本發(fā)明屬于分子生物，具體涉及rhoa基因作為靶分子在豬格拉瑟氏病防治中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、豬格拉瑟氏病，又稱多發(fā)性纖維素性漿膜炎和關(guān)節(jié)炎，是由副豬嗜血桿菌(g.parasuis)引起的細菌性傳染病。臨床上表現(xiàn)為體溫升高、關(guān)節(jié)腫脹、呼吸困難、多發(fā)性漿膜炎和高死亡率，對斷奶仔豬和保育豬的健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。雖然存在疫苗和抗生素藥物，但對豬格拉瑟氏病的預(yù)防和治療效果并不理想。目前，該病的致病機制尚不清楚，缺乏關(guān)鍵有效的治療靶點。因此，尋找新的基因靶點對宿主靶向抗細菌藥物的開發(fā)顯得尤為緊迫和重要。

2、rhoa基因(ras?homolog?family?member?a)編碼小gtp酶rhoa，屬于rho家族。rhoa能夠在活躍的gtp結(jié)合狀態(tài)和無活性的gdp結(jié)合狀態(tài)之間循環(huán)，作為細胞內(nèi)的分子開關(guān)，調(diào)節(jié)多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。rhoa通過激活信號級聯(lián)反應(yīng)來調(diào)控囊泡運輸、細胞粘附、融合和運動等活動，參與多種病毒感染宿主過程，如皰疹病毒、腺病毒、登革熱病毒、痘病毒、偽狂犬病毒等。

3、盡管rhoa在多種病毒感染中發(fā)揮重要作用，其在副豬嗜血桿菌引發(fā)的豬格拉瑟氏病中的作用尚未明確。進一步研究rhoa在這種特定細菌性疾病中的功能，有望為未來治療策略提供新思路。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明公開了rhoa基因作為靶點用于制備防治豬格拉瑟氏病的藥物，所述藥物為靶向抑制rhoa基因表達的物質(zhì)。具體地，所述的藥物包括靶向敲低rhoa基因的sgrna或其表達載體。

2、進一步優(yōu)選地，靶向敲除rhoa基因的sgrna序列為5’-gaggtatatgtacctaccgt-3’。

3、本發(fā)明還公開了一種藥物，包含靶向敲低rhoa基因的sgrna，該藥物可用于防治豬格拉瑟氏病。

4、本發(fā)明還公開了rhoa基因作為靶點在制備抗副豬嗜血桿菌細菌感染的基因編輯細胞或動物模型中的應(yīng)用。具體地，包括：(1)利用慢病毒載體，通過hek293t細胞進行包裝，獲得crispr/cas9系統(tǒng)慢病毒顆粒；(2)將慢病毒顆粒感染目的細胞株，流式分選法傳代篩選，獲得rhoa基因敲低的細胞株。

5、進一步地，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)rhoa基因與副豬嗜血桿菌黏附入侵具有相關(guān)性。在本發(fā)明的具體實施例中，當(dāng)敲低rhoa基因時，可以降低副豬嗜血桿菌感染pk1細胞的能力，提高細胞增殖能力和存活率。

6、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

7、本發(fā)明提供rhoa基因在防治豬格拉瑟氏病中的應(yīng)用。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)副豬嗜血桿菌感染宿主細胞后rhoa基因表達水平上調(diào)，通過靶向敲低rhoa基因表達可有效抑制副豬嗜血桿菌感染宿主細胞，從而防治g.parasuis感染所引發(fā)的豬格拉瑟氏病。因此，rhoa基因可以作為豬格拉瑟氏病防治的潛在靶點，具有重要的臨床應(yīng)用價值。

技術(shù)特征：

1.rhoa基因抑制劑的用途，其特征在于，用于制備預(yù)防或治療豬格拉瑟氏病的藥物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述rhoa基因抑制劑包括靶向敲低rhoa基因的核苷酸或其表達載體。

3.用于制備預(yù)防或治療豬格拉瑟氏病的藥物，其特征在于，包括靶向敲低rhoa基因的核苷酸或其表達載體。

4.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物，其特征在于，包括靶向敲低rhoa基因的特異性sgrna，所述sgrna序列為5’-gaggtatatgtacctaccgt-3’。

5.抗豬格拉瑟氏病的細胞模型或動物模型，其特征在于，細胞中rhoa基因被敲低，rhoa蛋白表達被抑制。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了RHOA基因在防治豬格拉瑟氏病中的應(yīng)用，通過靶向抑制RHOA基因表達，可有效抑制副豬嗜血桿菌黏附入侵宿主細胞，并減少細胞病變。這種方法有助于抵抗副豬嗜血桿菌感染誘導(dǎo)的細胞死亡，從而預(yù)防豬格拉瑟氏病的發(fā)生。因此，RHOA基因可以作為治療豬格拉瑟氏病的重要靶點，具有重要的臨床應(yīng)用前景。

技術(shù)研發(fā)人員：周煥煥,陳洪波,陳雪雪,李新云,謝勝松
受保護的技術(shù)使用者：武漢輕工大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19