本發(fā)明專利涉及一種中藥口服制劑及其制備方法，尤其涉及一種具有養(yǎng)腦安神、調(diào)五臟、和氣血功效的中藥口服制劑及制備方法。
背景技術(shù)：
補(bǔ)腦湯方(或稱長春補(bǔ)腦湯方，本申請中，二者可以通用)，具有養(yǎng)腦安神、調(diào)五臟、和氣血功效，用于腦力不足，或病后虛弱，頭目眩暈而痛，記憶力衰弱，失眠，多夢，精神不振，疲倦乏力，或煩躁易怒，脈象軟弱，舌質(zhì)淡紅，無胎，胃納及二便如常等癥。收載于名老中醫(yī)魏長春魏老經(jīng)驗(yàn)方劑集中，為魏老多年臨床經(jīng)驗(yàn)精華所聚。
本方采用黃精、玉竹(又名葳蕤)，以安五臟，填精髓，潤心肺，健脾胃，調(diào)和氣血，氣味和緩，甘平滋潤，補(bǔ)不礙邪；前人認(rèn)為可代參、芪、地黃；近年用于治療心力衰竭，取得一定效果。伍決明子，清頭目，散風(fēng)熱，又能柔肝益精，鎮(zhèn)潛通便；能降低血壓和血脂。配川芎，以活血行氣，祛風(fēng)止痛，兼鎮(zhèn)靜安神，味薄氣雄，性最流通，善于升散，可上達(dá)巔頂，下行血海，旁及四肢，走而不守，為血中氣藥，對心血管疾病心絞痛有一定療效。四味配合，雖無貴奇之品，看似平淡，實(shí)寓深意。其中決明子性降，川芎能升，升降合用，可引黃精、玉竹、共奏上寧頭腦，下安五臟，能使失調(diào)機(jī)能得以恢復(fù)正常。
現(xiàn)有技術(shù)中，補(bǔ)腦處方均以湯劑形式給藥，cn105194318a公開了一種復(fù)方中藥健腦湯，其以黃精、玉竹、決明子及川芎共水煎煮，然后分裝，得到湯藥，這種簡易工藝制備得成藥，除有效成分外，還含有大量的雜質(zhì)成分，如淀粉、蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)、鞣質(zhì)、樹脂和色素等，其分子量都在5萬以上，而具有生理活性成分的分子量多在10000以下，這些雜質(zhì)成分在長期的儲放過程中，非常容易集聚而產(chǎn)生大量的沉淀，會產(chǎn)生澄清度下降、久置更為明顯，這嚴(yán)重影響了藥品的性狀及療效，而且，每次服用量大，患者順應(yīng)性差，制約了該產(chǎn)品的市場開拓。
口服液系指合劑以單劑量包裝者，是在湯劑、注射劑基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新劑型?？诜何樟酥兴幾⑸鋭┑墓に囂攸c(diǎn)，是將湯劑進(jìn)一步精制、濃縮、灌封、滅菌而得到的。生產(chǎn)質(zhì)量合格而又保證療效的口服液，合適的工藝為其關(guān)鍵，而對于傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝，如水提醇沉或醇提水沉，雖然其能除掉部分雜質(zhì)成分，但依然有部分大分子物質(zhì)以凝膠狀的極微絮狀或超細(xì)微粒存于溶液中，這些膠體分散物，在溶液系統(tǒng)的環(huán)境條件改變時(shí)(如溫度變化)，容易因久置陳華而重新集聚，出現(xiàn)可見的沉淀，影響口服液的澄明度及療效。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種補(bǔ)腦口服液，所述口服液由原料藥黃精、玉竹、決明子、川芎及可藥用輔料助溶劑和防腐劑制成，所述原料藥黃精、玉竹、決明子及川芎的重量配比為10:10:3:1，如黃精30重量份、玉竹30重量份、決明子9重量份、川芎3重量份，所述的黃精、玉竹，優(yōu)選為炮制后的制黃精、制玉竹。
本發(fā)明中，其中所述助溶劑占最終口服液的量為0.1％～1％(v/v)，如可以是吐溫類、十二烷基磺酸鈉類；防腐劑占最終口服液的量為0.1％～1％(w/v)，防腐劑可以是選自山梨酸鉀、對羥基苯甲酸類、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯類等，優(yōu)選為山梨酸鉀。
本發(fā)明的再一目的在于提供一種制備本發(fā)明所述補(bǔ)腦口服液有效部位的制備方法，包括：(1)：提取黃精、玉竹和決明子原料藥中以多糖為主要成分的有效部位；(2)：提取川芎中含川芎嗪成分的有效部位；(3)合并上述兩步所得有效部位。
所述有效部位的制備方法，更為具體地，包括：(1)所述黃精、玉竹和決明子原料藥的有效部位的提取方式為將重量份的黃精、玉竹及決明子藥材混合，經(jīng)水提、脫色后，提取液采用醇沉方式處理，所得上清醇提液再經(jīng)7000-3萬膜進(jìn)行超濾處理，濾過孔徑溶液部分濃縮，干燥或不干燥，得有效部位；(2)所述川芎中含川芎嗪成分的有效部位的提取方式為，將重量份的川芎用乙醇提取，取乙醇提取液，濃縮后，干燥或不干燥，得川芎有效部位；(3)合并上兩步有效部位得長春補(bǔ)腦口服液有效部位。
所述有效部位制備過程中，脫色方式為在水提濾液中加入活性炭進(jìn)行脫色，活性炭的用量為提取濾液的1％-5％，所述醇沉后的藥液中乙醇的濃度為40％-70％，優(yōu)選為50％-60％；所述含川芎嗪的有效部位的提取方式是以乙醇為溶媒，采用索氏提取器進(jìn)行提取。更為優(yōu)選的是，在各優(yōu)效部位提取之前，藥材先經(jīng)過各自提取溶媒浸泡處理，浸泡時(shí)間為12-36小時(shí)。
本發(fā)明的再一目的在于提供一種制備本發(fā)明所述補(bǔ)腦口服液的制備方法，所述方法包括藥材粉碎、藥液提取、脫色、濃縮、醇沉除雜、超濾、進(jìn)一步濃縮、配液、灌裝等步驟。
進(jìn)一步地，所述口服液按如下方法制備得到：
(1)按重量比稱取原料藥，并分別將藥材粉碎成細(xì)顆粒；
(2)水提：將黃精、玉竹、決明子混合，以水提取，過濾，取濾液，備用；
(3)川芎以乙醇為提取溶媒進(jìn)行提取，過濾，濾液濃縮，備用；
(4)脫色：在步驟(2)所得水提液中，加入活性炭，充分?jǐn)嚢?，靜置過濾，活性炭以水洗，合并濾液；
(5)濃縮：步驟(4)所得濾液濃縮，備用；
(6)醇沉：濃縮液中加入乙醇使含醇量40％-70％，并不斷攪拌，過濾，取濾液；
(7)超濾：將步驟(6)所得濾液經(jīng)截留分子量為7000-3萬的中空纖維膜超濾，收集濾過孔徑溶液部分；
(8)濃縮：將步驟(7)收集得到的濾過液減壓濃縮至無醇，得濃縮液，備用；
(9)配液：將步驟(8)的濃縮水提液與川芎提取物混勻，加入助溶劑，40℃-70℃溫水浴攪拌均勻至液面無油滴，加入防腐劑，定容、分裝、滅菌即得口服液。
具體地，本發(fā)明所述補(bǔ)腦口服液的制備方法包括如下步驟：
(1)按重量比稱取原料藥，并分別將藥材粉碎成細(xì)顆粒；
(2)水提：將黃精、玉竹、決明子混合，以水提取1-4次，過濾，合并水提取液，備用；
(3)川芎以乙醇為提取溶媒，采用索氏提取法提取至回流液基本澄清，提取液濃縮至無明顯乙醇味，得油狀物，備用；
(4)脫色：在步驟(2)所得水提液中，加入1％-5％(w/v)的活性炭，充分?jǐn)嚢?，靜置30-60分鐘，過濾，活性炭以水洗，合并濾液；
(5)濃縮：步驟(4)所得濾液濃縮至生藥量1-3倍(v/w)；
(6)醇沉：濃縮液中加入乙醇使含醇量40％-70％，并不斷攪拌，靜置12-24小時(shí)，過濾，取濾液；
(7)超濾：將步驟(6)所得濾液經(jīng)截留分子量為10000的中空纖維膜超濾，收集分子量小于10000的濾過部分；
(8)濃縮：將步驟(7)收集得到的濾過液減壓濃縮至生藥量的2/5～4/5(v/w)；
(9)配液：將步驟(8)的濃縮水提液與川芎提取物混勻，加入助溶劑吐溫-80，40℃-70℃溫水浴攪拌均勻至液面無油滴，加入防腐劑山梨酸鉀、矯味劑甜菊糖，定容、分裝、滅菌即得口服液。
在步驟(2)進(jìn)行水提時(shí)，提取前對黃精、玉竹及決明子進(jìn)行水浸泡處理，浸泡時(shí)間為12-36小時(shí)，水提時(shí)可以采用水浸提、煎煮提取、回流提取等方式，提取次數(shù)為1-4次，優(yōu)選為2-3次，每次提取時(shí)水的用量為藥材重量的2-10倍(v/w)，如第一次提取時(shí)可以水用量多些，如可以是10倍，第二次水用量可以降低，如可以是5倍，第三次可以進(jìn)一步降低，如可以是2倍；同樣，在對川芎進(jìn)行索氏提取之前，進(jìn)一步包括用乙醇浸泡川芎，浸泡時(shí)間為12-36小時(shí)，乙醇用量為川芎重量的8-10倍。
在進(jìn)行醇沉的步驟中，水提濃縮液中加入乙醇使溶液最終含醇量為30％-70％，優(yōu)選為40％-60％，醇沉?xí)r，主要以醇沉后所得上清液中總多糖的含量為考察指標(biāo)而進(jìn)行優(yōu)化選擇。
對醇沉后所得的上清液，經(jīng)中控纖維膜進(jìn)一步超濾，中控纖維膜優(yōu)選為截留分子量為3萬、優(yōu)選為25000，更優(yōu)選為20000、甚至更優(yōu)選為截留分子量為10000的膜，所述膜是耐有機(jī)溶劑的，至少是耐乙醇的，如可以是選自聚乙烯類樹脂、聚氯乙烯類樹脂、聚砜類樹脂等，這樣可以進(jìn)一步除去其中的大分子物質(zhì)，防止口服液在長期儲放過程中出現(xiàn)大量沉淀和黏壁的現(xiàn)象,提升產(chǎn)品的穩(wěn)定性。
在步驟(9)中吐溫-80的加入量為最終口服液的0.4％-0.6％(w/v)，防腐劑山梨酸鉀的加入量為口服液最終口服液量的0.2％-0.4％(w/v)。
本發(fā)明中，如未特別說明乙醇濃度，所述的乙醇可以是指95％的乙醇或無水乙醇。
本發(fā)明所得補(bǔ)腦口服液，質(zhì)量穩(wěn)定，長期儲放過程中幾乎沒有沉淀及黏壁現(xiàn)象產(chǎn)生，溶液依然保持澄清狀，各指標(biāo)有效成分含量變化不明顯，穩(wěn)定可靠，并且在大幅降低每次服用藥液體積量的情況下，依然至少可以保證湯劑的類似效果，某些效果上如對戊巴比妥納誘導(dǎo)的小鼠平均睡眠時(shí)間延長方面甚至要優(yōu)于安神補(bǔ)腦湯劑，這一方面大大提升了患者的順應(yīng)性，另一方面提升了產(chǎn)品的品質(zhì)。
附圖說明
圖1為標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
具體實(shí)施例
以下從具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)一步說明，需要說明的是，本發(fā)明實(shí)施例并不是為了限制本發(fā)明實(shí)施方式，在合理的范圍內(nèi)，對本發(fā)明的技術(shù)方案做出改變，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說顯而易見的，這些也在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
實(shí)施例1補(bǔ)腦口服液處方及制備
(1)稱取黃精300g，玉竹300g，決明子90g，川芎30g，粉碎，過10-14目篩；
(2)將黃精、玉竹及決明子混合，加入6000ml蒸餾水，浸泡24小時(shí)，回流提取2小時(shí)，過濾；濾渣繼續(xù)加入藥材3倍量(2000ml)蒸餾水，回流提取0.5小時(shí)，過濾，合并兩次濾液，備用；
(3)川芎以索氏提取器提取，至回流液基本澄清，索氏提取液部分濃縮至無醇?xì)馕?，得油狀物，備用?/p>
(4)往步驟(2)中所得水提取液中加入300g活性炭，充分?jǐn)嚢?，靜置30min，過濾，活性炭繼續(xù)用水洗滌，合并濾過液；
(5)將步驟(4)中活性炭處理后的濾液減壓濃縮至2000ml，加入乙醇使藥液含醇量為60％，過濾，取上清液；
(6)醇沉上清部分采用截留分子量為10000的聚乙烯類中空纖維膜進(jìn)行超濾處理，取超濾后的濾過液(即分子量小于10000的濾過部分)，濾過部分減壓濃縮至約350ml，備用；
(7)配液、定容：將350ml濃縮后的水提液與川芎提取物混合，加入2ml吐溫-80,60℃水浴中攪拌至液面無油滴，再加入1.2g山梨酸鉀，攪拌均勻，用蒸餾水定容至400ml，分裝成20瓶，并用封蓋機(jī)封蓋，沸水中滅菌30分鐘即得。
經(jīng)測定，所得口服液每毫升中總多糖含量為103.73mg(換算為無水葡萄糖后)。
實(shí)施例2補(bǔ)腦湯劑制備
按照對比文件cn105194318中的工藝，稱取黃精300g，玉竹300g，決明子90g，川芎30g，粉碎，過10-14目篩，并混合，加入藥材10倍量水，浸泡4小時(shí)候，水煎煮提取3次，第二次加500ml水，第三次加200ml水，過濾，合并濾液，濾液減壓濃縮至1200ml，靜置過夜，離心取上清液，上清液中分別加入0.5％的防腐劑山梨酸鉀、8％的矯味劑甜菊糖，攪拌均勻，分裝即得補(bǔ)腦湯劑。
實(shí)施例3補(bǔ)腦口服液醇沉工藝中醇濃度選擇
在實(shí)施例1步驟(5)所得2000ml濃縮后水提液中均分為五份樣品，每份20ml，分別依照乙醇體積比為30％、40％、50％、60％、70％進(jìn)行醇沉，靜置24小時(shí)后抽濾，測定濾液中總多糖含量，優(yōu)選出最佳配比。
靜置后的水提液經(jīng)過抽濾、超濾后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙醇，采用苯酚-濃硫酸法，利用紫外-可見分光光度儀，測定每份樣品中的總多糖含量，經(jīng)過換算，得到等體積醇沉樣品中的總多糖含量，具體實(shí)驗(yàn)過程如下：
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：
精密量取對照品溶液1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml，分別置50ml量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取上述各溶液2ml，置具塞試管中，分別加4％苯酚溶液lml,混勻，迅速加人硫酸7.0ml，搖勻，40℃水浴中保溫30分鐘，取出，置冰水浴中5分鐘，取出，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外-可見分光光度法,在490nm的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線參見附圖1。
曲線方程為：y＝0.00745x-0.0824
表1總多糖吸光度
旋蒸后的樣品溶液經(jīng)過稀釋500倍后量取2ml于具塞試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“加4％苯酚溶液lml”起,依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中無水葡萄糖的重量(mg)，計(jì)算，即得。
結(jié)果如下表：
表2.總多糖濃度
根據(jù)結(jié)果優(yōu)選出最佳醇沉乙醇百分體積比為60％。
實(shí)施例4補(bǔ)腦口服液穩(wěn)定性考察
高溫試驗(yàn)：分別取本發(fā)明工藝制備所得的補(bǔ)腦口服液，以及補(bǔ)腦湯劑，于(60±2)℃恒溫箱放置10d，分別于第0、5、10天取樣，考察其性狀，以及第10天后總多糖含量和川芎嗪含量變化，結(jié)果表明，本發(fā)明補(bǔ)腦口服液在高溫環(huán)境下，在第0、5、10天均未出現(xiàn)沉淀，溶液依然澄清狀態(tài)，無懸浮物，均一透明；而補(bǔ)腦湯劑在第5天開始，已經(jīng)出現(xiàn)部分顆粒狀沉淀，第10天更是有大量沉淀及少量黏壁現(xiàn)象。第10天后，以各成分起始濃度均為100％計(jì)，本發(fā)明補(bǔ)腦口服液中總多糖含量為起始濃度的約102.80％，川芎嗪的含量為起始濃度的99.42％(下降約0.58％)，高溫試驗(yàn)下主要指標(biāo)成分含量幾乎沒有變化，質(zhì)量穩(wěn)定；而補(bǔ)腦湯劑在第10天后，總多糖含量為起始濃度的76.24％(下降約23.76％)，川芎嗪的含量為起始濃度的85.78％(下降約14.22％)，指標(biāo)有效成分含量下降明顯。
加速試驗(yàn)：分別取本發(fā)明工藝制備所得的補(bǔ)腦口服液，以及補(bǔ)腦湯劑，放入溫度(40±2)℃、相對濕度75％的恒溫箱中，分別于第0、3及6個(gè)月取樣，觀察其性狀，以及第6個(gè)月后總多糖含量和川芎嗪含量變化。結(jié)果表明，本發(fā)明補(bǔ)腦口服液在加速試驗(yàn)條件下，三個(gè)后保持澄清狀態(tài)，未見沉淀和懸浮物，第6個(gè)月同樣未見沉淀和懸浮物，溶液澄清，均一透明；而補(bǔ)腦湯劑在第3個(gè)月即出現(xiàn)明顯的顆粒狀沉積，第6個(gè)月更是出現(xiàn)大量沉淀及顯著的黏壁現(xiàn)象。6個(gè)月后，以各成分起始濃度均為100％計(jì)，本發(fā)明補(bǔ)腦口服液中總多糖含量為起始濃度的約98.93％(下降約1.07％)，川芎嗪的含量為起始濃度的99.07(下降約0.93％)，高溫高濕試驗(yàn)下主要指標(biāo)成分含量幾乎沒有變化，質(zhì)量穩(wěn)定；而補(bǔ)腦湯劑在6個(gè)月后，總多糖含量為起始濃度的65.36％(下降約34.64％)，川芎嗪的含量為起始濃度的81.23％(下降約18.77％)，指標(biāo)有效成分含量下降更為明顯。
穩(wěn)定性試驗(yàn)表明，本發(fā)明補(bǔ)腦口服液無論是在高溫試驗(yàn)還是加速試驗(yàn)下，其外觀指標(biāo)、指標(biāo)有效成分含量變化情況均符合要求，本發(fā)明工藝制備得到的補(bǔ)腦口服液質(zhì)量穩(wěn)定，明顯要優(yōu)于補(bǔ)腦液湯劑。
實(shí)施例5補(bǔ)腦口服液對睡眠剝奪大叔腦內(nèi)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶影響
一氧化氮合酶(nos)試劑盒鉤子南京建成生化技術(shù)公司
約250g的雄性大鼠20只，分為4組，依此為正常對照組(灌胃生理鹽3ml/kg)、睡眠剝奪模型組(灌胃生理鹽水3ml/kg)、補(bǔ)腦口服液組(灌胃3ml/kg，折合生藥5.4g/kg)、以及補(bǔ)腦湯劑組(灌胃9ml/kg，折合生藥5.4g/kg)，每天1次，給藥2周后進(jìn)行試驗(yàn)造模，造模期間繼續(xù)給藥。
睡眠剝奪箱參考machado等(machadorb,hipolidedc,benedito-silvaaa,etal.sleepdeprivationinducedbythemodifiedmultipleplatformtechnique:quantificationofsleeplossandrecovery[j].brainres.2004,1004(1-2):45-51)的多站臺水環(huán)境法，水箱規(guī)格：127cm×44cm×44cm，其內(nèi)放置13個(gè)站臺，站臺高度20cm，上面直徑7cm。試驗(yàn)造模時(shí)以水面離站臺1cm，將大鼠放入睡眠箱，每組放入5只，正常對照組放在同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的籠內(nèi)。各組動物自由進(jìn)食和水，前后經(jīng)歷4d。睡眠剝奪后與上午9-11時(shí)，將大鼠以10％水合氯醛0.4mg/kg腹腔注射麻醉后處死，剝離腦組織并分離出前腦放在液氮罐中，置-80℃冰箱內(nèi)保存直至樣品處理。
inos活力測定：取前腦組織以生理鹽水勻漿，3000r/min離心10min，吸取上清，以lowry法進(jìn)行蛋白定量，其余步驟按nos試劑盒要求嚴(yán)格操作。
表3補(bǔ)腦口服液對睡眠剝奪大鼠前腦組織inos活力的影響
*p<0.05
睡眠剝奪大鼠前腦的inos活力比正常對照鼠顯著增高，從上表結(jié)果可以看出，補(bǔ)腦口服液和補(bǔ)腦湯劑也都可使睡眠剝奪大鼠前腦組織的inos活力明顯降低，口服液組與湯劑組間無差異，療效相當(dāng)，但給藥體積量卻明顯減少。
實(shí)施例6補(bǔ)腦液改善睡眠功能性試驗(yàn)
1試驗(yàn)動物及分組
spf級icr種♀小鼠，體重20-30g，飼養(yǎng)條件：屏障級動物房。動物房溫度20℃-22℃，相對濕度(50％-65％)。
2試驗(yàn)劑量
將36只小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)后按照體重隨機(jī)平均分成3組，即對照組和試驗(yàn)組，補(bǔ)腦口服液灌胃6ml/kg劑量(折合生藥10.8g/kg，相當(dāng)于人體推薦攝入量20ml/人/日的20倍)，補(bǔ)腦湯劑灌胃18ml/kg劑量(折合生藥10.8g/kg，相當(dāng)于人體推薦攝入量20ml/人/日的20倍)。每天灌胃一次，連續(xù)30d。對照組使用等體積蒸餾水灌胃。
3試驗(yàn)方法
3.1直接睡眠試驗(yàn)
觀測每組小鼠在給予補(bǔ)腦口服液后，有無睡眠癥狀(睡眠以翻正反射消失為指標(biāo))。
3.2延長戊巴比妥納睡眠時(shí)間試驗(yàn)
最后一次灌胃補(bǔ)腦口服液或蒸餾水30min后，對各組小鼠腹腔注射戊巴比妥納47mg/kg·bw，觀察并記錄注射后小鼠的睡眠(即失去翻正反射)持續(xù)時(shí)間。分別計(jì)算各組小鼠的平均睡眠時(shí)間。
3.3戊巴比妥納閾下劑量催眠試驗(yàn)
最后一次灌胃補(bǔ)腦口服液或蒸餾水30min后，按照32mg/kg·bw劑量給各組小鼠腹腔注射戊巴比妥納生理鹽水溶液，觀察注射后30min內(nèi)的入眠小鼠(以翻正反射消失超過1min為判斷入睡的標(biāo)準(zhǔn))。分別計(jì)算各組小鼠的睡眠發(fā)生率。
3.4巴比妥納睡眠潛伏期試驗(yàn)
最后一次灌胃補(bǔ)腦口服液或蒸餾水30min后給各組小鼠腹腔注射巴比妥納240mg/kg·bw，觀察并記錄注射后小鼠的入眠時(shí)間。分別計(jì)算各組小鼠的平均睡眠潛伏期(即入睡時(shí)間-注射巴比妥納時(shí)間)。
4數(shù)據(jù)分析
數(shù)據(jù)均采用minitab17進(jìn)行處理。睡眠發(fā)生率使用卡方檢驗(yàn)；睡眠時(shí)間和睡眠潛伏期使用方差分析做檢驗(yàn)，p＜0.05認(rèn)為數(shù)據(jù)存在顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
5試驗(yàn)結(jié)果
5.1補(bǔ)腦口服液對小鼠體重的影響
給予補(bǔ)腦口服液期間，小鼠體重變化情況如表4-表6。
表4小鼠體重變化(睡眠時(shí)間測定)(n＝4)
從表4數(shù)據(jù)可以看出，沒有服用口服液的小鼠中期體重變化率(中期體重-初始體重)/初始體重為31.93％；結(jié)束時(shí)的體重變化率(結(jié)束體重-初始體重)/初始體重為40.76％。然后分別計(jì)算不同劑型喂養(yǎng)的小鼠的體重變化率，得出如下結(jié)果：口服液組體重變化率29.33％和41.78％；湯劑組體重變化率27.83％和41.94％。分析可知兩種劑型基本上對小鼠體重沒有不利影響。
表5小鼠體重變化(入睡率測定)(n＝4)
從表5數(shù)據(jù)可以看出，沒有服用口服液的小鼠中期體重變化率(中期體重-初始體重)/初始體重為21.89％；結(jié)束時(shí)的體重變化率(結(jié)束體重-初始體重)/初始體重為38.20％。然后分別計(jì)算不同劑型喂養(yǎng)的小鼠的體重變化率，得出如下結(jié)果：口服液組體重變化率24.27％和35.92％；湯劑組體重變化率22.01％和37.32％，可知兩種不同劑型組小鼠體重與對照組體重變化均無差異，對小鼠體重?zé)o明顯影響。
表6小鼠體重變化(睡眠潛伏期測定)(n＝4)
從表6數(shù)據(jù)可以看出，沒有服用口服液的小鼠中期體重變化率(中期體重-初始體重)/初始體重為27.49％；結(jié)束時(shí)的體重變化率(結(jié)束體重-初始體重)/初始體重為40.55％。然后分別計(jì)算不同劑型喂養(yǎng)的小鼠的體重變化率，得出如下結(jié)果：口服液組體重變化率26.33％和38.43％；湯劑組體重變化率25.99％和37.55％，不同劑型組小鼠體重與對照組體重變化不大，對小鼠體重沒有顯著影響。
5.2補(bǔ)腦口服液對小鼠直接睡眠試驗(yàn)結(jié)果
在此條件下試驗(yàn)，各組動物在給予受試樣品后均無出現(xiàn)睡眠現(xiàn)象，即本試驗(yàn)樣品無直接睡眠作用。
5.3延長戊巴比妥納睡眠時(shí)間試驗(yàn)結(jié)果
表7補(bǔ)腦口服液對戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間的影響(n＝4)
注：*與對照組比較，p＜0.05。
從表7可以看出，補(bǔ)腦口服液和補(bǔ)腦湯劑組小鼠的平均睡眠時(shí)間與對照組比較，小鼠的睡眠時(shí)間均有不同程度增加，其中口服液組小鼠的睡眠時(shí)間與對照組比較有顯著增加(p﹤0.05),且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而且較湯劑組的睡眠時(shí)間也要明顯曾長，即補(bǔ)腦口服液組對戊巴比妥納誘導(dǎo)的小鼠平均睡眠時(shí)間延長作用，效果要優(yōu)于補(bǔ)腦湯劑組。
5.4戊巴比妥納閾下劑量催眠試驗(yàn)結(jié)果
小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉的劑量為27mg/kg·bw，結(jié)果如表8所示。
表8補(bǔ)腦口服液對閾下劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)睡眠發(fā)生的影響(n＝4)
注：*與對照組比較，p＜0.05。
從表8看出，補(bǔ)腦口服液和湯劑組小鼠的睡眠發(fā)生率與對照組相比均有顯著差異，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，即補(bǔ)腦口服液對低劑量戊巴比妥納誘導(dǎo)的小鼠睡眠發(fā)生率有明顯作用，口服液組要較湯劑組的睡眠發(fā)生率更高。
5.5巴比妥納睡眠潛伏期試驗(yàn)結(jié)果
小鼠腹腔注射巴比妥鈉的劑量為240mg/kg·bw，結(jié)果如表9所示。
表9補(bǔ)腦口服液對巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠的睡眠潛伏期的影響
通過表9可知，補(bǔ)腦口服液和湯劑組小鼠的平均睡眠潛伏時(shí)間與對照組比較均有縮短，口服液組睡眠潛伏時(shí)間縮短相對更為顯著。