個(gè)治本的療法上。因?yàn)榘┘?xì)胞是異常的甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素促成的，用藥物抑制這異常酵素，則對(duì)已發(fā)病的有治病的功效，末發(fā)病的有預(yù)防的功效，此療法兼具上醫(yī)和中醫(yī)的優(yōu)良療法。由于正常人尿中具有并排泄少量可引導(dǎo)癌細(xì)胞進(jìn)行終末分化的化學(xué)物質(zhì)，本發(fā)明即是用正常人的尿進(jìn)行提練精制成可以將癌細(xì)胞的異常甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素改正、能引導(dǎo)癌細(xì)胞進(jìn)行終末分化而不再繼續(xù)分裂的細(xì)胞分化劑及其制劑，以達(dá)到醫(yī)療和預(yù)防的目的。本發(fā)明的制劑可以有選擇地抑制異常的甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素，結(jié)果癌細(xì)胞就和正常細(xì)胞一樣被引導(dǎo)進(jìn)行分化，因?yàn)檎５募谆D(zhuǎn)移復(fù)合酵素沒有異常因素，所以正常細(xì)胞的生長和功能不會(huì)受到這些抗癌物質(zhì)的影響，在抗癌化學(xué)藥物中，這是唯一有特異選擇性的，是一種順乎自然治本療法，而且健康人本來也是依賴這些化學(xué)物質(zhì)來對(duì)抗癌癥的發(fā)生。也就是說這是人類固有的抗癌方法?？拱┗瘜W(xué)藥物中很難找出可以駕乎其上的藥物。
本發(fā)明的細(xì)胞分化劑的制備是首先收集具有一定肌酸酐濃度的正常人尿，經(jīng)過吸附劑吸附和用有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取、回收純化而成制劑，本發(fā)明的制劑是一種針劑，亦可制成膠囊等劑型。
本發(fā)明與已有技術(shù)相比，其優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明利用人體本能的抗癌物質(zhì)制造治療和預(yù)防癌癥的藥物，從根本上使癌細(xì)胞分化而不再繼續(xù)分裂以達(dá)到治療的目的，故本發(fā)明是一種治本的有效方法，而且本發(fā)明的藥物沒有任何不良的副作用。


圖1為本發(fā)明的細(xì)胞分化劑制造流程2為本發(fā)明的細(xì)胞分化劑的凝膠過濾分析3為尿紅素和維生素B2作為分化輔助劑濃度與減低指數(shù)的關(guān)系4為尿紅素和維生素B2對(duì)TRNA甲基轉(zhuǎn)移酵素抑制能力與其濃度的關(guān)系5為尿紅素和維生素B2對(duì)分化引導(dǎo)劑的增進(jìn)作用6為本發(fā)明的CDA-II和胸苷配合使用的抗癌作用圖結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明附圖A.制備本發(fā)明包括尿的收集、過濾、吸附、溶劑萃取和干燥，用無熱原水溶解作為CDA-II的原料藥。
1.細(xì)胞分化劑的制備利用桶收集人尿，桶內(nèi)放入鹽酸，約每20kg人尿用1kg 1N鹽酸，上述促進(jìn)分化的活性至少可保持一個(gè)月不受破壞，PH值調(diào)整到2后，尿液先用尼龍布粗濾，再經(jīng)常規(guī)細(xì)濾將分子量大于10000道耳者的物質(zhì)除去。萃取時(shí)使用不銹鋼濾斗，濾斗上放置裝有吸附劑XAD-16的布袋，使用前先用2倍(v/w)的乙醇沖洗，再用2倍(v/w)的去離子水沖洗掉乙醇，重復(fù)二次。被吸附在XAD-16的物質(zhì)用4倍溶量(v/w)的去離子水沖洗后，再用2倍溶量(v/w)的乙醇溶解出來。中和乙醇抽取液后，用干燥機(jī)把乙醇蒸發(fā)干凈，干燥桶內(nèi)溫度保持在50℃以下。干燥后的物質(zhì)用無熱原水溶解出來作為CDA-II的原料藥。
乙醇抽取后的吸附劑用2倍溶量(v/w)的去離子水沖洗后，可重復(fù)使用，一直到吸附能力減低至新吸附劑吸附能力的70％左右再更換新吸附劑，一般說，XAD-16約可重復(fù)使用200次以上。
由于人體每天排泄的肌酸酐(crcatinine)有一定量，尿中的固體濃度大約與肌酸酐成正比，故尿中有效化學(xué)物質(zhì)的定量總是以肌酸酐作基礎(chǔ)較為可靠。作為原料所收集的尿液，其肌酸酐濃度在1.2-3.7克/公升間，平均為2.4±0.6克/公升。CDA-II產(chǎn)率在通過吸附劑的首一百次約為0.51±0.17克/克肌酸酐，而尿的固體成分約為46.7克/克肌酸酐，所以所制得的CDA原料藥之產(chǎn)率是固體成分的1.1％左右。
2.細(xì)胞分化劑注射液的制備CDA-II注射液的最后濃度約為50±2克/毫升，而原料藥的濃度一般在250毫克/毫升以上。故原料藥需進(jìn)行稀釋，首先將原料藥用去熱原水稀釋后，經(jīng)一系列的過濾，先用慢速濾紙過濾，再依序經(jīng)1μm和0.45μm濾孔的微孔濾膜過濾，濾液用去熱原水調(diào)到適當(dāng)濃度，在8小時(shí)內(nèi)經(jīng)0.22μm濾孔的過濾器，在無菌操作室(100級(jí)凈化間)內(nèi)完成過濾去菌。去菌后馬上灌裝制成100毫升或250毫升分化劑注射液制劑。
3.細(xì)胞分化劑膠囊的制備CDA-II可以用來制成膠囊制劑，即將上述原料藥經(jīng)微孔濾膜過濾的過濾液再用冷凍干燥方法干燥成固體。干燥固體研成粉末后，用自動(dòng)膠囊機(jī)裝成膠囊制劑，并裝入鋁箔密封，最后用放射線滅菌。
B.本發(fā)明之細(xì)胞分化劑分析4.細(xì)胞分化劑抗癌活性分析細(xì)胞分化劑的抗癌效力乃是根據(jù)有效成分對(duì)癌細(xì)胞異常甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素的抑制，因而引導(dǎo)癌細(xì)胞進(jìn)行終末分化以至停止細(xì)胞分裂，即細(xì)胞分化劑的活性具有抑制癌異常酵素MATLT的作用，可引導(dǎo)HL-60癌細(xì)胞的分化，以及抑制人類乳癌細(xì)胞群的形成，這些活性的測(cè)定方法已發(fā)表(文獻(xiàn)19，27，29)。本發(fā)明取三批CDA-II制劑分析其抗癌活性，其操作如后使用CDA-II之注射液制劑，所用劑量為1毫克/毫升。MATLT是由HL-60癌細(xì)胞制取，首先將沉淀的細(xì)胞懸浮于0.05M Tris，PH7，0.5mM MgCl2，然后用攪勻器將細(xì)胞膜打碎。酵素抽取液用高速離心法分離出來，再經(jīng)纖維素層析法以KCl梯度溶液將MATLT溶解出來并予以精制(文獻(xiàn)19)。MATLT活性的測(cè)定是在0.05毫升的反應(yīng)液包括0.05M Tris，PH8.2，0.15M KCl，15mM MgCl2，5mMDTT，2mM ATP及1μM3H-CH3]甲硫胺酸，37℃反應(yīng)30分鐘。將反應(yīng)液酸化，然后全部移至1平方英寸的磷酸纖維紙上，這些紙一起在燒杯內(nèi)多次用5mM磷酸緩沖液，PH7，沖洗掉未反應(yīng)的[3H-CH3]甲硫胺酸，最后測(cè)定被吸附之[3H-CH3]AdoMet的放射線，籍此決定MATLT的活性(結(jié)果見表1)。
HL-60癌細(xì)胞的終末分化按照NBT+測(cè)定方法(文獻(xiàn)27)進(jìn)行。先將HL-60細(xì)胞稀釋培養(yǎng)，每一培養(yǎng)瓶置入10毫升起始細(xì)胞，其濃度為1.5×105細(xì)胞/毫升，對(duì)比樣品及含CDA-II的培養(yǎng)瓶均經(jīng)過96小時(shí)培養(yǎng)后，取出一小部分將細(xì)胞用離心楊沉淀下來，這些細(xì)胞用NBT試劑在37℃作用半小時(shí)后，取出一小滴放置在細(xì)胞計(jì)數(shù)器并在顯微鏡下計(jì)數(shù)全部細(xì)胞數(shù)及染成黑色(NBT+)的細(xì)胞數(shù)。NBT+所占的百分比即CDA-II引導(dǎo)分化的活性(表1)。
CDA-II抗癌活性的另一指標(biāo)是對(duì)HBL-100乳癌細(xì)胞群的抑制，先將等比級(jí)數(shù)增加的乳癌細(xì)胞用生理鹽水沖洗一次，然后加入約2毫升的0.05％胰蛋白酶-0.53mM EDTA培養(yǎng)液，在37℃下培養(yǎng)10分鐘。先測(cè)定細(xì)胞濃度，再取部分稀釋成3×103細(xì)胞/毫升，取0.5毫升稀釋液加入4.5毫升對(duì)比液或含有CDA-II的培養(yǎng)液在37℃下培養(yǎng)。五天后，將培養(yǎng)液倒出，用生理鹽水沖洗一次，然后用甲醇固定15分鐘，固定后的細(xì)胞群用20倍稀釋的Giemsa染色液浸泡30分鐘。倒出染色液，經(jīng)水洗烘干后，在解剖鏡下計(jì)數(shù)細(xì)胞群數(shù)目，籍此決定CDA-II的抗癌活性(表1)。
表1細(xì)胞分化制(CDA-II)的抗癌活性％MAT抑制％NBT+ ％乳癌細(xì)胞群抑制制劑批號(hào)0149 58 1000255 53 1000350 54 100注CDA-II制劑為注射液制劑，所用劑量濃度為1毫克/毫升。MATLT由HL-60癌細(xì)胞如前述方法經(jīng)DEAE-cellulose純化制備，活性測(cè)定也按前法(文獻(xiàn)(19，PH60癌細(xì)胞的終末分化乃根據(jù)NBT+測(cè)定方法測(cè)定(文獻(xiàn)27)。至于癌細(xì)胞群形成的抑制作用則采用人類HBL-100乳癌細(xì)胞的培養(yǎng)方法(文獻(xiàn)29)。
5.細(xì)胞分化劑的有效成分分析將本實(shí)施例之2制得的CDA-II細(xì)胞分化劑注射液冷凍干燥，濃縮成200毫克/毫升。取5毫升濃縮液加入Bio-Gel P2的層析管柱(4.1厘米×44厘米)，然后用蒸餾水溶離，每7分鐘自動(dòng)收集一管，每管10毫升。完成分離后，從每支管取出25微升，加水稀釋至1毫升，測(cè)定A255的吸光度。另外也從每支管取出25微升作MATLT活性抑制的測(cè)定，MATLT活性的測(cè)定是根據(jù)本實(shí)施例4所述方法。然后根據(jù)A255的吸光值把收集管分割成如圖2所示的8個(gè)部分，將每一部分籍冷凍干燥把水分完全蒸干，測(cè)定干燥量以決定重量百分比分布。干燥固體則重新溶解于蒸餾水，用以測(cè)定HL-60癌細(xì)胞的分化活性，這活性用％NBT+來表示，分化活性的測(cè)定是根據(jù)本實(shí)施例4所述方法進(jìn)行，其結(jié)果如圖2所示。
細(xì)胞分化劑抗癌的有效成分中，最重要的當(dāng)然是可以引導(dǎo)癌細(xì)胞分化的引導(dǎo)劑。其分離純化及作用機(jī)制已發(fā)表(文獻(xiàn)27、28、29和30)。分化引導(dǎo)劑有兩種主要的化學(xué)成分；一為與色素結(jié)合的酸性肽類，簡稱PP-O，一為有機(jī)酸類，簡稱OA-0.79。PP-O是在如圖2所示分割之第一部分，OA-0.79則在第5和第6部分。要特別說明的是細(xì)胞分化劑之分化活性的表現(xiàn)并不是分化引導(dǎo)劑單獨(dú)作用所致，而往往是由于和分化輔助劑協(xié)同所表現(xiàn)出來的活性。分化輔助劑是細(xì)胞分化劑的主要化學(xué)成分，因分化引導(dǎo)劑的含量極少，且其化學(xué)結(jié)構(gòu)仍屬未知，因?yàn)檫€沒有精純到可以決定的程度。就如圖2所示分化引導(dǎo)的活性和MATLT抑制的活性非常吻合，不過有些部分如圖2的第2和第3部分，雖有明顯的MATLT抑制活性，但并沒有引導(dǎo)癌細(xì)胞分化的活性。這部分可能只有分化輔助劑而沒有分化引導(dǎo)劑，所以不具有引導(dǎo)癌細(xì)胞分化的活性。
分化輔助劑是甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素的單獨(dú)成員酵素的抑制劑(文獻(xiàn)32，可以協(xié)助分化引導(dǎo)劑將異常甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素改正為正常酵素，因而促進(jìn)分化引導(dǎo)劑的分化功能。
CDA制劑中已知為MAT抑制劑的有苯醋酸，吲噌醋酸和馬尿酸。苯醋酸很可能是苯基谷氨醯胺在干燥過程時(shí)的水解產(chǎn)物，是分布在第6和第7部分，用C18HPLC可以測(cè)定出來，吲噌醋酸也在這部分。馬尿酸則是第5部分的主要成分。這些MAT抑制劑要達(dá)到0.5減低指數(shù)(即分化引導(dǎo)劑有效劑量減半)的濃度各為4mM苯醋酸，8mM馬尿酸和0.95mM引噌醋酸。作為分化輔助劑甲基轉(zhuǎn)移酵素的抑制劑比MAT的抑制劑有效得多，前者往往只要有后者千分之一或更少的量即可達(dá)到同樣的效果。CDA制劑中已知有兩種甲基轉(zhuǎn)移酵素的抑制劑，都具有很好的分化輔助劑活性。這兩個(gè)成分是維生素B2和尿紅素。維生素B2分布在圖2第8部分的后半部分(文獻(xiàn)31)，該成分再經(jīng)C18HPC，可得很精純的維生素B2，含量約為0.04％左右，尿紅素是在第6和第7部分，含有尿紅素的流分再經(jīng)Sephadex SH管柱層析法和矽膠薄層層析法可以獲得很精純的尿紅素，含量為CDA-II制劑的0.5％。
6.尿紅素和維生素B2的分化輔助劑活性的測(cè)定分化輔助劑活性的測(cè)定是依據(jù)本發(fā)明人等所設(shè)計(jì)的方法(文獻(xiàn)32)。用培養(yǎng)的HL-60白血癌細(xì)胞，以NBT的定量方法來測(cè)定癌細(xì)胞的分化程度。開始是將HL-60細(xì)胞稀釋培養(yǎng)，每一培養(yǎng)瓶含有10毫升起始細(xì)胞液，其濃度為1.5×105細(xì)胞/毫升，每組四個(gè)培養(yǎng)瓶作對(duì)比，只添加維生素甲酸分化引導(dǎo)劑，劑量調(diào)節(jié)到可引導(dǎo)15％至60％之間的NBT+細(xì)胞，另加一個(gè)只加溶劑的對(duì)比瓶。維生素甲酸是溶于甲醇，但甲醇的總加入量不得超過2％，這對(duì)癌細(xì)胞的分化不會(huì)有影響。其它每組同樣有四個(gè)培養(yǎng)瓶，但用比較低劑量的維生素甲酸，另加一個(gè)只有溶劑的對(duì)比瓶，每一組再加不同劑量的分化輔助劑。經(jīng)96小時(shí)培養(yǎng)后，測(cè)定每一瓶的細(xì)胞數(shù)目，并按本實(shí)施例4所述方法，進(jìn)行NBT測(cè)定。一般說，HL-60細(xì)胞的自然分化(即沒有任何添加劑)總是低于4％。在只有分化輔助劑組的劑量范圍內(nèi)，細(xì)胞分化多半不會(huì)超過10％。每一瓶的NBT+數(shù)值都需要減除對(duì)比值的基數(shù)。
將劑量與NBT+之相對(duì)關(guān)系劃出曲線，籍此可獲得ED50值，即NBT+50％所需的分化引導(dǎo)劑劑量。從這些ED50值可計(jì)算出分化輔助劑的減低指數(shù)，減低指數(shù)＝有分化輔助劑的ED50/單獨(dú)引導(dǎo)劑ED50。減低指數(shù)越低，分化輔助劑的功能越高。其結(jié)果如圖3所示，維生素B2和尿紅素要達(dá)到0.5減低指數(shù)的濃度分別為3.0M和1.8M，比上述的MAT抑制劑活性高出許多。
7.尿紅素和維生素B3對(duì)tRNA甲基轉(zhuǎn)移酵素的抑制活性
tRNA甲基轉(zhuǎn)移酵素是由HL-60癌細(xì)胞制備，根據(jù)本實(shí)施例4所示的高速細(xì)胞抽取液。先將細(xì)胞抽取液調(diào)到PH5，沉淀的蛋白質(zhì)用離心機(jī)分離出來，再溶于0.05M Tris，PH7.8，0.5mM MgCl2與5mM HSCH2CH2OH組成的混合液。再經(jīng)過DEAD-cellulose層析法，以KCl梯度沖提液將tRNA甲基轉(zhuǎn)移酵素溶離出來精制(文獻(xiàn)20)。tRNA甲基轉(zhuǎn)移酵素活性的測(cè)定在0.25毫升反應(yīng)液內(nèi)進(jìn)行，其中包括0.05M Tris，PH7.8，0.1M，NH4Cl，0.04M NH4F，0.5mM MgCl2，5mM DTT，20微克大腸桿菌BtRNA，0.25μCi[3H-CH3]AdoMet，以及25微克酵素。反應(yīng)在37℃進(jìn)行3鐘。其結(jié)果如圖4所示，尿紅素和維生素B2具有抑制tRNA甲基轉(zhuǎn)移酵素的活性，不過抑制甲基轉(zhuǎn)移活性的有效劑量要比分化輔助劑的有效劑量高出很多，這可能和測(cè)這些不同活性的理化環(huán)境有關(guān)，因不同的理化環(huán)境(比如鹽的濃度)會(huì)影響化學(xué)物質(zhì)和酵素的有效接觸。盡管敏感度有相當(dāng)差異，不同的甲基轉(zhuǎn)移酵素的抑制劑和分有效的分化輔助劑。還發(fā)現(xiàn)其它甲基轉(zhuǎn)移酵素的抑制劑，例如溴化乙錠和?？邓?文獻(xiàn)20)，它們和尿紅素及維生素B2一樣有很好的分化輔助劑活性。這兩種甲基轉(zhuǎn)移酵素的抑制劑要達(dá)到0.5減低指數(shù)的濃度各為0.95μM溴化乙錠和2μM海康松(文獻(xiàn)20)，它們和尿紅素及維生素B2一樣有很好的分化輔助劑活性。這兩種甲基轉(zhuǎn)移酵素的抑制劑要達(dá)到0.5減低指數(shù)的濃度各為0.95μM溴化乙錠和2μM?？邓伞Ｋ约谆D(zhuǎn)移酵素的抑制劑當(dāng)作有效的分化輔助劑應(yīng)該不容置疑的。
8.分化輔助劑的促進(jìn)分化作用的分析分化輔助劑不但可以降低分化引導(dǎo)劑的有效劑量，又可促進(jìn)分化程度的完全。
培養(yǎng)HL-60癌細(xì)胞，其培養(yǎng)的起始濃度為1.5×105細(xì)胞/毫升。培養(yǎng)瓶分成三組，每組4至5瓶，其中一瓶作為無添加劑的對(duì)比。一組加入維生素甲酸0.025到0.15μM作為對(duì)比組；另外兩組加入4μM的尿紅素和維生素B2。培養(yǎng)96小時(shí)后，作NBT測(cè)定。每個(gè)測(cè)定值均需減除無添加劑的對(duì)比基數(shù)。
其結(jié)果如圖5所示，單用分化引導(dǎo)劑分化程度最高只能達(dá)到85％左右，如有尿紅素或維生素B2幫助，則分化程度可達(dá)100％。促進(jìn)分化程度的完全在醫(yī)療上可能比降低分化引導(dǎo)劑的有效劑量更為重要。
已知維生素甲酸作為抗癌劑，雖其療效極佳(文獻(xiàn)14、42)，可是不久癌細(xì)胞又會(huì)復(fù)發(fā)(文獻(xiàn)34、1)。復(fù)發(fā)和單用分化引導(dǎo)劑分化不完全有關(guān)，其原因是單用分化引導(dǎo)劑會(huì)造成傷害，使細(xì)胞不能完成分化程序。由于分化的程度需要經(jīng)過漫長的兩個(gè)細(xì)胞分裂周期(文獻(xiàn)43、44、45)，如細(xì)胞受到傷害而停頓就不能完成終末分化。異常甲基轉(zhuǎn)移酵素一旦被分化引導(dǎo)劑修正去掉癌蛋白因素，復(fù)合酵素會(huì)分解成單獨(dú)三個(gè)成員酵素，有些甲基轉(zhuǎn)移酵素成單體的時(shí)候會(huì)表現(xiàn)分解核酸的活性而造成傷害細(xì)胞(文獻(xiàn)18)，如傷害嚴(yán)重則細(xì)胞死亡，若傷害不夠嚴(yán)重，經(jīng)過一段長時(shí)間的停頓和修復(fù)且臨床的維生素甲酸無法維持有效濃度時(shí)，這些修復(fù)復(fù)活的細(xì)胞就會(huì)回復(fù)原狀造成復(fù)發(fā)的結(jié)果。所以分化輔助劑是分化療法不可缺的成分，雖其重要性或許比不上分化引導(dǎo)劑。
細(xì)胞分化劑除了必要的分化引導(dǎo)劑和輔助劑外，還有另一種成分對(duì)癌癥醫(yī)療也相當(dāng)有幫助，即抗惡病質(zhì)劑。發(fā)現(xiàn)苯基谷氨醯胺可以對(duì)抗癌癥病人惡病質(zhì)癥引起的過渡排泄(文獻(xiàn)26)；這化合物可以恢復(fù)病人化學(xué)監(jiān)察本能，對(duì)早期的病人確實(shí)有醫(yī)療效果(文獻(xiàn)26)，尤其對(duì)癌癥的預(yù)防效果更明顯(文獻(xiàn)16、35)。苯基谷氨醯胺是圖2第4部分的主要成分。總之，細(xì)胞分化劑有許多必要的化學(xué)成分，互相協(xié)助來達(dá)到良好的醫(yī)療作用。
9.細(xì)胞分化劑與其它抗癌化學(xué)療劑的協(xié)助抗癌作用癌癥致病的因素有多種，當(dāng)然異常甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素是其中很重要的病因，其它癌基因的表現(xiàn)也是促成癥狀的重要因素，雖然我們相信解決異常甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素已除去了一個(gè)大害，但更相信多方面的夾擊會(huì)取得更好的療效。
癌細(xì)胞有非?；钴S的甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素，如單用化學(xué)藥物抑制DNA合成會(huì)引起過度甲基轉(zhuǎn)移，這是促成基因重復(fù)合成的原因。基因重復(fù)合成會(huì)導(dǎo)致抗藥物細(xì)胞的形成(文獻(xiàn)33)，這是化學(xué)療法失敗的一個(gè)很重要因素。用細(xì)胞分化劑抑制甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素可以減低抗藥細(xì)胞的形成，有助于癌癥的治療，事實(shí)亦證明細(xì)胞分化劑對(duì)某些抗癌藥物確實(shí)有協(xié)助的治療效果。如本發(fā)明利用CDA-II和胸苷的組合用藥(圖6)。
附錄專業(yè)名詞縮寫(1)AdoHcyS-腺苷高胱胺酸(S-adenosylhomocysteine)(2)AdoMetS-腺苷甲硫胺酸(S-adenosylmethionine)(3)CDA細(xì)胞分化劑(cell diffentiation agent)(4)DTT二硫蘇糖醇(dithiothreitol)(5)HPLC高效液相層析(high performance liquid chromatography)(6)MAT甲硫胺酸腺苷轉(zhuǎn)移酵素(methionine adenosyltransferase)(7)NBT硝基蘭四唑(nitroblue tetrazoliun)(8)SAHHS-腺苷高胱胺酸水解酵素(S-adenosylhomocysteine hydrolase)(9)XAD吸附劑
權(quán)利要求
1.一種引導(dǎo)癌細(xì)胞分化之藥物劑的制備方法，其特征在于用于治療與預(yù)防癌癥，以癌細(xì)胞中異常甲基轉(zhuǎn)移復(fù)合酵素為藥靶的細(xì)胞分化劑及其載劑是從人尿提練精制而成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所說的一種引導(dǎo)癌細(xì)胞分化之藥劑的制備方法，其特征在于藥物是制成針劑、膠囊等劑型。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所說的一種引導(dǎo)癌細(xì)胞分化之藥劑的制備方法，其特征在于(1)收集新鮮人尿，其中肌酸酐濃度在1.2-3.7克/分升間；(2)通過吸附劑XAD-6或類似功能的吸附劑；(3)經(jīng)乙醇或類似功能的有機(jī)溶劑萃??；(4)回收和純化細(xì)胞分化劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所說的一種引導(dǎo)癌細(xì)胞分化之藥劑的制備方法，其特征在于細(xì)胞分化劑最好與胸苷合并使用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療癌癥藥劑的制備。本發(fā)明是由新鮮人尿提練純化的細(xì)胞分化劑CDA－Ⅱ。本發(fā)明揭示CDA－Ⅱ可以解除癌細(xì)胞甲基轉(zhuǎn)移酵素異常狀態(tài),本發(fā)明是一種抗癌新方法,旨在去除病因,可促進(jìn)癌細(xì)胞的終末分化而達(dá)醫(yī)療的顯著效果。本發(fā)明藥劑在治療上有特異的選擇性,且無不良副作用,其有效成分包括分化引導(dǎo)劑、分化輔助劑和抗惡病質(zhì)劑,這些有效成分的相互協(xié)助可達(dá)最有效的療效。CDA－Ⅱ和其它抗癌藥物如胸苷聯(lián)合使用,其抗癌效果更佳。
文檔編號(hào)A61K9/48GK1172650SQ9610904
公開日1998年2月11日 申請(qǐng)日期1996年8月2日 優(yōu)先權(quán)日1996年8月2日
發(fā)明者廖明征 申請(qǐng)人:張銘烈