本發(fā)明涉及皮膚病中藥治療領(lǐng)域，具體而言，涉及用于治療急性濕熱性皮膚病的中藥組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：濕疹、皮炎等皮膚科疾病是一種最常見的瘙癢性皮膚病，近年來發(fā)病率呈上升趨勢，流行病學(xué)調(diào)查研究表明，濕疹病患者約占皮膚科門診量的15-25％，其中急性濕疹約占52.4％?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為濕疹是過敏性炎性皮膚病，是由多種復(fù)雜的內(nèi)、外因素引起的一種具有多形性皮損和易有滲出傾向的皮膚炎癥性反應(yīng)。目前西醫(yī)治療濕疹的常用口服藥物主要包括抗組胺劑、糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑、非特異性抗敏藥等，但長期使用會出現(xiàn)一系列的副作用，臨床上尚缺乏安全有效、針對性強(qiáng)、經(jīng)濟(jì)實(shí)用的濕疹治療措施。中醫(yī)藥治療濕疹歷史悠久，經(jīng)驗(yàn)豐富。幾千年的臨床實(shí)踐證實(shí)，中醫(yī)藥治療濕疹與西藥相比具有療效好、副作用少的優(yōu)勢，既可以明顯改善癥狀，也可以通過抗組胺、抗變態(tài)反應(yīng)等作用治療各種因素引起的濕疹，具有良好的應(yīng)用前景。有鑒于此，特提出本發(fā)明。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的第一目的在于提供用于治療急性濕熱性皮膚病的中藥組合物，主要由龍膽、黃芩、車前草、白茅根、板藍(lán)根、茯苓、生地黃、生石膏、甘草、滑石粉10味中藥材配伍而成，諸藥合用，協(xié)同配合增強(qiáng)，使該配方清熱利濕力強(qiáng)，兼有涼血之功，全方對皮膚病治療，主治急性濕疹、接觸性皮炎、帶狀皰疹、藥疹等急性濕熱性皮膚病，效果顯著。本發(fā)明的第二目的在于提供用于治療急性濕熱性皮膚病的中藥組合物的制備方法，特別是顆粒劑，該劑型的藥物便于服用，效果優(yōu)良。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：用于治療急性濕熱性皮膚病的中藥組合物，主要由以下原料制成：按重量份計，龍膽8-10份、黃芩8-10份、車前草10-15份、白茅根25-35份、生地黃13-18份、茯苓8-12份、板藍(lán)根13-18份、生石膏25-35份、甘草1.5-2.5份、滑石粉9-15份。本發(fā)明提供的用于治療急性濕熱性皮膚病的中藥組合物，方中龍膽大苦大寒，清肝膽濕熱，為本方君藥；黃芩性味苦寒，清肺熱，為臣藥；白茅根、生地黃滋陰涼血清熱，茯苓、車前草、滑石粉利濕清熱、使?jié)駸釓乃蓝?，板藍(lán)根清熱解毒涼血，甘草補(bǔ)脾益氣、清熱解毒，生石膏清氣分衛(wèi)熱，數(shù)藥共為佐藥。諸藥合用，使該方清熱利濕力強(qiáng)，兼有涼血之功。全方對急性濕疹、接觸性皮炎、帶狀皰疹、藥疹等急性濕熱性皮膚病具有很好的治療效果。為了進(jìn)一步增強(qiáng)各原料之間的協(xié)同作用，優(yōu)選地，按重量份計，龍膽9份、黃芩9份、車前草12份、白茅根30份、生地黃15份、茯苓10份、板藍(lán)根15份、生石膏30份、甘草2.1份、滑石粉12.9份。進(jìn)一步地，所述皮膚病為急性濕熱性皮膚病，所述皮膚病包括急性濕疹、接觸性皮炎、帶狀皰疹、藥疹。進(jìn)一步地，所述中藥組合物還包括輔料。用于將中藥組合物制成各種劑型。本發(fā)明提供的用于治療急性濕熱性皮膚病的中藥組合物可為各種劑型，如膠囊劑、顆粒劑、丸劑、片劑等等。這些劑型按常規(guī)的方法制備即可。優(yōu)選地，所述中藥組合物的劑型為顆粒劑。進(jìn)一步地，本發(fā)明還提供了用于治療急性濕熱性皮膚病的中藥組合物的制備方法，包括以下步驟：(a)、稱取各原料，備用；(b)、龍膽、黃芩和車前草進(jìn)行醇提，得到醇提物；(c)、白茅根、茯苓、生地黃、板藍(lán)根、生石膏、甘草和滑石粉進(jìn)行水提，得到水提物；(d)、將所述醇提物和所述水提物混合，濃縮，得到濃縮液；(e)、所述濃縮液添加輔料，制成相應(yīng)的劑型。本發(fā)明提供的用于治療急性濕熱性皮膚病的中藥組合物的制備方法，不同原料采用不同的提取方式得到提取物，將各原料中的有效活性成分充分的提取出來，然后將提取物混合后制成各種劑型即可，整個制備方法簡便易行，制得的顆粒劑的效果佳。為了將龍膽、黃芩和車前草中的有效成分充分的浸出，進(jìn)一步地，在步驟(b)中，所述醇提為：龍膽、黃芩和車前草加10-14倍量的質(zhì)量濃度為68％-75％乙醇水溶液，提取2-4次，每次1-2h，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，得到所述醇提物。優(yōu)選地，所述醇提為：龍膽、黃芩和車前草加12倍量的質(zhì)量濃度為70％乙醇水溶液，提取3次，每次1.5h，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，得到所述醇提物。進(jìn)一步地，在步驟(c)中，所述水提為：白茅根、茯苓、生地黃、板藍(lán)根、生石膏、甘草和滑石粉加入5-10倍量水浸泡20分鐘以上，提取2-4次，每次1-3h，得到所述水提物。該條件下，能將這幾種原料中的有效活性成分充分地浸提出來。優(yōu)選地，所述水提為：白茅根、茯苓、生地黃、板藍(lán)根、生石膏、甘草和滑石粉加入8倍量水浸泡30分鐘后，提取3次，每次2h，得到所述水提物。進(jìn)一步地，所述劑型為顆粒劑，所述輔料為羥丙纖維素、糊精和可溶性淀粉；步驟(e)為：所述濃縮液中加入羥丙纖維素、糊精和可溶性淀粉并進(jìn)行干燥，然后采用濕法制粒。進(jìn)一步地，在步驟(d)中，所述濃縮至總藥材重量的1.5-3倍，優(yōu)選為2倍。進(jìn)一步地，在步驟(e)中，羥丙纖維素、糊精和可溶性淀粉的添加量均為所述濃縮液重量的0.8％-1.2％，優(yōu)選為1％。通過在濃縮液中添加適量的輔料，便于后續(xù)顆粒劑的制備。噴霧干燥法干燥速度快，產(chǎn)品性能好。優(yōu)選地，所述干燥采用噴霧干燥法進(jìn)行。進(jìn)一步地，所述干燥在噴霧干燥機(jī)中進(jìn)行；優(yōu)選地，所述噴霧干燥機(jī)干燥時，儀器進(jìn)液速度為18％-25％，霧化溫度為130±5℃，霧化壓力為53-55mmhg。該條件下制得的粉末為后續(xù)制備顆粒提供良好的條件。優(yōu)選地，儀器進(jìn)液速度為20％，霧化溫度為130℃，霧化壓力為54mmhg。進(jìn)一步地，在步驟(e)中，所述濕法制粒為：在干燥后得到的粉末中加入質(zhì)量濃度為95％的乙醇水溶液，潤濕粉末，搖擺式制粒，干燥即得。一般干燥的時間為2小時。本發(fā)明經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)摸索，得到該顆粒劑的制備方法，制得的顆粒劑效果優(yōu)良。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：(1)本發(fā)明提供的用于治療急性濕熱性皮膚病的中藥組合物，方中龍膽大苦大寒，清肝膽濕熱，為本方君藥；黃芩性味苦寒，清肺熱，為臣藥；白茅根、生地黃滋陰涼血清熱，茯苓、車前草、滑石粉利濕清熱、使?jié)駸釓乃蓝?，板藍(lán)根清熱解毒涼血，甘草補(bǔ)脾益氣、清熱解毒，生石膏清氣分衛(wèi)熱，數(shù)藥共為佐藥，諸藥合用，使該方清熱利濕力強(qiáng)，兼有涼血之功，全方治療急性濕疹、接觸性皮炎、帶狀皰疹、藥疹等皮膚病，治愈率均達(dá)85％以上，治療效果顯著。(2)本發(fā)明提供的用于治療急性濕熱性皮膚病的中藥組合物的制備方法，不同原料采用不同的提取方式得到提取物，將各原料中的有效活性成分充分的提取出來，然后將提取物混合后制成各種劑型即可，整個制備方法簡便易行，制得的顆粒劑的效果佳。(3)本發(fā)明還進(jìn)一步限定了制備方法中的各參數(shù)，提高有效活性成分的提出率，增加治療效果。附圖說明為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，以下將對實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。圖1為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例1中對二甲苯所致小鼠耳腫脹度的影響柱形圖；圖2為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例1中對小鼠ⅳ型變態(tài)反應(yīng)模型耳腫脹度的影響柱形圖；圖3為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例1中對小鼠ⅳ型變態(tài)反應(yīng)模型耳腫脹率的影響柱形圖；圖4為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例1中對4-氨基吡啶誘發(fā)小鼠舔體反應(yīng)的影響柱形圖；圖5為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例1中對4-氨基吡啶誘發(fā)小鼠前驅(qū)時間的影響柱形圖。具體實(shí)施方式下面將結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，下列實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。實(shí)施例1一、提取工藝研究1.提取方法研究根據(jù)方中各味藥的主要化學(xué)成分的理化性質(zhì)及其相關(guān)的藥理作用，設(shè)計了分類提取法(醇提和水提)；以主成分含量和抗炎效果為評價指標(biāo)，比較分類提取法與傳統(tǒng)水煎煮法，結(jié)果見表1、表2。君藥龍膽中龍膽苦苷含量和臣藥黃芩中黃芩苷的含量分類提取法大于傳統(tǒng)水煎煮法，對二甲苯致小鼠耳腫脹的抑制作用分類提取法強(qiáng)于傳統(tǒng)水煎煮法，確定提取方法為分類提取法。表1分類提取法與水煎法含量測定結(jié)果比較成分水煎法分類提取法龍膽苦苷含量(％)2.813.91黃芩苷含量(％)3.616.63龍膽苦苷轉(zhuǎn)移率(％)67.5094.02黃芩苷轉(zhuǎn)移率(％)36.2866.69表2分類提取法與水煎法對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響注：與模型對照組比﹡p＜0.01；n＝202.提取工藝參數(shù)優(yōu)化2.1醇提工藝研究：采用乙醇回流法提取處方中的龍膽、黃芩、車前草?？疾煊绊懱崛」に嚨?個因素乙醇濃度、乙醇用量、提取次數(shù)和提取時間，每個因素選取3個水平，按照l9(34)正交表進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)，以hplc法測定的龍膽苦苷、黃芩苷、大車前苷的含量作為評價指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析見表3、4。表3醇提工藝正交試驗(yàn)結(jié)果*注：表中所示含量為兩次重復(fù)實(shí)驗(yàn)平均含量。龍膽苦苷的權(quán)重系數(shù)為0.5，黃芩苷的權(quán)重系數(shù)為0.3，大車前苷的權(quán)重系數(shù)為0.2，綜合評分＝龍膽苦苷含量/3.76×0.5×100+黃芩苷含量/9.57×0.3×100+大車前苷含量/0.53×0.2×100表4綜合評分方差分析經(jīng)直觀分析和方差分析可知，影響該工藝的因素依次為d(提取次數(shù))＞c(提取時間)＞b(乙醇用量)＞a(乙醇濃度)，4個因素對3個成分的含量均具有極顯著性影響(p<0.01)；最佳提取工藝為a2b3c3d3，即加12倍量70％乙醇，提取3次，每次1.5h。經(jīng)驗(yàn)證，工藝穩(wěn)定、可行。2.2水提工藝研究對處方中其余藥味白茅根、茯苓、板藍(lán)根、生地黃、生石膏、甘草、滑石粉采用水煎法提取。以a(提取次數(shù))、b(提取時間)、c(加水量)為考察因素，每個因素選取3個水平，按照l9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)，以提取液中多糖含量作為評價指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析見表5、6。表5水提工藝正交試驗(yàn)結(jié)果表6水提工藝方差分析直觀分析可以看出，3因素中因素a對實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響最大，為主要影響因素，影響次序依次為a＞b＞c。進(jìn)一步的方差分析表明，3個因素對多糖含量的影響無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。綜合考慮工藝成本，最佳水提工藝為a3b2c1，即加8倍量的水提取3次，每次2h。經(jīng)驗(yàn)證，工藝重現(xiàn)性良好。二、制劑成型工藝研究1.濃縮與干燥1.1輔料優(yōu)選：采用噴霧干燥法將濃縮、干燥一步完成。采用l9(34)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選輔料最佳配比，以出粉率和吸濕率為評價指標(biāo)，出粉率值以最大者為佳，吸濕率值以最小者為佳，權(quán)重各占50％。綜合加權(quán)評分＝出粉率各值-出粉率最小值)/(出粉率最大值-出粉率最小值)*50％-(吸濕率各值-吸濕率最小值)/(吸濕率最大值-吸濕率最小值)*50％，結(jié)果見表7。方差分析結(jié)果見表8，顯示模型無統(tǒng)計學(xué)意義，各因素也無顯著性影響。結(jié)合直觀分析方法，確定三因素對出粉率的影響順序依次為a(羥丙基纖維素)>b(糊精)>c(可溶性淀粉)；各因素最優(yōu)水平為a2b2c3，可溶性淀粉的影響最小，c3與c2差距甚微，綜合考慮節(jié)約輔料成本及減少服用量的原則選定輔料條件為a2b2c2即：每付加入羥丙纖維素1％、糊精1％及可溶性淀粉1％。表7輔料正交試驗(yàn)結(jié)果表表8輔料方差分析結(jié)果1.2儀器參數(shù)優(yōu)選：采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計法對噴霧干燥儀器進(jìn)液速度、霧化溫度及霧化壓力三關(guān)鍵指標(biāo)進(jìn)行優(yōu)選，參考文獻(xiàn)并結(jié)合以往經(jīng)驗(yàn)分別選擇三個因素的三個水平，按照l9(34)正交表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以出粉率為評價指標(biāo)，出粉率值以最大者為佳。實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析見表9、10。表9儀器參數(shù)正交試驗(yàn)結(jié)果表10儀器參數(shù)正交試驗(yàn)方差分析結(jié)果方差分析顯示，模型有統(tǒng)計學(xué)意義，且因素a(進(jìn)液速度)與因素c(霧化壓力)對出粉率有極顯著影響。結(jié)合直觀分析方法，確定三因素對出粉率的影響順序依次為進(jìn)液速度>霧化壓力>霧化溫度；各因素最優(yōu)水平為a1b2c3。即進(jìn)液速度為20％，霧化溫度為130℃，霧化壓力為54mmhg。1.3驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：在優(yōu)選的輔料最佳配比及儀器最佳工藝參數(shù)條件下重復(fù)三批驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。即：儀器參數(shù)為進(jìn)液速度為20％，霧化溫度為130℃，霧化壓力為54mmhg；輔料加入量為每290ml藥液中加入羥丙纖維素1.45g、糊精1.45g及可溶性淀粉1.45g。結(jié)果表明三批樣品重現(xiàn)性好，出粉率rsd在2％以內(nèi)，吸濕率rsd在5％以內(nèi)。三、制粒工藝研究采用單因素考察法考察了潤濕劑(乙醇)的體積分?jǐn)?shù)及其用量，以顆粒成型率作為評價指標(biāo)。結(jié)果以95％乙醇潤濕，用量為每g藥粉約0.6ml。實(shí)施例2用于治療急性濕熱性皮膚病的中藥組合物的顆粒劑的制備方法，步驟如下：取以下重量份的各原料：龍膽9份、黃芩9份、車前草12份、白茅根30份、生地黃15份、茯苓10份、板藍(lán)根15份、生石膏30份、甘草2.1份、滑石粉12.9份；龍膽、黃芩和車前草加12倍量的質(zhì)量濃度為70％乙醇水溶液，提取3次，每次1.5h，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，得到醇提物；白茅根、茯苓、生地黃、板藍(lán)根、生石膏、甘草和滑石粉加入8倍量水浸泡30分鐘后，提取3次，每次2h，得到水提物；將醇提物和水提物混合，濃縮至總藥材重量的1.5-3倍，優(yōu)選為2倍，得到濃縮液；濃縮液中加入羥丙纖維素、糊精和可溶性淀粉，羥丙纖維素、糊精和可溶性淀粉的添加量均為濃縮液重量的0.8％-1.2％，優(yōu)選為1％；噴霧干燥器中進(jìn)行干燥，噴霧干燥器干燥時，儀器進(jìn)液速度為20％，霧化溫度為130℃，霧化壓力為54mmhg；在干燥后得到的粉末中加入質(zhì)量濃度為95％的乙醇水溶液，潤濕粉末，搖擺式制粒，干燥即得。實(shí)施例3用于治療急性濕熱性皮膚病的中藥組合物的顆粒劑的制備方法，步驟如下：取以下重量份的各原料：龍膽8份、黃芩8份、車前草10份、白茅根25份、生地黃13份、茯苓8份、板藍(lán)根13份、生石膏25份、甘草1.5份、滑石粉9份；龍膽、黃芩和車前草加10倍量的質(zhì)量濃度為75％乙醇水溶液，提取4次，每次1h，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，得到醇提物；白茅根、茯苓、生地黃、板藍(lán)根、生石膏、甘草和滑石粉加入5倍量水浸泡20分鐘，提取2次，每次3h，得到所述水提物；將醇提物和水提物混合，濃縮至總藥材重量的1.5倍，得到濃縮液；濃縮液中加入羥丙纖維素、糊精和可溶性淀粉，羥丙纖維素、糊精和可溶性淀粉的添加量均為濃縮液重量的0.8％；噴霧干燥機(jī)中進(jìn)行干燥，噴霧干燥機(jī)干燥時，儀器進(jìn)液速度為18％，霧化溫度為130±5℃，霧化壓力為53mmhg；在干燥后得到的粉末中加入質(zhì)量濃度為95％的乙醇水溶液，潤濕粉末，搖擺式制粒，干燥即得。實(shí)施例4用于治療急性濕熱性皮膚病的中藥組合物的顆粒劑的制備方法，步驟如下：取以下重量份的各原料：龍膽10份、黃芩10份、車前草15份、白茅根35份、生地黃18份、茯苓12份、板藍(lán)根18份、生石膏35份、甘草2.5份、滑石粉15份；龍膽、黃芩和車前草加14倍量的質(zhì)量濃度為68％乙醇水溶液，提取2次，每次2h，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，得到醇提物；白茅根、茯苓、生地黃、板藍(lán)根、生石膏、甘草和滑石粉加入10倍量水浸泡1h，提取4次，每次1h，得到所述水提物；將醇提物和水提物混合，濃縮至總藥材重量的3倍，得到濃縮液；濃縮液中加入羥丙纖維素、糊精和可溶性淀粉，羥丙纖維素、糊精和可溶性淀粉的添加量均為濃縮液重量的1.2％；噴霧干燥器中進(jìn)行干燥，噴霧干燥器干燥時，儀器進(jìn)液速度為25％，霧化溫度為130±5℃，霧化壓力為55mmhg；在干燥后得到的粉末中加入質(zhì)量濃度為95％的乙醇水溶液，潤濕粉末，搖擺式制粒，干燥即得。實(shí)驗(yàn)例1以實(shí)施例2制得的顆粒劑進(jìn)行以下試驗(yàn)。動物實(shí)驗(yàn)1、對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響1.1實(shí)驗(yàn)動物：昆明種小鼠60只(雌雄各半)，體重18-22g。1.2實(shí)驗(yàn)分組：模型組、顆粒劑高劑量組、中劑量組、低劑量組、撲爾敏組(陽性對照)。每組雌雄各6只。1.3實(shí)驗(yàn)方法：模型組：給予0.4ml/只蒸餾水灌胃。連續(xù)6天。第7日，灌胃給予蒸餾水1小時后，右耳內(nèi)外側(cè)涂抹二甲苯20μl/只。陽性對照組：取藥品2片(8mg)超聲溶解，100ml定容，給藥濃度為1.8mg/kg，每天灌胃0.4ml/只，連續(xù)6天。第7日，灌胃1小時后，右耳內(nèi)外側(cè)涂抹二甲苯20μl/只。顆粒劑高劑量：顆粒中試樣品加水溶解調(diào)整濃度為2.16g/ml，每天灌胃0.4ml/只，連續(xù)6天。第7日，灌胃1小時后，右耳內(nèi)外側(cè)涂抹二甲苯20μl/只。顆粒劑中劑量：顆粒中試樣品加水溶解調(diào)整濃度為1.08g/ml，每天灌胃0.4ml/只，連續(xù)6天。第7日，灌胃1小時后，右耳內(nèi)外側(cè)涂抹二甲苯20μl/只。顆粒劑低劑量：顆粒中試樣品加水溶解調(diào)整濃度為0.54g/ml，每天灌胃0.4ml/只，連續(xù)6天。第7日，灌胃1小時后，右耳內(nèi)外側(cè)涂抹二甲苯20μl/只。各組涂抹二甲苯50分鐘后，脫頸處死小鼠，沿耳廓基線剪下兩耳后，使用直徑7mm打孔器，分別在同一位置打下耳片，電子天平稱重，以兩片重量之差表示腫脹度，具體計算公式如下：腫脹度＝右耳片重量-左耳片重量。1.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)二甲苯刺激對小鼠耳腫脹的影響給予二甲苯刺激的鼠耳較未給予刺激的鼠耳紅腫、變大，說明耳腫脹模型造模成功。(2)各劑量組對小鼠耳腫脹的影響各劑量組的腫脹度較模型組均有抑制作用，其中治療效果低劑量組的好于高劑量組好于中劑量組，低劑量組效果與其它組有極顯著差異。具體見表1和圖1。表1顆粒劑對二甲苯所致小鼠耳腫脹度的影響組別腫脹度模型0.0119±0.0043低劑量0.0041±0.0031**中劑量0.0078±0.0066高劑量0.0073±0.0046*撲爾敏0.0100±0.00272、對小鼠ⅳ型變態(tài)反應(yīng)模型耳腫脹度的影響2.1實(shí)驗(yàn)動物：昆明種小鼠52只(雌雄各半)，體重18-22g。2.2實(shí)驗(yàn)分組：空白組、模型組、顆粒劑高劑量組、中劑量組、低劑量組、撲爾敏組(陽性對照)。空白組4只，其余每組8只。2.3實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)前一天將小鼠腹腔注射1％戊巴比妥鈉(0.08ml/10g)麻醉后，在小鼠背部中下部去毛，面積約2cm2。實(shí)驗(yàn)當(dāng)日和第二天于小鼠背部皮膚脫毛區(qū)涂以1％2,4-二硝基氟苯(dnfb)液(丙酮/麻油＝1:1)50μl致敏一次。同時，實(shí)驗(yàn)組口服給予相應(yīng)藥物，空白組和模型組給予等量的蒸餾水，每天1次，連續(xù)給藥7天。致敏第8天后涂1％dnfb液20μl于小鼠右耳內(nèi)側(cè)激發(fā)，3小時后灌胃給予相應(yīng)藥物。第9天灌胃給予相應(yīng)藥物3小時后處死。用耳腫打耳器取下直徑6.5mm的左右耳片在分析天平上稱量，以兩耳重量差為腫脹度作為遲發(fā)型超敏反應(yīng)指標(biāo)。2.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)dnfb刺激對小鼠耳腫脹的影響給予1％dnfb刺激的鼠耳較未給予刺激的鼠耳紅腫、變大，說明耳腫脹模型造模成功。(2)各劑量組對小鼠耳腫脹的影響各治療組的腫脹度及腫脹率較模型組均有抑制作用，其中治療效果高劑量的好于中劑量好于低劑量，但無統(tǒng)計學(xué)意義。具體見表2、3和圖2、3。表2對小鼠ⅳ型變態(tài)反應(yīng)模型耳腫脹度的影響組別腫脹度空白0.000829±0.000652模型0.002814±0.002137低劑量0.001414±0.001277中劑量0.001329±0.000776高劑量0.001043±0.000658撲爾敏0.001143±0.000966腫脹度＝模型耳－空白耳。表3對小鼠ⅳ型變態(tài)反應(yīng)模型耳腫脹率的影響組別腫脹率(％)空白7.387227±6.126197模型25.68267±19.97968低劑量12.87601±11.79919中劑量11.77103±7.385086高劑量11.05139±7.418063撲爾敏11.60279±10.37835腫脹率＝腫脹度/空白耳×100％。3、對4-氨基吡啶(4-ap)致小鼠瘙癢模型的影響3.1實(shí)驗(yàn)動物：icr小鼠60只(雌雄各半)，體重18-22g。3.2實(shí)驗(yàn)分組：空白組、模型組、顆粒劑高劑量組、中劑量組、低劑量組、撲爾敏組(陽性對照)，每組雌雄各5只。3.3藥物干預(yù)：(1)陽性對照組：取藥品2片(8mg)超聲溶解，100ml定容，給藥濃度為1.8mg/kg，每天灌胃0.4ml/只，每日1次。(2)高劑量：顆粒中試樣品加水溶解調(diào)整濃度為2.16g/ml，每天灌胃0.4ml/只，每日1次。(3)中劑量：顆粒中試樣品加水溶解調(diào)整濃度為1.08g/ml，每天灌胃0.4ml/只，每日1次。(4)低劑量：顆粒中試樣品加水溶解調(diào)整濃度為0.54g/ml，每天灌胃0.4ml/只，每日1次。3.4實(shí)驗(yàn)方法各組給予相應(yīng)藥物灌胃0.4ml/只，每日1次。模型組給予0.4ml/只蒸餾水灌胃。連續(xù)6天。第6日，將小鼠頸背部脫毛。第7日，各組給予相應(yīng)藥物/蒸餾水灌胃0.4ml/只，后頸背部皮下注射0.1mg/ml4-ap生理鹽水溶液0.1ml/10g體重，注射后立即觀察10分鐘舔體次數(shù)及前驅(qū)時間。3.5實(shí)驗(yàn)結(jié)果給予4-ap刺激后的小鼠均出現(xiàn)明顯的舔體反應(yīng)，各劑量組小鼠的舔體次數(shù)與前驅(qū)時間與模型組相比均有顯著差異，其中以高劑量組的調(diào)節(jié)效果最為明顯。具體見表4、5和圖4、5。表4對4-氨基吡啶誘發(fā)小鼠舔體反應(yīng)的影響表5對4-氨基吡啶誘發(fā)小鼠前驅(qū)時間的影響組別前驅(qū)時間模型組29.30±1.23低劑量組18.63±1.99中劑量組18.50±2.31高劑量組13.63±3.02撲爾敏5.40±1.36盡管已用具體實(shí)施例來說明和描述了本發(fā)明，然而應(yīng)意識到，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的情況下可以作出許多其它的更改和修改。因此，這意味著在所附權(quán)利要求中包括屬于本發(fā)明范圍內(nèi)的所有這些變化和修改。當(dāng)前第1頁12