專利名稱：長(zhǎng)效注射用混懸液及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及長(zhǎng)效注射用混懸液，其中包含生理上可接受的，X-衍射呈無(wú)定形及結(jié)晶的低溶解性的鹽類的具有治療意義的活性肽類，及其制備方法。
在治療中，肽類通常只能在經(jīng)非胃腸道的注射給藥時(shí)才能安全、高效，這是因?yàn)榻?jīng)口服給藥它們會(huì)被酶降解而破壞，而且經(jīng)鼻給藥通常只有很少量的藥物能被吸收，而經(jīng)皮膚給藥根據(jù)就不吸收。
由于在生物體內(nèi)肽類僅有很短的半衰期，肽類的非腸道給藥劑型，例如LHRH類似物，即所說(shuō)的超興奮劑和LHRH拮抗劑，必須被天天使用以達(dá)到所希望的療效，其中包括對(duì)LH和FSH抑制劑的兩組物質(zhì)的使用。
其結(jié)果是使男性的睪酮生成量和女性的雌二醇生成量下降到一個(gè)特定的值之下。可使用術(shù)語(yǔ)化學(xué)閹割。
LHRH類似物被理解為超興奮劑如戈舍瑞林(INN)和曲普瑞林(INN)，以及拮抗劑如cetrorelix(INN)antide(INN)或ganirelix(INN)。戈舍瑞林，和戈舍瑞林的合成，公開了Drug of the Future，5(4)1980，p191。布舍瑞林和布舍瑞林的合成公開于Drugs of theFuture，4(3)，1979，p173和Drugs of Today，21，(305)，(1985)。De-capeptyl以及decapeptyl的合成公開于Drugs of the Future，3，(9)，(1978)，p645。Leuprolide和Leuprolide的合成公開于Drugs of theFuture，7(12)，(1982)，p883。
Azaline B公開于GHRH-Analogues-The State ofthe Art(1993)，Parthenon Publishing Groups Ed.，B.Lunenfeld，V.Insler，Pages 13-26。
已有很多人在試圖制備具有持續(xù)釋放效果的長(zhǎng)效LHRH類似物制劑。例如，GB2 052 258公開了由肽的鋅鹽，芝麻油和硬脂酸鋁制備的含LHRH類似物質(zhì)持續(xù)釋放注射劑。
事實(shí)上超興奮劑和拮抗劑的差異在于，對(duì)于超興奮劑，反饋機(jī)理導(dǎo)致在前幾周的治療中與過(guò)高激素釋放，即所說(shuō)發(fā)作，有關(guān)的效果，它必須用另外的藥物對(duì)抗。相反地，對(duì)于拮抗劑，例如，Cetrorelix(INN)，藥理作用立即產(chǎn)生并不存在發(fā)作機(jī)理。持續(xù)降低血液中性激素水平通常用于前列腺癌和乳腺癌的緩和治療中，以抑制依賴于性激素的腫瘤的生長(zhǎng)，也可用于治療子宮內(nèi)膜異位。從化學(xué)的角度講LHRH-超興奮劑和拮抗劑為九肽或十肽。
上面提到的一個(gè)有效的LHRH拮抗劑是Cetrorelix，氨基酸序列為Ac-Dnal-PpcL-Phe-Dpal-Ser-Tyr-Dcit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2的十肽。它的合成和藥理性質(zhì)在EP299402中公開。Cetrorelix乙酸鹽已被證明為一生理上可接受的鹽。在臨床前研究和臨床研究中發(fā)現(xiàn)Cetrorelix乙酸鹽水溶液必須被每日注射，以使睪酮和雌二醇激素水平降到適當(dāng)范圍，直至下次注射。雖然慢性病患者和不在醫(yī)院治療的患者設(shè)計(jì)的一星期給一次藥代替每日給藥已走出了第一步，但是，可達(dá)到閾劑量的作用持續(xù)時(shí)間卻不能被延長(zhǎng)。
目前使用的LHRH—類似物為每日使用的水溶性鹽的溶液如注射溶液或者每日多次經(jīng)鼻使用的布舍瑞林乙酸鹽滴鼻劑(Supref-act nasal)或那法瑞林乙酸鹽滴鼻劑，此劑型至今只在美國(guó)上市。如以上所述，這些藥劑形式必須被經(jīng)常地使用。注射劑只能由醫(yī)生給藥，而滴鼻劑一天得用藥好幾次。這兩種藥劑形式都很不適合于慢性病的治療。
DE-05 42 23 282.1描述了通過(guò)微膠囊法制備Cetrorelix雙經(jīng)萘酸鹽的持續(xù)釋放制劑的方法。植入劑是一種用于長(zhǎng)時(shí)間間隔給藥的藥劑形式。例如，當(dāng)植入皮下后，一個(gè)包含了戈舍瑞林乙酸鹽的可生物降解的聚(乳酸—乙醇酸)共聚物圓柱可有效地降低睪酮水平(Zoladex depot)。每月注射一次含活性物質(zhì)亮丙瑞林乙酸鹽的可生物降解的聚合物顆粒的混懸液也可有效地降低這一時(shí)期的性激素水平(Enantone MonatsdepotR)。
兩種持續(xù)釋放劑型將在下面的專利或?qū)＠暾?qǐng)中描述。除用藥間隔這一優(yōu)點(diǎn)外，它們的明顯的缺點(diǎn)將在下文中列出。
EP 0058 481描述了以ZoladexR商標(biāo)上市的植入劑的組成與制備。這種劑型的缺點(diǎn)在于使用特需的擠壓機(jī)和包裝機(jī)生產(chǎn)此種圓柱體劑型的昂貴的工藝，這些機(jī)器將此圓柱體劑型插入到特殊設(shè)計(jì)的套管很厚的注射器中。這種圓柱體直徑為1mm，長(zhǎng)度為幾個(gè)毫米。當(dāng)植入患者時(shí)引起劇痛和淤血，所以需要一種無(wú)疼痛的劑型。
EP 0 052 510描述了例如那法瑞林乙酸鹽的微粒體的組成與制備。在氯化烴存在下將活性物質(zhì)摻入到聚(乳酸，乙醇酸)共聚物中。因?yàn)樗玫木哂畜w內(nèi)所需的生物降解性能的聚合物僅溶于氯化烴中，所以氯化烴在該組合物中的使用是不可避免的。用該方法制備的劑型中包含有大量殘余溶劑，近似值＝1000ppm，這是其缺點(diǎn)。越來(lái)越多的最新研究結(jié)果表明，氯化烴有致癌性，根據(jù)現(xiàn)行的歐洲藥典(Pharm Europe，Vol 4 No.1，March 1992)規(guī)定，現(xiàn)在將原料和劑型中的殘余溶劑含量限制在＜50ppm。該方法另外的缺點(diǎn)是由于多肽在水相中的損失使實(shí)際加入微膠囊的活性物質(zhì)含量編低，而此步驟在生產(chǎn)中是必不可少的。
為了藥物的安全性，只有用繁瑣的后處理方法才能將殘余溶劑含量降到該閾值以下。例如，Syntex提出了一種用次臨界CO2降低殘余溶劑的方法。
DE 4023 134 A1使用了一種如上所述的將肽類摻入聚(乳酸，乙醇酸)共聚物類型的可生物降解的聚合物中的相似方法。在該方法中，使用不溶于水的肽鹽代替肽乙酸鹽混入聚酯中以減少大量活性物質(zhì)的損失。不溶于水的肽鹽如雙羥萘酸鹽，硬脂鹽和棕櫚酸鹽。如上面描述過(guò)的，這一方法存在必須使用致癌烴的缺點(diǎn)，并且存在含有氯代甲烷或氯仿溶劑這些生理上不接受的殘余溶劑的問題。
EP 145 240包含了其它摻加水溶性肽鹽的方法。在通過(guò)復(fù)合乳劑將活性物質(zhì)水溶液混入可生物降解的聚(乳酸、乙醇酸)共聚物的復(fù)雜過(guò)程中，活性物質(zhì)有顯著的損失，其缺點(diǎn)還在于使用了氯化烴。
在EP 505 966中，通過(guò)含有氯化烴的活性物質(zhì)一聚合物溶液的噴霧干燥將布舍瑞林乙酸鹽嵌入聚(乳酸，乙醇酸)共聚物中。反過(guò)來(lái)說(shuō)，此方法有使用致癌的氯化烴作溶劑的缺點(diǎn)。
當(dāng)使用氯化烴時(shí)，不僅藥劑中的高殘留溶劑量是其缺點(diǎn)，而且，從生態(tài)學(xué)角度看，就使用這些溶劑本身而言，產(chǎn)生了氯化烴在生產(chǎn)地的處理問題，而且對(duì)工人有危險(xiǎn)。
根據(jù)WO 92 14449，一些易溶解的肽，如生長(zhǎng)激素也進(jìn)行了混合法制備。例如，將活性物質(zhì)混合入月桂酸中，熔化，并在冷卻后將此混合物研磨成100μm的顆粒。US 5,137,669在制備LHRH興奮劑持續(xù)釋放劑型時(shí)使用了同樣的方法，以使這些顆粒以混懸液的形式注射來(lái)延緩有效成分的釋放。這兩種制劑的共同因素是需要長(zhǎng)時(shí)間釋放有效成分的載體物質(zhì)，并且只能使用繁瑣的工藝生產(chǎn)注射劑。直到今天，檢驗(yàn)脂肪沉積物的耐藥性，及其可靠度和有效成份的再生釋放還是不可能的。對(duì)于脂肪嵌入物，在以包封物形式給藥的部位可產(chǎn)生副作用，這種副作用在長(zhǎng)達(dá)數(shù)年以上的治療中是無(wú)法被耐受的。
由于甲磺酸溴麥角環(huán)肽，一種活性成份，很難制成緩釋劑型，DE3430852合成了一種新聚酯，如葡萄糖與乳酸和乙醇酸的聚酯，以便達(dá)到期望的活性物質(zhì)的釋放分布型。這種情況下需要進(jìn)行綜合的，高成本的開發(fā)和毒理學(xué)試驗(yàn)以便制備一種有著充足持續(xù)作用時(shí)間的緩釋劑型，因?yàn)楹苊黠@，沒有更簡(jiǎn)單，更便宜的劑型能達(dá)到同樣的目的。
雙羥萘酸(4，4’-亞甲基—雙(3-羥基-2-萘酸)經(jīng)常用于藥物制型中以便制備藥物的難溶鹽。這些難溶鹽在體內(nèi)滯留時(shí)間長(zhǎng)，可使藥物緩慢釋放(Rompps Chemie-Lexikon，Sttuttgart 1976，p.1007)。
根據(jù)權(quán)利要求1的本發(fā)明的制劑可令人驚奇地在不使用可生物降解的聚合物或脂肪時(shí)，產(chǎn)生意外的作用時(shí)間延長(zhǎng)和療效的提高。不僅僅是由激素抑制時(shí)間測(cè)得的作用時(shí)間的延長(zhǎng)，而且還發(fā)現(xiàn)腫瘤的生長(zhǎng)被抑制到超比例的范圍內(nèi)。
本發(fā)明的制劑也可以用于LHRH興奮劑，如用于Lenprolide布舍瑞林，戈舍瑞林和曲普瑞林。本發(fā)明的制劑也可用于韓蛙皮素拮抗劑，生長(zhǎng)抑素拮劑劑和GHRH類似物。
按下列程序進(jìn)行實(shí)驗(yàn)對(duì)DM BA(7，12-二甲基苯并[a]-蒽)誘導(dǎo)的Spragne-Daw-ley大鼠乳腺癌的抑制作用方法雌性Spragne-Dawley大鼠(動(dòng)物飲食Altromin R，任意給水)在50天齡，用胃管經(jīng)口將溶于1ml橄欖油的20mg 7，12-二甲基苯并[a]—蒽給藥。每星期觸摸動(dòng)物來(lái)監(jiān)視腫瘤的發(fā)展。在誘導(dǎo)后第35天和第70天約90％的大鼠有腫瘤發(fā)展，它們適于進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
用Druckry.H，Steinhoff.D.Nakayama，M，Preussmanp，R，Anger，K(1983)，Experimentelle Beitrage zum Dosis-Problem in derKrebs-Chemotherapia und zur Wirkung von Endoxan，[xperimental.Contributions to the doseproblem in cacer chemotherapy and to themode of action of Endoxan]，Dtsoh.Med.Wschr.88651.的方法測(cè)定腫瘤的重量。通過(guò)比較觸摸法測(cè)定的腫瘤重量和直接稱重法(切除腫瘤之后)測(cè)定的腫瘤重量驗(yàn)證該方法。
相關(guān)系數(shù)為0.98。當(dāng)腫瘤的總重量達(dá)到約1g后，將動(dòng)物隨機(jī)分組，每組7只，分為對(duì)照組和處理組。
立即對(duì)處理組皮下注射試驗(yàn)藥物。
通過(guò)使用亞甲藍(lán)染色的陰道細(xì)胞涂片的方法測(cè)定并通過(guò)Jones，T.C，Mohr.U，Hunt，K.D(1972)The genital，System，in Mono-graphs on Pathology of lakaratory animals sponsored by the Intema-tional Life Science Institute(Springer，N.Y.，London)的方法評(píng)價(jià)動(dòng)物的激素狀況。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果于

圖1中列出。未處理的對(duì)照組動(dòng)物的腫瘤重量曲線呈現(xiàn)出無(wú)限制的增長(zhǎng)。曲線1(*)和2(O)為給以在不同載體中的Cenorelix乙酸鹽而處理的結(jié)果。拉長(zhǎng)的曲線3顯示雙羥萘酸鹽處理后腫瘤重量急劇降低。
由于在此實(shí)驗(yàn)中僅單劑量給藥治療，腫瘤繼續(xù)生長(zhǎng)是因?yàn)閱畏剿幬镏委煵荒軞⑺浪心[瘤細(xì)胞。
本發(fā)明的制劑為十肽Cetrorelix的雙羥萘酸鹽的X-衍射呈無(wú)定形的沉淀物。這種沉淀物的水混懸物，可有選擇地含有一些等滲添加劑，比肽的水溶液在動(dòng)物模型上顯現(xiàn)出明顯的作用延長(zhǎng)。令人吃驚地發(fā)現(xiàn)，其作用持續(xù)時(shí)間大約和包含了肽雙羥萘酸鹽的沉淀物于如聚(乳酸，乙醇酸)共聚物的可生物降解的聚合物中的注射用混懸液的作用時(shí)間相同。此結(jié)果的特別意外在于，如上面提出的，直至今日，只有付出復(fù)雜勞動(dòng)制備的將有效成份混合于可生物降解的聚合物中的緩釋劑型，才能顯現(xiàn)出足夠持久的作用時(shí)間。
此發(fā)現(xiàn)另外使人驚奇的是，根據(jù)J.Pharm Phamavol 47，878-883(1985)，嘧啶甲胺，一種2，4-二氨基嘧啶衍生物，在給小鼠皮下注射后，與它的雙羥萘酸鹽比較，在藥物動(dòng)力學(xué)表現(xiàn)，血漿水平過(guò)程和AUC方面沒有顯示出不同。相似地，咪丙嗪鹽酸鹽在口服給藥后沒有顯現(xiàn)出與咪丙嗪雙羥萘酸鹽有什么不同(Indian Journal ofPhysiology and Pharmacology 25，(4)，331-338(1989)。正如結(jié)晶胰島素鋅混懸液用于治療糖尿病，非肽藥物的結(jié)晶注射用混懸液，如強(qiáng)的松龍或去炎松，被認(rèn)為是緩釋劑型。胰島素包含51個(gè)氨基酸。后來(lái)所述的這些劑型均為晶體。而X-射線衍射分析顯示本發(fā)明的劑型為無(wú)定型。本發(fā)明制劑的粒度均在5μm到200μm之間。粒度在5μm以下的Cetrorelix雙羥萘酚鹽顯示出比本發(fā)明制劑差的持續(xù)釋放作用。類似地，粒度超過(guò)200μm的Cetrorelix雙羥萘酸鹽比本發(fā)明的制劑持續(xù)釋放作用更差。
本發(fā)明的制劑的另一優(yōu)點(diǎn)是批產(chǎn)物有更高的一致性用本發(fā)明的制劑生產(chǎn)出的藥物的質(zhì)量幾乎沒有改變。
實(shí)施例1以肽(按游離堿計(jì)算)和雙羥萘酸的等摩爾比，將含過(guò)量堿的雙羥萘酸水溶液與Cetrorelix乙酸鹽的乙酸溶液合并，出現(xiàn)黃色結(jié)晶狀雙羥萘酸沉淀。再加入稀氫氧化鈉溶液使PH值為7-7.5，雙羥萘酸溶解并與十肽成摩爾組成為肽雙羥萘酸2∶1(Mol/Mol)的Cetrorelix雙羥萘酸含水鹽而沉淀。將該沉淀濾出，用水洗滌并干燥。
實(shí)施例2以等摩爾比將Cetrorlix乙酸鹽和雙羥萘酸溶于二甲基乙酰胺并將該溶液滴入水中。將肽雙羥萘酸鹽為2∶1(Mol/Mol)的Cetrorelix雙羥萘酸鹽濾出并干燥。
實(shí)施例3以摩爾比為1∶1.6的比率將Cetrorelix和雙羥萘酸溶于二甲基乙酰胺或其含水混合物中，并將該溶液滴入水中。將黃色沉淀濾出并干燥。將所得沉淀用70％乙酸成糊，在35℃干燥并通過(guò)80到125μm的篩。
實(shí)施例4
以肽∶雙羥萘酸為2∶1的摩爾比將堿性雙羥萘酸鹽溶液加入肽乙酸鹽的含水乙醇溶液中。將白色沉淀濾出并干燥。將干燥的沉淀用50％乙醇潤(rùn)濕，在真空干燥箱中干燥并過(guò)篩。白色產(chǎn)物含2∶1肽雙羥萘酸鹽(Mol/Mol)。
實(shí)施例5以肽∶雙羥萘酸為1∶1.6的摩爾比將堿性雙羥萘酸鹽溶液加入肽乙酸鹽的含水乙醇溶液中。將黃色沉淀濾出并干燥。將干燥的沉淀用50％乙醇潤(rùn)濕，在真空干燥箱中于35℃干燥并過(guò)篩。黃色產(chǎn)物含2∶1肽雙羥萘酸鹽(Mol/Mol)以及過(guò)量的雙羥萘酸。
對(duì)動(dòng)物作用期的實(shí)驗(yàn)以0.5mg cetrorelix/kg體重的劑量對(duì)雄性大鼠皮下注射沉淀物的混懸液，之后測(cè)量肽對(duì)睪酮血漿水平的影響。Cetrorelix的影響為降低睪酮水平。作為參考同時(shí)對(duì)按照DE 4023134 A1制備的含在聚(乳酸，乙醇酸)共聚物中的肽雙羥萘酸鹽的注射混懸液進(jìn)行測(cè)試。通過(guò)檢測(cè)Cetrorelix乙酸鹽的水溶液確定Cetrorelix的非—持續(xù)釋放劑型的作用期。
圖3顯示在對(duì)雄性大鼠施用Cetrorelix乙酸鹽(D-20761)水溶液后測(cè)得的300小時(shí)睪酮水平變化過(guò)程。施用6小時(shí)后達(dá)到對(duì)睪酮抑制的效果。24小時(shí)后仍可在兩只動(dòng)物中測(cè)得低于1ng/ml的抑制效果，48小時(shí)或兩天后仍可在另三只動(dòng)物中測(cè)得同樣的抑制效果。
圖2顯示在以相同劑量對(duì)四只動(dòng)物11-14號(hào)施用按實(shí)施例1制備的沒有粘性添加劑的Cetrorelix雙羥萘酸鹽(D-20762)混懸液后測(cè)得的300小時(shí)睪酮水平變化過(guò)程。使用6小時(shí)后也達(dá)到對(duì)睪酮抑制的效果，192小時(shí)(八天)后有一只動(dòng)物睪酮水平升至1ng/ml以上，直到第九天其他三只動(dòng)物仍保持抑制效果。
圖4顯示用本發(fā)明雙羥萘酸鹽(顆粒大小80μm-125μm)處理后睪酮水平變化過(guò)程。
將圖2-3與圖4比較即可看出本發(fā)明制劑的優(yōu)點(diǎn)。
權(quán)利要求
1.LHRH類似物的難溶鹽，其特征在于其顆的粒徑主要在5到200μm之間。
2.LHRH類似物的難溶鹽，其特征在于其顆粒的粒徑主要在10到150μm之間。
3.LHRH類似物的難溶鹽，其特征在于其顆粒的粒徑主要在20到125μm之間。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3之一的難溶鹽，其特征在于使用雙羥萘酸成鹽。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4之一的難溶鹽的制藥的用途。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5之一的鹽，其特征在于使用Cetrocelix作為L(zhǎng)HRH類似物
7.根據(jù)權(quán)利要求1-5之一的鹽，其特征在于使用antarelix作為L(zhǎng)HRH類似物。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-5之一的鹽，其特征在于使用ganirelix作為L(zhǎng)HRH類似物。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-5之一的鹽，其特征在于使用antide作為L(zhǎng)HRH類似物。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-5之一的鹽，其特征在于使用A-75998作為L(zhǎng)HRH類似物。
11.根據(jù)權(quán)利要求6-10之一的鹽，其特征在于使用雙羥萘酸成鹽。
12.Antide雙羥萘酸鹽，其特征在于其顆粒直徑在10μm到125μm之間。
13.Ganirelix雙羥萘酸鹽，其特征在于其顆粒直徑在10μm到125μm之間。
14.A-75998雙羥萘酸鹽，其特征在于其顆粒直徑在10μm到125μm之間。
15.Cetrorelix雙羥萘酸鹽，其特征在于其顆粒直徑在5μm到200μm之間。
16.Cetrorelix雙羥萘酸鹽，其特征在于其顆粒直徑在10μm到125μm之間。
17.Cetrorelix雙羥萘酸鹽，其特征在于其顆粒直徑在20μm到125μm之間。
18.根據(jù)權(quán)利要求6到17之一的鹽的制藥的用途。
19.肽的難溶鹽，其特征在于其顆粒直徑在5μm到200μm之間。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的鹽，其特征在于使用雙羥萘酸成鹽。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的鹽的制藥的用途。
22.生長(zhǎng)抑素類似物的難溶鹽，其特征在于其顆粒的直徑在5μm到200μm之間。
23.根據(jù)權(quán)利要求22的鹽，其特征在于使用雙羥萘酸成鹽。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的鹽的制藥的用途。
25.GHRH類似物的難溶鹽，其特征在于其顆粒的直徑在5μm到200μm之間。
26.根據(jù)權(quán)利要求25的鹽，其特征在于使用雙羥萘酸成鹽。
27.根據(jù)權(quán)利要求26的鹽的制藥的用途。
28.韓蛙皮素類似物的難溶鹽，其特征在于其顆粒的直徑在5μm到200μm之間。
29.根據(jù)權(quán)利要求28的鹽，其特征在于使用雙羥萘酸成鹽。
30.根據(jù)權(quán)利要求29的鹽的制藥的用途。
全文摘要
顆粒大小為5μm到200μm的LHRH類似物難溶鹽，例如Cetrovelix雙羥萘酸鹽，顯示體內(nèi)持續(xù)釋放的效果。
文檔編號(hào)A61P13/00GK1136779SQ94194405
公開日1996年11月27日 申請(qǐng)日期1994年11月25日 優(yōu)先權(quán)日1993年12月9日
發(fā)明者J·恩格爾, K·克洛克斯貝思克, T·雷斯曼, P·希爾加德 申請(qǐng)人:Asta藥物股份公司