本發(fā)明涉及皮膚保養(yǎng)品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抗凍護(hù)手霜及其制備方法。
背景技術(shù)：
冬季氣候寒冷而干燥，隨著西北風(fēng)吹過，人們的手足由濕潤轉(zhuǎn)為粗糙，這是由于在寒冷的天氣，血液循環(huán)差，皮膚彈性降低，容易引起手裂。如果不加以保護(hù)，極易出現(xiàn)裂口，嚴(yán)重者還會引起疼痛、出血，醫(yī)學(xué)上稱之“皸裂癥”。此外，經(jīng)常做家務(wù)的人手會接觸洗潔精、皂液等堿性物質(zhì)，手部肌膚容易受到腐蝕而變得粗糙,這是由于手皮膚表面的油膜損壞，皮膚干燥，失去彈性所產(chǎn)生的皮膚組織斷裂。再者，老年人新陳代謝緩慢，死亡的細(xì)胞多，新生的細(xì)胞少，皮膚彈性差，易發(fā)生手裂。
合適的護(hù)手霜是對手部保養(yǎng)的一種有效的方法，但如今護(hù)手霜的種類繁多，不同工作環(huán)境對手部皮膚造成的傷害也不同。護(hù)手霜根據(jù)其不同成分可分為防護(hù)型、保濕型及活膚型等多種類型，選用時要根據(jù)不同的需要進(jìn)行保養(yǎng)。目前，針對上述情況的護(hù)手霜一般都含有果酸及維生素a和e等修復(fù)性元素,其中的果酸等成分對堿性物質(zhì)有極強(qiáng)的綜合修復(fù)作用，但果酸等原料具有脫色或脫皮作用等安全隱患，抗衰老常用的va同樣存在遇光、熱分解的隱患。而選擇護(hù)手霜不僅要根據(jù)使用者所從事的工作的不同，還要根據(jù)季節(jié)的變換，只有這樣才能抵御因惡劣氣候因素給手部留下的痕跡。
專利公開號為cn104800142a的發(fā)明公開了一種護(hù)手霜及其制備工藝，成分包括天然中草藥提取物：黃芪、艾葉、薰衣草、甘草、鐘乳石、當(dāng)歸、蘆薈、白及、蜂蜜、牛奶、益母草、菊花和川彎。此類發(fā)明制得的護(hù)手霜能起到滋潤肌膚、保養(yǎng)肌膚、延緩衰老、消除硬角質(zhì)層等功效，但其抗凍防護(hù)的效果不明顯，在秋冬季使用效果不理想。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
有鑒于此，有必要針對上述的問題，提供一種抗凍效果更好的護(hù)手霜。
本發(fā)明提供一種抗凍護(hù)手霜，所述抗凍護(hù)手霜的原料包括以下重量份的組分：梅花提取物10-20份、尿囊素10-15份、干細(xì)胞分泌因子0.01-0.5份、乳化劑30-40份、角鯊?fù)?0-20份、水15-25份。
優(yōu)選的，所述梅花提取物的主要成分包括羅勒烯、芳樟醇、乙酸芐酯、水楊酸甲酯、側(cè)伯烯、檸檬烯以及苯甲醇。
優(yōu)選的，所述梅花提取物的制備方法包括：取水分質(zhì)量＜10％的梅花花瓣，加入乙醇水溶液浸泡，回流提取，過濾，得到第一濾液；在第一濾液中加入殼聚糖水溶液，絮凝，過濾，得到第二過濾液；將第二過濾液減壓濃縮得到濃溶液；將濃溶液過柱，收集過柱液，得到所述梅花提取物。
優(yōu)選的，所述尿囊素從甜菜中提取得到。
優(yōu)選的，所述干細(xì)胞分泌因子為臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分泌因子。
優(yōu)選的，所述乳化劑選自單硬脂酸甘油酯、棕櫚酸異丙酯、甘油酯、乳化蠟、卵磷脂、羊毛脂或蔗糖酯中的至少一種。
本發(fā)明還提供一種上述抗凍護(hù)手霜的制備方法，所述制備方法包括：將所述梅花提取物、所述尿囊素、所述干細(xì)胞分泌因子以及水按重量份混合溶解，加入所述乳化劑和所述角鯊?fù)?，加熱攪拌，降至室溫后，通過超微化得到所述抗凍護(hù)手霜。
優(yōu)選的，所述加熱攪拌的溫度為80-90℃，加熱攪拌的速率為3000-5000轉(zhuǎn)/min。
優(yōu)選的，所述超微化通過動態(tài)高壓微射流超微化技術(shù)實現(xiàn)，所述動態(tài)高壓微射流超微化技術(shù)包括剪碎、破碎和均質(zhì)，所述動態(tài)高壓微射流超微化技術(shù)的工作壓力為140-180mpa，工作溫度為20-30℃。
本發(fā)明提供的抗凍護(hù)手霜克服了傳統(tǒng)護(hù)手霜中大量添加刺激性化學(xué)品以及致癌或者有毒化學(xué)品的缺陷，采用純天然化妝品成分，能夠有效的保護(hù)手部，采用生物抗凍成分，對手部進(jìn)行了全面護(hù)理；所用的原料中含有梅花提取物，來源主要是天然植物提取物，具有清淡的芬芳香味，使人們的心情放松，使用舒適。本發(fā)明提供的抗凍護(hù)手霜中還含有干細(xì)胞分泌的各種活性因子，具有提高成纖維細(xì)胞的增殖能力，促進(jìn)皮膚的成纖維細(xì)胞合成膠原蛋白的能力，修復(fù)細(xì)胞、改善細(xì)胞代謝、激活衰老細(xì)胞。通過同時采用來自于天然植物提取物和來自于與人同源的干細(xì)胞分泌因子，兩者互為促進(jìn)吸收與修復(fù)皮膚組織和細(xì)胞，不但使得適用人群的范圍擴(kuò)大，而且能夠起到滿足特殊人群的需要(如抗凍抗皺)。具體制備方法中，采取了對含有效成分的純天然植物進(jìn)行了活性組分提取方法，因此能夠提高植物的利用率，整個提取過程中無添加任何有毒化學(xué)溶劑，并對形成的護(hù)手霜進(jìn)行了超微化，使得手部可以更好地吸收，制備方法簡單安全可靠，產(chǎn)品無任何毒副作用，有良好的抗凍防裂效果，適合秋冬季節(jié)使用。
具體實施方式
為了便于本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，下面將結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述。
本發(fā)明提供一種抗凍護(hù)手霜，所述抗凍護(hù)手霜的原料包括以下重量份的組分：梅花提取物10-20份、尿囊素10-15份、干細(xì)胞分泌因子0.01-0.5份、乳化劑30-40份、角鯊?fù)?0-20份、水15-25份。其中，水為純進(jìn)水或去離子水。通過這些重量份比例的各原料得到的抗凍護(hù)手霜涂抹在手上更容易吸收和滲透，不會有油膩厚重的感覺。
梅花是自然界為數(shù)不多可以抵御寒冬的神奇物種，科學(xué)研究證明，梅花內(nèi)含有豐富的人體所需的氨基酸、維生素、常量和微量元素以及多種類脂、核酸、生長素、酶類和抗菌素等生物活性成分，近期研究得知梅花中還含有增強(qiáng)人體體質(zhì)和保障人類健康至關(guān)重要的高效生物活性物質(zhì)。梅花還有獨特的藥理功能，如清熱解毒、理氣養(yǎng)血之功，還有清單健脾、提神抗癌之效，使用含有梅花提取物的產(chǎn)品還可增強(qiáng)免疫、祛病益壽、養(yǎng)顏美容。
具體實施方式中，梅花提取物包括黃酮(flavone)、多糖(polysaccharide)、皂甙(saponins)、苯甲醛(benzaldehyde)、異丁香酚(isoeugenol)、乙酸(aceticacid)、1，1-二乙氧基乙烷(1，1diethoxyethane)、異戊醇(isoamylalcohol)、1，3-二氧戊環(huán)(1，3-dioxolang)、雙丙酮醇(diacetonealcohol)、3-丁烯-2-酮(3-butene-2-one)、葉醇(3-hexen-1-ol)、側(cè)柏烯(2-thujene)、月桂烯(myrcene)、對聚傘花素(pcymene)、檸檬烯(limonene)、6-甲基-1-辛醇(6-methyl-1-octanol)、苯甲醇(benzylalcohol)、羅勒烯(α-ocimene)、芳樟醇(linalool)，氧化芳樟醇(linalooloxide)、松樟酮(pinocamphone)、乙酸芐酯(benzylacetate)、萘(naphthalene)、水楊酸甲酯(methylsalicylate)、吲哚(1h-indole)、β-丁香烯(β-caryophyllene)、(王古)(王巴)烯(α-copaene)、2，6-二叔丁基對甲苯酚(2，6-di-tertbutyl-4-methylphenol)、香檜酮(sabinadetone)、苯甲酸(benzoicacid)、癸酸(decanoicacid)、鄰苯二甲酸叔丁酯(diphenatetertbutylester)、十二酸(dodecanoicacid)、4-癸酮(4-decanone)、1，3，5-三丁基六氫-1，3，5-三氮雜苯(1，3，5-tributylhexahydro-1，3，5-triazine)等成分。其中含量最多的是羅勒烯，其次是芳樟醇、乙酸芐酯、水楊酸甲酯、側(cè)伯烯、檸檬烯及苯甲醇。另外還含有紅豆杉氰甙(taxiphyllin)，蠟梅甙(meratin)，α-胡蘿卜素(α-carotene)，蠟梅堿(calycanthine)等。
梅花提取物的制備方法包括：取水分質(zhì)量＜10％的梅花花瓣，加入乙醇水溶液浸泡，回流提取，過濾，得到第一濾液；在第一濾液中加入殼聚糖水溶液，絮凝，過濾，得到第二過濾液；將第二過濾液減壓濃縮得到濃溶液；將濃溶液過柱，收集過柱液，得到所述梅花提取物。
具體實施方式中，梅花提取物的制備方法包括：
(1)取干的梅花花瓣作為原料，其水分質(zhì)量含量<10％，取干的梅花花瓣10-50份，加入1-1.5倍10-30％的乙醇水溶液浸泡1.5-3h；
(2)回流提取2-4h，過濾，取濾液；
(3)加入濾液量1-5％的1％殼聚糖水溶液，絮凝10-60min，過濾，取濾液；
(4)以75℃-80℃減壓濃縮成0.5-1生藥/ml的濃溶液；
(5)過樹脂柱(直徑1.5厘米的層析柱)，上樣速度為l-1.5ml/min，收集過柱液，即得梅花提取物。
更具體的，梅花提取物的制備方法包括：
(1)取干的梅花花瓣作為原料，其水分質(zhì)量含量<10％，取干的梅花花瓣30份，加入1倍20％的乙醇水溶液浸泡2h；
(2)回流提取3h，過濾，取濾液；
(3)加入濾液量3.5％的1％殼聚糖水溶液，絮凝35min，過濾，取濾液；
(4)以78℃減壓濃縮成0.5生藥/ml的濃溶液；
(5)過樹脂柱(直徑1.5厘米的層析柱)，上樣速度為lml/min，收集過柱液，即得梅花提取物。
具體實施方式中，尿囊素從甜菜中提取得到。選取甜菜作為尿囊素的提取源，對尿囊素進(jìn)行提取，具體包括：采用亞臨界水提取工藝對甜菜的尿囊素活性組分進(jìn)行提取得到尿囊素提取液，將尿囊素提取液采用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器旋轉(zhuǎn)蒸干得尿囊素粘稠狀液體，其中，亞臨界醇提取工藝的提取溫度為135℃-145℃，提取時間為45-50min，液料比為(13:1)-(15:1)。更優(yōu)選的，亞臨界醇提取工藝的提取溫度為135℃，提取時間為45min，液料比為13:1。
干細(xì)胞抗衰老基于其兩種基本功能，一是干細(xì)胞的增殖分化能力，可以分化成不同的體細(xì)胞以代替衰老死亡的機(jī)體細(xì)胞，二是干細(xì)胞的分泌功能，可以產(chǎn)生許多生物活性分子，間充質(zhì)干細(xì)胞一個強(qiáng)大的功能就是分泌眾多的營養(yǎng)性細(xì)胞因子。大量科學(xué)研究表明，間充質(zhì)干細(xì)胞至少分泌免疫調(diào)節(jié)因子(hgf、lif)、趨化因子(rantes、sdf-lα、fractalkine、mip-lα、mcp-1、mcp-2)、支持祖細(xì)胞的營養(yǎng)因子(il-6、fgf-2、pdgf-aa、pdgf-bb、egf)、血管再生因子(vegf165、fgf-2、pdgf-aa、pdgf-bb、egf)、抑制疤痕因子(hgf、fgf-2)、抗凋亡因子(vegf165、fgf-2、hgf)、傷口愈合相關(guān)因子(il-6、il-8、tgf-βl、mcp-1、vegf、gm-csf)、timp-1)、各型膠原蛋白(i、ii、iii、iv型膠原蛋白)以及各種溶菌酶等。
具體實施方式中，由于目前骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的獲得存在一些困難且來源不穩(wěn)定，細(xì)胞增殖沒有臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞速度快；羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞雖然獲得容易，但細(xì)胞體積大，增殖速度慢，獲得干細(xì)胞分泌因子的成本高；脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞大多數(shù)供者自身都存在炎癥問題，干細(xì)胞分泌因子中炎性因子也較多，不利于用于護(hù)膚品。本發(fā)明的抗凍護(hù)手霜中，干細(xì)胞分泌因子優(yōu)選采用臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分泌因子。
具體的，干細(xì)胞分泌因子凍干粉制備過程如下：
(1)收集健康人體臍帶，對臍帶作進(jìn)一步清洗，再用無菌手術(shù)剪將臍帶去除外膜、靜脈和動脈后切割分為細(xì)小組織。
(2)剪碎后的細(xì)小組織通過加入適當(dāng)濃度的胰酶、膠原酶等消化臍帶組織塊0.5小時。以消化出單核細(xì)胞，收集消化出的細(xì)胞用無血清培養(yǎng)基進(jìn)行貼壁培養(yǎng)，獲得臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。
(3)間充質(zhì)干細(xì)胞的擴(kuò)增培養(yǎng),用干細(xì)胞培養(yǎng)基通過常規(guī)干細(xì)胞培養(yǎng)的方式進(jìn)行間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長狀況進(jìn)行換液，補(bǔ)液。
(4)觀察細(xì)胞生長情況，取細(xì)胞檢測細(xì)胞表面陽性標(biāo)志cd90、cd105和細(xì)胞表面陰性表面標(biāo)志cd45、cd34的表達(dá)情況。高表達(dá)上述檢測物質(zhì)時，取50ml干細(xì)胞培養(yǎng)基，分裝于培養(yǎng)皿中，液面厚度不高于3mm，蓋上保鮮膜，放于-86℃冰箱中冷凍24h。
(5)取出冷凍后的培養(yǎng)皿，用細(xì)針在保鮮膜上戳出若干小孔，放置于凍干機(jī)中，冷凍干燥。
(6)凍干成粉末狀分裝備用。
具體的，本發(fā)明采用第3代到第5代的細(xì)胞用于制備干細(xì)胞分泌因子，用于制備干細(xì)胞分泌因子的培養(yǎng)基為不含酚紅的rpmi-1640，用于制備干細(xì)胞分泌因子的培養(yǎng)上清只收集細(xì)胞接種后第72-96h時間區(qū)間的培養(yǎng)上清。
具體實施方式中，所述乳化劑選自單硬脂酸甘油酯、棕櫚酸異丙酯、甘油酯、乳化蠟、卵磷脂、羊毛脂或蔗糖酯中的至少一種。
具體實施方式中，本發(fā)明所用的原料中角鯊?fù)槭菑纳詈ｕ忯~肝臟中提取的角鯊烯經(jīng)氫化制得一種性能優(yōu)異的烴類油脂，故又名深海鯊魚肝油。角鯊?fù)槭且环N化學(xué)穩(wěn)定性高，使用感極佳的動物油脂，對皮膚有較好的親和性，不會引起過敏和刺激，并能加速配方中其他活性成分向皮膚中滲透；具有較低的極性和中等的鋪展性，且純凈、無色、無異味；還可抑制霉菌的生長。具有高度的滋潤性和保濕性；其抗氧化性和熱穩(wěn)定性優(yōu)異；在寬廣的ph范圍內(nèi)有很好的穩(wěn)定性；與礦物油和大多數(shù)護(hù)理用品的原料有很好的相容性。
本發(fā)明提供的抗凍護(hù)手霜克服了傳統(tǒng)護(hù)手霜中大量添加刺激性化學(xué)品以及致癌或者有毒化學(xué)品的缺陷，采用純天然化妝品成分，能夠有效的保護(hù)手部，采用生物抗凍成分，對手部進(jìn)行了全面護(hù)理；所用的原料中含有梅花提取物，來源主要是天然植物提取物，具有清淡的芬芳香味，使人們的心情放松，使用舒適。本發(fā)明提供的抗凍護(hù)手霜中還含有干細(xì)胞分泌的各種活性因子，具有提高成纖維細(xì)胞的增殖能力，促進(jìn)皮膚的成纖維細(xì)胞合成膠原蛋白的能力，修復(fù)細(xì)胞、改善細(xì)胞代謝、激活衰老細(xì)胞。通過同時采用來自于天然植物提取物和來自于與人同源的干細(xì)胞分泌因子，兩者互為促進(jìn)吸收與修復(fù)皮膚組織和細(xì)胞，不但使得適用人群的范圍擴(kuò)大，而且能夠起到滿足特殊人群的需要(如抗凍抗皺)。
本發(fā)明還提供一種上述抗凍護(hù)手霜的制備方法，制備方法包括：將梅花提取物、尿囊素、干細(xì)胞分泌因子以及水按重量份混合溶解，加入乳化劑和角鯊?fù)?，加熱攪拌，降至室溫后，通過超微化得到抗凍護(hù)手霜。其中，加熱攪拌的溫度為80-90℃，加熱攪拌的速率為3000-5000轉(zhuǎn)/min。超微化通過動態(tài)高壓微射流超微化技術(shù)實現(xiàn)，動態(tài)高壓微射流超微化技術(shù)包括剪碎、破碎和均質(zhì)，動態(tài)高壓微射流超微化技術(shù)的工作壓力為140-180mpa，工作溫度為20-30℃。
具體的制備方法包括：在分別制備好梅花提取物，尿囊素以及干細(xì)胞分泌因子后，將梅花提取物10-20重量份、尿囊素10-15重量份以及干細(xì)胞分泌因子0.01-0.5份，加入15-25重量份的純凈水混合后溶解，向其中加入30-40重量份乳化劑，再加入10-20重量份的角鯊?fù)椋瑪嚢柘录訜岬?0℃-90℃，加入攪拌機(jī)中攪拌，攪拌速率為3000-5000轉(zhuǎn)/min，攪拌3-8min，降至室溫，通過干法粉碎技術(shù)或者濕法粉碎技術(shù)進(jìn)行超微化得到生物抗凍護(hù)手霜。更優(yōu)選的，攪拌下加熱到85℃，加入攪拌機(jī)中攪拌，攪拌速率為4000轉(zhuǎn)/min，攪拌5min，降至室溫。更優(yōu)選的，其中，超微化采用的是動態(tài)高壓微射流超微化技術(shù)，具體步驟：剪碎、破碎和均質(zhì)，其中工作壓力為150-170mpa，工作溫度為20-30℃；更優(yōu)選的工作壓力為160mpa，工作溫度為25℃。
具體的實施方式中，抗凍護(hù)手霜的制備方法包括如下步驟：
步驟一、梅花提取物的制備過程
(1)將梅花花瓣10-50份，加入1-1.5倍10％-30％的乙醇水溶液浸泡1.5-3h；
(2)回流提取2-4h，過濾，取濾液；
(3)加入濾液量1％-5％的1％殼聚糖水溶液，絮凝10-60min，過濾，取濾液；
(4)以75℃-80℃減壓濃縮成0.5-1生藥/ml的濃溶液；
(5)過樹脂柱(直徑1.5厘米的層析柱)，上樣速度為1-1.5ml/min，收集過柱液，即得梅花提取物。
步驟二、尿囊素的提取的制備
選取甜菜作為尿囊素的提取源，對尿囊素進(jìn)行提取，具體包括：采用亞臨界水提取工藝對甜菜的尿囊素活性組分進(jìn)行提取得到尿囊素提取液，將所述尿囊素提取液采用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器旋轉(zhuǎn)蒸干得尿囊素粘稠狀液體，其中，所述亞臨界醇提取工藝的提取溫度為135℃-145℃，提取時間為45-50min，液料比為(13:1)-(15:1)。
步驟三、干細(xì)胞分泌因子凍干粉制備
(1)收集健康人體臍帶，對臍帶作進(jìn)一步清洗，再用無菌手術(shù)剪將臍帶去除外膜、靜脈和動脈后切割分為細(xì)小組織。
(2)剪碎后的細(xì)小組織通過加入適當(dāng)濃度的胰酶、膠原酶等消化臍帶組織塊0.5小時。以消化出單核細(xì)胞，收集消化出的細(xì)胞用無血清培養(yǎng)基進(jìn)行貼壁培養(yǎng)，獲得臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。
(3)間充質(zhì)干細(xì)胞的擴(kuò)增培養(yǎng)，用干細(xì)胞培養(yǎng)基通過常規(guī)干細(xì)胞培養(yǎng)的方式進(jìn)行間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長狀況進(jìn)行換液，補(bǔ)液。
(4)觀察細(xì)胞生長情況，取細(xì)胞檢測細(xì)胞表面陽性標(biāo)志cd90、cd105和細(xì)胞表面陰性表面標(biāo)志cd45、cd34的表達(dá)情況。高表達(dá)上述檢測物質(zhì)時，取50ml干細(xì)胞培養(yǎng)基，分裝于培養(yǎng)皿中，液面厚度不高于3mm，蓋上保鮮膜，放于-86℃冰箱中冷凍24h。
(5)取出冷凍后的培養(yǎng)皿，用細(xì)針在保鮮膜上戳出若干小孔，放置于凍干機(jī)中，冷凍干燥。
(6)凍干成粉末狀分裝備用。
步驟四、抗凍護(hù)手霜的制備
將梅花提取物10-20重量份、尿囊素10-15重量份以及干細(xì)胞分泌因子0.01-0.5份，加入15-25重量份的純凈水混合后溶解，向其中加入30-40重量份乳化劑，再加入10-20重量份的角鯊?fù)椋瑪嚢柘录訜岬?0℃-90℃，加入攪拌機(jī)中攪拌，攪拌速率為3000-5000轉(zhuǎn)/min，攪拌3-8min，降至室溫，通過干法粉碎技術(shù)或者濕法粉碎技術(shù)進(jìn)行超微化得到生物抗凍護(hù)手霜，其中，超微化采用的是動態(tài)高壓微射流超微化技術(shù)，具體步驟：剪碎、破碎和均質(zhì)，其中工作壓力為150-170mpa，工作溫度為20℃-30℃。
本發(fā)明的制備方法中，采取了對含有效成分的純天然植物進(jìn)行了活性組分提取方法，因此能夠提高植物的利用率，整個提取過程中無添加任何有毒化學(xué)溶劑，并對形成的護(hù)手霜進(jìn)行了超微化，使得手部可以更好地吸收，制備方法簡單安全可靠，產(chǎn)品無任何毒副作用，有良好的抗凍防裂效果，適合秋冬季節(jié)使用。
以下結(jié)合具體實施例予以進(jìn)一步說明。
下述實施例中原料份數(shù)均為重量份數(shù)。使用的原料均為干的梅花花瓣，水分質(zhì)量含量<10％。
實施例1：
步驟一、梅花提取物的制備過程
(1)將梅花花瓣10份，加入0.5倍10％的乙醇水溶液浸泡1.5h；
(2)回流提取2h，過濾，取濾液；
(3)加入濾液量1％的1％殼聚糖水溶液，絮凝10min，過濾，取濾液；
(4)以75℃減壓濃縮成0.5生藥/ml的濃溶液；
(5))過樹脂柱(直徑1.5厘米的層析柱)，上樣速度為0.5ml/min，收集過柱液，即得梅花提取物。
步驟二、尿囊素的提取的制備
選取甜菜作為尿囊素的提取源，對尿囊素進(jìn)行提取，具體包括：采用亞臨界水提取工藝對甜菜的尿囊素活性組分進(jìn)行提取得到尿囊素提取液，將所述尿囊素提取液采用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器旋轉(zhuǎn)蒸干得尿囊素粘稠狀液體，其中，所述亞臨界醇提取工藝的提取溫度為135℃，提取時間為45min，液料比為13:1。
步驟三、干細(xì)胞分泌因子凍干粉制備
(1)收集健康人體臍帶，對臍帶作進(jìn)一步清洗，再用無菌手術(shù)剪將臍帶去除外膜、靜脈和動脈后切割分為細(xì)小組織。
(2)剪碎后的細(xì)小組織通過加入適當(dāng)濃度的胰酶、膠原酶等消化臍帶組織塊0.5小時。以消化出單核細(xì)胞，收集消化出的細(xì)胞用無血清培養(yǎng)基進(jìn)行貼壁培養(yǎng)，獲得臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。
(3)間充質(zhì)干細(xì)胞的擴(kuò)增培養(yǎng)，用干細(xì)胞培養(yǎng)基通過常規(guī)干細(xì)胞培養(yǎng)的方式進(jìn)行間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長狀況進(jìn)行換液，補(bǔ)液。
(4)觀察細(xì)胞生長情況，取細(xì)胞檢測細(xì)胞表面陽性標(biāo)志cd90、cd105和細(xì)胞表面陰性表面標(biāo)志cd45、cd34的表達(dá)情況。高表達(dá)上述檢測物質(zhì)時，取50ml干細(xì)胞培養(yǎng)基，分裝于培養(yǎng)皿中，液面厚度不高于3mm，蓋上保鮮膜，放于-86℃冰箱中冷凍24h。
(5)取出冷凍后的培養(yǎng)皿，用細(xì)針在保鮮膜上戳出若干小孔，放置于凍干機(jī)中,冷凍干燥。
(6)凍干成粉末狀分裝備用。
步驟四、抗凍護(hù)手霜的制備
將步驟一得到的梅花提取物10重量份、步驟二得到的尿囊素10重量份以及步驟三的得到的干細(xì)胞分泌因子0.05重量份，加入22重量份的純凈水混合后溶解，向其中加入40重量份單硬脂酸甘油酯(乳化劑)，再加入17重量份的角鯊?fù)?，攪拌下加熱?5℃，加入攪拌機(jī)中攪拌，攪拌速率為4000轉(zhuǎn)/min，攪拌5min，降至室溫，通過干法粉碎技術(shù)或者濕法粉碎技術(shù)進(jìn)行超微化得到生物抗凍護(hù)手霜，其中，超微化采用的是動態(tài)高壓微射流超微化技術(shù)，具體步驟：剪碎、破碎和均質(zhì)，其中工作壓力為160mpa，工作溫度為25℃。
制得實施例1的抗凍護(hù)手霜經(jīng)過體系破壞性試驗，對皮膚無任何損傷破壞，而且，產(chǎn)品各項感觀指標(biāo)、理化指標(biāo)、衛(wèi)生指標(biāo)均符合相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)。
實施例2：
步驟一、梅花提取物的制備過程
(1)將梅花花瓣30份，加入1倍20％的乙醇水溶液浸泡2h；
(2)回流提取3h，過濾，取濾液；
(3)加入濾液量3.5％的1％殼聚糖水溶液，絮凝35min，過濾，取濾液；
(4)以78℃減壓濃縮成0.5生藥/ml的濃溶液；
(5)過樹脂柱(直徑1.5厘米的層析柱)，上樣速度為lml/min，收集過柱液，即得梅花提取物。
步驟二、尿囊素的提取的制備
選取甜菜作為尿囊素的提取源，對尿囊素進(jìn)行提取，具體包括：采用亞臨界水提取工藝對甜菜的尿囊素活性組分進(jìn)行提取得到尿囊素提取液，將所述尿囊素提取液采用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器旋轉(zhuǎn)蒸干得尿囊素粘稠狀液體，其中，所述亞臨界醇提取工藝的提取溫度為135℃，提取時間為45min，液料比為14:1；
步驟三、干細(xì)胞分泌因子凍干粉制備
(1)收集健康人體臍帶，對臍帶作進(jìn)一步清洗，再用無菌手術(shù)剪將臍帶去除外膜、靜脈和動脈后切割分為細(xì)小組織。
(2)剪碎后的細(xì)小組織通過加入適當(dāng)濃度的胰酶、膠原酶等消化臍帶組織塊0.5小時。以消化出單核細(xì)胞，收集消化出的細(xì)胞用無血清培養(yǎng)基進(jìn)行貼壁培養(yǎng)，獲得臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。
(3)間充質(zhì)干細(xì)胞的擴(kuò)增培養(yǎng)，用干細(xì)胞培養(yǎng)基通過常規(guī)干細(xì)胞培養(yǎng)的方式進(jìn)行間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長狀況進(jìn)行換液，補(bǔ)液。
(4)觀察細(xì)胞生長情況，取細(xì)胞檢測細(xì)胞表面陽性標(biāo)志cd90、cd105和細(xì)胞表面陰性表面標(biāo)志cd45、cd34的表達(dá)情況。高表達(dá)上述檢測物質(zhì)時，取50ml干細(xì)胞培養(yǎng)基，分裝于培養(yǎng)皿中，液面厚度不高于3mm，蓋上保鮮膜，放于-86℃冰箱中冷凍24h。
(5)取出冷凍后的培養(yǎng)皿，用細(xì)針在保鮮膜上戳出若干小孔，放置于凍干機(jī)中，冷凍干燥。
(6)凍干成粉末狀分裝備用。
步驟四、抗凍護(hù)手霜的制備
將步驟一得到的梅花提取物15重量份、步驟二得到的尿囊素13重量份以及步驟三的得到的干細(xì)胞分泌因子0.2重量份，加入18重量份的純凈水混合后溶解，向其中加入30重量份棕櫚酸異丙酯(乳化劑)，再加入20重量份的角鯊?fù)?，攪拌下加熱?8℃，加入攪拌機(jī)中攪拌，攪拌速率為4500轉(zhuǎn)/min，攪拌8min，降至室溫，通過干法粉碎技術(shù)或者濕法粉碎技術(shù)進(jìn)行超微化得到生物抗凍護(hù)手霜，其中，超微化采用的是動態(tài)高壓微射流超微化技術(shù)，具體步驟：剪碎、破碎和均質(zhì)，其中工作壓力為170mpa，工作溫度為25℃。
制得的實施例2的抗凍護(hù)手霜經(jīng)過體系破壞性試驗，對皮膚無任何損傷破壞，而且，產(chǎn)品各項感觀指標(biāo)、理化指標(biāo)、衛(wèi)生指標(biāo)均符合相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)。
實施例3：
步驟一、梅花提取物的制備過程
(1)將梅花花瓣50份，加入1.5倍30％的乙醇水溶液浸泡3h；
(2)回流提取4h，過濾，取濾液；
(3)加入濾液量5％的1％殼聚糖水溶液，絮凝60min，過濾，取濾液；
(4)以80℃減壓濃縮成1g生藥/ml的濃溶液；
(5)過樹脂柱(直徑1.5厘米的層析柱)，上樣速度為l.5ml/min，收集過柱液，即得梅花提取物。
步驟二、尿囊素的提取的制備
選取甜菜作為尿囊素的提取源，對尿囊素進(jìn)行提取，具體包括：采用亞臨界水提取工藝對甜菜的尿囊素活性組分進(jìn)行提取得到尿囊素提取液，將所述尿囊素提取液采用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器旋轉(zhuǎn)蒸干得尿囊素粘稠狀液體，其中，所述亞臨界醇提取工藝的提取溫度為145℃，提取時間為50min，液料比為15:1；
步驟三、干細(xì)胞分泌因子凍干粉制備
(1)收集健康人體臍帶，對臍帶作進(jìn)一步清洗，再用無菌手術(shù)剪將臍帶去除外膜、靜脈和動脈后切割分為細(xì)小組織。
(2)剪碎后的細(xì)小組織通過加入適當(dāng)濃度的胰酶、膠原酶等消化臍帶組織塊0.5小時。以消化出單核細(xì)胞，收集消化出的細(xì)胞用無血清培養(yǎng)基進(jìn)行貼壁培養(yǎng)，獲得臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。
(3)間充質(zhì)干細(xì)胞的擴(kuò)增培養(yǎng),用干細(xì)胞培養(yǎng)基通過常規(guī)干細(xì)胞培養(yǎng)的方式進(jìn)行間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長狀況進(jìn)行換液，補(bǔ)液。
(4)觀察細(xì)胞生長情況，取細(xì)胞檢測細(xì)胞表面陽性標(biāo)志cd90、cd105和細(xì)胞表面陰性表面標(biāo)志cd45、cd34的表達(dá)情況。高表達(dá)上述檢測物質(zhì)時，取50ml干細(xì)胞培養(yǎng)基，經(jīng)過45μm濾膜過濾后分裝于新的培養(yǎng)皿中，液面厚度不高于3mm，蓋上保鮮膜，放于-86℃冰箱中冷凍24h。
(5)取出冷凍后的培養(yǎng)皿，用細(xì)針在保鮮膜上戳出若干小孔，放置于凍干機(jī)中，冷凍干燥。
(6)凍干成粉末狀分裝備用。
步驟四、抗凍護(hù)手霜的制備
將步驟一得到的梅花提取物20重量份、步驟二得到的尿囊素15重量份以及步驟三的得到的干細(xì)胞分泌因子0.3重量份，加入15重量份的純凈水混合后溶解，向其中加入32重量份甘油酯(乳化劑)，再加入12重量份的角鯊?fù)?，攪拌下加熱?0℃，加入攪拌機(jī)中攪拌，攪拌速率為5000轉(zhuǎn)/min，攪拌10min，降至室溫，通過干法粉碎技術(shù)或者濕法粉碎技術(shù)進(jìn)行超微化得到生物抗凍護(hù)手霜，其中，超微化采用的是動態(tài)高壓微射流超微化技術(shù)，具體步驟：剪碎、破碎和均質(zhì)，其中工作壓力為160mpa，工作溫度為25℃。
制得實施例3的抗凍護(hù)手霜經(jīng)過體系破壞性試驗，對皮膚無任何損傷破壞，而且，產(chǎn)品各項感觀指標(biāo)、理化指標(biāo)、衛(wèi)生指標(biāo)均符合相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)。
對照例1：
步驟一、尿囊素的提取的制備
選取甜菜作為尿囊素的提取源，對尿囊素進(jìn)行提取，具體包括：采用亞臨界水提取工藝對甜菜的尿囊素活性組分進(jìn)行提取得到尿囊素提取液，將所述尿囊素提取液采用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器旋轉(zhuǎn)蒸干得尿囊素粘稠狀液體，其中，所述亞臨界醇提取工藝的提取溫度為145℃，提取時間為50min，液料比為15:1；
步驟二、干細(xì)胞分泌因子凍干粉制備
(1)收集健康人體臍帶，對臍帶作進(jìn)一步清洗，再用無菌手術(shù)剪將臍帶去除外膜、靜脈和動脈后切割分為細(xì)小組織。
(2)剪碎后的細(xì)小組織通過加入適當(dāng)濃度的胰酶、膠原酶等消化臍帶組織塊0.5小時。以消化出單核細(xì)胞，收集消化出的細(xì)胞用無血清培養(yǎng)基進(jìn)行貼壁培養(yǎng),獲得臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。
(3)間充質(zhì)干細(xì)胞的擴(kuò)增培養(yǎng),用干細(xì)胞培養(yǎng)基通過常規(guī)干細(xì)胞培養(yǎng)的方式進(jìn)行間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長狀況進(jìn)行換液，補(bǔ)液。
(4)觀察細(xì)胞生長情況，取細(xì)胞檢測細(xì)胞表面陽性標(biāo)志cd90、cd105和細(xì)胞表面陰性表面標(biāo)志cd45、cd34的表達(dá)情況。高表達(dá)上述檢測物質(zhì)時，取50ml干細(xì)胞培養(yǎng)基，經(jīng)過45μm濾膜過濾后分裝于新的培養(yǎng)皿中，液面厚度不高于3mm，蓋上保鮮膜,放于-86℃冰箱中冷凍24h。
(5)取出冷凍后的培養(yǎng)皿，用細(xì)針在保鮮膜上戳出若干小孔，放置于凍干機(jī)中，冷凍干燥。
(6)凍干成粉末狀分裝備用。
步驟三、抗凍護(hù)手霜的制備
將步驟一得到的尿囊素12重量份以及步驟二的得到的干細(xì)胞分泌因子0.25重量份，加入25重量份的純凈水混合后溶解，向其中加入40重量份乳化劑，再加入18重量份的角鯊?fù)?，攪拌下加熱?0℃，加入攪拌機(jī)中攪拌，攪拌速率為5000轉(zhuǎn)/min，攪拌10min，降至室溫，通過干法粉碎技術(shù)或者濕法粉碎技術(shù)進(jìn)行超微化得到對照組1護(hù)手霜，其中，超微化采用的是動態(tài)高壓微射流超微化技術(shù)，具體步驟：剪碎、破碎和均質(zhì)，其中工作壓力為160mpa，工作溫度為25℃。
制得的對照組1的抗凍護(hù)手霜經(jīng)過體系破壞性試驗，對皮膚無任何損傷破壞，而且，產(chǎn)品各項感觀指標(biāo)、理化指標(biāo)、衛(wèi)生指標(biāo)均符合相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)。
對照例2：
步驟一、梅花提取物的制備過程
(1)將梅花花瓣50份，加入1.5倍30％的乙醇水溶液浸泡3h；
(2)回流提取4h，過濾，取濾液；
(3)加入濾液量5％的1％殼聚糖水溶液，絮凝60min，過濾，取濾液；
(4)以80℃減壓濃縮成1g生藥/ml的濃溶液；
(5)過樹脂柱(直徑1.5厘米的層析柱)，上樣速度為l.5ml/min，收集過柱液，即得梅花提取物。
步驟二、尿囊素的提取的制備
選取甜菜作為尿囊素的提取源，對尿囊素進(jìn)行提取，具體包括：采用亞臨界水提取工藝對甜菜的尿囊素活性組分進(jìn)行提取得到尿囊素提取液，將所述尿囊素提取液采用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器旋轉(zhuǎn)蒸干得尿囊素粘稠狀液體，其中，所述亞臨界醇提取工藝的提取溫度為145℃，提取時間為50min，液料比為15:1；
步驟三、抗凍護(hù)手霜的制備
將步驟一得到的梅花提取物13重量份、步驟二得到的尿囊素14重量份，加入19重量份的純凈水混合后溶解，向其中加入38重量份乳化劑，再加入16重量份的角鯊?fù)?，攪拌下加熱?0℃，加入攪拌機(jī)中攪拌，攪拌速率為5000轉(zhuǎn)/min，攪拌10min，降至室溫，通過干法粉碎技術(shù)或者濕法粉碎技術(shù)進(jìn)行超微化得到對照組2護(hù)手霜，其中，超微化采用的是動態(tài)高壓微射流超微化技術(shù)，具體步驟：剪碎、破碎和均質(zhì)，其中工作壓力為160mpa，工作溫度為25℃。
制得的對照組2的抗凍護(hù)手霜經(jīng)過體系破壞性試驗，對皮膚無任何損傷破壞，而且，產(chǎn)品各項感觀指標(biāo)、理化指標(biāo)、衛(wèi)生指標(biāo)均符合相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)。
具體實施例1、實施例2、實施例3、對照組1和對照組2的抗凍護(hù)手霜對應(yīng)的原料組分如表1中所示：
表1
效果評價
在秋冬季節(jié)，挑選往年有手部開裂情況的使用者250名并將其分為5組，分別使用實施例1、實施例2、實施例3、對照組1和對照組2產(chǎn)品，每天早上和午后使用本品各1次，每次約使用3g，連續(xù)1個月。對他們的手部開裂情況做記錄分析。
(1)安全性評價：本實驗中，所有實驗對象在使用過程中無不良反應(yīng)(如皮膚刺痛、脫皮及泛紅等不良反應(yīng))。
(2)效果評價：1個月后，與對照組相比，實驗組(實施例1、實施例2、實施例3)使用者手部開裂現(xiàn)象均有顯著降低。
表2
如表2所示，其中，有效率是指，若未再發(fā)生開裂、皸裂或有所改善則為有效，若發(fā)生開裂、皸裂與往年無異則為無效。根據(jù)表2數(shù)據(jù)結(jié)果可知，采用本發(fā)明實施例的制備方法制得的抗凍護(hù)手霜，相對于對照組1和對照組2分別僅僅只使用梅花提取物或者干細(xì)胞分泌因子所得到的抗凍護(hù)手霜，使用后使用者手部開裂現(xiàn)象均有顯著降低，手部皮膚無龜裂現(xiàn)象得到顯著改善。充分說明本發(fā)明的抗凍護(hù)手霜不僅能夠有效的保護(hù)手部，對手部進(jìn)行了全面護(hù)理；還能促進(jìn)皮膚的成纖維細(xì)胞合成膠原蛋白的能力，修復(fù)細(xì)胞、改善細(xì)胞代謝、激活衰老細(xì)胞；同時具有清淡的芬芳香味，使人們的心情放松，使用舒適。梅花提取物與干細(xì)胞分泌因子兩者的結(jié)合使用帶來了更加突出的效果。
以上所述實施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。