專利名稱：免疫原性組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及包含非正常地溶于疏水性溶劑的免疫原的免疫原性的組合物，涉及制備這些組合物的方法及其在治療或預防疾病中的用途，或在制備具有上述用途的制劑中的應用。特別地，本發(fā)明涉及用作口服疫苗的免疫原性的組合物。
由于它們的親水性和高極化度限制了它們相互作用或混合成液相的程度，使蛋白質(zhì)和相似的大分子在，例如藥物學，食品技術或化妝品工業(yè)中的應用受到限制。很多天然系統(tǒng)使用脂類載體(例如皮膚，細胞膜)以防止過量親水性分子進入?yún)^(qū)室內(nèi)部；脂類載體分散蛋白質(zhì)的能力展示了將這些大分子導入生物系統(tǒng)的新途徑，由此可將含蛋白質(zhì)的脂類介質(zhì)與載體的疏水性成分結(jié)合在一起，而不是被它們所排斥。
應用疏水溶劑中親水性大分子的增溶作用的另一領域是用來誘發(fā)免疫反應的組合物，例如，疫苗，特別是口服疫苗。疫苗在宿主動物中發(fā)揮它們的效力，對特定的抗原或抗原組產(chǎn)生免疫反應?？乖M分或疫苗組分常包括一種或多種蛋白質(zhì)，例如病毒膜蛋白質(zhì)。對患者使用疫苗可通過從其中可衍生一種或多種抗原的特定的試劑誘導患者體內(nèi)抗體的產(chǎn)生，導致對抗感染的保護反應。
但是，包含蛋白質(zhì)的口服疫苗存在與上述反應有關的問題。因此，仍需要發(fā)明患者服用時可誘導適當?shù)拿庖叻磻?，又無上述問題的口服疫苗。
現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這樣的免疫反應可通過使用其中免疫原被溶于疏水溶劑如油的制劑而誘導，特別地，溶于油中的蛋白或肽可被用于一般的免疫反應，因而可用于疫苗，特別是口服疫苗中。
在油相而非水介質(zhì)中的親水性物質(zhì)的分散在增加對溫度介導的變性，水解，光敏感性等的穩(wěn)定性方面有著另外的好處。油可在比水溶液寬的溫度范圍內(nèi)保持流動，或者具有較高的粘性，對物理損傷產(chǎn)生很好的保護作用。在混合相系統(tǒng)中，油中的蛋白質(zhì)螯合物可與水溶性化合物相互限制有害的相互作用，例如氧化或水解。
已有一些同時含有大分子和油的制劑的例子，其中之一公開于EP-A-0366277。該文獻公開的制劑為同時含有疏水和親水相的乳劑，其中疏水相含多種或單種乳糜粒形成的脂類。但是，該大分子只溶于親水相不溶于疏水相。
EP-A-0521994也涉及一種大分子的適于口服給藥的組合物，其中包括一種與卵磷脂有關的生物活性材料或可在體內(nèi)作為卵磷脂前體的化合物。所有被例舉的組合物都為包括親水和親脂相的制劑。另外，該在先技術文獻中，大分子被溶解在親水相中而不是親脂相中。
盡管上述制劑都含有大分子和油。但顯然所有上述制劑中的大分子都被溶解在親水相中而不是親脂相中。制備真正溶于油的大分子的嘗試遇到了限制，尚無已知的用于疫苗中的這樣的溶液的例子。
US-A-5340588公開了基于室溫下為固體的脂球的疫苗制劑。其中在脂球芯表面包埋著一層磷脂，抗原，或者免疫原被固定在芯中，可被附著在磷脂表面或中間或者兼而有之。
UK專利申請No.9323588.5公開了一種可將親水性物質(zhì)溶于通常不能溶解在其中的疏水性溶劑中的方法。該方法依賴于下述驚人的發(fā)現(xiàn)，即如果親水性物質(zhì)在某種情況下與一種兩親物質(zhì)混合，所得到的組合物將易溶于親脂性物質(zhì)如油中。
本發(fā)明涉及下述驚人的發(fā)現(xiàn)，即溶于親脂性溶劑如油中的免疫原可誘發(fā)服用它的動物體內(nèi)部的免疫反應。特別是可有利于口服給藥。
該脂類介質(zhì)也可作為更有效的微粒釋放系統(tǒng)，容易地通過噬菌作用而被吸收。
因此，本發(fā)明首先提供一種包含在無親水相存在的情況下溶于或分配于疏水溶劑的免疫原的免疫原性的組合物。在優(yōu)選的實施方案中，免疫原是抗原而組合物是疫苗，例如口服疫苗。
這里使用的術語“免疫原”指可誘發(fā)免疫作用的物質(zhì)，該免疫作用可以是典型的免疫反應，例如產(chǎn)生抗體，觸發(fā)分化作用或擴張?zhí)囟ǖ腡細胞群，并可為全身的或局部的，例如限于粘膜反應。選擇性地，該免疫作用可以是，例如，免疫耐受性的，其中天然的免疫系統(tǒng)對特定抗原的激發(fā)無反應。另一種選擇性的免疫作用可以是脫敏的，其中對特定抗原的自體免疫或變應性反應(IgE)的預先存在的趨勢被緩減。
合適的免疫原的例子包括白喉類毒素，破傷風類毒素，肉毒桿菌類毒素，蛇毒抗原，肝炎B抗原，百日咳亞單位，流感和/或b(全部殺死的病毒或蛋白亞單位)，霍亂抗原，H.Pylori抗原，全菌或其提取物例如，銅綠假單胞菌，衣原體，奈瑟氏球菌，耶爾森氏菌，沙門氏菌，真菌或真菌的抗原，例如，來自Candida，狂犬病毒，脊髓灰質(zhì)炎病毒，輪狀病毒，麻疹病毒，風疹病毒，呼吸道合胞病毒，HIV，BCG，其他分枝桿菌抗原，原生動物抗原，例如，瘧原蟲，利什曼原蟲，弓形蟲，錐蟲，吸蟲抗原，例如，血吸蟲屬，絳蟲抗原，例如，囊尾蚴屬，棘球絳蟲屬，線蟲抗原，例如弓蛔蟲屬，鉤蟲和絲蟲，螺旋體抗原，例如疏螺旋體，癌細胞特異性的表面膜表位，和針對抗炎的免疫調(diào)制劑的細胞受體(治療炎癥如Crohn′s病和風濕性關節(jié)炎)，例如抗TNF-R和抗IL-1R。
也可使用非蛋白質(zhì)抗原，例如，多糖或者甾體的聚合物綴合物。
本發(fā)明的一個優(yōu)點是不同的抗原(例如蛋白質(zhì)和多糖)可共存于相同的介質(zhì)中激發(fā)增強的免疫反應，其好處是其中一個組分作為另一個組分的載體，而不需要任何共價鍵。
可用于減輕或限制針對它們的免疫反應的抗原的例子包括HLA抗原和多核苷酸和RNA，和DNA包括質(zhì)粒DNA。
可用于激發(fā)脫敏免疫反應的抗原的例子包括花粉，塵螨抗原，蜂毒和食物變應原。
當免疫原是肽，多糖或其他抗原時，也可使其與至少一個中長-或長鏈烴尾綴合。
在另一個實施方案中，為了增強反應使免疫原與一種或多種細胞因子共溶。合適的細胞因子的例子包括IL-4，IL-10，IL-12和γ-干擾素。其他免疫刺激劑也可被摻入，例如單磷?；愼，氫化的細菌提取物，胞壁酰二肽及類似物，吞噬刺激素和霍亂毒素亞基B以及大腸桿菌的熱易變毒素。
本發(fā)明的另一個方面提供了一種制備免疫原性的組合物的方法，其中包括將免疫原溶于或分散于通常不能溶于其中的疏水溶劑中的步驟。優(yōu)選的組合物為口服疫苗。
UK專利申請No.9323588.5公開的方法特別適于將免疫原溶于用于本發(fā)明組合物的制備中的疏水性溶劑中。
因此，本發(fā)明的優(yōu)選方案中，溶解親脂性物質(zhì)的方法包括下列步驟(i)將免疫原用兩親物締合在液體介質(zhì)中；(ii)除去液體介質(zhì)，留下一系列兩親物分子，它們的親水端基指向免疫原，并且，其中兩親物和免疫原之間無化學相互作用；以及(iii)在免疫原/兩親物系列周圍提供疏水溶劑。
可用于本發(fā)明的兩親物很多，已發(fā)現(xiàn)的特別合適的兩親物是兩性離子兩親物如磷脂。具有磷脂酰膽堿端基的磷脂已被成功地使用，這樣的磷酯的例子包括磷脂酰膽堿本身(PC)，溶血磷脂酰膽堿(lyso-PC)，鞘磷酯，它們的衍生物，例如十六烷基磷酸膽堿，或含磷酸膽堿的兩親聚合物，以及鹵代兩親物，例如氟代磷脂。在本申請中，術語磷脂酰膽堿(PC)和卵膦脂可互換作用。合適的天然卵磷脂可由任何方便的來源，例如雞蛋，以及特別是大豆衍生。在大多數(shù)情況下，優(yōu)選與所選擇的疏水溶劑化學性質(zhì)相似的兩親物，這將在下文中詳細討論?？墒褂眯粱咸擒?，α-生育酚，或其酯，或者這些化合物的混合物。
本發(fā)明者已經(jīng)發(fā)現(xiàn)兩性離子兩親物如磷脂特別適用于本發(fā)明的方法，這進一步顯示了本發(fā)明與Okahata等人的方法的顯著差異。顯然，在先技術文獻的作者斷定陰離子和兩性離子脂類完全不適用于它們的方法并指明他們用這些脂類得到了產(chǎn)率為零的絡合物。
疏水溶劑的選擇依賴于被溶解的物質(zhì)和兩親物的類型。合適的溶劑包括烴類，例如非極性油如礦物油，角鯊烷和角鯊烯，長鏈脂肪酸與不飽和脂肪酸例如優(yōu)選油酸和亞油酸，醇類，特別是中長鏈醇如辛醇和帶分枝的長鏈醇如植醇，類異戊二烯，例如橙花醇和香葉醇，其他醇如正丁醇，松油醇，單甘油醇如甘油單油酸酯(GMO)，其他酯類，例如乙酯乙酯，乙酸戊酯，和乙酸冰片酯，中長或長鏈單，雙或三甘油酯及其混合物，上述物質(zhì)的鹵代類似物，其中包括鹵代油，例如長鏈碳氟化合物和碘三甘油，例如lipidiol。
將疏水溶劑和兩親物合適地匹配時，通?？傻玫阶罾硐氲慕Y(jié)果。例如，當溶劑為油酸時，兩親物選擇lyso-PC比PC更合適，而疏水溶劑為三甘油時卻正好相反。
另外，在某些情況下，我們發(fā)現(xiàn)在將其與免疫原/兩親物接觸以前在疏水溶劑中加入一定的兩親物很有益處。這將確保兩親物分子不會因兩親物對疏水溶劑的高親合性而從親水性物質(zhì)的周圍剝離。
兩親物分子由它們的親水性端基向著免疫原部分進入免疫原/兩親物粒子的定向(作用)可由數(shù)種方法實現(xiàn)，特別優(yōu)選的方法的例子將在下文中更詳細地討論。
在第一種方法中，該方法開始部分與kirby等人在生物/技術，1984年11月，979-984和在脂質(zhì)體技術，第1卷，第19-27頁，Gregoriadis，編輯，CRC出版公司，Boca Raton，弗羅里達，美國中描述方法相似，將免疫原與兩親物在親水性溶劑中的分散系混合，以便使兩親物分子形成親水性端基指向含免疫原的親水相表面的組合物。然后除去親水溶劑，留下其中兩親物分子親水性端基指向免疫原的干燥組合物。
在第一種方法中，盡管可使用其他極性溶劑，但親水性溶劑優(yōu)選水。
兩親物組合件的形成可為微膠囊，單層狀囊，優(yōu)選常見的直徑約為25nm的小單層狀囊，多層狀囊或管狀結(jié)構(gòu)，例如，匙孔筒狀物(cochleatecylinders)，六角形狀物，立方體狀物或髓磷脂類結(jié)構(gòu)。所采用的形式將取決于所使用的兩親物，例如，如磷脂酰膽堿(PC)的兩親物傾向于形成小單層狀囊，而溶血磷脂酰膽堿形成微膠囊。但是，在所有上述結(jié)構(gòu)中，兩親物分子的疏水端基指向結(jié)構(gòu)中心的內(nèi)部，而親水性端基指向分散有免疫原的溶劑的外周。
兩親物免疫原的重量比通常在1∶1到100∶1的范圍內(nèi)，優(yōu)選從2∶1到20∶1，對于PC最優(yōu)選約8∶1而對于lyso-PC最優(yōu)選4∶1。
這些比例僅為優(yōu)選的比例，應當特別指出。該比例的上限是建立在盡可能使用最少量的兩親物的經(jīng)濟因素上的。有時下限更為關鍵，當免疫原具有明顯的疏水部分或者特殊地大時，2∶1或更低的比例也是可能的。
當溶劑被快速除去時將得到好的結(jié)果，盡管可使用其他方法，但冷凍干燥是簡便的除去溶劑的方法。
在某些情況下，在親水溶液中包含鹽可能是有益的，特別是當免疫原是大分子化合物如大分子蛋白質(zhì)。但是，由于大量無機鹽的存在導致結(jié)晶的形成，因而產(chǎn)生了渾濁的溶液，因此優(yōu)選使用有機鹽而不使用無機鹽如氯化鈉。由于另外具有易于冷凍干燥除去的優(yōu)點，乙酸銨特別適于該目的。
制備含兩親物端基指向免疫原部分的粒子的組合物的第二種方法是將免疫原和兩親物共溶于一種公共溶劑中，隨后除去該溶劑。
因此，在本發(fā)明第二個方面的另一優(yōu)選方案中提供了一種制備疫苗的方法，其中包括將免疫原和兩親物共溶于一種公共溶劑中，隨后除去該溶劑，因而形成免疫原/兩親物粒子，其兩親物分子的親水端基指向免疫原。
使用該方法時，兩親物免疫原的重量比優(yōu)選約1∶1到50∶1，更優(yōu)選2∶1到10∶1，最優(yōu)的比例約為4∶1。
當然，普通溶劑必須能溶解兩親物和免疫原，優(yōu)選極性有機溶劑如二甲基甲酰胺，二甲亞砜，最優(yōu)選冰醋酸。
該方法中，與第一種方法相反，粒子不可能在除去普通溶劑之前形成。
在除去溶劑時，兩親物分子趨向有序排于一種片狀結(jié)構(gòu)中，該結(jié)構(gòu)中它們的親水性端基指向免疫原而它們的親脂性端基背向免疫原。但是，本發(fā)明的效果并不取決于該項觀察的精確與否。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，當緩慢地除去溶劑，例如通過在氮氣流中干燥，可得到好的結(jié)果，這可能是因為給了兩親物分子重新排列更多的時間。
對于兩親物可使用任何疏水性溶劑，但是，對于小分子免疫原優(yōu)選使用的油包水型乳液來說，優(yōu)選使用低沸點的溶劑，因為已經(jīng)發(fā)現(xiàn)當使用溫和的方法如蒸發(fā)慢慢除去疏水溶劑時，將獲得最佳結(jié)果，顯然，使用低沸點的溶劑最有利于這種情況。盡管冷凍干燥是更適合的除去溶劑的方法，但低沸點溶劑也適于油包水型油液。親水性溶劑優(yōu)選水。
兩親物免疫原的重量比可從約1∶1到50∶1，優(yōu)選從2∶1到10∶1，最優(yōu)選約4∶1。
親水溶液與疏水溶液的比例不是關鍵，但使用小分子免疫原時，形成油包水型乳液優(yōu)于形成水包油型乳液。
特別適于水分子免疫原的一種選擇性的形成粒子的方法是，將免疫原截留在封閉的液體囊如分散在親水溶劑中的小單層狀囊(SUVs)中，然后除去溶劑。
不能形成脂質(zhì)體的兩親物的一個例子是溶血卵磷脂。在大多數(shù)小環(huán)境中，該兩親物形成微膠囊而不是小單層狀囊，因而它不適用于脂質(zhì)體的制備，但它在本發(fā)明中極其有用，特別是它適用與可混溶的疏水性溶劑如油酸的混合。
第三方面，本發(fā)明提供了免疫原在疏水溶劑中的單相疏水制劑，該制劑可使用這里所述的方法得到。
第四方面，與發(fā)明提供了一種兩相組合物，其中包括親水相和疏水相，親水相中又包括本發(fā)明免疫原性的組合物。特別地，疏水相分散于連續(xù)的親水相中，并優(yōu)選地為一種乳劑。
第五方面，本發(fā)明提供了溶于疏水溶劑中的免疫原的用途。通常情況下它不溶于免疫原組合物的制劑，特別是口服疫苗中。
第六方面，本發(fā)明提供了一種含免疫原組合物或本發(fā)明單相疏水制劑的腸溶膜膠囊。
上述單相制劑的一個優(yōu)點是它們實際上是含水的，因而不易被水解。它們在冰凍-熔化時也是穩(wěn)定的并在高溫下也有很好的穩(wěn)定性，這可能是因為欲使蛋白質(zhì)伸展及變性必須有水的存在。這意味著它們比免疫原的含水制劑將有更長的貯存期。
下列將參照實施例進一步描述本發(fā)明，這些實施例不應被認為是對本發(fā)明的限制。
實施例與本申請附圖有關，其中

圖1顯示口服本發(fā)明制劑后對破傷風類毒素的反應；以及圖2顯示皮下注射本發(fā)明制劑后對破傷風類毒素的反應。
實施例1將濃度為3000Lf/ml(6mg/ml)的1ml破傷風類毒素用1升蒸餾水透析過夜。10分鐘內(nèi)，通過探針超聲波與冷卻將大豆磷脂酰膽堿以100mg/ml的濃度分散在蒸餾水中。將1ml該溶液分配在具有玻璃螺帽的2ml管形瓶中。然后浸入40μl破傷風類毒素(稀釋后5mg/ml)。將該混合物冷凍干燥過夜，并加入1ml油酸。得到了一種清澈的溶液，使用前將其冷藏。
將100μl該制劑(稱為制劑‘A’)皮下注射或通過胃管對控制條件下每籠關三只并適宜喂以食物和水的近交的年輕的成年Swiss小鼠給藥(每組3-4只小鼠，每只動物20μg破傷風類毒素)。給藥兩星期后從尾靜脈取出血漿樣品，以1∶100稀釋后按夾心ELISA法則量針對破傷風抗原的抗體(IgG)水平。在450nm處的光密度如圖1和2所示。實施例210分鐘內(nèi)，通過探針超聲波與冷卻將大豆磷脂酰膽堿以100mg/ml的濃度分散在蒸餾水中。將1ml該溶液分配于具有玻璃螺絲帽的2ml管形瓶中，如實施例‘A’，混入40μl破傷風類毒素。將該混合物冷凍干燥過夜，并加入1ml Miglyol 818。得到了一種清澈的溶液，使用前將其冷藏。
將100μl該制劑(稱為制劑‘B’)皮下注射或通過胃管對控制條件下每籠關三只并適宜喂以食物和水的近交的年輕的成年Swiss小鼠給藥(每組3-4只小鼠，每只動物20μg破傷風類毒素。給藥兩星期后從尾靜脈取出血漿樣品。以1∶100稀釋后按夾心ELISA法測量抗體(IgG)水平。在450nm處的光密度如圖1和2所示。實施例310分鐘內(nèi)，通過探針超聲波與冷卻將大豆磷脂酰膽堿以100mg/ml的濃度分散在蒸餾水中。將1ml該溶液分配于具有玻璃螺絲帽的2ml管形瓶中，如實施例‘A’，混合入40μl破傷風類毒素。將該混合物冷凍干燥過夜，產(chǎn)加入1ml市場購買的葵花油。得到了一種清澈的溶液，使用前將其冷藏。
將100μl該制劑(稱為制劑‘C’)皮下注射或通過胃管對控制條件下每籠關三只并適宜喂以食物和水的近交的年輕的成年Swiss小鼠給藥(每組3、4只小鼠，每只動物20μg破傷風類毒素)。給藥兩星期后從尾靜脈取出血漿樣品，以1∶100的比例稀釋后按夾心ELISA法測量抗體(IgG)的水平。450nm處的光密度如圖1所示。實施例4將十六烷基磷酸膽堿以100mg/ml的濃度溶于蒸餾水中。將500μl該溶液分配于具有玻璃螺絲帽的2ml管形瓶中，如實施例‘A’，混入20μl破傷風類毒素(稀釋后5mg/ml)。將該混合物冷凍干燥過夜，并加入500μl油酸。得到了一種清澈的溶液，使用前將其冷藏。
將100μl該制劑(稱為制劑‘D’)通過胃管對控制條件下每籠三只并適宜喂以食物和水的近交的年輕的成年Swiss小鼠給藥(每組3-4只小鼠，每只動物20μg破傷風類毒素)。給藥兩星期后從尾靜脈取出血漿樣品，以1∶100的比例稀釋后按夾心ELISA法測量抗體(IgG)的水平。450nm處的光密度如圖1所示。實施例5將β-辛基葡糖苷以100mg/ml的濃度溶于蒸餾水中。將500μl該溶液分配于具有玻璃螺絲帽的2ml管形瓶中，如實施例‘A’，混入20μl破傷風類毒素(稀釋后5mg/ml)。將該混合物冷凍干燥過夜，并加500μl甘油單油酸酯。得到一種清澈的溶液，使用前將其冷藏。
將100μl該制劑(稱為制劑‘E’)皮下注射或通過胃管對控制條件下每籠關三只并適宜喂以食物和水的近交的年輕的成年Swiss小鼠給藥(每組3-4只小鼠，每只動物20μg破傷風類毒素)。給藥兩星期后從尾靜脈取出血漿樣品，以1∶100的比例稀釋后按夾心ELISA法測量抗體(IgG)的水平。450nm處的光密度如圖2所示。實施例6將兩親物β-辛基葡糖苷以100mg/ml的濃度溶于蒸餾水中。將500μl該溶液分配于具有玻璃螺絲帽的2ml管形瓶中，如實施例‘A’，混合20μl破傷風類毒素，(稀釋后5mg/ml)。將該混合物冷凍干燥過夜，并加入500μl植醇。得到一種清澈的溶液，使用前將其冷藏。
將100μl該制劑(稱為制劑‘F’)皮下注射或通過胃管對控制條件下每籠關三只并適宜喂以食物和水的近交的年輕的成年Swiss小鼠給藥(每組3-4只小鼠，每只動物20μg破傷風類毒素)。給藥兩星期后從尾靜脈取出血漿樣品，以1∶100的比例稀釋后按夾心ELISA法測量抗體(IgG)的水平。450nm處的光密度如圖所示。
權利要求
1.一種免疫原性的組合物，其中包括在無親水相的情況下溶于，或分配于疏水溶劑的免疫原。
2.權利要求1的免疫原性的組合物，其中免疫原溶于疏水溶劑形成單相。
3.權利要求1或2的免疫原性的組合物，其中免疫原是抗原。
4.權利要求1到3中任意一項的免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物為疫苗或可用于疫苗的制備。
5.權利要求4的免疫原性組合物，其中疫苗是口服疫苗。
6.權利要求1到5中任意一項的免疫原性組合物，其中免疫原選自白喉類毒素，破傷風類毒素，肉毒桿菌類毒素，蛇毒抗原，肝炎B抗原，百日咳亞單位，流感和/或b(或全部被殺死的病毒或蛋白亞單位)，霍亂抗原，H.pylori抗原，全菌，或其提取物，例如銅綠假單胞菌，衣原體，奈瑟氏球菌，耶爾森氏菌，沙門氏菌，真菌或真菌的抗原，例如來自Candida，狂犬病毒，脊髓灰質(zhì)炎病毒，輪狀病毒，麻疹病毒，風疹病毒，呼吸道合胞病毒，HIV，BCG，其他分枝桿菌抗原，H.inflnenza A或B(有或沒有載體蛋白)，原生動物抗原，例如瘧原蟲，利什曼原蟲，弓形蟲，錐蟲，吸蟲抗原，例如血吸蟲屬，絳蟲抗原，例如囊尾蚴屬，棘球絳蟲屬，線蟲抗原，例如弓蛔蟲屬鉤蟲和絲蟲，螺旋體抗原，例如疏螺旋體，癌細胞特異性的表面膜表位，和針對抗炎的免疫調(diào)制劑的細胞受體(治療炎癥如Crohn’s病和風濕性關節(jié)炎)，例如抗TNF-R和抗IL-IR，甾體化合物的多糖或聚合物綴合物。
7.權利要求1到6中任意一項的免疫原性組合物，其中組合物中共存兩種或更多的抗原。
8.權利要求7的免疫原性組合物，其中蛋白質(zhì)抗原與多糖抗原共存。
9.權利要求1到8中任意一項的免疫原性組合物，其中免疫原是綴合在至少一個中長或長鏈烴尾上的肽，多糖或其他抗原。
10.權利要求1到9中任意一項的免疫原性組合物，其中存在一種或多種另外的免疫刺激劑。
11.權利要求10的免疫原性組合物，其中另外的免疫刺激劑選自IL-4，IL-10，IL-12，γ-干擾素，單磷酰基類脂A，分枝桿菌提取物，胞壁酰二肽及類似物，吞噬刺激素和毒素亞基B，以及大腸桿菌熱易變毒素。
12.權利要求1到3中任意一項的免疫原性組合物，其中免疫原將減少對抗抗原的免疫反應的消除。
13.權利要求12的免疫原性組合物，其中抗原是HLA抗原或DNA。
14.權利要求1到3中任意一項的免疫原性組合物，其中該組合物可使免疫反應脫敏。
15.權利要求14的免疫原性組合物，其中抗原選自花粉，塵螨抗原或食物變應原。
16.一種制備免疫原性組合物的方法，其中包括將免疫原溶于，或分配于通常情況不能溶解免疫原的疏水溶劑的步驟
17.權利要求16的方法，其中包括下列步驟(i)將免疫原用兩親物締合在液體介質(zhì)中；(ii)除去液體介質(zhì)，留下一系列兩親物分子，它們的親水性端基指向免疫原，而且兩親物和免疫原之間無化學相互作用；以及(iii)在免疫原/兩親物粒子系列周圍提供疏水溶劑。
18.權利要求16或17的方法，其中該方法由權利要求3至15中任意一項或多項的特征限定。
19.權利要求17或18的方法，其中兩親物是磷酯，辛基葡糖苷，α-生育酚，或其酯，或膽汁鹽，或其混合物。
20.權利要求19的方法，其中磷脂具有磷脂酰膽堿端基。
21.權利要求20的方法，其中磷脂為磷脂酰膽堿(PC)，溶血性磷脂酰膽堿(lyso-PC)，鞘磷脂，它們之一的衍生物如十六烷基膽堿磷酸或含磷酸膽堿的兩親聚合物。
22.權利要求16至21中任意一項的方法，其中疏水溶劑包括烴類，例如礦物油或角鯊烯，長鏈脂肪酸，中長鏈醇，多元醇，例如α-生育酚，中長或長鏈單，雙或三甘油酯，或其混合物。
23.權利要求17到22中任意一項的方法，其中兩親物包括PC，疏水溶劑為三甘油酯，或其中兩親物包括lyso-PC而疏水溶劑為油酸。
24.權利要求17到22中任意一項的方法，其中免疫原/兩親物粒子由免疫原與兩親物在親水溶劑中的分散系混合并除去該親水溶劑而生成。
25.權利要求24的方法，其中親水溶劑是水。
26.權利要求24或25的方法，其中兩親物組合件包括微膠囊，單層狀囊，例如單層狀囊，多層狀囊或管狀結(jié)構(gòu)如匙孔筒狀結(jié)構(gòu)，六角形結(jié)構(gòu)，立方體結(jié)構(gòu)或髓磷脂類結(jié)構(gòu)。
27.權利要求24到26中任意一項的方法，其中通過冷凍干燥除去親水性溶劑。
28.權利要求17到24中任意一項的方法，其中免疫原/兩親物粒子是通過將免疫原和兩親物共溶于-和公共溶劑中隨后除去該溶劑形成的。
29.權利要求28的方法，其中兩親物與免疫原的重量比為從約1∶1到50∶1。
30.權利要求29的方法，其中疏水溶劑是低沸點的有機溶劑如乙醚。
31.一種由權利要求17到30中任意一項中的方法得到的，免疫原在疏水溶劑中的單相疏水制劑。
32.一種包括親水相和疏水相的兩相組合物，其中疏水相包括權利要求1到15中任意一項的組合物或權利要31的制劑。
33.權利要求32的組合物，其中疏水相被分散在連續(xù)的親水相中。
34.權利要求32或33的組合物，其中該組合物是乳劑。
35.免疫原組合物制劑中溶于通常情況下不能溶解免疫原的疏水溶劑中的免疫原的用途。
36.權利要求35的用途，其中免疫原性組合物是口服疫苗。
37.一種含權利要求1到15中任意一項中的免疫原性的組合物或權利要求31中的單相疏水制劑的腸溶膜膠囊。
全文摘要
包括在無親水相的情況下溶于或分配于疏水溶劑中的免疫原的免疫原性的組合物。優(yōu)選的該免疫原性的組合物為口服疫苗。
文檔編號A61K39/08GK1163575SQ95196259
公開日1997年10月29日 申請日期1995年11月14日 優(yōu)先權日1994年11月15日
發(fā)明者R·R·C·紐 申請人:科特克斯有限公司