本發(fā)明涉及醫(yī)藥，具體涉及一種20(s)-ppd磷脂固體分散體及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、慢性腎病是指由于各類原因?qū)е碌哪I臟結(jié)構(gòu)和功能障礙的一種進(jìn)行性疾病，患病率、死亡率都很高，已經(jīng)成為全球重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題，嚴(yán)重威脅著人類的健康。全球疾病負(fù)擔(dān)(global?burden?of?disease，gbd)研究顯示，慢性腎病傷殘調(diào)整壽年(disabilityand?adjusted?life?years，daly)已從1990年的第29位上升至2019年的第18位。全球慢性腎病導(dǎo)致的負(fù)擔(dān)正在迅速增加，預(yù)計(jì)到2040年慢性腎病將成為全球第五大最常見(jiàn)的生命損失原因。(collaborators?gdai.global?burden?of?369diseases?and?injuries?in204countries?and?territories，1990-2019a?systematic?analysis?for?the?globalburgen?of?disease?study2019[j].lancet，2020,396(10258)：1204-1222.)

2、膜性腎病(membranous?nephropathy，mn)也叫膜性腎小球腎炎，是成人慢性腎病綜合征常見(jiàn)的病理類型之一，病因未明者稱為特發(fā)性膜性腎病(idiopathic?membranousnephropathy，imn)。國(guó)外報(bào)道imn占原發(fā)性腎病綜合征的30％～40％，國(guó)內(nèi)報(bào)道全國(guó)范圍內(nèi)mn占腎小球疾病的24.9％，已躍居第二位且比例有逐年增高趨勢(shì)，局部地區(qū)占比高達(dá)51％。(楊麗虹,蘇佩玲,包崑.特發(fā)性膜性腎病中醫(yī)臨床實(shí)踐指南(2021)[j].中國(guó)全科醫(yī)學(xué),2023,26(06):647-659+645.)；約20％的患者發(fā)病與系統(tǒng)性疾病、感染、藥物或腫瘤等繼發(fā)性因素有關(guān)，其余無(wú)明確繼發(fā)因素，稱為原發(fā)性膜性腎病(primarymembranousnephropathy，pmn)。

3、目前認(rèn)為，pmn屬于一種自身免疫性疾病，發(fā)病主要與多種足細(xì)胞抗原誘發(fā)機(jī)體免疫系統(tǒng)活化有關(guān)。(ronco?p，beck?l，debiec?h，et?al.membranous?nephropthy[j].natrev?dis?primers，2021，7(1):69.)

4、人參是傳統(tǒng)中藥之一，具有抗炎、抗腫瘤、調(diào)節(jié)人體免疫力等藥理活性，人參提取物在治療膜性腎病上具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。其中人參皂苷是從人參中提取的主要活性成分，由親水糖苷鏈和疏水苷元組成。根據(jù)苷元的骨架不同，人參皂苷主要分為原人參二醇(protopanaxadiol，ppd)型和原人參三醇(protopanaxatriol，ppt)型，其中苷元與膽固醇具有相似的類固醇結(jié)構(gòu)。

5、磷脂是一種由親水部分和疏水部分以雙分子層排列成的兩性分子，屬于兩性離子表面活性劑，具有乳化作用。

6、目前，已經(jīng)開(kāi)發(fā)了多種增加20(s)-ppd溶解度以提高其體內(nèi)生物利用度的技術(shù)方法，例如脂質(zhì)體、固體分散體、微粉化、納米化、共晶體等。在口服劑型中，固體分散體可以通過(guò)將藥物以無(wú)定型的高度分散狀態(tài)均勻分散在載體中形成的一種以固體粉末形式存在的分散系統(tǒng)，在胃腸道形成過(guò)飽和溶液來(lái)改善藥物溶解度和生物利用度，可以通過(guò)相對(duì)簡(jiǎn)單且經(jīng)濟(jì)高效的方法獲得，易于自我給藥。但現(xiàn)有研究的相關(guān)固體分散體是一種熱力學(xué)不穩(wěn)定體系，在生產(chǎn)和儲(chǔ)蓄過(guò)程中，由于機(jī)械力、溫度和濕度的作用，藥物可能從無(wú)定形態(tài)變?yōu)榻Y(jié)晶態(tài)，從亞穩(wěn)態(tài)變?yōu)榉€(wěn)態(tài)，并與載體發(fā)生相分離或晶體成長(zhǎng)，這樣會(huì)導(dǎo)致藥物溶解度減小和溶出速率減慢。(申夏夏.基于藥用丙烯酸樹(shù)脂的納米纖維狀固體分散體的制備及評(píng)價(jià)[d].東華大學(xué),2015.)

7、因此，制備一種新型磷脂固體分散體制劑以達(dá)到提高20(s)-ppd溶解度及口服生物利用度及生產(chǎn)和存儲(chǔ)期限內(nèi)溶解度及生物利用度不會(huì)減慢具有很大價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明公開(kāi)了一種20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體制劑。二者可以形成自組裝囊泡狀脂質(zhì)體。所得制劑水化后，可在胃腸道自發(fā)形成納米混懸液，藥物溶解度和溶出度得到顯著提高。正是這種優(yōu)越的制劑結(jié)構(gòu)，使得其穩(wěn)定性、溶出速率及口服生物利用度得到顯著的提升。

2、本發(fā)明提供一種20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體，所述制劑由20(s)-ppd、磷脂、乙醇、抑晶劑、分散劑組成。

3、上述的制劑，包括磷脂1～6份、pvpk30?1～3份、介孔硅15～20份；優(yōu)選所述制劑中20(s)-ppd含量為10～30％(w/w)；優(yōu)選所述磷脂為大豆磷脂pc70或/pc50中的一種；優(yōu)選所述20(s)-ppd與大豆磷脂的用量之比即藥載比為1～4:1；優(yōu)選所述乙醇濃度為90～100％(w/w)。

4、上述的制劑，所述抑晶劑為聚乙烯吡咯烷酮k30(pvpk30)或/共聚維酮s630中的一種，含量為3～10％(w/w)。

5、上述的制劑，所述分散劑為介孔硅或微孔淀粉中的一種，含量為50～60％(w/w)。

6、上述的制劑，所述分散劑的功能為介孔分散及使得20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體獲得優(yōu)良的粉體學(xué)性質(zhì)；優(yōu)選所述介孔硅的品牌及型號(hào)為xp3050、244fp中的一種，粒徑大小為3.5～50μm。

7、所述制劑的制備方法，包括以下步驟：

8、1)將20(s)-ppd、大豆磷脂和pvp?k30溶于入乙醇中，不斷攪拌使其充分溶解。

9、2)將適量介孔硅作為分散劑，加入步驟1)所述成分中加熱回流并進(jìn)行固化。

10、3)減壓蒸發(fā)除去乙醇并收集固體物。

11、4)放入真空干燥箱真空干燥24h，即得20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體。

12、所述的制備方法，步驟1)所述的溶解方式為加熱攪拌溶解，優(yōu)選所述的加熱溫度為37～60℃。

13、所述的制備方法，所述的加熱時(shí)間為5～15min。

14、所述的制劑或所述制備方法制備得到的制劑在制備改善足細(xì)胞損傷的藥物或治療膜性腎小球腎炎的藥物中的應(yīng)用。

15、所述的制劑或所述制備方法制備得到的制劑生物利用度得到顯著提高。

16、20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體制劑示意圖見(jiàn)圖1所示。

17、本發(fā)明前期進(jìn)行大量試驗(yàn)，將20(s)-ppd制備成了多種劑型，對(duì)多種劑型在大鼠體內(nèi)進(jìn)行藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究，其絕對(duì)生物利用度結(jié)果如下。

18、 樣品 給藥方式 絕對(duì)生物利用度 脂肪乳劑1 口服 19.44％ 脂肪乳劑2 口服 16.52％ 脂肪乳劑3 口服 14.32％ 微丸1 口服 20.12％ 微丸2 口服 15.43％ 微丸3 口服 17.33％ 納米囊 口服 8.57％ 納米混懸劑 口服 9.42％

19、本發(fā)明前期進(jìn)行大量試驗(yàn)，將20(s)-ppd制備成了多種劑型，對(duì)多種劑型在大鼠體內(nèi)進(jìn)行藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究，所制備的20(s)-ppd脂肪乳劑、微丸、納米混懸液、納米囊等劑型口服絕對(duì)生物利用度仍較低且性質(zhì)不穩(wěn)定，載藥量較低，均未達(dá)到預(yù)期效果。

20、本發(fā)明在上述研究基礎(chǔ)上，進(jìn)一步改進(jìn)，制備出一種20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體制劑。制劑載藥量高，口服絕對(duì)生物利用度高，藥效顯著。

21、對(duì)實(shí)施例1所制備的20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體進(jìn)行dsc熱分析。

22、dsc分析圖見(jiàn)圖2所示，其中a：游離20(s)-ppd?b:磷脂c：20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體d:20(s)-ppd與磷脂的物理混合物

23、由dsc分析圖可知，游離20(s)-ppd在214.14℃出現(xiàn)吸熱峰，而在20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體的dsc曲線中特征峰消失了，表明20(s)-ppd在20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體制劑中不存在晶型藥物成分，藥物以無(wú)定形態(tài)存在于固體分散體中。

24、對(duì)實(shí)施例1所制備的20(s)-ppd-磷脂-pvpk30復(fù)合物進(jìn)行偏光顯微鏡檢測(cè)(polarization?micro-scope，plm)。利用plm對(duì)復(fù)合物結(jié)晶情況進(jìn)行觀察。

25、分別取適量20(s)-ppd、磷脂、pvpk30于載玻片上滴加硅油進(jìn)行分散；取實(shí)施例1制備的20(s)-ppd-磷脂-pvpk30復(fù)合物溶液30μl于載玻片上，待乙醇自然揮發(fā)，以10×20放大倍數(shù)觀察并拍照。

26、20(s)-ppd：有針狀結(jié)晶結(jié)構(gòu)，具體結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖3所示。

27、磷脂：整齊排列無(wú)結(jié)晶結(jié)構(gòu)，具體結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖4所示。

28、20(s)-ppd-磷脂-pvpk30復(fù)合物：有磷脂整齊排列且無(wú)結(jié)晶結(jié)構(gòu)，具體結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖5所示。

29、通過(guò)偏光顯微鏡檢測(cè)(plm)觀察，可以確定20(s)-ppd為針狀結(jié)晶狀結(jié)構(gòu)，磷脂為整齊排列且無(wú)結(jié)晶的結(jié)構(gòu)，而觀察20(s)-ppd-磷脂-pvpk30復(fù)合物結(jié)構(gòu)圖中無(wú)結(jié)晶狀結(jié)構(gòu)，可判斷復(fù)合物中無(wú)20(s)-ppd藥物結(jié)晶析出，呈無(wú)定型狀態(tài)存在，可達(dá)到最大載藥量。

30、本發(fā)明所制備的20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體制劑，外觀為白色均勻粉末，加水復(fù)溶后可形成無(wú)明顯不溶物質(zhì)的納米混懸液。由于磷脂的存在，可以在疏水藥物20(s)-ppd顆粒表面形成水化膜并荷電，降低液-固表面張力，提高顆粒間的排斥力，從而提高20(s)-ppd藥物顆粒的分散性，減少沉降。

31、對(duì)實(shí)施例1所制備的20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體制劑進(jìn)行粉體學(xué)性質(zhì)測(cè)定。

32、采用固體圓錐體法測(cè)定20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體的休止角。將實(shí)施例1所制備的制劑置固定于圓形表面皿的中心點(diǎn)上的漏斗中，使其緩緩流出，直至20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體堆積到不再下流為止，平行三次測(cè)出堆體高度(h)、表面皿半徑(r)，算出休止角(θ)，結(jié)果如下表所示。

33、

34、粉體的休止角越小，摩擦力越小，流動(dòng)性即越好。一般認(rèn)為，休止角小于40°時(shí)可以滿足生產(chǎn)流動(dòng)性的需要。上表結(jié)果表明20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體制劑流動(dòng)性較好。

35、稱取一定量的20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體，輕輕裝入50ml量筒中，測(cè)量最初松體積；采用輕敲法使粉體處于最緊狀態(tài)，測(cè)量最終體積；計(jì)算最松密度ρ0與最緊密度ρf；根據(jù)公式計(jì)算其壓縮度c，結(jié)果見(jiàn)下表。

36、

37、

38、粉體的壓縮性可以反應(yīng)其流動(dòng)性、凝聚性及松軟狀態(tài)，粉體的壓縮度在20％以下時(shí)流動(dòng)性良好，壓縮性增大時(shí)流動(dòng)性下降。結(jié)果表明，20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體制劑具有良好的流動(dòng)性。

39、本發(fā)明所制備的20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體制劑利用介孔硅進(jìn)行分散，使得制劑具有良好的粉體學(xué)特性。

40、對(duì)實(shí)施例1所制備的20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體制劑稱取40mg過(guò)篩粉體至燒杯中，加入20ml胃液中復(fù)溶，可觀測(cè)到具有丁達(dá)爾效應(yīng)的納米混懸液，通過(guò)馬爾文納米粒度儀測(cè)定后發(fā)現(xiàn)，納米混懸液的粒徑為200nm左右。具體測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖6所示。

41、對(duì)實(shí)施例1所制備的20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體制劑與20(s)-ppd脂肪乳劑進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)研究，其與脂肪乳劑絕對(duì)生物利用度對(duì)比結(jié)果如下。

42、1、大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)評(píng)價(jià)

43、采用雄性sd大鼠，180±20g，隨機(jī)分為8組，每組6只。通過(guò)灌胃給藥，20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體制劑含量為14.42％，給藥劑量為35mg/kg，給藥體積為10ml/kg；20(s)-ppd脂肪乳制劑含量為3.62mg/ml，給藥劑量為35mg/kg，給藥體積為10ml/kg。

44、口服后平均絕對(duì)生物利用度f(wàn)＝23.95％

45、以口服20(s)-ppd脂肪乳為參比制劑，20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體制劑的相對(duì)生物利用度為123.22％。具體的藥時(shí)曲線見(jiàn)圖7(口服藥時(shí)曲線)、8(靜脈注射藥時(shí)曲線)所示。

46、通過(guò)改變20(s)-原人參二醇的劑型，將其制成20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體制劑，促進(jìn)了制劑的吸收能力，其口服生物利用度得到了有效改善。

47、對(duì)實(shí)施例1所制備的20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體制劑進(jìn)行物理穩(wěn)定性試驗(yàn)。

48、取不同條件下放置的20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體制劑適量于載玻片上滴加硅油進(jìn)行分散，通過(guò)偏光顯微鏡觀察后放置，其結(jié)果如下。

49、

50、物理穩(wěn)定性結(jié)果表明，在室溫25℃及高溫40℃條件放置后，所制得的20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體制劑無(wú)藥物析出情況，外觀狀態(tài)良好，表明其穩(wěn)定性良好，質(zhì)量可控；在高濕度條件下有細(xì)小結(jié)晶，可能是20(s)-ppd磷脂固體分散體制劑具有一定的吸濕性，因此在保存時(shí)要注意保持干燥。

51、本發(fā)明的目的是提供一種處方組成及方法簡(jiǎn)單，載藥量高，穩(wěn)定性好，藥效顯著，并且能有效解決20(s)-ppd的體內(nèi)口服吸收利用度低且在胃腸道內(nèi)藥物過(guò)飽和溶液不穩(wěn)定，容易重結(jié)晶的問(wèn)題的新型固體分散體制劑及其制備方法。

52、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

53、一種20(s)-ppd磷脂/介孔硅固體分散體制劑組成及其制備方法，其特征在于，該制劑由20(s)-ppd、大豆磷脂、乙醇、聚乙烯吡咯烷酮k30(pvp?k30)、介孔硅組成。本發(fā)明所述制劑采用溶劑揮發(fā)法制備而成，具體包含下述步驟：

54、1)稱取處方量的20(s)-ppd、磷脂與pvpk30溶于乙醇后置于圓底燒瓶中，在加熱40℃狀態(tài)下不斷攪拌使之形成澄清透明溶液。

55、2)稱取一定量的介孔硅作為分散劑加入其中，在加熱40℃條件下回流10min并進(jìn)行分散固化。

56、3)減壓蒸發(fā)除去乙醇，并收集固體物。

57、4)將所收集的固體物放入真空干燥箱24h進(jìn)行干燥，即得。

58、所述20(s)-ppd含量為10～50％(w/w)，優(yōu)選20～40％(w/w)。

59、所述大豆磷脂1～3份，優(yōu)選2份。

60、所述20(s)-ppd與大豆磷脂含量比即藥載比為1～4:1，優(yōu)選3:1。

61、所述乙醇濃度為90～100％(w/w)，優(yōu)選95％

62、所述抑晶劑pvpk30或共聚維酮s630中的一種，優(yōu)選pvpk30。

63、所述pvpk30用量1～4份，優(yōu)選3份；含量為3～10％(w/w)，優(yōu)選8～9％(w/w)。

64、所述分散劑介孔硅或微孔淀粉中的一種，優(yōu)選介孔硅。

65、所述介孔硅為xp3050、244fp中的一種，粒徑大小為3.5～50μm；優(yōu)選xp3050，優(yōu)選粒徑50μm。

66、所述分散劑介孔硅或微孔淀粉中的一種15～20份，優(yōu)選16份；含量為40～60％(w/w)，優(yōu)選50～55％(w/w)。

67、所述20(s)-ppd磷脂固體分散體制劑的制備工藝，其特征在于，所述制劑的加熱溫度為37～60℃，優(yōu)選40℃；加熱時(shí)間為5～15min，優(yōu)選10min。

68、本發(fā)明所述的20(s)-ppd磷脂固體分散體制劑的優(yōu)點(diǎn)在于：

69、1)本發(fā)明組成簡(jiǎn)單易得，制備工藝簡(jiǎn)便，載藥量高，適合大批量生產(chǎn)。

70、2)本發(fā)明中磷脂的存在，可對(duì)20(s)-ppd藥物小晶核起到保護(hù)作用，在腸道過(guò)飽和狀態(tài)下抑制其長(zhǎng)大，從而提高制劑口服生物利用度。

71、3)本發(fā)明所使用的聚乙烯吡咯烷酮k30(pvp?k30)作為抑晶劑，不僅可以保持藥物在磷脂中的無(wú)定形狀態(tài)，還顯著提高了制劑的物理穩(wěn)定性和口服生物利用度。

72、4)本發(fā)明利用介孔硅作為分散劑，藥物與載體形成的復(fù)合物通過(guò)借助毛細(xì)管作用滲入介孔硅孔隙內(nèi)，可以達(dá)到研磨法無(wú)法達(dá)到的均勻細(xì)密的固體粉末，介孔硅與磷脂具有高度親和性，其可以被吸附在細(xì)胞表面并通過(guò)內(nèi)吞作用被多種細(xì)胞攝取，從而提高藥物在小腸內(nèi)的溶解度和生物利用度；并且介孔硅其單位體積的吸附量高且粉體密度較大，具有較好的粉末流動(dòng)性，可在吸附后仍保持為自由流動(dòng)的粉末。

73、5)本發(fā)明具有優(yōu)良的粉體學(xué)性質(zhì)，測(cè)得其休止角θ為39°，壓縮度為20％，粉體流動(dòng)性較好，滿足生產(chǎn)流動(dòng)性的要求。

74、6)本發(fā)明復(fù)溶后可形成納米混懸液，載藥量增大且難溶藥物的溶解度及溶出度得到顯著提高。

75、7)本發(fā)明穩(wěn)定性好，載藥量高，制劑中20(s)-ppd含量可以達(dá)到40％以上；口服絕對(duì)生物利用度高，可達(dá)23.95％。本制劑藥效顯著，口服后可顯著緩解維持腎小球?yàn)V過(guò)屏障完整性的足細(xì)胞的損傷，治療膜性腎病(mn)等成人慢性腎病綜合征。