本發(fā)明涉及護(hù)膚品，尤其涉及一種多重細(xì)胞提取物、制備方法及其在抗衰護(hù)膚品中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、白細(xì)胞是一類無色有核的血細(xì)胞，根據(jù)其形態(tài)、功能和來源部位可以分為粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。白細(xì)胞提取物(leukocyte?extract)是從白細(xì)胞中提取的一種細(xì)胞分泌的復(fù)合物，現(xiàn)有技術(shù)中對以白細(xì)胞為原料進(jìn)行提取的方法主要包括裂解白細(xì)胞從而獲得白細(xì)胞提取物。這種方法得到的產(chǎn)物中的主要成分為核苷酸并含有極其微量的細(xì)胞因子或小分子多肽，其用途主要有抗炎（王斌,葛志東,陳敏珠,等.?白細(xì)胞提取物的抗炎作用[j].?安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,?1998,?(05):?19-20.?doi:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.1998.05.007.）、抗肺纖維化（王春林,范啟修,劉杰文,等.?白細(xì)胞提取物對博來霉素誘生實驗性肺炎及肺纖維化的影響?[j].?中華勞動衛(wèi)生職業(yè)病雜志,?2001,?(02):?48-49）、抗氧化以及抗衰老作用等。

2、白細(xì)胞提取物（leukocyte?extract）在護(hù)膚領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用，該原料被收錄至國家藥監(jiān)局關(guān)于發(fā)布《已使用化妝品原料目錄（2021版）》，其安全性較好。同時，部分專利文獻(xiàn)也披露了白細(xì)胞提取物作為原料之一在護(hù)膚品中的應(yīng)用，例如，文獻(xiàn)號為cn116948961b的中國發(fā)明專利公開了一種白細(xì)胞提取物、抗皺緊致面霜及其制備方法，該發(fā)明專利以動物臍帶血為原料，分離生產(chǎn)出白細(xì)胞提取物，然后添加到含有透皮成分的面霜基礎(chǔ)液里制備成富含多種生長和細(xì)胞因子的白細(xì)胞提取物抗皺緊致面霜。而文獻(xiàn)號為cn113750031b的中國發(fā)明專利則公開了一種抗氧化的組合物及其制備方法，該抗氧化組合物包括白細(xì)胞提取物和富血小板血漿，其中，白細(xì)胞提取物富含核苷酸，富血小板血漿富含多種生長因子，并且具有抑制氧化應(yīng)激的作用，通過將這兩者混合，形成組合物，充分利用這兩者的結(jié)合優(yōu)勢，明顯提高抗氧化的能力，增強成纖維細(xì)胞的抗氧化能力效果，以有效減緩皮膚衰老。此類技術(shù)均顯示出了白細(xì)胞提取物在護(hù)膚領(lǐng)域良好的應(yīng)用前景。

3、與此同時，市面上已有多款含白細(xì)胞提取物的護(hù)膚產(chǎn)品，例如，鄂g妝網(wǎng)備字2021000270成分包括：白細(xì)胞提取物、黃芩（scutellaria?baicalensis）根提取物、積雪草（centella?asiatica）提取物、迷迭香（rosmarinus?officinalis）葉提取物、虎杖（polygonum?cuspidatum）根提取物、母菊（chamomilla?recutita）花提取物等；滬g妝網(wǎng)備字2024002004護(hù)膚品的主要成分為白細(xì)胞提取物、鐵皮石斛（dendrobium?officinale）莖提取物、蘭科植物（orchid）提取物、雨百合肉唇蘭（cycnoches?cooperi）花/葉提取物、向日葵（helianthus?annuus）籽油、扁葉香果蘭（vanilla?planifolia）果提取物、枸杞（lyciumchinense）提取物、龍膽（gentiana?scabra）根提取物、姜（zingiber?officinale）根提取物等。此類護(hù)膚品中通過以白細(xì)胞提取物作為有效成分之一來起到抗氧化、抗衰效果，但其組成復(fù)雜，一方面，使得原料成本較高，另一方面，復(fù)雜的成分體系也意味著更多不同的化學(xué)成分被引入護(hù)膚品中。每種植物提取物都可能含有多種活性成分，如黃酮類、酚類、萜類等。這些成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)各異，作用機制也各不相同，當(dāng)大量不同的化學(xué)成分同時存在于護(hù)膚品中時，它們之間可能發(fā)生相互作用，產(chǎn)生新的化合物或者改變原有成分的性質(zhì)。這種復(fù)雜的成分體系增加了皮膚接觸到潛在過敏原的機會，更容易造成消費者皮膚過敏問題，同時，過于復(fù)雜的成分體系還可能降低產(chǎn)品的穩(wěn)定性，甚至導(dǎo)致功效的拮抗等。由此，如何提高白細(xì)胞提取物的抗氧化、抗衰效果，并盡可能使得護(hù)膚品成分體系簡潔成為提高白細(xì)胞提取物在護(hù)膚品領(lǐng)域應(yīng)用亟待解決的問題之一。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于提供一種多重細(xì)胞提取物、制備方法及其在抗衰護(hù)膚品中的應(yīng)用，所述多重細(xì)胞提取物通過將白細(xì)胞提取物與少一種植物細(xì)胞進(jìn)行組合使得該多重細(xì)胞提取物組分簡潔、抗衰老效果優(yōu)異，使得白細(xì)胞提取物在抗衰老護(hù)膚品領(lǐng)域具有更大的應(yīng)用前景。

2、為達(dá)到上述技術(shù)效果，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案：

3、首先，本發(fā)明提供一種多重細(xì)胞提取物，包括白細(xì)胞提取物和至少一種植物細(xì)胞提取物。

4、所述植物細(xì)胞提取物為蘋果（malus?domestica）果實細(xì)胞培養(yǎng)物提取物、沙漠薔薇（adenium?obesum）葉細(xì)胞提取物中的任意一種或多種的混合。

5、所述多重細(xì)胞提取物包括以下質(zhì)量份數(shù)的細(xì)胞提取物：白細(xì)胞提取物0.5～1.8份、蘋果（malus?domestica）果實細(xì)胞培養(yǎng)物提取物20～30份以及沙漠薔薇（adeniumobesum）葉細(xì)胞提取物3～6份。

6、其次，本發(fā)明提供一種多重細(xì)胞提取物的制備方法，該多重細(xì)胞提取物至少包括白細(xì)胞提取物，且所述多重細(xì)胞提取物的制備方法至少包括以下步驟：

7、a1：獲取健康臍帶血，所述臍帶血來源于暹羅鱷、牛、馬或驢中的任意一種；

8、a2：對獲得臍帶血離心處理，經(jīng)首次離心獲得含白細(xì)胞的中間層，吸取所述中間層并進(jìn)行二次離心2～3次，獲得白細(xì)胞；

9、a3：采用裂解液對所述白細(xì)胞進(jìn)行充分裂解以獲得白細(xì)胞提取物。

10、優(yōu)選地，所述a2中的離心參數(shù)為：首次離心條件為1500～2000?rpm?離心10～15min，溫度控制為0～4℃；首次離心后取含白細(xì)胞的中間層并加入pbs緩沖液以使其懸浮，控制二次離心條件為2000～2500?rpm，離心時長為5min，溫度控制為0～4℃，離心后，棄去上清液；在進(jìn)行一次二次離心后，再次重復(fù)所述二次離心至少1～2次，最終獲得沉淀物，即洗滌后的白細(xì)胞。

11、優(yōu)選地，所述裂解液包括以下組分：edta、ε-?氨基己酸以及sds；

12、更優(yōu)選地，所述裂解液還包括二硫蘇糖醇、β-?巰基乙醇、甘油、tris以及電解質(zhì)的任意一種。

13、優(yōu)選地，所述裂解液組成如下：1～5?mmol/l?edta、12～15?mmol/l?ε-氨基己酸、1～5?mmol/l二硫蘇糖醇、10～100mmol/l?β-巰基乙醇、4%～6%?甘油、17～22mmol/l?tris、100～120mmol/l?nacl、4～6mmol/l?kcl、0.8%～1.2%?sds（w/v）以及蛋白酶k?0.5g/l。

14、最優(yōu)選地，所述裂解液組成如下：5?mmol/l?edta、13?mmol/l?ε-氨基己酸、2mmol/l二硫蘇糖醇、60?mmol/l?β-巰基乙醇、5%?甘油、20?mmol/l?tris、110?mmol/l?nacl、4?mmol/l?kcl、1%?sds（w/v）以及蛋白酶k?0.5g/l。

15、第三方面，本發(fā)明還提供一種前述的多重細(xì)胞提取物在抗衰護(hù)膚品中的應(yīng)用。

16、優(yōu)選地，所述護(hù)膚品為駐留類護(hù)膚品，且所述多重細(xì)胞提取物在所述駐留類護(hù)膚品中的添加量為3?～?8?wt%。

17、進(jìn)一步地，所述護(hù)膚品的制備方法如下：

18、s1：提供液態(tài)基質(zhì)，所述液態(tài)基質(zhì)為水或水溶液；優(yōu)選地，所述水溶液為突厥薔薇（rosa?damascena）花水；

19、s2：在攪拌狀態(tài)下，緩慢加入蘋果（malus?domestica）果實細(xì)胞培養(yǎng)物提取物、白細(xì)胞提取物以及沙漠薔薇（adenium?obesum）葉細(xì)胞提取物，持續(xù)攪拌，確保各提取物充分分散在液態(tài)基質(zhì)中，以獲得含有多重細(xì)胞提取物的混合體系；

20、s3：向所述混合體系中加入其他配方輔料，所述配方輔料為香精香料、著色劑、ph調(diào)節(jié)劑、防腐劑、促滲透劑、乳化劑、增稠劑或其他功效成分中的任意一種或多種，以制得所述護(hù)膚品。

21、需要特別說明的是，所述香精香料、著色劑、ph?調(diào)節(jié)劑、防腐劑、促滲透劑、乳化劑、增稠劑可從現(xiàn)有技術(shù)中進(jìn)行任意選擇，本發(fā)明對此不作限制。

22、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：

23、首先，本發(fā)明提供的一種多重細(xì)胞提取物通過對白細(xì)胞提取物與至少一種植物細(xì)胞提取物進(jìn)行組合，并將其運用于抗衰老護(hù)膚品領(lǐng)域，在該多重細(xì)胞提取物中，其組分來源于天然的植物和白細(xì)胞，相對安全可靠，對皮膚的刺激性較小，且組分類別簡單、成本更低、致敏性也低。在該多重細(xì)胞提取物中，白細(xì)胞提取物可能含有一些生長因子和免疫調(diào)節(jié)因子，可以刺激皮膚細(xì)胞的再生和修復(fù)，這有助于替換受損的皮膚細(xì)胞，使皮膚更加健康和有活力；而蘋果（malus?domestica）果實細(xì)胞培養(yǎng)物提取物富含多種營養(yǎng)成分，如維生素、礦物質(zhì)和抗氧化劑等，這些成分可以為皮膚細(xì)胞提供養(yǎng)分，促進(jìn)細(xì)胞的新陳代謝和再生，從而減少細(xì)紋和皺紋的出現(xiàn)；沙漠薔薇（adenium?obesum）葉細(xì)胞提取物也可能具有促進(jìn)細(xì)胞再生的作用。它可能含有一些特殊的生物活性成分，能夠刺激皮膚細(xì)胞的增殖和分化，加速皮膚的修復(fù)過程。前述活性成分單獨應(yīng)用時均具有一定的抗衰老效果，而在本發(fā)明提供的一種新的多重細(xì)胞提取物中，該白細(xì)胞提取物和植物細(xì)胞提取物的組合進(jìn)一步產(chǎn)生了協(xié)同作用，增強了該組合物的抗衰老的效果。

24、此外，本發(fā)明的發(fā)明人還進(jìn)一步對白細(xì)胞提取物的制備方法進(jìn)行了改進(jìn)，改進(jìn)后的提取方法在多重細(xì)胞提取物中顯示出更好的功效測試效果，本發(fā)明人推測可能的原理如下：一方面，該裂解方法可以更有效地釋放白細(xì)胞中的活性成分，如生長因子、細(xì)胞因子和免疫調(diào)節(jié)因子等；另一方面，通過對保護(hù)劑的添加，減少了裂解過程中對白細(xì)胞中活性成分的破壞，使其在護(hù)膚品中保持更高的生物活性，綜合兩方面因素，合適的裂解液組成以及配比對裂解效果具有較大的影響。