本發(fā)明涉及納米藥物，尤其涉及一種細胞仿生納米顆粒及其構(gòu)建方法與應用。

背景技術(shù)：

1、利用細胞膜融合技術(shù)構(gòu)建的細胞仿生納米藥物可以通過高效繼承源細胞表面的眾多功能分子，如信號受體，表面抗原等而實現(xiàn)諸如主動靶向、炎癥調(diào)控等傳統(tǒng)納米藥物需經(jīng)過大量復雜化學工藝方可實現(xiàn)的高階功能。同時，納米藥物固有的尺寸效應可以實現(xiàn)對炎癥區(qū)域的被動靶向富集。因此，免疫細胞膜仿生納米藥物在炎癥治療領(lǐng)域已涌現(xiàn)出大量優(yōu)秀成果。

2、然而，這種應用目前還主要集中在將細胞膜作為功能輔助物質(zhì)，其治療作用還主要依靠所攜帶的相關(guān)藥物。同時，此類納米藥物在自身免疫性疾病中的應用尚較為欠缺，其主要構(gòu)建策略集中于運載免疫抑制劑、免疫耐受重建物質(zhì)，而對于自身免疫抗體含量水平的抑制較少有人關(guān)注。更重要的是，這些成果的工藝流程仍然復雜，不利于快速地在臨床廣泛應用，藥物獲得性差。

3、自身免疫性疾病是一類復雜的具有器官特異性或全身性的炎癥性疾病，嚴重影響著患者的生活質(zhì)量。現(xiàn)有針對自身免疫性疾病治療的納米藥物對于炎癥水平的調(diào)控以及病灶部位自身免疫反應的抑制主要通過復雜的化學工藝共建載體材料，用以運載相應的治療性藥物，即便是新晉誕生的細胞膜仿生納米藥物也往往是將細胞膜作為輔助性物質(zhì)加以利用。單純利用細胞膜多樣的生理功能來實現(xiàn)對自身免疫性疾病的治療，特別是系統(tǒng)性地實現(xiàn)炎癥水平的調(diào)控、免疫耐受重建以及自身免疫性抗體含量水平的降低，在目前的研究當中尚存在明顯欠缺。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種細胞仿生納米顆粒及其構(gòu)建方法與應用，僅通過目標細胞膜與疏水納米核心的簡單超聲融合，即可獲得仿生納米細胞。該仿生納米細胞可有效繼承與模擬源細胞膜表面功能蛋白，系統(tǒng)性地代替源細胞在生理病理過程中所發(fā)揮的功能，諸如吸附炎癥因子、遷移因子等，從細胞機制上干擾并抑制疾病進程，調(diào)控病灶部位細胞組成與免疫微環(huán)境，而無需依靠額外運載藥物。

2、為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明的第一目的是提供一種構(gòu)建細胞仿生納米顆粒的方法，包括以下步驟：

4、s1、細胞膜的制備，

5、培養(yǎng)免疫細胞或者腫瘤細胞，超聲破碎后，去除細胞內(nèi)涵物，取上清，離心，獲得細胞膜；所述免疫細胞包括淋巴細胞和巨噬細胞中的任一種；所述腫瘤細胞為與病理靶標細胞有相同自身免疫性抗原的腫瘤細胞；

6、s2、細胞仿生納米顆粒的制備，

7、以細胞膜蛋白含量為標準，將細胞膜按照預設(shè)比例在雙蒸水中進行混合，然后加入疏水納米顆粒，超聲混合，然后離心，獲得細胞仿生納米顆粒，所述疏水納米顆粒包括聚乳酸納米顆粒、聚苯乙烯納米顆?；蚓廴樗?羥基乙酸納米顆粒中的任一種。

8、進一步的，步驟s1中，離心的轉(zhuǎn)速為10000~20000rpm，離心時間1~60min。

9、進一步的，細胞膜蛋白：疏水納米顆粒的質(zhì)量比為10:1~1:10。

10、進一步的，超聲混合3~20min，然后10000~20000g離心。

11、進一步的，步驟s2中，細胞膜還可以為免疫細胞的細胞膜與腫瘤細胞的細胞膜融合后形成的雜化細胞膜。

12、進一步的，所述腫瘤細胞為過表達pd-l1的肝癌腫瘤細胞或者過表達tshr/igf-1r/pd-l1的肺癌腫瘤細胞。

13、進一步的，所述免疫細胞為巨噬細胞。

14、本發(fā)明的第二目的是提供一種采用上述方法構(gòu)建得到的細胞仿生納米顆粒。

15、本發(fā)明的第三目的是提供一種上述的細胞仿生納米顆粒制備治療自身免疫性疾病藥物中的應用。

16、進一步的，所述自身免疫性疾病包括自身免疫性肝炎或甲狀腺相關(guān)眼病。

17、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

18、（1）本發(fā)明提供的一種構(gòu)建細胞仿生納米顆粒的方法，不同于既有細胞仿生納米藥物，本發(fā)明從自身免疫性疾病病理機制出發(fā)，僅通過目標細胞膜與疏水納米核心的簡單超聲融合，即可獲得仿生納米細胞。該仿生納米細胞可有效繼承與模擬源細胞膜表面功能蛋白，系統(tǒng)性地代替源細胞在生理病理過程中所發(fā)揮的功能，諸如吸附炎癥因子、遷移因子等，從細胞機制上干擾并抑制疾病進程，調(diào)控病灶部位細胞組成與免疫微環(huán)境，而無需依靠額外運載藥物。針對免疫耐受缺失的相關(guān)發(fā)病機制，創(chuàng)新性地提出構(gòu)建免疫耐受的治療策略。

19、（2）本發(fā)明提供的逆向使用腫瘤細胞對自身免疫疾病病灶部位的同源性與固有的免疫抑制性，重建病灶部位基于免疫檢查點的免疫耐受，同時代替靶細胞吸附自身免疫性抗體，降低免疫反應水平。

20、（3）本發(fā)明還創(chuàng)造性地將細胞膜作為模塊化功能集合進行雜化，構(gòu)建具有雙重功能的雜化仿生納米細胞，實現(xiàn)免疫反應與炎癥的同時抑制，具有極為重要的科研價值與廣闊的臨床價值。

技術(shù)特征：

1.一種構(gòu)建細胞仿生納米顆粒的方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟s1中，離心的轉(zhuǎn)速為10000~20000rpm，離心時間1~60min。

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，細胞膜蛋白：疏水納米顆粒的質(zhì)量比為10:1~1:10。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，超聲混合3~20min，然后10000~20000g離心。

5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，步驟s2中，細胞膜還可以為免疫細胞的細胞膜與腫瘤細胞的細胞膜融合后形成的雜化細胞膜。

6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述腫瘤細胞為過表達pd-l1的肝癌腫瘤細胞或者過表達tshr/igf-1r/pd-l1的肺癌腫瘤細胞。

7.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述免疫細胞為巨噬細胞。

8.一種如權(quán)利要求1~7任一項所述的方法構(gòu)建得到的細胞仿生納米顆粒。

9.一種如權(quán)利要求8所述的細胞仿生納米顆粒在制備治療自身免疫性疾病藥物中的應用。

10.如權(quán)利要求9所述的應用，其特征在于，所述自身免疫性疾病包括自身免疫性肝炎或甲狀腺相關(guān)眼病。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于細胞仿生納米藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種細胞仿生納米顆粒及其構(gòu)建方法與應用。通過目標細胞膜與疏水納米核心的簡單超聲融合，即得細胞仿生納米顆粒。該仿生納米細胞可有效繼承與模擬源細胞膜表面功能蛋白，系統(tǒng)性地代替源細胞在生理病理過程中所發(fā)揮的功能，如吸附炎癥因子、遷移因子等，從細胞機制上干擾并抑制疾病進程，調(diào)控病灶部位細胞組成與免疫微環(huán)境，而無需依靠額外運載藥物。本發(fā)明針對免疫耐受缺失的相關(guān)發(fā)病機制，創(chuàng)新性地提出構(gòu)建免疫耐受的治療策略。逆向使用腫瘤細胞對自身免疫疾病病灶部位的同源性與固有的免疫抑制性，重建病灶部位基于免疫檢查點的免疫耐受，同時代替靶細胞吸附自身免疫性抗體，降低免疫反應水平。

技術(shù)研發(fā)人員：周興,張成元,崔媛旭
受保護的技術(shù)使用者：昆明醫(yī)科大學
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19