本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種奶牛的布魯氏菌病免疫試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

布魯氏菌病是由布魯氏菌引起的人獸共患慢性傳染病。布魯氏菌病在世界各地均有分布，每年因此造成的經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)數(shù)億美元，并且還對(duì)人類健康造成嚴(yán)重威脅。迄今為止，只有少數(shù)幾個(gè)國家基本上控制了本病的流行。由于該病可通過未經(jīng)消毒的牛奶、奶制品等感染人類，不僅會(huì)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，更會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的社會(huì)公共衛(wèi)生問題。因此，奶牛場布魯氏菌病的防控顯得尤為迫切和重要。

疫苗免疫是預(yù)防和控制布魯氏菌病的重要措施之一，選擇和使用有效的布魯氏菌病疫苗關(guān)系到布魯氏菌病防控的成效。傳統(tǒng)奶牛布魯氏菌病免疫以注射免疫為主，但是注射免疫對(duì)懷孕牲畜不安全，且免疫抗體在體內(nèi)存在的時(shí)間可長達(dá)18個(gè)月。

黏膜免疫是近年國際上布魯氏菌病免疫研究的一個(gè)焦點(diǎn)，黏膜免疫的優(yōu)點(diǎn)是免疫抗體持續(xù)時(shí)間短，利于布病監(jiān)測等綜合防控措施的開展，并且對(duì)懷孕牲畜的安全性也更高。另一方面黏膜免疫能夠有效模擬布魯氏菌入侵機(jī)體的方式。在奶牛布魯氏菌病免疫方面，世界各國都在采用點(diǎn)眼、口服、滴鼻等黏膜途徑免疫，而且以點(diǎn)眼免疫為多見。但是，由于上述黏膜部位或者是體表暴露部位，或者是易于與外界相通部位，存在免疫后疫苗活菌易于污染周邊環(huán)境、感染操作人員問題,且同時(shí)還存在有效成分流失的問題，尤其是奶牛點(diǎn)眼免疫由于眼睛部位的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，疫苗成分流失尤其嚴(yán)重。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明一個(gè)目的是提供一種用于布魯氏菌病疫苗免疫動(dòng)物的試劑盒。

本發(fā)明提供的試劑盒，其包括布魯氏菌病活疫苗和陰道噴注器；

所述陰道噴注器包括噴注器、針頭和可拆卸套管；所述針頭與所述噴注器的注藥管前部可拆卸連接，所述可拆卸套管套設(shè)于所述針頭上，且所述可拆卸套管通過其端部設(shè)置的軟塞與所述針頭的尖端部配合。

上述試劑盒中，所述套管近針頭端為圓頭。

上述試劑盒中，所述軟塞為梯形軟塞。

上述試劑盒中，所述針頭的長為5-10cm。

上述試劑盒中，所述噴注器包括依次連接的注藥管、注射腔、活塞、活塞桿和推手；

所述注藥管的側(cè)壁上設(shè)有兩端開口的針狀刺頭和單向進(jìn)氣閥，且所述針狀刺頭通過單向進(jìn)氣閥與所述注藥管連通，所述注藥管的后部連接注射腔的前部；

所述注射腔內(nèi)設(shè)有活塞，所述活塞通過活塞桿與所述推手連接，所述活塞桿上設(shè)有彈簧，所述彈簧上設(shè)有調(diào)節(jié)螺母，所述推手通過固定螺母與所述活塞桿固定連接，所述推手與所述固定螺母連接的桿體上設(shè)有相對(duì)位置的鉤環(huán)和手柄。

上述試劑盒中，所述試劑盒還包括記載有免疫方式的載體；所述免疫方式為動(dòng)物陰道免疫，且免疫的深度為動(dòng)物陰道口內(nèi)5-10cm處。

上述試劑盒中，所述布魯氏菌病活疫苗為布魯氏菌病活疫苗a19。

上述試劑盒中，所述動(dòng)物為家畜；

或所述動(dòng)物為家畜，所述家畜為奶牛；

或所述動(dòng)物為家畜，所述家畜為奶牛，所述免疫的深度為動(dòng)物陰道口內(nèi)5-10cm。

上述的試劑盒中的所述布魯氏菌病活疫苗和所述陰道噴注器在布魯氏菌病疫苗免疫動(dòng)物中的應(yīng)用也是本發(fā)明保護(hù)的范圍。

上述應(yīng)用中，所述動(dòng)物為家畜；

或所述動(dòng)物為家畜，所述家畜為奶牛。

本發(fā)明的試驗(yàn)證明，本發(fā)明將布魯氏菌病疫苗進(jìn)行奶牛陰道免疫，陰道不屬于體表暴露部位,疫苗不易流失,生物利用度高,且同時(shí)提高了免疫的安全性。由于奶牛陰道口是閉合的，當(dāng)在陰道口內(nèi)免疫后，布魯氏菌病疫苗不會(huì)流出陰道，能被陰道黏膜全部有效吸收而產(chǎn)生良好免疫效果，提高了免疫的安全性和生物利用度，而且免疫抗體的消長規(guī)律與其他黏膜免疫途徑一致，有利于監(jiān)測等布魯氏菌病綜合防控措施的開展，是一種良好的奶牛布魯氏菌病黏膜免疫新方法。因而，奶牛陰道免疫作為布魯氏菌病疫苗黏膜免疫的一種途徑，既有黏膜免疫的效果，又避免了其它黏膜途徑呈現(xiàn)的擴(kuò)散至周邊環(huán)境的可能性和有效成分流失的問題，是一種較為理想的黏膜免疫途徑。

附圖說明

圖1為本發(fā)明專用陰道噴注器結(jié)構(gòu)圖；

1、梯形軟塞；2、一次性套管；3、針頭；4、注藥管；5、針狀刺頭；6、單向進(jìn)氣閥；7、注射腔；8、活塞；9、彈簧；10、活塞桿11、調(diào)節(jié)螺母；12、固定螺母；13、鉤環(huán)；14、手柄；15、推手。

圖2為使用a19疫苗對(duì)奶牛進(jìn)行陰道免疫、口腔噴注、點(diǎn)眼、注射免疫后在免疫后7天、15天、30天、60天、90天奶?？贵w效價(jià)變化規(guī)律。

具體實(shí)施方式

下述實(shí)施例中所使用的試驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。

下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。

下面結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明。

實(shí)施例1、專用陰道噴注器

一、專用陰道噴注器的結(jié)構(gòu)

如圖1所示，陰道噴注器包括噴注器、針頭3和可拆卸套管2；針頭與噴注器的注藥管前部可拆卸連接，可拆卸套管套(圓頭一次性套管)設(shè)于針頭上，且可拆卸套管通過其端部設(shè)置的軟塞1(保護(hù)針頭)與針頭的尖端部配合。套管近針頭端為圓頭。軟塞為梯形軟塞。針頭的長為10cm直徑1um，可拆卸套管的長度為長為10cm直徑4um。

上述噴注器采用公開號(hào)為105213064a的專利申請(qǐng)公開的噴注器主體部分，具體如下：

噴注器包括依次連接的注藥管4、注射腔7、活塞8、活塞桿10和推手15；

注藥管4的前部連接可拆卸針頭3，注藥管4的側(cè)壁上設(shè)有兩端開口的針狀刺頭5和單向進(jìn)氣閥6，且針狀刺頭通過單向進(jìn)氣閥與注藥管連通；注藥管4的后部連接注射腔7的前部，注射腔內(nèi)設(shè)有活塞8，活塞8通過活塞桿10與推手15連接，活塞桿10上設(shè)有彈簧9，彈簧與調(diào)節(jié)螺母11(控制注射量)相連，推手15通過固定螺母12與活塞桿10固定連接，推手15與固定螺母12連接的桿體上設(shè)有相對(duì)位置的鉤環(huán)13和手柄14，方便著力。

實(shí)施例2、奶牛的布魯氏菌病免疫

使用布魯氏菌病活疫苗a19(購自中牧股份有限公司，批號(hào)1602001)對(duì)奶牛按下述方法進(jìn)行免疫

免疫組設(shè)定：設(shè)四個(gè)試驗(yàn)組，a組(點(diǎn)眼組)、b組(口腔噴注組)、c組(肌肉注射組)、d組(陰道免疫組)，每組各20頭奶牛。設(shè)一個(gè)陰性對(duì)照組：四種免疫方式各5頭，共20頭，使用生理鹽水替代疫苗作為陰性對(duì)照。

免疫劑量：所有途徑的疫苗免疫劑量均為疫苗使用劑量一頭份(600億)，1ml/頭份。

免疫方法：

1.點(diǎn)眼方法：按常規(guī)方法進(jìn)行。即用無針頭的注射器在奶牛眼部滴注一頭份疫苗。

2.口腔噴注方法：按常規(guī)方法進(jìn)行。即用無針頭的注射器在奶牛口腔內(nèi)噴注一頭份疫苗。

3.陰道免疫方法：用實(shí)施例1的陰道噴注器在奶牛陰道口內(nèi)10cm免疫一頭份疫苗，具體免疫方法如下：

先用調(diào)節(jié)螺母調(diào)節(jié)好推注的疫苗劑量1ml,然后將稀釋好的疫苗瓶倒插入針狀刺頭，準(zhǔn)備完成后,右手食指勾住鉤環(huán),中指以下勾住手柄,手掌推動(dòng)活塞桿,使活塞在注射腔內(nèi)向前移動(dòng),將藥液通過注藥管到達(dá)一次性套管保護(hù)的針頭噴注到母牛的陰道內(nèi)，當(dāng)一次推藥后,受彈簧的作用推手自動(dòng)回位,在回位的同時(shí),又在注藥腔內(nèi)吸入定量的藥液,待下次噴注。免疫一次更換一個(gè)可拆卸套管

試驗(yàn)過程：按照上述免疫方式對(duì)各組奶牛進(jìn)行免疫，于免疫后的7天、15天、30天、60天、90天對(duì)奶牛進(jìn)行采血，離心取血清，使用微量試管凝集試驗(yàn)測定效價(jià)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2和表1所示：

表1

由上圖2可知陰道免疫組相對(duì)于點(diǎn)眼和口腔噴注組的抗體效價(jià)上升較快且比較均勻，相對(duì)于注射組來講奶?？贵w在90天的時(shí)候基本上消失，抗體存在時(shí)間較注射免疫短。

因此，可以將布魯氏菌病疫苗株、奶牛陰道免疫專用陰道噴注器以及本發(fā)明所述陰道免疫方法作為試劑盒組分。