本發(fā)明涉及細(xì)胞藥物治療，尤其涉及一種用于增強(qiáng)間充質(zhì)干細(xì)胞治療效能的組合物及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal?stem/stromal?cell，mscs)是一種廣泛存在于多種組織和器官中的成體干細(xì)胞，與個(gè)體生長(zhǎng)發(fā)育、組織穩(wěn)態(tài)維持和器官損傷修復(fù)密切相關(guān)。除了具備強(qiáng)大的自我更新能力和多項(xiàng)分化潛能外，mscs也具有免疫調(diào)控能力。當(dāng)機(jī)體損傷時(shí)，外源輸注的mscs與內(nèi)源性組織的mscs都可被招募至損傷部位，通過(guò)細(xì)胞替代或細(xì)胞賦能的方式協(xié)調(diào)原位基質(zhì)細(xì)胞和組織特異性干細(xì)胞功能等，促進(jìn)損傷修復(fù)和組織再生。因此，mscs已然成為生命醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中重要的研究對(duì)象，為多種難治性和頑疾性疾病的治療帶來(lái)了希望。

2、因來(lái)源方便、易獲得且免疫原性低等特點(diǎn)，mscs有望成為多種炎癥性疾病的細(xì)胞治療制劑之一。與一線的免疫抑制性藥物相比，mscs并不是系統(tǒng)性地降低免疫系統(tǒng)的功能，而是通過(guò)靶向高炎癥狀態(tài)下的免疫反應(yīng)，降低機(jī)體的炎癥損傷，促進(jìn)組織的再生修復(fù)。

3、在實(shí)際的臨床試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)使用mscs治療炎癥性疾病時(shí)，如果注射的細(xì)胞量過(guò)低，將無(wú)法達(dá)成預(yù)期療效；反之，如果增加干細(xì)胞的輸注量，則會(huì)大幅增加血栓風(fēng)險(xiǎn)，引發(fā)嚴(yán)重的不良反應(yīng)。故，在原有劑量下提升當(dāng)次輸注細(xì)胞的免疫功能特性在臨床實(shí)踐中顯得尤為重要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為解決上述治療的諸多痛點(diǎn)，本發(fā)明提供了一種用于增強(qiáng)間充質(zhì)干細(xì)胞治療效能的組合物及應(yīng)用。本發(fā)明所述的改良的間充質(zhì)干細(xì)胞通過(guò)使用臨床藥物parp抑制劑聯(lián)合炎癥因子處理得到。本發(fā)明通過(guò)使用parp抑制劑聯(lián)合炎癥因子體外預(yù)處理間充質(zhì)干細(xì)胞，以促進(jìn)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白1(signal?transducer?and?activatoroftranscription?1，stat1)磷酸化水平，增加免疫抑制因子吲哚胺雙加氧酶1(indoleamine?2,3-dioxygenase?1，ido1)和程序性細(xì)胞死亡配體1(programmed?celldeath?ligand?1,pd-l1)表達(dá)，從而增強(qiáng)干細(xì)胞免疫調(diào)控功能，增強(qiáng)間充質(zhì)干細(xì)胞治療以異常炎癥反應(yīng)為主要特征的免疫性疾病的效能，如結(jié)腸炎和肝炎。

2、本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

3、本發(fā)明第一個(gè)目的是提供一種用于增強(qiáng)間充質(zhì)干細(xì)胞治療效能的組合物，所述組合物包括parp抑制劑和炎癥因子。

4、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述炎癥因子包括ifn-γ(干擾素-γ)和tnf-α(腫瘤壞死因子-α)。

5、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述炎癥因子的濃度為1ng/ml-20ng/ml，優(yōu)選為10ng/ml。

6、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述parp抑制劑選自盧卡帕尼、奧拉帕尼和尼拉帕利中的一種或多種，優(yōu)選為盧卡帕尼。

7、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述parp抑制劑的濃度為1μm-20μm，優(yōu)選為10μm。

8、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源于骨髓、脂肪或臍帶。

9、所述的間充質(zhì)干細(xì)胞是一種具有自我更新和多向分化潛能的多能干細(xì)胞。臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞(uc-mscs)是現(xiàn)今臨床試驗(yàn)研究中主要使用的mscs類型之一，其可分化為多種間質(zhì)組織，如骨骼、軟骨、脂肪以及骨髓造血組織等。本發(fā)明中所列的細(xì)胞使用實(shí)例都按照蘇州大學(xué)倫理委員會(huì)規(guī)范實(shí)行。

10、特別指出，本發(fā)明所使用的人多能干細(xì)胞均不能發(fā)育成完整個(gè)體，且都已通過(guò)蘇州大學(xué)倫理委員會(huì)審查通過(guò)可用于科學(xué)研究使用。

11、本發(fā)明第二個(gè)目的是提供一種用于增強(qiáng)間充質(zhì)干細(xì)胞治療效能的細(xì)胞藥物，所述細(xì)胞藥物通過(guò)使用所述的組合物培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞得到。

12、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述處理的溫度為37℃，時(shí)間為24h-48h，優(yōu)選為24h。

13、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述間充質(zhì)干細(xì)胞選自10代以內(nèi)的間充質(zhì)干細(xì)胞。

14、本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種用于治療以炎癥反應(yīng)為主要特征的免疫性疾病藥物，包含所述細(xì)胞藥物。

15、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述炎癥反應(yīng)包括以異常炎癥反應(yīng)為主要特征的免疫性疾病；所述異常炎癥反應(yīng)為主要特征的免疫性疾病包括結(jié)腸炎，肝炎，移植物抗宿主病等。

16、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述藥物促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞免疫抑制因子的表達(dá)。

17、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述藥物的劑型為注射劑。

18、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述藥物還包括藥學(xué)上可接受的載體。

19、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述載體選自崩解劑、稀釋劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、矯味劑、助懸劑、表面活性劑和防腐劑中的一種或多種。

20、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述細(xì)胞藥物的給藥劑量為4×106個(gè)間充質(zhì)干細(xì)胞/kg。

21、當(dāng)然，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以知曉，可以根據(jù)需要提高藥物劑量，即所述細(xì)胞藥物的給藥劑量≥4×106個(gè)間充質(zhì)干細(xì)胞/kg。

22、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述藥物通過(guò)提升stat1的磷酸化水平，增加免疫抑制因子的表達(dá)，進(jìn)而增強(qiáng)干細(xì)胞的免疫調(diào)控功能。

23、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，免疫抑制因子ido1和pd-l1。

24、本發(fā)明通過(guò)使用parp抑制劑體外預(yù)處理間充質(zhì)干細(xì)胞，相比于同等數(shù)量未經(jīng)預(yù)處理的間充質(zhì)干細(xì)胞可表現(xiàn)出更高效的治療效應(yīng)，從而為異常炎癥反應(yīng)為主要特征的免疫性疾病(如結(jié)腸炎和肝炎)治療提供了一種新穎的增益策略。

25、本發(fā)明的上述技術(shù)方案相比現(xiàn)有技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)：

26、本發(fā)明提供了用于增強(qiáng)間充質(zhì)干細(xì)胞治療效能的組合物及應(yīng)用，通過(guò)使用parp抑制劑和炎癥因子體外預(yù)處理間充質(zhì)干細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了對(duì)以異常炎癥反應(yīng)為主要特征的免疫性疾病如腸炎、肝炎的治療的增益效應(yīng)。本發(fā)明單次輸注低劑量(2×105)的dmso和炎癥因子預(yù)處理的mscs未能顯著緩解小鼠疾病指征，然而輸注同等數(shù)量經(jīng)parp抑制劑和炎癥因子預(yù)處理后的mscs卻可顯著改善肝炎小鼠血清中的轉(zhuǎn)氨酶水平同時(shí)抑制肝臟組織壞死，另外也可減輕腸炎小鼠體重丟失、腹瀉、便血、腸組織增厚水腫、結(jié)構(gòu)破損以及免疫細(xì)胞浸潤(rùn)等疾病癥狀。因此，使用parp抑制劑預(yù)處理mscs可以增強(qiáng)干細(xì)胞的免疫調(diào)控功能，實(shí)現(xiàn)干細(xì)胞疾病治療的增益效應(yīng)。

技術(shù)特征：

1.一種用于增強(qiáng)間充質(zhì)干細(xì)胞治療效能的組合物，其特征在于，所述組合物包括parp抑制劑和炎癥因子。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述炎癥因子包括ifn-γ和tnf-α。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述炎癥因子的濃度為1ng/ml-20ng/ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述parp抑制劑選自盧卡帕尼、奧拉帕尼和尼拉帕利中的一種或多種。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述parp抑制劑的濃度為1μm-20μm。

6.一種用于增強(qiáng)間充質(zhì)干細(xì)胞治療效能的細(xì)胞藥物，其特征在于，所述細(xì)胞藥物通過(guò)使用權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的組合物培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞得到。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的細(xì)胞藥物，其特征在于，所述培養(yǎng)的時(shí)間為24h-48h。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的細(xì)胞藥物，其特征在于，所述間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源于骨髓、脂肪或臍帶。

9.一種用于治療以炎癥反應(yīng)為特征的免疫性疾病藥物，其特征在于，包含權(quán)利要求6-8任一項(xiàng)所述的細(xì)胞藥物。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的免疫性疾病藥物，其特征在于，所述炎癥反應(yīng)包括以異常炎癥反應(yīng)為特征的免疫性疾??；所述以異常炎癥反應(yīng)為特征的免疫性疾病為結(jié)腸炎、急性肝炎和移植物抗宿主病。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及用于增強(qiáng)間充質(zhì)干細(xì)胞治療效能的組合物及應(yīng)用，屬于細(xì)胞藥物治療技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明用于增強(qiáng)間充質(zhì)干細(xì)胞治療效能的組合物包括PARP抑制劑和炎癥因子。通過(guò)該組合物預(yù)處理間充質(zhì)干細(xì)胞，得到治療效能增強(qiáng)的間充質(zhì)干細(xì)胞，用于制備以異常炎癥反應(yīng)為特征的免疫性疾病的治療藥物。本發(fā)明使用PARP抑制劑聯(lián)合炎癥因子處理間充質(zhì)干細(xì)胞可以提升胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白1(STAT1)磷酸化水平，增加免疫抑制因子吲哚胺雙加氧酶1(IDO1)和程序性細(xì)胞死亡配體1(PD?L1)表達(dá)，從而增強(qiáng)干細(xì)胞免疫調(diào)控功能，實(shí)現(xiàn)對(duì)以異常炎癥反應(yīng)為主要特征的免疫性疾病治療的增益效應(yīng)。

技術(shù)研發(fā)人員：時(shí)玉舫,邵常順,王婷婷,房建凱,李亞南
受保護(hù)的技術(shù)使用者：蘇州大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19