本發(fā)明涉及腫瘤治療技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及阿司匹林與曲妥珠單抗聯(lián)合或協(xié)同在腫瘤治療中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

目前，惡性腫瘤已經(jīng)成為威脅人類(lèi)健康的主要疾病。人表皮生長(zhǎng)因子受體2(humanepidermalgrowthfactorreceptor-2,her-2)陽(yáng)性的惡性腫瘤浸潤(rùn)性強(qiáng)，患者無(wú)病生存期短，預(yù)后差。

her2陽(yáng)性乳腺癌占全部乳腺癌的20％～30％，在乳腺癌所有的分子分型中，her2陽(yáng)性早期乳腺癌的至遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移時(shí)間和總生存時(shí)間均較短。her2陽(yáng)性是胃癌常見(jiàn)的分子分型，據(jù)統(tǒng)計(jì)約有20％的胃癌呈her2陽(yáng)性，該分型較其他胃癌分型惡性程度高。因此，針對(duì)her2陽(yáng)性惡性腫瘤的治療和研究備受研究者關(guān)注。曲妥珠單抗(赫賽汀、herceptin)是一種針對(duì)her2原癌基因產(chǎn)物的人/鼠嵌合單抗，能特異地作用于her2受體過(guò)度表達(dá)的癌細(xì)胞并且起到殺傷作用。雖然曲妥珠單抗能有效提高h(yuǎn)er2陽(yáng)性乳腺癌、胃癌的療效，但是令人遺憾的是，僅有約30％的her2陽(yáng)性乳腺癌、胃癌患者效果明顯，且大部分初始接受曲妥珠單抗治療有效的病人常在1年內(nèi)產(chǎn)生耐藥，加上其費(fèi)用高昂，這極大的限制了曲妥珠單抗的臨床應(yīng)用。因此，尋找針對(duì)her2陽(yáng)性惡性腫瘤新的治療模式，增加曲妥珠單抗的療效，具有重要的臨床意義。

鑒于此，特提出本發(fā)明。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供阿司匹林與曲妥珠單抗聯(lián)合在制備用于治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的另一目的在于提供阿司匹林與曲妥珠單抗協(xié)同在制備用于治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的另一目的在于提供阿司匹林與曲妥珠單抗聯(lián)合或協(xié)同在制備用于抑制腫瘤細(xì)胞增殖的抑制劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明的另一目的在于提供阿司匹林與曲妥珠單抗聯(lián)合或協(xié)同在制備用于促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的促進(jìn)劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種用于治療腫瘤的藥物組合。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種治療腫瘤的方法。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：

阿司匹林與曲妥珠單抗聯(lián)合在制備用于治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。

阿司匹林與曲妥珠單抗協(xié)同在制備用于治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。

阿司匹林與曲妥珠單抗聯(lián)合或協(xié)同在制備用于抑制腫瘤細(xì)胞增殖的抑制劑中的應(yīng)用。

阿司匹林與曲妥珠單抗聯(lián)合或協(xié)同在制備用于促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的促進(jìn)劑中的應(yīng)用。

一種用于治療腫瘤的藥物組合，其包括曲妥珠單抗，以及用于與該曲妥珠單抗聯(lián)合或協(xié)同施用的阿司匹林。

一種治療腫瘤的方法，其包括：向患有腫瘤的患者施用曲妥珠單抗，并聯(lián)合或協(xié)同施用阿司匹林。

本發(fā)明具有以下有益效果：

本發(fā)明的研究首次發(fā)現(xiàn)了阿司匹林的新用途，其有助于增加曲妥珠單抗的療效，即相對(duì)于單獨(dú)地施用曲妥珠單抗，將阿司匹林與曲妥珠單抗聯(lián)合用藥，可明顯地抑制her2陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞增殖以及促進(jìn)her2陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的凋亡，聯(lián)合用藥的抗her2陽(yáng)性腫瘤的效果好于單獨(dú)地施用曲妥珠單抗的效果。因此，本發(fā)明提供的阿司匹林與曲妥珠單抗聯(lián)合或協(xié)同在制備用于治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用，不僅為阿司匹林在腫瘤尤其是her2陽(yáng)性腫瘤的抗癌效應(yīng)提供一定的理論依據(jù)，同時(shí)也為腫瘤尤其是her2陽(yáng)性腫瘤(例如her2陽(yáng)性乳腺癌或her2陽(yáng)性胃癌)的治療提供了一種新的思路和治療手段。

附圖說(shuō)明

為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，應(yīng)當(dāng)理解，以下附圖僅示出了本發(fā)明的某些實(shí)施例，因此不應(yīng)被看作是對(duì)范圍的限定，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他相關(guān)的附圖。

圖1為本發(fā)明實(shí)施例2提供的阿司匹林聯(lián)合曲妥珠單抗對(duì)her2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞增殖的影響結(jié)果；

圖2為本發(fā)明實(shí)施例2提供的阿司匹林聯(lián)合曲妥珠單抗對(duì)her2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞增殖的影響結(jié)果；

圖3為本發(fā)明實(shí)施例3提供的阿司匹林聯(lián)合曲妥珠單抗對(duì)her2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞凋亡的影響結(jié)果；

圖4為本發(fā)明實(shí)施例3的阿司匹林聯(lián)合曲妥珠單抗對(duì)her2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞凋亡的影響結(jié)果。

具體實(shí)施方式

為使本發(fā)明實(shí)施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過(guò)市售購(gòu)買(mǎi)獲得的常規(guī)產(chǎn)品。

下面對(duì)本發(fā)明實(shí)施例的阿司匹林與曲妥珠單抗聯(lián)合或協(xié)同在腫瘤治療中的應(yīng)用進(jìn)行具體說(shuō)明。

阿司匹林作為一種解熱鎮(zhèn)痛藥，已應(yīng)用于臨床上百年，它以出色的抗凝和保護(hù)心臟作用成為心血管疾病一線(xiàn)和基礎(chǔ)治療用藥。

有關(guān)阿司匹林在腫瘤方面的抗癌作用還不完全清楚。對(duì)于阿司匹林與曲妥珠單抗聯(lián)合用于her2陽(yáng)性腫瘤研究的報(bào)道更是沒(méi)有。

本發(fā)明的研究首次發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于單獨(dú)地施用曲妥珠單抗，將阿司匹林與曲妥珠單抗聯(lián)合用藥，可明顯地抑制her2陽(yáng)性腫瘤(例如her2陽(yáng)性乳腺癌或her2陽(yáng)性胃癌)細(xì)胞增殖以及促進(jìn)her2陽(yáng)性腫瘤(例如her2陽(yáng)性乳腺癌或her2陽(yáng)性胃癌)細(xì)胞的凋亡，阿司匹林與曲妥珠單抗聯(lián)合用藥的抗her2陽(yáng)性腫瘤例如her2陽(yáng)性乳腺癌或her2陽(yáng)性胃癌的效果好于單獨(dú)地施用曲妥珠單抗或阿司匹林的效果。本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)了阿司匹林的新用途，將其與曲妥珠單抗聯(lián)合使用，阿司匹林有助于增加曲妥珠單抗的療效。

基于此，一方面，本發(fā)明提供了阿司匹林與曲妥珠單抗聯(lián)合在制備用于治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，上述腫瘤為her2陽(yáng)性腫瘤。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，上述her2陽(yáng)性腫瘤為her2陽(yáng)性乳腺癌或her2陽(yáng)性胃癌。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，阿司匹林與曲妥珠單抗的質(zhì)量比為60：(1-2)。

另一方面，本發(fā)明提供了阿司匹林與曲妥珠單抗協(xié)同在制備用于治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，上述腫瘤為her2陽(yáng)性腫瘤。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，上述her2陽(yáng)性腫瘤為her2陽(yáng)性乳腺癌或her2陽(yáng)性胃癌。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，阿司匹林與曲妥珠單抗的質(zhì)量比為60：(1-2)。

另一方面，本發(fā)明提供了阿司匹林與曲妥珠單抗聯(lián)合或協(xié)同在制備用于抑制腫瘤細(xì)胞增殖的抑制劑中的應(yīng)用。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，上述腫瘤細(xì)胞為her2陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，上述her2陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞為her2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞或her2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，阿司匹林與曲妥珠單抗的質(zhì)量比為60：(1-2)。

另一方面，本發(fā)明提供了阿司匹林與曲妥珠單抗聯(lián)合或協(xié)同在制備用于促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的促進(jìn)劑中的應(yīng)用。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，上述腫瘤細(xì)胞為her2陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，上述her2陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞為her2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞或her2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，阿司匹林與曲妥珠單抗的質(zhì)量比為60：(1-2)。

另一方面，本發(fā)明提供了一種用于治療腫瘤的藥物組合，其包括曲妥珠單抗，以及用于與上述曲妥珠單抗聯(lián)合或協(xié)同施用的阿司匹林。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，上述腫瘤為her2陽(yáng)性腫瘤。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，上述her2陽(yáng)性腫瘤為her2陽(yáng)性乳腺癌或her2陽(yáng)性胃癌。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，阿司匹林與曲妥珠單抗的質(zhì)量比為60：(1-2)。

另一方面，本發(fā)明提供了一種治療腫瘤的方法，其包括：向患有腫瘤的患者施用曲妥珠單抗，并聯(lián)合或協(xié)同施用阿司匹林。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，上述腫瘤為her2陽(yáng)性腫瘤。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，上述her2陽(yáng)性腫瘤為her2陽(yáng)性乳腺癌或her2陽(yáng)性胃癌。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，阿司匹林與曲妥珠單抗的質(zhì)量比為60：(1-2)。

本發(fā)明提供的阿司匹林與曲妥珠單抗聯(lián)合或協(xié)同在制備用于治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用，不僅為阿司匹林在腫瘤尤其是her2陽(yáng)性腫瘤的抗癌效應(yīng)提供一定的理論依據(jù)，同時(shí)也為腫瘤尤其是her2陽(yáng)性腫瘤(例如her2陽(yáng)性乳腺癌或her2陽(yáng)性胃癌)的治療提供了一種新的思路和治療手段。

以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的特征和性能作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。

細(xì)胞系和主要試劑

her2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞系skbr3、her2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞系sgc7901均源自于中科院上海細(xì)胞庫(kù)，由中國(guó)人民解放軍蘭州總醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心保存。skbr3細(xì)胞和sgc7901細(xì)胞均使用dmem培養(yǎng)液(含10％胎牛血清)在37℃、5％co2孵箱內(nèi)培養(yǎng)。阿司匹林(acetylsalicylicacid)、mtt(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽)均購(gòu)于sigma公司。注射用曲妥珠單抗購(gòu)于羅氏公司。阿司匹林溶于二甲基亞砜(dmso)，曲妥珠單抗溶于無(wú)菌注射用水。

實(shí)施例1

本實(shí)施例提供了一種用于治療腫瘤的藥物組合，該藥物組合包括曲妥珠單抗，以及用于與曲妥珠單抗聯(lián)合或協(xié)同施用的阿司匹林。

本實(shí)施例提供的藥物組合對(duì)腫瘤尤其是her2陽(yáng)性腫瘤例如her2陽(yáng)性乳腺癌或her2陽(yáng)性胃癌具有較好的治療效果。

實(shí)施例2

1阿司匹林聯(lián)合曲妥珠單抗對(duì)her2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞skbr3增殖的影響

mtt法檢測(cè)細(xì)胞增殖

將正常生長(zhǎng)的skbr3細(xì)胞傳代后接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔200μl體積，細(xì)胞數(shù)為2×10³個(gè)，培養(yǎng)過(guò)夜后分別加入含有5mm阿司匹林(5mmaspirin)、15μg/ml曲妥珠單抗(15μg/mltrastuzumab)、30μg/ml曲妥珠單抗(30μg/mltrastuzumab)以及兩藥聯(lián)合(5mmaspirin+15μg/mltrastuzumab，即阿司匹林與曲妥珠單抗的質(zhì)量比為60:1)、(5mmaspirin+30μg/mltrastuzumab，即阿司匹林與曲妥珠單抗的質(zhì)量比為60:2)的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，以加入等體積注射用水或dmso的培養(yǎng)液作為對(duì)照組(即control組)，于2d后檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。將mtt配置濃度為5mg/ml，每孔加入20μl后繼續(xù)培養(yǎng)4h，之后棄培養(yǎng)液，每孔加入150μl的dmso，在酶標(biāo)儀上振蕩約5min，490nm檢測(cè)吸光度(od)值，繪制柱狀圖表示細(xì)胞生長(zhǎng)情況，結(jié)果如圖1所示(圖中：縱坐標(biāo)表示細(xì)胞增殖率，橫坐標(biāo)代表不同的用藥組)。每組3復(fù)孔，并重復(fù)3次，結(jié)果以(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)表示。

圖1的結(jié)果顯示，control組細(xì)胞相對(duì)增殖率為(100±6.13)％，5mm阿司匹林組細(xì)胞相對(duì)增殖率為(79.6±4.51)％，15μg/ml曲妥珠單抗組細(xì)胞相對(duì)增殖率為(69.2±2.23)％，30μg/ml曲妥珠單抗組細(xì)胞相對(duì)增殖率為(48.2±5.80)％，5mmaspirin+15μg/mltrastuzumab組細(xì)胞相對(duì)增殖率為(46.1±7.01)％，5mmaspirin+30μg/mltrastuzumab組細(xì)胞相對(duì)增殖率為(21.5±2.89)％。統(tǒng)計(jì)分析顯示，與control組相比，5mm阿司匹林組、15μg/ml曲妥珠單抗組、30μg/ml曲妥珠單抗組和兩藥聯(lián)合組的細(xì)胞增殖受到抑制，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；不論與5mm阿司匹林組、15μg/ml曲妥珠單抗組、30μg/ml曲妥珠單抗組相比，兩藥聯(lián)合組的細(xì)胞增殖明顯受到抑制，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，且兩個(gè)不同濃度的兩藥聯(lián)合組的增殖率低于單藥組。由此說(shuō)明，阿司匹林聯(lián)合曲妥珠單抗能夠明顯抑制skbr3細(xì)胞增殖，且抑制效果好于單獨(dú)使用曲妥珠單抗的情況，阿司匹林能夠促進(jìn)或增加或放大或協(xié)同曲妥珠單抗對(duì)her2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞的抑制作用。

2阿司匹林聯(lián)合曲妥珠單抗對(duì)her2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞sgc7901增殖的影響

mtt法檢測(cè)細(xì)胞增殖

將正常生長(zhǎng)的sgc7901細(xì)胞傳代后接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔200μl體積，細(xì)胞數(shù)為2×10³個(gè)，培養(yǎng)過(guò)夜后分別加入含有5mm阿司匹林(5mmaspirin)、15μg/ml曲妥珠單抗(15μg/mltrastuzumab)、30μg/ml曲妥珠單抗(30μg/mltrastuzumab)以及兩藥聯(lián)合(5mmaspirin+15μg/mltrastuzumab，即阿司匹林與曲妥珠單抗的質(zhì)量比為60:1)、(5mmaspirin+30μg/mltrastuzumab，即阿司匹林與曲妥珠單抗的質(zhì)量比為60:2)的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，以加入等體積注射用水或dmso的培養(yǎng)液作為對(duì)照組(即control組)，于2d后檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。將mtt配置濃度為5mg/ml，每孔加入20μl后繼續(xù)培養(yǎng)4h，之后棄培養(yǎng)液，每孔加入150μl的dmso，在酶標(biāo)儀上振蕩約5min，490nm檢測(cè)吸光度(od)值，繪制柱狀圖表示細(xì)胞生長(zhǎng)情況，結(jié)果如圖2所示(圖中：縱坐標(biāo)表示細(xì)胞增殖率，橫坐標(biāo)代表不同的用藥組)。每組3復(fù)孔，并重復(fù)3次，結(jié)果以(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)表示。

圖2的結(jié)果顯示，control組細(xì)胞相對(duì)增殖率為(100±1.72)％，5mm阿司匹林組細(xì)胞相對(duì)增殖率為(80.3±5.66)％，15μg/ml曲妥珠單抗組細(xì)胞相對(duì)增殖率為(76.0±3.11)％，30μg/ml曲妥珠單抗組細(xì)胞相對(duì)增殖率為(57.3±3.54)％，5mmaspirin+15μg/mltrastuzumab組細(xì)胞相對(duì)增殖率為(47.5±6.20)％，5mmaspirin+30μg/mltrastuzumab組細(xì)胞相對(duì)增殖率為(26.5±1.66)％。統(tǒng)計(jì)分析顯示，與control組相比，5mm阿司匹林組、15μg/ml曲妥珠單抗組、30μg/ml曲妥珠單抗組和兩藥聯(lián)合組的細(xì)胞增殖受到抑制，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；不論與5mm阿司匹林組、15μg/ml曲妥珠單抗組、30μg/ml曲妥珠單抗組相比，兩藥聯(lián)合組的細(xì)胞增殖明顯受到抑制，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。由此可見(jiàn)，相較于單獨(dú)使用曲妥珠單抗的情況，將阿司匹林與曲妥珠單抗聯(lián)合使用其對(duì)sgc7901細(xì)胞增殖的抑制效果更好，阿司匹林能夠促進(jìn)或增加或放大或協(xié)同曲妥珠單抗對(duì)her2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞的抑制作用。

實(shí)施例3

阿司匹林聯(lián)合曲妥珠單抗對(duì)her2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞skbr3細(xì)胞凋亡的影響

流式細(xì)胞儀法檢測(cè)細(xì)胞凋亡

將正常生長(zhǎng)的skbr3細(xì)胞傳代后接種于培養(yǎng)皿中，待細(xì)胞密度達(dá)到80％左右時(shí)分別加入含有5mm阿司匹林(5mmaspirin)、30μg/ml曲妥珠單抗(30μg/mltrastuzumab)以及兩藥聯(lián)合(5mmaspirin+30μg/mltrastuzumab，即阿司匹林與曲妥珠單抗的質(zhì)量比為60:2)的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，以加入等體積注射用水或dmso的培養(yǎng)液作為對(duì)照組(即control組)，于72h后處理細(xì)胞。將細(xì)胞消化后重懸，調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1×10⁶個(gè)/ml，用pbs洗2-3次后加入500μl緩沖液懸浮細(xì)胞，再分別加入10μl膜連蛋白v-異硫氰酸熒光素(annexinv-fitc)和10μlpi混勻，室溫避光孵育染色15min，上流式細(xì)胞儀進(jìn)行雙色熒光細(xì)胞流式計(jì)數(shù)。結(jié)果如圖3所示(圖中：a為阿司匹林聯(lián)合曲妥珠單抗對(duì)her2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞凋亡的流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果；b為司匹林聯(lián)合曲妥珠單抗對(duì)her2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞凋亡的影響結(jié)果柱狀圖，圖b中：縱坐標(biāo)為細(xì)胞凋亡率，橫坐標(biāo)為不同的用藥組)。

圖3的結(jié)果顯示，control組細(xì)胞凋亡率為(13.5±3.20)％，5mm阿司匹林組細(xì)胞凋亡率為(27.3±3.47)％，30μg/ml曲妥珠單抗組細(xì)胞凋亡率為(35.3±2.80)％，5mmaspirin+30μg/mltrastuzumab組細(xì)胞凋亡率為(56.2±3.95)％。統(tǒng)計(jì)分析顯示，與control組相比，5mm阿司匹林組、30μg/ml曲妥珠單抗組和兩藥聯(lián)合組的細(xì)胞凋亡增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；不論與5mm阿司匹林組或30μg/ml曲妥珠單抗組相比，兩藥聯(lián)合組的細(xì)胞凋亡明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。由此說(shuō)明，相較于單獨(dú)使用曲妥珠單抗的情況，將阿司匹林與曲妥珠單抗聯(lián)合使用其對(duì)skbr3細(xì)胞凋亡的促進(jìn)效果更好，這表明，阿司匹林能夠增強(qiáng)或促進(jìn)或放大或協(xié)同曲妥珠單抗對(duì)her2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞促凋亡的作用。

實(shí)施例4

阿司匹林聯(lián)合曲妥珠單抗對(duì)her2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞sgc7901細(xì)胞凋亡的影響

流式細(xì)胞儀法檢測(cè)細(xì)胞凋亡

將正常生長(zhǎng)的sgc7901細(xì)胞傳代后接種于培養(yǎng)皿中，待細(xì)胞密度達(dá)到80％左右時(shí)分別加入含有5mm阿司匹林(5mmaspirin)、30μg/ml曲妥珠單抗(30μg/mltrastuzumab)以及兩藥聯(lián)合(5mmaspirin+30μg/mltrastuzumab，即阿司匹林與曲妥珠單抗的質(zhì)量比為60:2)的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，以加入等體積注射用水或dmso的培養(yǎng)液作為對(duì)照組(即control組)，于72h后處理細(xì)胞。將細(xì)胞消化后重懸，調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1×10⁶個(gè)/ml，用pbs洗2-3次后加入500μl緩沖液懸浮細(xì)胞，再分別加入10μl膜連蛋白v-異硫氰酸熒光素(annexinv-fitc)和10μlpi混勻，室溫避光孵育染色15min，上流式細(xì)胞儀進(jìn)行雙色熒光細(xì)胞流式計(jì)數(shù)。結(jié)果如圖4所示(圖中：a為阿司匹林聯(lián)合曲妥珠單抗對(duì)her2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞凋亡的流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果；b為司匹林聯(lián)合曲妥珠單抗對(duì)her2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞凋亡的影響結(jié)果柱狀圖，圖b中：縱坐標(biāo)為細(xì)胞凋亡率，橫坐標(biāo)為不同的用藥組)。

圖4的結(jié)果顯示，control組細(xì)胞凋亡率為(11.8±1.22)％，5mm阿司匹林組細(xì)胞凋亡率為(28.7±1.53)％，30μg/ml曲妥珠單抗組細(xì)胞凋亡率為(32.0±2.22)％，5mmaspirin+30μg/mltrastuzumab組細(xì)胞凋亡率為(71.5±2.54)％。統(tǒng)計(jì)分析顯示，與control組相比，5mm阿司匹林組、30μg/ml曲妥珠單抗組和兩藥聯(lián)合組的細(xì)胞凋亡增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；不論與5mm阿司匹林組或30μg/ml曲妥珠單抗組相比，兩藥聯(lián)合組的細(xì)胞凋亡明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。由此說(shuō)明，相較于單獨(dú)使用曲妥珠單抗的情況，將阿司匹林與曲妥珠單抗聯(lián)合使用其對(duì)sgc7901細(xì)胞凋亡的促進(jìn)效果更好，這表明，阿司匹林能夠增強(qiáng)或促進(jìn)或放大或協(xié)同曲妥珠單抗對(duì)her2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞促凋亡的作用。

以上結(jié)果說(shuō)明，阿司匹林能夠增強(qiáng)或促進(jìn)或放大或協(xié)同曲妥珠單抗對(duì)腫瘤尤其是her2陽(yáng)性腫瘤的抑制增殖或促進(jìn)凋亡的效果，這一發(fā)現(xiàn)出乎意料，讓本領(lǐng)域技術(shù)人員吃驚。

實(shí)施例4

本實(shí)施例提供了一種治療腫瘤的方法，其包括：向患有腫瘤的患者施用曲妥珠單抗，并聯(lián)合或協(xié)同施用阿司匹林。

本實(shí)施例提供的治療腫瘤的方法對(duì)腫瘤尤其是her2陽(yáng)性腫瘤(例如her2陽(yáng)性乳腺癌或her2陽(yáng)性胃癌)具有較好的治療效果。

阿司匹林通常作為一種非抗腫瘤藥物進(jìn)行使用，但本發(fā)明的研究顯示，其能夠放大或協(xié)同或增強(qiáng)傳統(tǒng)抗腫瘤藥物(例如曲妥珠單抗)的療效，首次發(fā)現(xiàn)并證實(shí)了阿司匹林的新用途，該結(jié)果令人驚訝，超出本領(lǐng)域技術(shù)人員的意料。因此，阿司匹林能夠與曲妥珠單抗聯(lián)合或協(xié)同用于制備治療腫瘤尤其是her2陽(yáng)性腫瘤(例如her2陽(yáng)性乳腺癌或her2陽(yáng)性胃癌)的藥物中。將阿司匹林與曲妥珠單抗聯(lián)合使用，作為一種全新的治療模式用于her2陽(yáng)性腫瘤的治療具備以下優(yōu)勢(shì)：

首先，這種新模式增加了單獨(dú)使用曲妥珠單抗的療效。

例如，單獨(dú)使用曲妥珠單抗的her2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞的增殖率僅為(48.2±5.80)％，曲妥珠單抗聯(lián)合阿司匹林使用后，her2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞的增殖率降低至(21.5±2.89)％，降低比例達(dá)55.4％；單獨(dú)使用曲妥珠單抗對(duì)her2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞的凋亡率僅為(35.3±2.80)％，曲妥珠單抗聯(lián)合阿司匹林使用后細(xì)胞凋亡率達(dá)到(56.2±3.95)％，增加比例達(dá)58.9％。這種聯(lián)合使用在her2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞中得到了相似的結(jié)果。由此曲妥珠單抗聯(lián)合阿司匹林使用對(duì)her2陽(yáng)性乳腺癌、胃癌細(xì)胞抑制增殖、促進(jìn)凋亡作用非常明顯，這一效果是本領(lǐng)域技術(shù)人員不能預(yù)料得到的。

其次，這種新模式可以降低患者的毒副反應(yīng)。

將聯(lián)合阿司匹林作為一種抗腫瘤治療新模式不僅可以增加傳統(tǒng)抗腫瘤藥物的療效，更重要的是降低患者化療毒副反應(yīng)。這種治療模式不同于臨床上兩種抗腫瘤藥物的簡(jiǎn)單聯(lián)合，由于阿司匹林不是抗腫瘤藥物，因此也沒(méi)有抗腫瘤藥物劇烈的毒副反應(yīng)。這種新的模式可以降低患者的毒副反應(yīng)，減輕患者的痛苦，避免醫(yī)患糾紛，實(shí)現(xiàn)以人為本的治療目的。

再有，這種新模式可降低醫(yī)療成本，節(jié)約醫(yī)療資源。

曲妥珠單抗有著高昂的藥費(fèi)，1位患者使用曲妥珠單抗的總費(fèi)用在15萬(wàn)左右。但是，對(duì)于部分患者來(lái)說(shuō)，即使付出了費(fèi)用采用了這種方式治療，也存在曲妥珠單抗反應(yīng)性差的問(wèn)題，不能達(dá)到好的治療效果。阿司匹林費(fèi)用低廉，容易獲得，而且阿司匹林在增加曲妥珠單抗的療效的同時(shí)又不增加額外藥費(fèi)。本發(fā)明的研究對(duì)her2陽(yáng)性腫瘤患者而言減輕了治療費(fèi)用負(fù)擔(dān)，節(jié)約社會(huì)醫(yī)療資源。

總之，本發(fā)明的研究表明，阿司匹林與曲妥珠單抗聯(lián)合或協(xié)同可用于制備治療腫瘤尤其是her2陽(yáng)性腫瘤例如her2陽(yáng)性乳腺癌或her2陽(yáng)性胃癌的藥物中，并且阿司匹林與曲妥珠單抗聯(lián)合或協(xié)同可用于制備抑制腫瘤細(xì)胞增殖的抑制劑或促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的促進(jìn)劑中。這不僅為阿司匹林在腫瘤方面尤其her2陽(yáng)性腫瘤的抗癌效應(yīng)提供一定的理論依據(jù)，同時(shí)也為對(duì)腫瘤尤其her2陽(yáng)性腫瘤例如her2陽(yáng)性乳腺癌或her2陽(yáng)性胃癌的治療提供了一種新的思路和治療手段。

以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。