本發(fā)明屬于干細(xì)胞
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種干細(xì)胞制劑及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：糖尿病足是指由于糖尿病血管病變、神經(jīng)病變及其感染等綜合因素，導(dǎo)致神經(jīng)性病變使得下肢保護(hù)功能減退，大血管和微血管病變使動(dòng)脈灌注不足致微循環(huán)障礙而引起足部疼痛、皮膚深潰瘍甚至肢體壞疽的疾病狀態(tài)。糖尿病足是糖尿病一種嚴(yán)重的并發(fā)癥，是糖尿病患者致殘，甚至致死的重要原因之一，不但給患者造成痛苦，而且使其增添了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。臨床上用于治療糖尿病足的方法有藥物治療、血管重建和介入手術(shù)，然而，糖尿病患者多年老體弱，?；加行哪X血管等疾病，不能耐受手術(shù)搭橋等刺激，且血管病變多累及小動(dòng)脈，部分患者缺乏遠(yuǎn)端動(dòng)脈流出道，不具備行血管搭橋和介入治療的條件。因此，目前糖尿病足的臨床治療仍然非常棘手，難以取得令人滿意的療效，常常導(dǎo)致截肢甚至危及病患生命。因此，臨床上迫切需要找到創(chuàng)傷小、易接受、療效好的新的治療方法。因此，迫切需要尋求一種輔助治療糖尿病足的制劑或方法。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種干細(xì)胞制劑及其制備方法和應(yīng)用，用于輔助治療糖尿病足，降低截肢率，改善患者的生活質(zhì)量。本發(fā)明的具體技術(shù)方案如下：本發(fā)明提供了一種干細(xì)胞制劑，包括：臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、人血白蛋白和富含血小板血漿。優(yōu)選的，所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞密度為4×106個(gè)/ml～8×106個(gè)/ml。優(yōu)選的，所述人血白蛋白的體積百分比濃度為10％。優(yōu)選的，所述富含血小板血漿的體積百分比濃度為20％～40％。優(yōu)選的，所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞為第四代至第六代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。優(yōu)選的，所述干細(xì)胞制劑為注射劑。優(yōu)選的，所述干細(xì)胞制劑的注射劑量為10ml/次。本發(fā)明還提供了一種上述干細(xì)胞制劑的制備方法，將臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、人血白蛋白和富含血小板血漿混合均勻，得到所述干細(xì)胞制劑。本發(fā)明還提供了上述干細(xì)胞制劑或上述制備方法得到的干細(xì)胞制劑在制備治療糖尿病足藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所提供的一種干細(xì)胞制劑，包括：臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、人血白蛋白和富含血小板血漿，各組分配伍合理、協(xié)同增效，促進(jìn)血管生長(zhǎng)和血液循環(huán)，促進(jìn)了糖尿病足的修復(fù)治療，改善患者的生活質(zhì)量。本發(fā)明采用臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞作為種子細(xì)胞，采集簡(jiǎn)單、容易獲得，而且免疫原性低，無倫理問題，對(duì)于糖尿病足患者具有重要意義。本發(fā)明所提供的制備方法，步驟操作簡(jiǎn)單，工藝優(yōu)化，可實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)。具體實(shí)施方式本發(fā)明提供了一種干細(xì)胞制劑及其制備方法和應(yīng)用，有助于降低截肢率，改善患者的生活質(zhì)量。本發(fā)明所提供的干細(xì)胞制劑包括：臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、人血白蛋白和富含血小板血漿。進(jìn)一步的，所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞密度優(yōu)選為4×106個(gè)/ml～8×106個(gè)/ml，更優(yōu)選為6×106個(gè)/ml。進(jìn)一步的，所述人血白蛋白的體積百分比濃度優(yōu)選為10％。進(jìn)一步的，所述富含血小板血漿的體積百分比濃度優(yōu)選為20％～40％，更優(yōu)選為30％。富含血小板血漿又名prp，是自體全血經(jīng)離心后得到的血小板濃縮物，含有大量生長(zhǎng)因子及蛋白質(zhì)，能促進(jìn)血管生長(zhǎng)，促進(jìn)血液循環(huán)。prp與富含血小板血漿協(xié)同作用，共同促進(jìn)了糖尿病足創(chuàng)面愈合，促進(jìn)患者康復(fù)，改善患者的生活質(zhì)量。進(jìn)一步的，所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞為第四代至第六代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。進(jìn)一步的，所述干細(xì)胞制劑為注射劑。本發(fā)明對(duì)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、人血白蛋白和富含血小板血漿的來源沒有特殊限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的即可，如市售來源的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、人血白蛋白和富含血小板血漿。其中，所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、人血白蛋白和富含血小板血漿也可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)制備方法制備。本發(fā)明還提供了一種上述干細(xì)胞制劑的制備方法，將臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、人血白蛋白和富含血小板血漿混合均勻，得到所述干細(xì)胞制劑。本發(fā)明還提供了上述干細(xì)胞制劑或通過上述制備方法得到的干細(xì)胞制劑在制備治療糖尿病足藥物中的應(yīng)用。進(jìn)一步的，所述干細(xì)胞制劑治療糖尿病足的注射劑量為10ml/次。下面將結(jié)合本發(fā)明具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例只是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行修改或者對(duì)部分技術(shù)特征進(jìn)行同等替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神，均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明保護(hù)的范圍中。實(shí)施例11、配方第四代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞4×106個(gè)/ml；人血白蛋白10vol％；富含血小板血漿(prp)20vol％。2、制備(1)采集臍帶樣本，去除臍帶上皮、靜脈膜和兩個(gè)動(dòng)脈，取華通氏膠，剪碎，然后置于培養(yǎng)皿中采用組織培養(yǎng)法進(jìn)行分離培養(yǎng)，培養(yǎng)基采用lonza完全培養(yǎng)基；待培養(yǎng)皿中爬出5處克隆時(shí)，去掉組織塊再加入lonza完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)；待培養(yǎng)至細(xì)胞數(shù)達(dá)到2×106個(gè)以上時(shí)進(jìn)行傳代培養(yǎng)，直至培養(yǎng)到p4代，收集細(xì)胞。將細(xì)胞用胰酶消化下來后采用lonza完全培養(yǎng)基終止消化，放入離心管用500g離心5分鐘，去除上清，加入pbs重懸繼續(xù)離心，重復(fù)一遍。然后將細(xì)胞沉淀采用5mlpbs和2ml人血白蛋白進(jìn)行重懸，再用50μm濾網(wǎng)過濾，收集濾液。(2)抽取糖尿病患者的外周血10ml，350g離心10min后吸取血漿層，裝入新的離心管，再500g離心5分鐘后直接把上清導(dǎo)入到新的離心管中，繼續(xù)采用1300g離心，離心完后只留取離心管底部的3mlprp，將它收集起來。(3)將步驟(1)中收集的濾液和步驟(2)中收集的prp充分混勻，得到用于治療糖尿病足的干細(xì)胞制劑。實(shí)施例21、配方第五代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞6×106個(gè)/ml；人血白蛋白10vol％；富含血小板血漿(prp)30vol％。2、制備其制備方法同實(shí)施例1。實(shí)施例31、配方第六代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞8×106個(gè)/ml；人血白蛋白10vol％；富含血小板血漿(prp)40vol％。2、制備其制備方法同實(shí)施例1。實(shí)施例4隨機(jī)選取80例糖尿病患者，將患者隨機(jī)分為4組，其中一組為對(duì)照組，另外3組設(shè)為實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組采用胰島素注射治療，實(shí)驗(yàn)組分別采用實(shí)施例1至實(shí)施例3所制備的干細(xì)胞制劑在糖尿病足患者的腳上多處均勻注射，注射劑量均為10ml/次，兩周一次，3周后觀察治療效果，4周后再觀察治療療效，5周后繼續(xù)觀察。表1為第3周的觀察結(jié)果，表2為第4周的觀察結(jié)果，表3為第5周的觀察結(jié)果。如表1-3的結(jié)果所示，對(duì)照組和3組實(shí)驗(yàn)組均呈現(xiàn)不同程度的好轉(zhuǎn)，其中實(shí)驗(yàn)組的痊愈人數(shù)和顯效人數(shù)均高于對(duì)照組，說明本發(fā)明所提供的干細(xì)胞制劑能有效促進(jìn)糖尿病足患者的糖尿病足病情。以下為評(píng)估指標(biāo)：顯效：4周內(nèi)創(chuàng)面縮小75％，新生肉芽組織大部分長(zhǎng)出，無炎性滲出液；有改善：4周內(nèi)創(chuàng)面縮小，新生肉芽組織部分長(zhǎng)出，炎性滲出液較少；無效：4周內(nèi)無創(chuàng)面縮小，無新生肉芽組織，炎性滲出液較多。表1無效有改善顯效對(duì)照組10141實(shí)施例14165實(shí)施例22167實(shí)施例34174表2無效有改善顯效對(duì)照組8152實(shí)施例101510實(shí)施例201312實(shí)施例30178表3無效有改善顯效對(duì)照組6145實(shí)施例10718實(shí)施例20520實(shí)施例30817當(dāng)前第1頁12