本公開(kāi)涉及免疫療法。更具體地，本公開(kāi)涉及對(duì)b細(xì)胞成熟抗原(bcma)具有特異性的嵌合抗原受體(car)分子、用于治療免疫相關(guān)病癥的組合物及其方法。

背景技術(shù)：

1、以下列出了被認(rèn)為與目前公開(kāi)的主題的背景技術(shù)相關(guān)的參考文獻(xiàn)：

2、[1]friedman?km、garrett?te、evans?jw等人。通過(guò)抗b細(xì)胞成熟抗原嵌合抗原受體t細(xì)胞有效靶向多種表達(dá)b細(xì)胞成熟抗原的血液惡性腫瘤。hum.gene?ther?2018；29:585-601。

3、[2]carpenter?ro、evbuomwan?mo、pittaluga?s等人。b細(xì)胞成熟抗原是多發(fā)性骨髓瘤過(guò)繼性t細(xì)胞療法的有希望的靶點(diǎn)。clin.cancer?res?2013；19:2048-2060。

4、[3]ali?sa、shi?v、maric?i等人。表達(dá)抗b細(xì)胞成熟抗原嵌合抗原受體的t細(xì)胞導(dǎo)致多發(fā)性骨髓瘤緩解。blood?2016；128:1688-1700。

5、[4]brudno?jn、maric?i、hartman?sd等人。經(jīng)基因修飾以表達(dá)抗b細(xì)胞成熟抗原嵌合抗原受體的t細(xì)胞導(dǎo)致緩解不良預(yù)后的復(fù)發(fā)性多發(fā)性骨髓瘤。jco?2018；36:2267-2280。

6、[5]raje?n、berdeja?j、lin?y等人。抗bcmacar?t細(xì)胞療法bb2121治療復(fù)發(fā)性或難治性多發(fā)性骨髓瘤。n?engl?j?med?2019；380:1726-1737。

7、[6]cohen?ad、garfall?al、stadtmauer?ea等人。b細(xì)胞成熟抗原特異性car?t細(xì)胞在多發(fā)性骨髓瘤中具有臨床活性。j?clin?invest?2019；129:2210-2221。

8、[7]jiang?s、jin?j、hao?s等人。低劑量人scfv衍生的bcma靶向car-t細(xì)胞在復(fù)發(fā)性/難治性多發(fā)性骨髓瘤患者中實(shí)現(xiàn)了快速應(yīng)答和高度完全緩解。blood?2018；132:960。

9、[8]liu?y、chen?z、fang?h等人。bcma引導(dǎo)的car-t療法對(duì)復(fù)發(fā)性或難治性多發(fā)性骨髓瘤的持久的緩解。blood?2018；132:956。

10、[9]mailankody?s、ghosh?a、staehr?m等人。mcarh171(一種人源性bcma靶向car?t細(xì)胞療法)在復(fù)發(fā)性/難治性多發(fā)性骨髓瘤中的臨床應(yīng)答和藥代動(dòng)力學(xué)：i期臨床試驗(yàn)的最終結(jié)果。blood?2018；132:959。

11、[10]munshi?nc、anderson?ld,jr.、shah?n等人。復(fù)發(fā)性和難治性多發(fā)性骨髓瘤中的idecabtagene?vicleucel。n.engl.j.med.2021；384:705-716。

12、[11]eisenberg?v、hoogi?s、shamul?a、barliya?t,cohen?cj。t細(xì)胞“ala?car-t(e)”-基因工程t細(xì)胞對(duì)癌癥的應(yīng)答。adv.drug?deliv.rev.2019；141:23-40。

13、[12]kawalekar?ou、o'connor?rs、fraietta?ja等人。不同的共同受體信號(hào)傳導(dǎo)調(diào)節(jié)特定的代謝途徑并影響car?t細(xì)胞的記憶發(fā)育。immunity.2016；44:380-390。

14、[13]watanabe?n、bajgain?p、sukumaran?s等人。微調(diào)car間隔子提高t細(xì)胞效能。oncoimmunology.2016；5:e1253656。

15、[14]ying?z、huang?xf、xiang?x等人。安全且有效的抗cd19?car?t細(xì)胞療法。nat.med.2019；25:947-953。

16、本文對(duì)上述參考文獻(xiàn)的承認(rèn)不應(yīng)被推斷為意指這些參考文獻(xiàn)以任何方式與目前公開(kāi)的主題的專利性相關(guān)。

17、背景技術(shù)

18、多發(fā)性骨髓瘤(mm)通過(guò)惡性漿細(xì)胞的克隆擴(kuò)增在骨髓中發(fā)育，并與血液和尿液中單克隆免疫球蛋白的過(guò)量產(chǎn)生相關(guān)聯(lián)。盡管在mm的治療方面取得了顯著的進(jìn)展，但是這種疾病在復(fù)發(fā)性/難治性(r/r)患者中仍然是不可治愈的，具有不良預(yù)后。因此，需要開(kāi)發(fā)靶向多發(fā)性骨髓瘤的新型治療方法。繼cd19靶向car療法血液惡性腫瘤取得重大成功并于2017年獲得fda批準(zhǔn)后，car療法需要新的潛在靶點(diǎn)。在這方面，b細(xì)胞成熟抗原(bcma)是一種屬于腫瘤壞死因子受體(tnfr)超家族的細(xì)胞表面蛋白。在與april和baff相互作用后，bcma可促進(jìn)b細(xì)胞存活和增殖。除了成熟的b淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞，bcma在大多數(shù)mm病例中高度表達(dá)，使其成為car療法的有吸引力的靶點(diǎn)[1]。

19、kochenderfer及其同事在臨床試驗(yàn)中測(cè)試了抗bcmacar，該臨床試驗(yàn)在用0.3-3x106?car?t細(xì)胞/kg治療的患者組中產(chǎn)生了20％的客觀應(yīng)答率[2]。接受最高劑量car?t細(xì)胞(9x106細(xì)胞/kg)的患者組獲得了較高的總體應(yīng)答率(orr)(81％)[3,4]。最近的若干項(xiàng)試驗(yàn)證明了抗bcmacar方法在有希望的i/ii期研究中的潛力，在大量預(yù)治療的r/r多發(fā)性骨髓瘤患者中達(dá)到80％的orr，具有深度和持久的應(yīng)答[5-10]。基于nejm中出版的ii期試驗(yàn)的令人印象深刻的結(jié)果，fda和ema批準(zhǔn)idecabtagene?vicleucel(ide-cel或bb2121)用于治療r/r?mm患者。示出非常令人鼓舞的結(jié)果的附加的car?t細(xì)胞產(chǎn)物是ciltacabtageneautoleucel(cilta-cel)，其合并了兩個(gè)抗bcma單重鏈結(jié)構(gòu)域和4-1bb共刺激結(jié)構(gòu)域。使用這種構(gòu)建體的少數(shù)臨床試驗(yàn)證明orr大于80％而沒(méi)有細(xì)胞因子釋放綜合征或神經(jīng)毒性方面的過(guò)度毒性。

20、有理由推測(cè)，需要高劑量的car?t細(xì)胞來(lái)實(shí)現(xiàn)應(yīng)答[10]和防止復(fù)發(fā)可能與靶向部分的低親和力、較差的抗原表達(dá)、t細(xì)胞隨時(shí)間推移的持久性缺乏和/或car表達(dá)和穩(wěn)定性降低有關(guān)[11]。因此，car分子可能被調(diào)節(jié)以增強(qiáng)工程化t細(xì)胞功能。

21、car分子由兩個(gè)基本部分組成：細(xì)胞外結(jié)合結(jié)構(gòu)域和信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。結(jié)合結(jié)構(gòu)域通常由靶向設(shè)計(jì)抗原的單鏈片段可變(scfv)組成，而信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域通常由共刺激部分(cd28和/或4-1bb)組成，與cd3一起促進(jìn)t細(xì)胞活化。此外，共刺激的類型可極大地促進(jìn)cart細(xì)胞的持久性和代謝活性(諸如在基于4-1bb的car中所示)，而cd28促進(jìn)更有效但短暫的應(yīng)答[12]。鉸鏈結(jié)構(gòu)域和跨膜結(jié)構(gòu)域連接兩個(gè)car部分，提供了car分子的適當(dāng)連接和柔性，影響car-t細(xì)胞功能、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性和表達(dá)。car的特定鉸鏈結(jié)構(gòu)域的選擇通常根據(jù)靶配體與細(xì)胞膜的接近程度來(lái)選擇。

22、作為其功能的關(guān)鍵決定因素，car的組成和結(jié)構(gòu)通常根據(jù)經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)化。例如，zhang等人的研究表明，摻入cd8或cd28的跨膜結(jié)構(gòu)域而不是cd3的跨膜結(jié)構(gòu)域可導(dǎo)致更高的car表面表達(dá)。在另一項(xiàng)研究中，smith等人表明使用更長(zhǎng)的鉸鏈結(jié)構(gòu)域增加了car的效能和特異性。還示出了car設(shè)計(jì)的優(yōu)化和共刺激如何可減少活化誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡(aicd)，并隨時(shí)間推移導(dǎo)致car表達(dá)的改善。除了特異性，鉸鏈組成也可影響強(qiáng)直信號(hào)傳導(dǎo)和提高體內(nèi)活性；研究示出，基于igg的鉸鏈的修飾提高了體內(nèi)活性，并降低了由位于igg鉸鏈中的ch2ch3結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)的強(qiáng)直信號(hào)傳導(dǎo)效應(yīng)[13]。最近還表明，cd8α鉸鏈結(jié)構(gòu)域和tm結(jié)構(gòu)域的修飾導(dǎo)致car-t細(xì)胞中抗凋亡分子表達(dá)增加，并且細(xì)胞因子分泌減少，同時(shí)保留細(xì)胞毒性功能[14]。最近對(duì)基于抗cd19?car-t的臨床研究的回顧性分析，進(jìn)一步支持了car結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)組成(超出scfv和共刺激部分)影響臨床結(jié)果和相關(guān)毒性的觀點(diǎn)。例如，已經(jīng)表明，與基于cd8鉸鏈-tm的car相比，基于cd28鉸鏈-tm的car顯示出更高的臨床功效和嚴(yán)重的細(xì)胞毒性。

23、因此，本領(lǐng)域需要提供改進(jìn)的bcma-car-t分子，其根據(jù)經(jīng)驗(yàn)評(píng)估最佳配置，并表現(xiàn)出增加的特異性和高的體外和長(zhǎng)期體內(nèi)功效。本說(shuō)明書(shū)解決了這些需求。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本公開(kāi)的第一方面涉及嵌合抗原受體(car)分子，該car分子包含以下組分：(i)至少一個(gè)靶結(jié)合結(jié)構(gòu)域；其中所述靶結(jié)合結(jié)構(gòu)域中的至少一個(gè)靶結(jié)合結(jié)構(gòu)域特異性地識(shí)別并結(jié)合b細(xì)胞成熟抗原(bcma)；(ii)衍生自分化8α(cd8α)蛋白簇的至少一個(gè)鉸鏈結(jié)構(gòu)域和至少一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域(也稱為t細(xì)胞表面糖蛋白cd8α鏈)。應(yīng)當(dāng)注意的是，結(jié)構(gòu)域的鉸鏈區(qū)包含如seq?id?no:9所示的氨基酸序列，和其任何片段、衍生物和變體。該car分子還包含(iii)至少一個(gè)細(xì)胞內(nèi)t細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。更具體地，該結(jié)構(gòu)域包含腫瘤壞死因子(tnf)受體家族成員的至少一個(gè)結(jié)構(gòu)域，和任選地t細(xì)胞受體(tcr)分子的至少一個(gè)結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)的car?t分子包含如seq?id?no:1或其任何片段和衍生物中任一者所示的氨基酸序列，例如，car?t分子包含如seq?id?no:40所示的氨基酸序列。

2、本公開(kāi)的另一個(gè)方面涉及包含編碼至少一種car分子的至少一種核酸序列的核酸分子，或包含所述核酸分子的任何盒、載體或媒介物。在一些實(shí)施方案中，此類編碼的car分子包含以下組分。首先(i)，至少一個(gè)靶結(jié)合結(jié)構(gòu)域；其中所述靶結(jié)合結(jié)構(gòu)域中的至少一個(gè)靶結(jié)合結(jié)構(gòu)域特異性地識(shí)別并結(jié)合bcma；第二(ii)，衍生自cd8α蛋白的至少一個(gè)鉸鏈結(jié)構(gòu)域和至少一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。應(yīng)當(dāng)注意的是，結(jié)構(gòu)域的鉸鏈區(qū)包含如seq?id?no:9所示的氨基酸序列，和其任何片段、衍生物和變體。該car分子還包含作為第三組分(iii)的至少一個(gè)細(xì)胞內(nèi)t細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。更具體地，該結(jié)構(gòu)域包含tnf受體家族成員的至少一個(gè)結(jié)構(gòu)域，和任選地tcr分子的至少一個(gè)結(jié)構(gòu)域。

3、本公開(kāi)的另一個(gè)方面涉及基因編輯系統(tǒng)，該基因編輯系統(tǒng)包含：

4、首先(i)，根據(jù)本公開(kāi)所述的至少一種核酸分子，或包含該至少一種核酸分子的任何盒、載體或媒介物；和

5、第二(ii)，至少一種基因編輯組分或編碼該基因編輯組分的核酸序列。在一些具體實(shí)施方案中，由本公開(kāi)提供的基因編輯系統(tǒng)的至少一種核酸分子編碼至少一種car分子，該至少一種car分子包含以下組分：(i)，至少一個(gè)靶結(jié)合結(jié)構(gòu)域；其中所述靶結(jié)合結(jié)構(gòu)域中的至少一個(gè)靶結(jié)合結(jié)構(gòu)域特異性地識(shí)別并結(jié)合bcma；(ii)，衍生自cd8α蛋白的至少一個(gè)鉸鏈結(jié)構(gòu)域和至少一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。應(yīng)當(dāng)注意的是，結(jié)構(gòu)域的鉸鏈區(qū)包含如seq?id?no:9所示的氨基酸序列，和其任何片段、衍生物和變體；和(iii)至少一個(gè)細(xì)胞內(nèi)t細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。更具體地，該結(jié)構(gòu)域包含tnf受體家族成員的至少一個(gè)結(jié)構(gòu)域，和任選地tcr分子的至少一個(gè)結(jié)構(gòu)域。

6、本公開(kāi)的另一個(gè)方面涉及表達(dá)至少一種car分子的t細(xì)胞譜系的基因工程化細(xì)胞，或包含本文所公開(kāi)的該經(jīng)基因修飾的細(xì)胞的任何細(xì)胞群體。更具體地，在一些實(shí)施方案中，由工程化細(xì)胞表達(dá)的car包含以下組分：首先(i)，至少一個(gè)靶結(jié)合結(jié)構(gòu)域；其中所述靶結(jié)合結(jié)構(gòu)域中的至少一個(gè)靶結(jié)合結(jié)構(gòu)域特異性地識(shí)別并結(jié)合bcma；第二(ii)，衍生自cd8α蛋白的至少一個(gè)鉸鏈結(jié)構(gòu)域和至少一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。應(yīng)當(dāng)注意的是，結(jié)構(gòu)域的鉸鏈區(qū)包含如seqid?no:9所示的氨基酸序列，和其任何片段、衍生物和變體。該car分子還包含作為第三組分(iii)的至少一個(gè)細(xì)胞內(nèi)t細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。更具體地，該結(jié)構(gòu)域包含tnf受體家族成員的至少一個(gè)結(jié)構(gòu)域，和任選地tcr分子的至少一個(gè)結(jié)構(gòu)域。

7、本公開(kāi)的另一個(gè)方面涉及一種組合物，該組合物包含至少一種car分子、包含編碼所述car分子的至少一種核酸序列的任何核酸分子、或包含該核酸分子的任何盒、載體、媒介物或基因編輯系統(tǒng)、表達(dá)所述car分子的任何宿主細(xì)胞、和/或表達(dá)所述car的t譜系的任何基因工程化細(xì)胞或包含該t譜系的至少一種所述基因工程化細(xì)胞的細(xì)胞群體。更具體地，此類car分子包含以下組分。首先(i)，至少一個(gè)靶結(jié)合結(jié)構(gòu)域；其中所述靶結(jié)合結(jié)構(gòu)域中的至少一個(gè)靶結(jié)合結(jié)構(gòu)域特異性地識(shí)別并結(jié)合bcma；第二(ii)，衍生自cd8α蛋白的至少一個(gè)鉸鏈結(jié)構(gòu)域和至少一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。應(yīng)當(dāng)注意的是，結(jié)構(gòu)域的鉸鏈區(qū)包含如seq?id?no:9所示的氨基酸序列，和其任何片段、衍生物和變體。該car分子還包含作為第三組分(iii)的至少一個(gè)細(xì)胞內(nèi)t細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。更具體地，該結(jié)構(gòu)域包含tnf受體家族成員的至少一個(gè)結(jié)構(gòu)域，和任選地tcr分子的至少一個(gè)結(jié)構(gòu)域。

8、應(yīng)該注意的是，根據(jù)任選的實(shí)施方案，本公開(kāi)的組合物還包含藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、賦形劑和添加劑中的至少一者。

9、本公開(kāi)的另一個(gè)方面涉及用于治療、預(yù)防、改善、抑制或延遲哺乳動(dòng)物受試者中免疫相關(guān)病癥的發(fā)作的方法。在一些實(shí)施方案中，該方法包括向該受試者施用有效量的以下項(xiàng)中的至少一者的步驟：

10、(a)編碼至少一種car分子的至少一種核酸分子；(b)包含(a)的該核酸分子的至少一個(gè)盒、載體媒介物或基因編輯系統(tǒng)；(c)表達(dá)該car的至少一個(gè)細(xì)胞(具體地，t譜系的細(xì)胞)，或此類細(xì)胞群體；和(d)包含(a)、(b)和(c)中的至少一者的組合物。更具體地，在所公開(kāi)的方法的一些實(shí)施方案中，此類car分子包含以下組分。首先(i)，至少一個(gè)靶結(jié)合結(jié)構(gòu)域；其中該靶結(jié)合結(jié)構(gòu)域中的至少一個(gè)靶結(jié)合結(jié)構(gòu)域特異性地識(shí)別并結(jié)合bcma；第二(ii)，衍生自cd8α蛋白的至少一個(gè)鉸鏈結(jié)構(gòu)域和至少一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。應(yīng)當(dāng)注意的是，結(jié)構(gòu)域的鉸鏈區(qū)包含如seq?id?no:9所示的氨基酸序列，和其任何片段、衍生物和變體。該car分子還包含作為第三組分(iii)的至少一個(gè)細(xì)胞內(nèi)t細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。更具體地，該結(jié)構(gòu)域包含tnf受體家族成員的至少一個(gè)結(jié)構(gòu)域，和任選地tcr分子的至少一個(gè)結(jié)構(gòu)域。

11、本公開(kāi)的另一個(gè)方面涉及有效量的以下項(xiàng)中的至少一者：

12、(a)編碼至少一種car分子的至少一種核酸分子；(b)包含(a)的所述核酸分子的至少一個(gè)盒、載體媒介物或基因編輯系統(tǒng)；(c)表達(dá)該car分子的至少一個(gè)細(xì)胞，具體地，t譜系的細(xì)胞，或這些細(xì)胞群體；和(d)包含(a)、(b)和(c)中的至少一者的組合物；用于在治療、預(yù)防、改善、抑制或延遲哺乳動(dòng)物受試者中免疫相關(guān)病癥的發(fā)作的方法中使用。在所討論的用途的一些實(shí)施方案中，此類car分子包含以下組分。首先(i)，至少一個(gè)靶結(jié)合結(jié)構(gòu)域；其中所述靶結(jié)合結(jié)構(gòu)域中的至少一個(gè)靶結(jié)合結(jié)構(gòu)域特異性地識(shí)別并結(jié)合bcma；第二(ii)，衍生自cd8α蛋白的至少一個(gè)鉸鏈結(jié)構(gòu)域和至少一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。應(yīng)當(dāng)注意的是，結(jié)構(gòu)域的鉸鏈區(qū)包含如seq?id?no:9所示的氨基酸序列，和其任何片段、衍生物和變體。該car分子還包含作為第三組分(iii)的至少一個(gè)細(xì)胞內(nèi)t細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。更具體地，該結(jié)構(gòu)域包含tnf受體家族成員的至少一個(gè)結(jié)構(gòu)域，和任選地tcr分子的至少一個(gè)結(jié)構(gòu)域。

13、在又一些另一個(gè)方面，本公開(kāi)提供了一種針對(duì)表達(dá)bcma蛋白的靶細(xì)胞和/或包含該靶細(xì)胞的組織靶向活化t譜系的細(xì)胞的方法。更具體地，該方法包括將該t譜系的該細(xì)胞與有效量的以下項(xiàng)中的至少一者接觸的步驟：

14、(a)編碼至少一種car分子的至少一種核酸分子；(b)包含(a)的所述核酸分子的至少一個(gè)盒、載體媒介物或基因編輯系統(tǒng)；和(c)包含(a)和(b)中的至少一者的組合物；更具體地，此類car分子包含以下組分。首先(i)，至少一個(gè)靶結(jié)合結(jié)構(gòu)域；其中所述靶結(jié)合結(jié)構(gòu)域中的至少一個(gè)靶結(jié)合結(jié)構(gòu)域特異性地識(shí)別并結(jié)合bcma；第二(ii)，衍生自cd8α蛋白的至少一個(gè)鉸鏈結(jié)構(gòu)域和至少一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。應(yīng)當(dāng)注意的是，結(jié)構(gòu)域的鉸鏈區(qū)包含如seq?idno:9所示的氨基酸序列，和其任何片段、衍生物和變體。該car分子還包含作為第三組分(iii)的至少一個(gè)細(xì)胞內(nèi)t細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。更具體地，該結(jié)構(gòu)域包含tnf受體家族成員的至少一個(gè)結(jié)構(gòu)域，和任選地tcr分子的至少一個(gè)結(jié)構(gòu)域。

15、借助以下描述，本公開(kāi)的這些方面和其他方面將變得顯而易見(jiàn)。