本發(fā)明涉及動(dòng)物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種預(yù)防和/或治療腸炎型犬細(xì)小病毒病的中藥組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：犬細(xì)小病毒(canineparvovirus，cpv)屬于細(xì)小病毒科，細(xì)小病毒屬。cpv對(duì)多種理化因素和常用消毒劑具有較強(qiáng)的抵抗力：在4-10℃可存活6個(gè)月，37℃可存活2周，56℃可存活24h，80℃可存活15min，在室溫下可保存3個(gè)月感染性僅輕度下降，在糞便中可存活數(shù)月至數(shù)年；對(duì)乙醚、氯仿和醇類有抵抗力，而對(duì)紫外線、福爾馬林、次氯酸鈉、氧化劑較為敏感。腸炎型犬細(xì)小病毒病是由cpv引起的一種以犬只發(fā)熱、嘔吐、瀉痢、免疫功能下降為特征的急性烈性傳染病，且腸炎型犬細(xì)小病毒病常繼發(fā)嚴(yán)重細(xì)菌感染，引起菌血癥和毒血癥，最終導(dǎo)致敗血癥。cpv尤其對(duì)2～4月齡的幼犬危害最大，發(fā)病率和致死率達(dá)到70％，對(duì)犬類的健康造成了極大的危害，給養(yǎng)犬業(yè)帶來(lái)了重大的損失。目前常規(guī)的免疫接種可預(yù)防腸炎型犬細(xì)小病毒病，但有研究表明，免疫接種后的犬，依然可能再次感染該病毒，這可能與腸炎型犬細(xì)小病毒不斷變異從而產(chǎn)生新的突變株有一定的關(guān)系。由于獸用抗病毒藥的禁用，市場(chǎng)上防治腸炎型犬細(xì)小病毒病的藥物多為疫苗、高免血清和單克隆抗體，但防治效果參差不齊，高免血清效果也有逐年下降趨勢(shì)，疫苗和抗體有一定的局限性，用于輔助治療的各種化學(xué)藥物也帶來(lái)耐藥性等一系列問(wèn)題，使得研發(fā)新型高效無(wú)毒副作用的抗犬細(xì)小病毒中藥制劑成為新的研究課題。中獸藥是天然有機(jī)物，具有無(wú)藥物殘留的特點(diǎn)，是綠色獸藥產(chǎn)品。中國(guó)傳統(tǒng)中獸醫(yī)藥學(xué)經(jīng)過(guò)幾千年的理論和實(shí)踐的檢驗(yàn)，已有較為可靠的效果和安全性。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是如何預(yù)防和/或治療腸炎型犬細(xì)小病毒病。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明首先提供了一種預(yù)防和/或治療腸炎型犬細(xì)小病毒病的中藥組合物。所述中藥組合物的活性成分可由中藥材制成，所述中藥材可由郁金、赤芍、黃連、黃芩、地榆、槐花、甘草、白術(shù)、柯子、五倍子、延胡索和當(dāng)歸組成。所述中藥材中的各種中藥材可獨(dú)立包裝，也可混合包裝。所述中藥組合物中，所述中藥材的組成可為：27～33質(zhì)量份郁金(如27～30質(zhì)量份郁金、30～33質(zhì)量份郁金、27質(zhì)量份郁金、30質(zhì)量份郁金或33質(zhì)量份郁金)、18～22質(zhì)量份赤芍(如18～20質(zhì)量份赤芍、20～22質(zhì)量份赤芍、18質(zhì)量份赤芍、20質(zhì)量份赤芍或22質(zhì)量份赤芍)、13.5～16.5質(zhì)量份黃連(如13.5～15.0質(zhì)量份黃連、15.0～16.5質(zhì)量份黃連、13.5質(zhì)量份黃連、15.0質(zhì)量份黃連或16.5質(zhì)量份黃連)、13.5～16.5質(zhì)量份黃芩(如13.5～15.0質(zhì)量份黃芩、15.0～16.5質(zhì)量份黃芩、13.5質(zhì)量份黃芩、15.0質(zhì)量份黃芩或16.5質(zhì)量份黃芩)、13.5～16.5質(zhì)量份地榆(如13.5～15.0質(zhì)量份地榆、15.0～16.5質(zhì)量份地榆、13.5質(zhì)量份地榆、15.0質(zhì)量份地榆或16.5質(zhì)量份地榆)、18～22質(zhì)量份槐花(如18～20質(zhì)量份槐花、20～22質(zhì)量份槐花、18質(zhì)量份槐花、20質(zhì)量份槐花或22質(zhì)量份槐花)、9～11質(zhì)量份甘草(如9～10質(zhì)量份甘草、10～11質(zhì)量份甘草、9質(zhì)量份甘草、10質(zhì)量份甘草或11質(zhì)量份甘草)、18～22質(zhì)量份白術(shù)(如18～20質(zhì)量份白術(shù)、20～22質(zhì)量份白術(shù)、18質(zhì)量份白術(shù)、20質(zhì)量份白術(shù)或22質(zhì)量份白術(shù))、18～22質(zhì)量份柯子(如18～20質(zhì)量份柯子、20～22質(zhì)量份柯子、18質(zhì)量份柯子、20質(zhì)量份柯子或22質(zhì)量份柯子)、18～22質(zhì)量份五倍子(如18～20質(zhì)量份五倍子、20～22質(zhì)量份五倍子、18質(zhì)量份五倍子、20質(zhì)量份五倍子或22質(zhì)量份五倍子)、13.5～16.5質(zhì)量份延胡索(如13.5～15.0質(zhì)量份延胡索、15.0～16.5質(zhì)量份延胡索、13.5質(zhì)量份延胡索、15.0質(zhì)量份延胡索或16.5質(zhì)量份延胡索)和13.5～16.5質(zhì)量份當(dāng)歸(如13.5～15.0質(zhì)量份當(dāng)歸、15.0～16.5質(zhì)量份當(dāng)歸、13.5質(zhì)量份當(dāng)歸、15.0質(zhì)量份當(dāng)歸或16.5質(zhì)量份當(dāng)歸)。所述中藥組合物中，所述中藥材的組成具體可為：27質(zhì)量份郁金、18質(zhì)量份赤芍、13.5質(zhì)量份黃連、13.5質(zhì)量份黃芩、13.5質(zhì)量份地榆、18質(zhì)量份槐花、9質(zhì)量份甘草、18質(zhì)量份白術(shù)、18質(zhì)量份柯子、18質(zhì)量份五倍子、13.5質(zhì)量份延胡索和13.5質(zhì)量份當(dāng)歸。所述中藥組合物中，所述中藥材的組成具體可為：30質(zhì)量份郁金、20質(zhì)量份赤芍、15質(zhì)量份黃連、15質(zhì)量份黃芩、15質(zhì)量份地榆、20質(zhì)量份槐花、10質(zhì)量份甘草、20質(zhì)量份白術(shù)、20質(zhì)量份柯子、20質(zhì)量份五倍子、15質(zhì)量份延胡索和15質(zhì)量份當(dāng)歸。所述中藥組合物中，所述中藥材的組成具體可為：33質(zhì)量份郁金、22質(zhì)量份赤芍、16.5質(zhì)量份黃連、16.5質(zhì)量份黃芩、16.5質(zhì)量份地榆、22質(zhì)量份槐花、11質(zhì)量份甘草、22質(zhì)量份白術(shù)、22質(zhì)量份柯子、22質(zhì)量份五倍子、16.5質(zhì)量份延胡索和16.5質(zhì)量份當(dāng)歸。上述任一所述中藥組合物中，所述活性成分是利用水從所述中藥材中提取出的水溶性物質(zhì)。所述水和所述中藥材的質(zhì)量比可為4.23～5.17:1(如4.23～4.65:1、4.65～5.17:1、4.23:1、4.65:1或5.17:1)。上述任一所述中藥組合物可為口服中藥組合物。上述任一所述中藥組合物的制備方法也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。上述任一所述中藥組合物的制備方法可包括如下步驟：用水浸提所述中藥材，收集浸提液，所述浸提液即為所述中藥組合物。上述制備方法中，所述浸提的參數(shù)可為：常溫浸泡20min-40min(如20min-30min、30min-40min、20min、30min或40min)，文火煮沸20min-40min(如20min-30min、30min-40min、20min、30min或40min)。所述制備方法還可包括如下步驟：將收集的浸提液進(jìn)行濃縮。所述濃縮的方式可為加熱濃縮(目的為蒸發(fā)液體)。上述任一所述中藥組合物在制備產(chǎn)品中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍；所述產(chǎn)品的功能可為如下a1)至a10)中的至少一種：a1)治療腸炎型犬細(xì)小病毒病；a2)預(yù)防腸炎型犬細(xì)小病毒?。籥3)維持動(dòng)物體內(nèi)淋巴細(xì)胞處于正常水平；a4)維持動(dòng)物體內(nèi)單核細(xì)胞處于正常水平；a5)維持動(dòng)物體內(nèi)中性粒細(xì)胞處于正常水平；a6)維持動(dòng)物體內(nèi)白細(xì)胞處于正常水平；a7)維持動(dòng)物體內(nèi)紅細(xì)胞處于正常水平；a8)促進(jìn)感染犬細(xì)小病毒的動(dòng)物排毒；a9)增加感染犬細(xì)小病毒的動(dòng)物抗體水平；a10)控制感染犬細(xì)小病毒的動(dòng)物的小腸病變。上文中，所述動(dòng)物可為犬。實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明提供的中藥組合物可治療和預(yù)防腸炎型犬細(xì)小病毒病，維持動(dòng)物體內(nèi)淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、白細(xì)胞和紅細(xì)胞處于正常水平，同時(shí)可促進(jìn)感染犬細(xì)小病毒的動(dòng)物排毒、增加感染犬細(xì)小病毒的動(dòng)物抗體水平和控制感染犬細(xì)小病毒的動(dòng)物的小腸病變。本發(fā)明提供的中藥組合物具有重要的應(yīng)用價(jià)值。附圖說(shuō)明圖1為cpv抗原檢測(cè)板的陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果。圖2為19只犬的臨床癥狀評(píng)分的統(tǒng)計(jì)結(jié)果。圖3為各組的淋巴細(xì)胞百分率變化。圖4為各組的單核細(xì)胞百分率變化。圖5為各組的單核細(xì)胞百分率變化。圖6為各組的白細(xì)胞百分率變化。圖7為各組的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的變化。圖8為各組的紅細(xì)胞比積的變化。圖9為各組的血紅蛋白的測(cè)定結(jié)果。圖10為ha試驗(yàn)的試驗(yàn)結(jié)果。圖11為hi試驗(yàn)的試驗(yàn)結(jié)果。圖12為各組的臟器損傷情況。具體實(shí)施方式以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為自常規(guī)生化試劑商店購(gòu)買得到的。以下實(shí)施例中的定量試驗(yàn)，均設(shè)置三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取平均值。實(shí)施例1、中藥組合物的制備本實(shí)施例中的郁金、赤芍、黃連、黃芩、地榆、槐花、甘草、白術(shù)、柯子、五倍子、延胡索和當(dāng)歸均為市售中藥材，且均符合中國(guó)藥典(2010年版)一部正文各藥材項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定。1、按照表1的配比，將郁金、赤芍、黃連、黃芩、地榆、槐花、甘草、白術(shù)、柯子、五倍子、延胡索和當(dāng)歸混合后用500ml蒸餾水浸泡30min，再用文火煮沸30min，用紗布過(guò)濾，收集濾液。2、取步驟1收集的濾液，加入500ml蒸餾水，再用文火煮沸30min，用紗布過(guò)濾，收集濾液。3、取步驟2收集的濾液，加熱濃縮(目的為蒸發(fā)液體)至體積為215ml，獲得中藥組合物a、中藥組合物b和中藥組合物c。制備中藥組合物a時(shí)，水和中藥材的質(zhì)量比為4.65:1。制備中藥組合物b時(shí)，水和中藥材的質(zhì)量比為5.17:1。制備中藥組合物c時(shí)，水和中藥材的質(zhì)量比為4.23:1。表1.不同中藥組合物的原料組成(單位：g)實(shí)施例2、實(shí)施例1制備的中藥組合物在治療腸炎型犬細(xì)小病毒病中的效果生理鹽水為濃度為9g/l的氯化鈉水溶液。本實(shí)施例的犬細(xì)小病毒具體為中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供的cpv強(qiáng)毒株(記載于如下文獻(xiàn)中：陳琛，鄔靜，張海亮，等.犬細(xì)小病毒病診斷與防治情況調(diào)查[j].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，(08):1926-8.)。cpv強(qiáng)毒株病毒液的制備方法：(1)將cpv強(qiáng)毒株接種至貓腎f81細(xì)胞，37℃、5％co2培養(yǎng)15min；(2)完成步驟(1)后，加入維持液和1640完全培養(yǎng)液，37℃、5％co2培養(yǎng)24h；(3)完成步驟(2)后，棄液相，加入維持液，37℃、5％co2培養(yǎng)直至80％細(xì)胞出現(xiàn)致細(xì)胞病變效應(yīng)，將病變的細(xì)胞置于-80℃冰箱中，冷凍后取出放于37℃的溫箱內(nèi)進(jìn)行解凍，在解凍溶化過(guò)程中適度的振搖幾下幾次，以使所有細(xì)胞完全可以從細(xì)胞瓶的壁上脫落下來(lái)。反復(fù)凍融(-80℃/37℃)三次，12000r/min離心10min，上清液即為cpv強(qiáng)毒株病毒液。經(jīng)測(cè)定，cpv強(qiáng)毒株病毒液的滴度為1×103.54tcid50/ml。在下文中，cpv強(qiáng)毒株病毒液簡(jiǎn)稱病毒液。正常喂養(yǎng)的條件：飼喂美滋元公司生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)飼料(一日2次，兩次飼喂時(shí)間間隔8h，喂食量為65g/kg)，自由飲水；飼養(yǎng)條件為環(huán)境溫度為22-25℃，濕度為55±5％；通風(fēng)干燥；嚴(yán)格消毒處理；每天12h光照12h黑暗循環(huán)(光照時(shí)間每天7:00-19:00)。一、建立動(dòng)物模型1、將39只犬(包括購(gòu)自北京市海淀區(qū)興隆實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖廠的45日齡健康雜犬幼犬12只、購(gòu)自北京科宇動(dòng)物養(yǎng)殖中心的42日齡比格犬20只和購(gòu)自北京市通州區(qū)狗市的55日齡比格犬7只)先適應(yīng)性正常喂養(yǎng)1周，然后單只單籠繼續(xù)正常喂養(yǎng)7d(期間驅(qū)蟲和檢測(cè)抗體效價(jià)，并進(jìn)行常規(guī)臨床檢查)。2、完成步驟1后，對(duì)39只犬皮下注射2ml病毒液。3、完成步驟2后，正常喂養(yǎng)且每天觀察臨床癥狀(如食欲、排便、精神狀態(tài)、是否嘔吐、是否腹瀉)，檢測(cè)糞便中的病毒滴度，檢測(cè)血清中的抗體、炎性因子和血液學(xué)指標(biāo)。如果攻毒犬開(kāi)始逐漸精神沉郁，食欲下降，出現(xiàn)嘔吐，腹瀉，機(jī)體迅速脫水導(dǎo)致皮膚彈性下降，白細(xì)胞變化明顯，cpv抗原檢測(cè)板陽(yáng)性，視為腸炎型犬細(xì)小病毒病建模成功。檢測(cè)血清中的抗體：采用北京農(nóng)學(xué)院寵物醫(yī)院的cpv抗原檢測(cè)板和cpv單克隆抗體血清進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)血清中的血液學(xué)指標(biāo)：分別采集39只犬的右后肢靜脈血0.2-0.5ml，然后采用北京農(nóng)學(xué)院寵物醫(yī)院的全血細(xì)胞分析儀分析。部分cpv抗原檢測(cè)板的陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1。經(jīng)檢測(cè)，共有19只犬建模成功。二、治療將19只建模成功的犬隨機(jī)分成攻毒不治療組(5只)、西藥組(4只)、中西結(jié)合組(6只)和中藥預(yù)防組(4只)，然后單只單籠進(jìn)行治療。對(duì)各組中各犬的治療具體如下：攻毒不治療組：不治療；西藥組：依次進(jìn)行如下步驟：(1)每天靜脈注射a液(分兩次進(jìn)行)；a液由50ml生理鹽水、頭孢拉定(劑量為30-50mg/kg)、氨芐西林鈉(劑量為40-60mg/kg)和50％(500g/l)葡萄糖水溶液(劑量為2ml/kg)組成；輸液速度：6-10ml/kg·h；連續(xù)注射4d；(2)每天靜脈注射b液(分兩次進(jìn)行)；b液由50ml5％(50g/l)葡萄糖水溶液、止血敏(劑量為2-4ml/kg)和奧美拉唑(劑量為0.1-0.25ml/kg)組成；輸液速度：6-10ml/kg·h；連續(xù)注射4d；(3)每天靜脈注射c液(分兩次進(jìn)行)；c液由50ml乳酸林格氏液和cob(劑量為0.5ml/kg)組成；輸液速度：6-10ml/kg·h；連續(xù)注射4d；(4)每天靜脈注射d液(分兩次進(jìn)行)；d液由50ml復(fù)方氯化鈉、肝泰樂(lè)(劑量為0.2ml/kg)、氯化鈉甲硝唑(劑量為3ml/kg)、atp(劑量為0.5ml/d)、輔酶a(劑量為0.5ml/d)和vc(劑量為0.5ml/kg)組成；輸液速度：6-10ml/kg·h；連續(xù)注射4d；(5)每天皮下注射細(xì)小單抗(劑量為2ml/kg，分兩次進(jìn)行)，連續(xù)注射3d；(6)每天皮下注射布托啡諾(劑量為0.1ml/kg，分兩次進(jìn)行)，連續(xù)注射3d；(7)每天皮下注射科特壯(劑量為1-2.5ml/kg，分兩次進(jìn)行)，連續(xù)注射4d。(8)補(bǔ)液：每天靜脈注射補(bǔ)液(分兩次進(jìn)行)；補(bǔ)液由等滲液體(1體積份乳酸林格氏液或1體積份5％(50g/l)葡萄糖水溶液或1體積份生理鹽水)和維持液體(由0.5體積份乳酸林格氏液和0.5體積份5％(50g/l)葡萄糖水溶液組成)組成，具體要求如下：a、脫水量＝體重×10x脫水百分比b、12小時(shí)的維持量＝132÷2×0.75體重c、12小時(shí)流失量＝(10-20)ml×體重÷2d、前2小時(shí)補(bǔ)充總液體的1/4-1/2矯正脫水維持血壓；余下的10h內(nèi)補(bǔ)完。(9)完成步驟(8)2h后，加熱墊(目的為保溫)，止痛，止吐，喂食(喂食量至少為正常喂養(yǎng)時(shí)1/3且決不能餓超過(guò)12h)。熱量＝[體重×30％+70]×(1.25-1.5)。(10)完成步驟(9)后，每天靜脈注射e液(分兩次進(jìn)行)；e液由0.9體積份5％(50g/l)葡萄糖水溶液和0.1體積份50％(500g/l)葡萄糖水溶液組成；輸液速度少于4㎎/kg/min；連續(xù)注射4d。注意：1、連續(xù)兩天嘔吐嚴(yán)重，需每天靜脈注射f液(分兩次進(jìn)行)；f液由10-30ml5％(50g/l)葡萄糖水溶液和氯化鉀(劑量為0.1-0.2ml/kg)組成；輸液速度：6-10ml/kg·h；連續(xù)注射1d。2、若嘔吐，則皮下注射止吐寧(劑量為0.1ml/kg)1h后，少量多次喂食(奶粉和營(yíng)養(yǎng)膏)；3、若出現(xiàn)肺水腫，則皮下注射呋塞米(劑量為2-4.4mg/kg)，6-8h注射一次。4、若出現(xiàn)休克癥狀，則在a液中加地塞米松(劑量為2㎎/kg)。5、若出現(xiàn)低血容量性休克，則先靜脈注射等張晶體液(由1體積份乳酸林格氏液和或1體積份生理鹽水組成；輸液速度為90ml/kg/h)，待有效后降低劑量，然后靜脈注射羥乙基淀粉，劑量為10-20ml/kg。6、如有出血情況，用云南白藥直腸深部灌腸。中西結(jié)合組：除采取西藥組的措施外，還口服中藥組合物a。每次服用劑量為2ml/kg，每天兩次。中藥預(yù)防組：皮下注射2ml病毒液后開(kāi)始口服中藥組合物a，每次服用劑量為2ml/kg，每天一次；待發(fā)病后，除采取西藥組的措施外，還繼續(xù)口服中藥組合物a，每次服用劑量為2ml/kg，每天兩次。三、療效判定標(biāo)準(zhǔn)有效：經(jīng)過(guò)治療后食欲漸恢復(fù)、腹瀉減輕、嘔吐停止，患犬精神狀態(tài)好轉(zhuǎn)。無(wú)效：食欲、腹瀉、嘔吐未有改善直至死亡。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果每天觀察步驟二中各犬的臨床癥狀(如食欲、排便、精神狀態(tài)、是否嘔吐、是否腹瀉)，檢測(cè)糞便中的病毒滴度，檢測(cè)血清中的抗體、炎性因子和血液學(xué)指標(biāo)。如果犬死亡，則需進(jìn)行解剖，然后觀察各臟器(如心臟、肺、肝、小腸、大腸、盲腸、淋巴結(jié)等)的變化，并將小腸組織制作石蠟切片后進(jìn)行he染色。根據(jù)步驟三的標(biāo)準(zhǔn)，判定療效。具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：1、保護(hù)率及平均療程統(tǒng)計(jì)各組的保護(hù)率(保護(hù)率＝好轉(zhuǎn)只數(shù)/犬?dāng)?shù)目×100％)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明，攻毒不治療組短時(shí)間內(nèi)全部死亡，西藥組的保護(hù)率偏低，中西結(jié)合組和中藥預(yù)防組的保護(hù)率較高(即治療效果較好)；同時(shí)中藥預(yù)防組的保護(hù)率高于中西結(jié)合組，說(shuō)明提前使用中藥組合物a有助于提高治療效果。表2組別犬?dāng)?shù)目(只)平均療程(天)好轉(zhuǎn)只數(shù)(只)保護(hù)率(％)攻毒不治療組5200西藥組45.75125中西結(jié)合組64467中藥預(yù)防組463752、臨床癥狀部分臨床癥狀觀察賦分系統(tǒng)的分值見(jiàn)表3。19只犬的臨床癥狀評(píng)分統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表4和圖2，臨床癥狀評(píng)分為每天的食欲癥狀評(píng)分、嘔吐癥狀評(píng)分與腹瀉癥狀評(píng)分之和，評(píng)分越高癥狀越嚴(yán)重。表3表4注：“/”為未統(tǒng)計(jì)臨床癥狀評(píng)分。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，未經(jīng)治療的犬，在2-3天時(shí)間內(nèi)癥狀就已經(jīng)十分嚴(yán)重，經(jīng)過(guò)治療后癥狀有明顯控制，但仍然有惡化變嚴(yán)重的可能。口服中藥組合物a對(duì)臨床癥狀的控制較單純西藥組好，且越早使用中藥組合物a，對(duì)癥狀控制越有利。3、血常規(guī)的變化情況血常規(guī)又叫全血細(xì)胞計(jì)數(shù)，為臨床最為常用的檢測(cè)方法之一，在治療過(guò)程中，可以顯示病情，指導(dǎo)用藥。cbc監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)里紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、血紅蛋白和紅細(xì)胞比積的變化有很重要臨床意義。(1)淋巴細(xì)胞各組的淋巴細(xì)胞百分率變化見(jiàn)圖3：發(fā)病前，除攻毒不治療組外，其余3組的淋巴細(xì)胞都低于正常值下線；發(fā)病前3天，攻毒不治療組淋巴細(xì)胞急劇升高，采取治療有效的保持動(dòng)態(tài)平衡；發(fā)病4-6天，西藥組淋巴細(xì)胞水平持續(xù)在正常范圍下限水平，使用中藥組合物a的2組淋巴細(xì)胞增加且持續(xù)在正常范圍內(nèi)。(2)單核細(xì)胞各組的單核細(xì)胞百分率變化見(jiàn)圖4：整體來(lái)看，除西藥組外，其余3組在發(fā)病后，單核細(xì)胞數(shù)值都有明顯增加趨勢(shì)，而西藥組前期平穩(wěn)，后期有下降趨勢(shì)。這說(shuō)明患犬發(fā)病過(guò)程中出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，組織器官出現(xiàn)壞死，有吞噬需求，且引起了單核細(xì)胞相應(yīng)的變化。發(fā)病3天后，西藥組單核細(xì)胞呈平緩的下降趨勢(shì)，而中藥預(yù)防組和中西結(jié)合組呈上升趨勢(shì)，說(shuō)明此時(shí)西藥組機(jī)體產(chǎn)生單核細(xì)胞漸漸不足以滿足機(jī)體需求。而使用中藥組合物a雖然未能保持動(dòng)態(tài)平衡，但幫助機(jī)體使其此時(shí)仍然可以產(chǎn)生足夠的單核細(xì)胞。(3)中性粒細(xì)胞各組的單核細(xì)胞百分率變化見(jiàn)圖5：感染細(xì)小病毒后，患犬中性粒細(xì)胞雖有波動(dòng)，但在發(fā)病前5天內(nèi)，在白細(xì)胞中所占比例都遠(yuǎn)高于正常值。攻毒不治療組的中性粒細(xì)胞持續(xù)下降，因?yàn)槲唇?jīng)治療，機(jī)體抵抗力不足，中性粒細(xì)胞大量消耗又得不到補(bǔ)充所致。其余3組的治療有效的幫助機(jī)體維持一定的中性粒細(xì)胞水平，幫助機(jī)體抵抗病原菌感染。發(fā)病第4-6天，使用中藥組合物a后的兩組中性粒細(xì)胞先下降到正常水平，后繼續(xù)上升，但始終低于西藥組的中性粒細(xì)胞水平，可能是使用中藥組合物a后幫助控制了炎癥，中性粒細(xì)胞使用減少。(4)白細(xì)胞和紅細(xì)胞各組的白細(xì)胞百分率變化見(jiàn)圖6：攻毒不治療組在發(fā)病第1天急劇升高，第2天達(dá)到峰值后迅速下落；西藥組和中西結(jié)合組發(fā)病前4天的白細(xì)胞變化不大，持續(xù)在正常范圍上限值左右；中藥預(yù)防組在發(fā)病前2天先升高后降為正常值。因此，使用中藥組合物a后都會(huì)引起白細(xì)胞的增加，在一定程度下可以反映中藥幫助機(jī)體積極產(chǎn)生白細(xì)胞對(duì)應(yīng)繼發(fā)的感染。各組的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(rbc)、血紅蛋白測(cè)定(hgb)、紅細(xì)胞比積(hct)依次見(jiàn)圖7、圖8和圖9：rbc、hgb和hct的變化基本一致；發(fā)病前3天，除攻毒不治療組外，其它三組基本都在同一水平線上下浮動(dòng)；攻毒不治療組的紅細(xì)胞數(shù)值相對(duì)其余三組為高，是由于發(fā)病后大量嘔吐、血便，引起脫水，使得紅細(xì)胞數(shù)值相對(duì)增加，并不是真的有升高。4、ha-hi試驗(yàn)(1)ha試驗(yàn)每日采集感染犬的糞便，保存于等量生理鹽水中，進(jìn)行ha試驗(yàn)(試驗(yàn)步驟參考姚火春.獸醫(yī)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)(第二版)[m].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2002)。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖10。結(jié)果表明，從總體來(lái)看，犬感染cpv發(fā)病前2天開(kāi)始大量排毒，在發(fā)病第1天至第2天時(shí)排毒量達(dá)到最高峰。若不加以治療，在排毒高峰期就會(huì)有生命危險(xiǎn)。西藥組的排毒高峰期持續(xù)時(shí)間較中西結(jié)合組和中藥預(yù)防組長(zhǎng)，可見(jiàn)使用中藥組合物a后加快了患犬排毒，且縮短了大量排毒持續(xù)時(shí)間。使用中藥組合物a后，患犬排毒呈持續(xù)下降趨勢(shì)，且中藥預(yù)防組排毒量低于中西結(jié)合組，可見(jiàn)越早使用中藥，排毒效果越好。(2)hi試驗(yàn)每日采集感染犬頸靜脈血，離心后保存血清，進(jìn)行hi試驗(yàn)(試驗(yàn)步驟參考姚火春.獸醫(yī)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)(第二版)[m].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2002)。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖11。結(jié)果表明，從總體來(lái)看，患犬感染cpv后，抗體水平趨勢(shì)是先增高后降低，可見(jiàn)患犬初感染cpv時(shí)，機(jī)體積極產(chǎn)生抗體應(yīng)對(duì)病毒的入侵，隨著病情發(fā)展呈逐漸降低或逐漸回升趨勢(shì)。發(fā)病第1天除攻毒不治療組外，其它所有組都開(kāi)始治療，中藥預(yù)防組此時(shí)轉(zhuǎn)為中西結(jié)合治療。發(fā)病前只有中藥預(yù)防組采用中藥，而發(fā)病前2天中藥預(yù)防組的抗體水平都高于其它3組，可見(jiàn)使用中藥組合物a可幫助患犬積極產(chǎn)生抗體。對(duì)比采取治療措施的3組發(fā)展趨勢(shì)可以看出，中藥預(yù)防組在發(fā)病第3天時(shí)抗體水平降到最低，之后開(kāi)始逐漸上升，且抗體水平開(kāi)始上升時(shí)間較其它2組早。5、臟器損傷情況各臟器評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下：小腸：整個(gè)小腸充血壞死程度25％，評(píng)分1分；整個(gè)小腸充血壞死程度50％，評(píng)分2分；整個(gè)小腸充血壞死程度75％，評(píng)分3分；整個(gè)小腸充血壞死程度100％，評(píng)分4分。大腸：整個(gè)大腸充血壞死程度25％，評(píng)分1分；整個(gè)大腸充血壞死程度50％，評(píng)分2分；整個(gè)大腸充血壞死程度75％，評(píng)分3分；整個(gè)大腸充血壞死程度100％，評(píng)分4分。肺：整個(gè)肺損傷充血壞死程度25％，評(píng)分1分；整個(gè)肺損傷充血壞死程度50％，評(píng)分2分；整個(gè)肺損傷充血壞死程度75％，評(píng)分3分；整個(gè)肺損傷充血壞死程度100％，評(píng)分4分。心臟：心臟無(wú)損傷，評(píng)分0分；心臟有損傷，評(píng)分1分。盲腸：盲腸無(wú)腫大，評(píng)分0分；盲腸有腫大，評(píng)分1分。肝：肝無(wú)損傷，評(píng)分0分；肝有損傷，評(píng)分1分。淋巴結(jié)：淋巴結(jié)無(wú)充血水腫，評(píng)分0分；淋巴結(jié)有充血水腫，評(píng)分1分。各組的臟器損傷情況見(jiàn)表5和圖12。結(jié)果表明，攻毒不治療組中，由于沒(méi)有進(jìn)行治療，患犬在1-2天內(nèi)死亡，除出現(xiàn)典型的小腸出血壞死病變外，心臟、肝和盲腸的病變都較其它組不明顯，這與上述3種器官疾病發(fā)展需要一定時(shí)間有關(guān)。所有組犬的腸系膜淋巴結(jié)都出現(xiàn)充血腫大，可見(jiàn)病毒侵襲機(jī)體免疫器官難以避免，現(xiàn)有的治療方法對(duì)淋巴結(jié)的保護(hù)作用都不夠。肺損傷的比較看出，犬細(xì)小病毒感染后，損傷免疫系統(tǒng)，加上患犬年幼，抵抗力普遍偏低，故普遍并發(fā)或繼發(fā)肺部感染。臨床上應(yīng)該嚴(yán)格監(jiān)測(cè)肺部損傷的情況，并加以積極防范。從小腸病變對(duì)比看出，中西結(jié)合組和中藥預(yù)防組病變明顯少于攻毒不治療組和西藥組，可見(jiàn)本試驗(yàn)采用中藥組合物a對(duì)小腸段病變控制有很大幫助。表5按照上述步驟，將中藥組合物a替換為中藥組合物b或中藥組合物c，其它步驟均不變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，中藥組合物a、中藥組合物b和中藥組合物c在治療腸炎型犬細(xì)小病毒病中的效果無(wú)顯著差異。當(dāng)前第1頁(yè)12