本發(fā)明涉及用于預(yù)防和/或治療腎盂腎炎和/或尿膿毒癥的方法和組合物。

背景技術(shù)：

1、尿路感染(uti)很常見并且可能是危險(xiǎn)的。臨床表現(xiàn)和嚴(yán)重程度取決于感染部位和疾病的分子基礎(chǔ)。在急性腎盂腎炎(apn)中，細(xì)菌會(huì)進(jìn)入腎盂，在那里引起強(qiáng)烈的粘膜炎癥反應(yīng)并進(jìn)展到腎實(shí)質(zhì)。嬰兒的癥狀包括高燒、不適、腰痛以及喂養(yǎng)不良和煩躁。apn可導(dǎo)致尿膿毒癥。

2、在急性腎盂腎炎中，由p型菌毛大腸桿菌通過神經(jīng)酰胺釋放和ticam-1(trif)和ticam-2(tram)接合體的連續(xù)磷酸化激活病原體特異性tlr4反應(yīng)，creb-1、c-fos和c-jun激活irf和api依賴性轉(zhuǎn)錄。myd88、tirap和nf-kb的額外參與取決于感染菌株的毒力庫。鼠類uti模型的基因研究已發(fā)現(xiàn)irf3依賴性基因表達(dá)和mcxcr2依賴性中性粒細(xì)胞活化是細(xì)菌清除和組織穩(wěn)態(tài)的決定因素。感染的irf3-/-或mcxcrl-/-小鼠在一周后會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的apn和組織損傷，并且已通過apn易感患者中與疾病相關(guān)的irf3和cxcr1多態(tài)性證明了其與人類apn易感性的相關(guān)性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明人現(xiàn)已出乎意料地發(fā)現(xiàn)了可用于治療或預(yù)防腎盂腎炎(包括apn)并因此預(yù)防由此引起的尿膿毒癥的藥劑。這些藥劑包括il-1受體的抑制劑，特別是il-1β和nlpd蛋白的抑制劑。不受理論約束，基于對(duì)il-1β加工的理解，發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)mmp7抑制劑和調(diào)節(jié)mmp7表達(dá)的藥劑也可用于本發(fā)明。尤其令人驚訝的是，這些以抗炎活性而已知的藥劑可用于治療感染。

2、本發(fā)明提供了一種用于預(yù)防或治療腎盂腎炎和/或尿膿毒癥的方法，包括向有此需要的患者施用有效量的選自由il-1抑制劑、mmp抑制劑和nlpd蛋白組成的組的藥劑。

3、本發(fā)明還提供了用于治療或預(yù)防腎盂腎炎和/或尿膿毒癥的藥劑，所述藥劑選自由il-1抑制劑、mmp抑制劑和nlpd蛋白組成的組。

4、在某些實(shí)施方式中，該方法或藥劑用于治療或預(yù)防腎盂腎炎，優(yōu)選治療腎盂腎炎。在某些實(shí)施方式中，腎盂腎炎是急性腎盂腎炎。在某些實(shí)施方式中，腎盂腎炎是慢性或長期的。在某些實(shí)施方式中，該方法或藥劑用于治療或預(yù)防、優(yōu)選預(yù)防尿膿毒癥，特別是由腎盂腎炎引起的尿膿毒癥。

5、在某些實(shí)施方式中，該藥劑可以以包含藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物的形式提供。

6、具體地，該藥劑是il-1抑制劑。在某些實(shí)施方式中，該藥劑是il-1β抑制劑。在某些實(shí)施方式中，該藥劑是il-1受體拮抗劑抑制劑。本領(lǐng)域已知許多il-1抑制劑。il-1抑制劑包括例如，小分子如蒽醌類，例如在usp?4,244,968中描述，包括雙醋瑞因；以及蛋白質(zhì)和肽如白介素-1受體拮抗劑(il-1ra)，例如阿那白滯素和利納西普；或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其前藥，以及這些的組合。具體地，該藥劑是il-1β受體拮抗劑，例如阿那白滯素(美國專利第5,075,222號(hào))。

7、可替代地，該藥劑是mmp抑制劑，特別地是mmp7抑制劑。如durrant等人.chem.biol.drug?des?20111；78；191-198(其全部內(nèi)容通過引用并入本文)所述，已知多種mmp抑制劑。具體示例包括巴馬司他、強(qiáng)力霉素(鹽酸多西環(huán)素)、馬立馬司他、或其鹽或前藥，但特別地是巴馬司他。該藥劑還可以是降低mmp、特別是mmp-7表達(dá)的藥劑，例如選自asc或nlrp-3的蛋白質(zhì)或其活性片段或變體。

8、在某些實(shí)施方式中，nlpd蛋白是細(xì)菌蛋白，優(yōu)選來自共生細(xì)菌或無癥狀攜帶者。在某些實(shí)施方式中，該細(xì)菌是針對(duì)人類宿主的共生細(xì)菌或來自無癥狀攜帶者。該細(xì)菌可以來自無癥狀菌尿(abu)。在某些實(shí)施方式中，細(xì)菌菌株是大腸桿菌菌株，例如大腸桿菌83972。

9、在某些實(shí)施方式中，nlpd蛋白可以包含seq?id?no:1或其變體或活性片段或由seqid?no:1或其變體或活性片段組成。

10、msagspkftv?rriaalslvs?lwlagcsdts?nppapvssvn?gnapantnsg?mlitpppkmgttstaqqpqiqpvqqpqiqa?tqqpqiqpmq?pvaqqpvqme?ngrivynrqy?gnipkgsysg?stytvkkgdtlfyiawitgn?dfrdlaqrnniqapyalnvg?qtlqvgnasg?tpitggnait?qadaaeqgvvikpaqnstvavasqptitys?essgeqsank?mlpnnkptat?tvtapvtvpt?asttepivsstststpistwrwptegkvie?tfgaseggnk?gidiagskgq?aiiatadgrvvyagnalrgy?gnliiikhnd?dylsayahndtmlvreqqev?kagqkiatmgstgtsstrlh?feirykgksv?nplrylpqr(seq?id?no:1)

11、seq?id?no:1的一個(gè)特定片段以粗體表示(即seq?id?no:2)。

12、在某些實(shí)施方式中，nlpd蛋白或其變體或活性片段具有低分子量，例如分子量小于3kda。在其他實(shí)施方式中，蛋白質(zhì)可以更大，例如為約40kda。

13、如本文所使用的，表述“片段”是指缺少全長蛋白質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的一個(gè)或多個(gè)氨基酸但仍具有全長蛋白質(zhì)功能的肽或蛋白質(zhì)。

14、表述“變體”是指具有相似的生物學(xué)功能但氨基酸序列與其所衍生自的堿基序列不同的蛋白質(zhì)或多肽，不同之處在于序列中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸被其他氨基酸替換。當(dāng)氨基酸被具有大致相似特性的不同氨基酸所取代時(shí)，氨基酸替換可視為“保守的”。非保守替換是指氨基酸被不同類型的氨基酸取代。

15、“保守替換”是指一種氨基酸被同類別的另一種氨基酸替換，其中類別定義如下：

16、

17、本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知，通過保守替換來改變多肽的一級(jí)結(jié)構(gòu)可能不會(huì)顯著改變?cè)摱嚯牡幕钚?，因?yàn)椴迦胄蛄兄械陌被醾?cè)鏈可能能夠形成與被替換的氨基酸側(cè)鏈相似的鍵和接觸。即使替換位于對(duì)于確定肽構(gòu)象的關(guān)鍵區(qū)域，也是如此。

18、只要不破壞活性，非保守替換也是可能的。廣義上講，在不改變多肽的生物活性的情況下，可以進(jìn)行少量的非保守替換。

19、確定任何替換(以及實(shí)際上任何氨基酸缺失或插入)的效果完全在本領(lǐng)域技術(shù)人員的常規(guī)能力范圍內(nèi)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地確定變體多肽是否保留了基礎(chǔ)多肽的基本特性和活性。例如，在確定多肽的變體是否屬于本發(fā)明的范圍時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員將確定該變體是否保留了天然蛋白質(zhì)的生物活性，以及該變體是否具有天然蛋白質(zhì)的至少60％、優(yōu)選至少70％、更優(yōu)選至少80％、更加優(yōu)選90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的活性。

20、多肽的變體可以包含以下或基本上由以下組成：與天然多肽序列具有至少70％同一性，例如至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。序列同一性的水平可以使用blastp計(jì)算機(jī)程序以天然多肽序列作為基礎(chǔ)序列來適當(dāng)?shù)卮_定。這意味著天然多肽序列形成確定百分比同一性的序列。blast軟件可在http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/blast.cgi公開獲取(2016年10月13日開放)。

21、nlpd蛋白可以從細(xì)菌中分離。當(dāng)nlpd蛋白為變體或活性片段時(shí)，可以通過重組表達(dá)獲得。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)通過重組表達(dá)獲得時(shí)，蛋白質(zhì)序列可包含用于純化的序列，例如n-末端或c-末端his標(biāo)簽。使用純化標(biāo)簽是本領(lǐng)域眾所周知的。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，nlpd蛋白或其變體或活性片段是合成的。通常，nlpd蛋白或其變體或活性片段是分離的或合成的。

22、對(duì)于向患者施用，該藥劑以藥物組合物的形式適當(dāng)?shù)厥┯茫撍幬锝M合物還包含藥學(xué)上可接受的載體。這種組合物是本領(lǐng)域已知的。

23、合適的藥物組合物可以是固體或液體形式。藥物組合物可適于通過任何方便的途徑施用，例如腸胃外、口服或局部施用，或者通過吸入或吹入施用。藥學(xué)上可接受的載體可包括生理上可耐受且與活性成分相容的稀釋劑或賦形劑。

24、制備腸胃外組合物用于注射，例如皮下注射或靜脈內(nèi)注射。腸胃外組合物可以是液體溶液或懸浮液，或者可以是適合在注射前溶解或懸浮在液體中的固體形式。合適的稀釋劑和賦形劑為例如水、鹽水、右旋糖、甘油等及其組合。此外，如果需要，組合物可包含少量輔助物質(zhì)，例如潤濕劑或乳化劑、穩(wěn)定劑或ph緩沖劑等。

25、口服制劑將為固體或液體形式，并且可以是溶液劑、糖漿、混懸劑、片劑、丸劑、膠囊劑、緩釋制劑或粉劑?？诜苿┌ㄍǔＪ褂玫馁x形劑，例如藥用級(jí)甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。

26、局部制劑通常采用栓劑或鼻內(nèi)氣霧劑的形式。對(duì)于栓劑，傳統(tǒng)的粘結(jié)劑和賦形劑可以包括例如聚亞烷基二醇或甘油三酯；這種栓劑可由含有活性成分的混合物形成。

27、根據(jù)正常臨床實(shí)踐，所施用藥劑的量將根據(jù)所用藥劑的性質(zhì)、患者的體型和健康狀況、所治療病癥的性質(zhì)等因素而改變。通常，預(yù)期在^g-50mg/kg范圍內(nèi)、例如2mg/kg至20mg/kg、例如5mg/kg至15mg/kg的劑量將產(chǎn)生合適的效果。

28、在本說明書的整個(gè)描述和權(quán)利要求書中，詞語“包括(comprise)”和“含有(contain)”以及這些詞語的變體，例如“包含(comprising)”和“包含(comprises)”，意思是“包括但不限于”，并且不排除其他組分、整數(shù)或步驟。此外，除非上下文另有要求，否則單數(shù)包含復(fù)數(shù)，特別地，在使用不定冠詞時(shí)，除非上下文另有要求，否則本說明書應(yīng)理解為考慮復(fù)數(shù)和單數(shù)。

29、本發(fā)明各個(gè)方面的優(yōu)選特征可以與任意其他方面相結(jié)合進(jìn)行描述。在本技術(shù)的范圍內(nèi)，明確意指前述段落、權(quán)利要求書和/或以下描述及附圖中呈現(xiàn)的各方面、實(shí)施方式、實(shí)施例和替代方案，特別是其單一特征，可以獨(dú)立使用或任意組合。也就是說，所有實(shí)施方式和/或任意實(shí)施方式的特征可以以任何方式進(jìn)行組合和/或組合，除非這些特征不相容。