本發(fā)明屬于生物與新醫(yī)藥，具體涉及一種益生菌代謝產(chǎn)物mes在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、抑郁癥表現(xiàn)出持續(xù)的情緒低落，缺乏活力，失去興趣或樂(lè)趣，失眠甚至無(wú)法享受生活，影響人們的精神、情緒和身體健康，是全世界主要致殘?jiān)?，也是造成全球疾病?fù)擔(dān)的主要原因。

2、針對(duì)抑郁癥廣大科學(xué)家開(kāi)展了大量深入研究，但仍然無(wú)法找到其確切的發(fā)病機(jī)制和病理生理學(xué)，目前，臨床上廣泛使用的抗抑郁藥物主要是基于“單胺神經(jīng)遞質(zhì)假說(shuō)”以及小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥理論來(lái)研制的?？挂钟羲幬锏淖饔脵C(jī)制主要是通過(guò)抑制5-羥色胺、多巴胺的轉(zhuǎn)運(yùn)體，阻止這些單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的再攝取，從而提高它們?cè)谏窠?jīng)元之間突觸間隙的濃度，進(jìn)而緩解抑郁癥狀。其中，5-羥色胺的英文名稱(chēng)為5-ht。多巴胺的英文名稱(chēng)為da。

3、腸道益生菌在抑郁癥中的應(yīng)用是一個(gè)相對(duì)較新的研究領(lǐng)域，腸道菌群與大腦之間的聯(lián)系，被稱(chēng)為“腸腦軸”，是一個(gè)雙向通信系統(tǒng)，它包括神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)。研究表明，腸道菌群的失衡可能與抑郁癥等心理健康問(wèn)題有關(guān)。益生菌可以通過(guò)提供有益菌來(lái)幫助改善腸道菌群的平衡，這些有益菌可以抑制有害菌的生長(zhǎng)，并可能對(duì)心理健康產(chǎn)生積極影響。抑郁癥患者常常伴隨著炎癥水平的升高，益生菌可能通過(guò)調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)和減少炎癥來(lái)幫助緩解抑郁癥狀。還可以促進(jìn)神經(jīng)遞質(zhì)生成和影響腦功能和情緒。盡管這一領(lǐng)域的研究很有希望，但目前還缺乏大規(guī)模、高質(zhì)量的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)來(lái)證實(shí)益生菌在抑郁癥治療中的確切效果。因此，雖然一些小型研究和初步證據(jù)支持益生菌對(duì)心理健康可能有積極作用，但它們還不能作為抑郁癥的標(biāo)準(zhǔn)治療方法。因此，迫切需要新的研究策略去探究抑郁癥病理機(jī)制及新型抗抑郁藥物的研發(fā)。

4、目前，臨床上使用的抗抑郁藥物多為化學(xué)合成類(lèi)藥物，還有部分從中草藥中提取，但從益生菌提取還未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)。

5、有研究報(bào)導(dǎo)一種益生菌：枯草芽孢桿菌因其有效分泌生物活性的卓越能力而備受關(guān)注，該益生菌能夠分泌出代謝產(chǎn)物可以緩解肥胖、促進(jìn)皮膚創(chuàng)傷愈合、抗感染、抗癌方面效果顯著。但目前尚未發(fā)現(xiàn)該益生菌分泌的代謝產(chǎn)物的抗抑郁作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為解決現(xiàn)有技術(shù)中目前尚未發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌分泌的代謝產(chǎn)物的抗抑郁作用的問(wèn)題，本發(fā)明旨在開(kāi)發(fā)一種益生菌：枯草芽孢桿菌的代謝產(chǎn)物作為治療抑郁癥的藥用潛能，提供了一種益生菌代謝產(chǎn)物mes在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

2、本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供了一種益生菌代謝產(chǎn)物mes在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用，其中，所述益生菌代謝產(chǎn)物mes分離自枯草芽孢桿菌bs-z15的發(fā)酵液。本發(fā)明提供了枯草芽孢桿菌bs-z15分離得到的益生菌代謝產(chǎn)物mes在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用，解決了目前尚未發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌分泌的代謝產(chǎn)物的抗抑郁作用的問(wèn)題。

3、進(jìn)一步地，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了枯草芽孢桿菌bs-z15分泌出的代謝產(chǎn)物mes具有抗抑郁效果，且抗抑郁藥效組分與之前該益生菌公開(kāi)過(guò)的具有抗感染作用的組分并不一樣。因此，本發(fā)明將該枯草芽孢桿菌bs-z15分泌出的代謝產(chǎn)物mes稱(chēng)為益生菌代謝產(chǎn)物mes。基于此，本發(fā)明提供了所述益生菌代謝產(chǎn)物mes在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用。

4、同時(shí)，本發(fā)明提供的所述枯草芽孢桿菌bs-z15的代謝產(chǎn)物mes良好的抗抑郁功能屬于首次發(fā)現(xiàn)。即所述益生菌代謝產(chǎn)物雖然有抗真菌，抗癌活性的報(bào)道，但其抗抑郁功能從未見(jiàn)報(bào)道。所以，本技術(shù)提供的一種益生菌代謝產(chǎn)物mes在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用屬于所述益生菌代謝產(chǎn)物mes的新應(yīng)用方向，可以為抗抑郁藥物的制備提供一種新的研發(fā)思路。

5、其中，枯草芽孢桿菌bs-z15的代謝產(chǎn)物mes又可稱(chēng)為益生菌代謝產(chǎn)物mes。

6、優(yōu)選地，所述益生菌代謝產(chǎn)物mes的制備方法包括如下步驟：

7、將所述枯草芽孢桿菌bs-z15接種至牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基培養(yǎng)12h～22h，得到所述枯草芽孢桿菌bs-z15的發(fā)酵液。

8、所述枯草芽孢桿菌bs-z15的發(fā)酵液在3℃～5℃下第一次低溫離心；第一次低溫離心后收集上清并調(diào)節(jié)溶液ph為2～3，38℃～4.2℃第一次靜置11.5h～12.5h。得到益生菌酸發(fā)酵液。

9、所述益生菌酸發(fā)酵液在3℃～5℃下第二次低溫離心；第二次低溫離心后收集沉淀，用無(wú)菌水將沉淀溶解，并調(diào)節(jié)溶液ph為6.5～7.5，得到益生菌酸沉淀粗提液。

10、向所述益生菌酸沉淀粗提液中加入預(yù)冷的丙酮，在3℃～5℃下低溫第二次靜置2.5h～3.5h后第三次離心，收集上清液；上清液去除丙酮后，先冷凍成固體，再經(jīng)冷凍真空干燥，得到所述益生菌代謝產(chǎn)物mes。

11、其中，所述益生菌酸沉淀粗提液中加入的丙酮的體積為所述益生菌酸沉淀粗提液的體積的3倍～5倍。

12、優(yōu)選地，所述益生菌酸沉淀粗提液中加入的丙酮的體積為所述益生菌酸沉淀粗提液的體積的4倍。所需4倍丙酮目的是保持節(jié)約丙酮的情況下稀釋出粗提液中更多雜蛋白，2.5h～3.5h稀釋蛋白時(shí)間足夠，除去丙酮后上清液超低溫成固體是冷凍干燥的前提。

13、優(yōu)選地，所述第一次低溫離心、所述第二次低溫離心和第三次離心的條件均為：3.5℃～4.5℃、11500r/min～12500r/min。3.5℃～4.5℃為保持離心時(shí)mes穩(wěn)定，11500r/min～12500r/min轉(zhuǎn)速根據(jù)離心機(jī)適配達(dá)到離心效果最佳。

14、優(yōu)選地，所述枯草芽孢桿菌bs-z15的培養(yǎng)條件為：溫度36℃～38℃，培養(yǎng)時(shí)間15h～18h。使益生菌發(fā)酵得出代謝產(chǎn)物最佳。

15、優(yōu)選地，冷凍成固體時(shí)的溫度為-75℃～-85℃；冷凍真空干燥的條件為-40℃～-50℃，15h～20h。上清液超低溫成固體是冷凍干燥的前提，-40℃～-50℃，15h～20h滿(mǎn)足固體冷凍干燥成粉末條件最佳。

16、優(yōu)選地，低溫靜置時(shí)的溫度為3.5℃～4.5℃。為保持mes效果穩(wěn)定。

17、優(yōu)選地，所述藥物是以所述益生菌代謝產(chǎn)物mes為活性成分，并輔以藥學(xué)上可接受的輔料制備得到。

18、優(yōu)選地，所述藥物中所述益生菌代謝產(chǎn)物mes的有效含量為80wt％～90wt％。

19、優(yōu)選地，所述輔料包括淀粉、氯化鈉、葡萄糖、乳糖、甘露醇中的任意一種或多種。

20、優(yōu)選地，所述藥物包括口服劑型。

21、根據(jù)實(shí)際的治療目的和治療方案，可以將所述益生菌代謝產(chǎn)物mes制備成不同類(lèi)型的藥物來(lái)實(shí)現(xiàn)抗抑郁病的作用。

22、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

23、1、本發(fā)明提供了一種益生菌代謝產(chǎn)物mes在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的該代謝產(chǎn)物mes可以提高正常小鼠的精神狀態(tài)，活躍度及認(rèn)知水平。并且，該代謝產(chǎn)物mes對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的抑郁小鼠模型通過(guò)治療后可以顯著改善小鼠的抑郁樣行為。與模型組相比，mes組小鼠的5-羥色胺、多巴胺水平表達(dá)量明顯提高。代謝產(chǎn)物mes對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的抑郁樣小鼠海馬小膠質(zhì)細(xì)胞激活標(biāo)記物iba-1表達(dá)有抑制效果，且該代謝產(chǎn)物mes能夠顯著增加抑郁小鼠海馬神經(jīng)元的密度并恢復(fù)其形態(tài)，減小細(xì)胞間隙，使其排列規(guī)范，改善細(xì)胞外水腫現(xiàn)象，增加胞質(zhì)中尼式體數(shù)量，能夠有效修復(fù)受損神經(jīng)元。調(diào)控對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的抑郁樣小鼠海馬環(huán)磷酸腺苷、camp反應(yīng)元件結(jié)合蛋白、磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶b與核因子κb通路相關(guān)蛋白表達(dá)。

24、其中，環(huán)磷酸腺苷的英文名稱(chēng)為camp。camp反應(yīng)元件結(jié)合蛋白的英文名稱(chēng)為creb。磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶b的英文名稱(chēng)為pi3k/akt。核因子κb的英文名稱(chēng)為nf-κb。