本發(fā)明涉及一種利用超臨界流體提取制備的無細(xì)胞(acellular)真皮組織。更具體地說，本發(fā)明涉及一種通過使用超臨界流體提取而具有改進(jìn)的細(xì)胞外基質(zhì)保留水平和優(yōu)化的機械性能(例如臨界載荷和彈性恢復(fù)力)的無細(xì)胞真皮組織。

背景技術(shù)：

1、人體的皮膚組織由最外層的表皮層、其下的真皮層和皮下組織組成。其中，表皮層是由將表皮層與真皮層牢固結(jié)合的基底膜分化成數(shù)層的上皮細(xì)胞、黑色素細(xì)胞、免疫細(xì)胞所構(gòu)成。表皮層下面的真皮層主要由成纖維細(xì)胞和由膠原蛋白、彈性蛋白等組成的細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)成。

2、皮膚組織或內(nèi)臟器官組織可能由于燒傷、外傷、潰瘍等原因而部分受損。在這種情況下，采用移植自身皮膚組織或內(nèi)臟器官組織的方法來治愈受損組織或用于進(jìn)行重建整形手術(shù)。在這種情況下，接受者必須承受額外提取其自身皮膚組織或器官組織的手術(shù)負(fù)擔(dān)，如果接受者的健康狀況不佳，這可能會很危險。此外，還有使用異種移植物或合成生物材料進(jìn)行移植的方法。但這些方法可能引起免疫排斥反應(yīng)，導(dǎo)致移植后出現(xiàn)長期炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致需要再次手術(shù)。

3、為了解決上述問題，韓國專利注冊號10-0469661和10-0791502中公開了從供體提取的皮膚組織制備用于移植的無細(xì)胞真皮層的方法。然而，這些方法遵循表面活性劑處理過程。表面活性劑處理可能會引起膠原蛋白等蛋白質(zhì)變性、生長因子破壞等問題。此外，結(jié)構(gòu)形態(tài)和組織學(xué)形態(tài)難以保持，臨界載荷、彈性等力學(xué)性能可能減弱。而且，殘留的表面活性劑不容易去除，如果去除不徹底，可能會有毒性。

4、此外，為了制備無細(xì)胞真皮基質(zhì)，還已經(jīng)使用胰蛋白酶或分散酶等蛋白水解酶作為免疫原性細(xì)胞去除方法，或使用反復(fù)凍融、nacl和sds處理等方法。然而，通過這些工藝制備的無細(xì)胞真皮基質(zhì)含有許多抗原成分，移植到受體部位時容易引起免疫排斥反應(yīng)，從而導(dǎo)致低植入率(r.j.walter?et.al,burns,24:104-113,1998)。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、技術(shù)問題

2、因此，本發(fā)明人進(jìn)行了研究，以開發(fā)一種無細(xì)胞真皮移植物材料，該材料改善了移植排斥和成本問題，同時還改進(jìn)了因化學(xué)處理脫細(xì)胞(decellularization)所造成的機械性能減弱的問題。結(jié)果，建立了無需表面活性劑處理的優(yōu)化超臨界流體處理工藝，并獲得了機械性能改進(jìn)、細(xì)胞外基質(zhì)保留水平提高的無細(xì)胞真皮組織。基于上述內(nèi)容，發(fā)明人完成了本發(fā)明。

3、解決方案

4、為了解決上述問題，在本發(fā)明的一個方面，提供了一種無細(xì)胞真皮組織移植物，其中，無細(xì)胞真皮組織的臨界荷載為11至19n，無細(xì)胞真皮組織的楊氏模量為0.5至1.2mpa。

5、本發(fā)明的另一個方面，提供了一種制備無細(xì)胞真皮組織移植物的方法，該方法包括以下步驟：a)將從對象分離的皮膚組織分離成表皮層和真皮層；b)用超臨界流體提取分離的真皮層；以及c)用磷酸鹽緩沖液清洗用超臨界流體提取的真皮層。

6、發(fā)明效果

7、根據(jù)本發(fā)明的無細(xì)胞真皮組織是通過脫細(xì)胞而獲得的，不經(jīng)過表面活性劑處理，因此保留了臨界載荷、彈性等力學(xué)性能，同時不具有表面活性劑殘留而引起的毒性，因此適合移植到燒傷、外傷等皮膚組織受損的患者身上。因此，本發(fā)明通過優(yōu)化的超臨界流體處理工藝所獲得的無細(xì)胞真皮組織不具有毒性及移植排斥，所以可有效用于治療皮膚組織受損的患者。

技術(shù)特征：

1.一種無細(xì)胞真皮組織移植物，其中，所述無細(xì)胞真皮組織的臨界荷載為11n至19n，所述無細(xì)胞真皮組織的楊氏模量為0.5mpa至1.2mpa。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的無細(xì)胞真皮組織移植物，其中，基于干重，所述無細(xì)胞真皮組織具有選自下列特征中的任一個特征：

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的無細(xì)胞真皮組織移植物，其中，所述無細(xì)胞真皮組織具有與原始組織相比的選自下列特征中的任一個特征：

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的無細(xì)胞真皮組織移植物，其中，所述無細(xì)胞真皮組織具有與原始組織相比的選自下列特征中的任一個特征：

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的無細(xì)胞真皮組織移植物，其中，所述無細(xì)胞真皮組織是通過包括用超臨界流體提取的步驟的制備方法制備的。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的無細(xì)胞真皮組織移植物，其中，用作所述超臨界流體的溶劑為二氧化碳。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的無細(xì)胞真皮組織移植物，其中，所述超臨界流體還包含乙醇作為共溶劑。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的無細(xì)胞真皮組織移植物，其中，所述提取是在30℃至40℃的溫度條件下進(jìn)行的。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的無細(xì)胞真皮組織移植物，其中，所述提取是在50bar至400bar的壓力條件下進(jìn)行的。

10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的無細(xì)胞真皮組織移植物，其中，所述提取進(jìn)行1小時至3小時。

11.根據(jù)權(quán)利要求5所述的無細(xì)胞真皮組織移植物，其中，在用超臨界流體提取的步驟之前包括分離表皮層和真皮層的步驟。

12.根據(jù)權(quán)利要求5所述的無細(xì)胞真皮組織移植物，其中，所述制備方法在用超臨界流體提取的步驟之后包括以下步驟中的任一個步驟：

13.一種無細(xì)胞真皮組織移植物的制備方法，包括以下步驟：

14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的制備方法，其中，步驟b)中的所述超臨界流體還包含共溶劑。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及一種利用超臨界流體提取制備的脫細(xì)胞的無細(xì)胞真皮組織。更具體地說，本發(fā)明涉及一種通過使用超臨界流體提取而具有改進(jìn)的細(xì)胞外基質(zhì)保留水平和優(yōu)化的機械性能(例如臨界載荷和彈性恢復(fù)力)的無細(xì)胞真皮組織。本發(fā)明的無細(xì)胞真皮組織是通過脫細(xì)胞而獲得的，不經(jīng)過表面活性劑處理，因此保留了機械性能，不具有殘留表面活性劑引起的毒性，并且最大程度地減少了移植排斥，因此可以有效用于治療皮膚組織受損的患者。

技術(shù)研發(fā)人員：辛龍雨,盧成來
受保護(hù)的技術(shù)使用者：株式會社多富
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19