專利名稱:眼角膜外用和燒傷用膠原溶液及其制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及一種眼角膜外用和燒傷用膠原溶液及其制備工藝。
以往眼角膜病的治療常采用纖維連接蛋白,對機(jī)械損傷的治愈期較長;燒傷創(chuàng)面治療常采用油紗或霜劑外敷創(chuàng)傷表面,難以滲填披覆全創(chuàng)面,引致感染、滲出較多或疼痛。
本發(fā)明的目的在于提供一種在體外不易變性、促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的眼角膜外用和燒傷用膠原溶液及其制備工藝。
下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作詳細(xì)描述。
本發(fā)明的組成成分為Ⅰ型膠原蛋白的原膠原分子,濃度為3mg/ml,分子結(jié)構(gòu)為[α1(Ⅰ)]2α2(Ⅰ),肽鏈結(jié)構(gòu)為(G-X-Y)n的多聚體。
本發(fā)明的制備工藝以下步驟均在15℃以下的無菌室進(jìn)行。
一、分離肌腱機(jī)械拉斷大白鼠頸椎致死,鼠尾分離后浸泡于75%酒精及0.1%新潔爾滅,洗凈,無菌術(shù)式分離鼠尾肌腱,稱重。
二、水洗肌腱用蒸餾水洗2次,后浸于蒸餾水,置4℃冰箱4小時(shí)待用。
三、酸溶用消毒濾紙吸干肌腱上的水份,溶于100倍重量體積的0.5M醋酸中,于4℃冰箱,酸溶48小時(shí),并不斷振蕩。
四、鹽析將酸溶液進(jìn)行離心,10000rpm×30min×4℃~8℃,取上清液加入等倍體積的10%NaCl,4℃中鹽析過夜,沉淀物棄之。
五、再酸溶鹽析液離心,4000rpm×10min×4℃~8℃,取沉淀加入6倍體積的0.5M醋酸進(jìn)行酸溶,置4℃×4h后,成為膠原蛋白提取液。
六、透析將膠原蛋白提取液高速低溫沉淀,取上層膠液調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)濃度為3mg/ml,置入透析袋,于4℃,對蒸餾水透析1天,連續(xù)3天,至pH=5.5。
七、分裝透析物離心,10000rpm×10min×4℃~8℃,上清液分裝于安瓿,10℃,避光保存,即得制品。
實(shí)施例(一)分離肌腱取一只250g大白鼠,機(jī)械拉斷頸椎致死,鼠尾分離后浸泡于75%酒精500ml及0.1%新潔爾滅500ml中,洗凈,無菌術(shù)式分離鼠尾肌腱,稱重約0.85g。
(二)水洗肌腱用蒸餾水洗2次,后浸于蒸餾水,置4℃冰箱4小時(shí)待用。
(三)酸溶用消毒濾紙吸干肌腱上的水份,溶于0.5M醋酸中,于4℃冰箱,酸溶48小時(shí),并不斷振蕩。
(四)鹽析將酸溶液進(jìn)行離心,10000rpm×30min×4℃~8℃,取50ml上清液加入10%NaCl50ml,4℃中鹽析過夜,沉淀物棄之。
(五)再酸溶鹽析液離心,4000rpm×10min×4℃~8℃,取沉淀加入6倍體積的0.5M醋酸進(jìn)行酸溶,置4℃×4h后,成為膠原蛋白提取液。
(六)透析將膠原蛋白提取液高速低溫沉淀,取上層膠液調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)濃度為3mg/ml,置入透析袋,于4℃,對1000ml無菌蒸餾水透析1天,連續(xù)3天,至pH=5.5。
(七)分裝透析物離心,10000rpm×10min×4℃~8℃,上清液分裝于安瓿,10℃,避光保存,得1.5ml/安瓿膠原溶液。
本發(fā)明不限于上述一個實(shí)施例。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)為純生化制劑,該溶液原膠原分子易在創(chuàng)傷表面聚合,能明顯地促進(jìn)眼角膜創(chuàng)傷和燒傷的愈合,無任何副作用。
權(quán)利要求
1.一種眼角膜外用和燒傷用膠原溶液,其特征在于該溶液的組成成分為Ⅰ型膠原蛋白的原膠原分子,濃度為3mg/ml;其分子結(jié)構(gòu)為[a1(Ⅰ)]2a2(Ⅰ),肽鏈結(jié)構(gòu)為(G-X-Y)n的多聚體。
2.一種眼角膜外用和燒傷用膠原溶液的制備工藝,其特征在于A.分離肌腱機(jī)械拉斷大白鼠頸椎致死,鼠尾分離后浸泡于75%酒精及0.1%新潔爾滅,洗凈,無菌術(shù)式分離鼠尾肌腱,稱重;B.水洗肌腱用蒸餾水洗2次,后浸于蒸餾水,置4℃冰箱4小時(shí)待用;C.酸溶用消毒濾紙吸干肌腱上的水份,溶于100倍重量體積的0.5M醋酸中,于4℃冰箱,酸溶48小時(shí),并不斷振蕩;D.鹽析將酸溶液進(jìn)行離心,10000rpm×30min×4℃~8℃,取上清液加入等倍體積的10%NaCl,4℃中鹽析過夜,沉淀物棄之;E.再酸溶鹽析液離心,4000rpm×10min×4℃~8℃,取沉淀加入6倍體積的0.5M醋酸進(jìn)行酸溶,置4℃×4h后,成為膠原蛋白提取液;F.透析將膠原蛋白提取液高速低溫沉淀,取上層膠液調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)濃度為3mg/ml,置入透析袋,于4℃,對蒸餾水透析1天,連續(xù)3天,至pH=5.5;G.分裝透析物離心,10000rpm×10min×4℃~8℃,上清液分裝于安瓿,10℃,避光保存,即得制品。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的眼角膜外用和燒傷用膠原溶液的制備工藝,其特征在于所述各步驟均在15℃以下的無菌室進(jìn)行。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種眼角膜外用和燒傷用膠原溶液及其制備工藝,該溶液的組成成分為I型膠原蛋白的原膠原分子,濃度為3mg/ml,分子結(jié)構(gòu)為[α
文檔編號A61K9/08GK1080872SQ9310434
公開日1994年1月19日 申請日期1993年4月15日 優(yōu)先權(quán)日1993年4月15日
發(fā)明者馬福廣, 李芳 , 劉錫粦, 甄兆忠 申請人:廣州市紅十字會醫(yī)院