本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
：：索拉非尼(sorafenib)是拜耳(bayer)和奧尼克斯(onyx)公司共同研發(fā)的口服多靶點(diǎn)抗癌藥，化學(xué)名為4-{4-[3(4-氯-3三氟甲基-苯基)-酰脲]苯氧基}-吡啶-2-羧酸甲胺，分子量為464.8，白色粉末，不溶于水。臨床用的是索拉非尼的甲苯磺酸鹽。由于索拉非尼溶解性能等原因(水中不溶，油中溶解度也較差)，生物利用度相當(dāng)?shù)?，受影響因素多，藥物?dòng)力學(xué)參數(shù)個(gè)體差異大(變異系數(shù)百分比范圍從36％到91％)。目前市場上使用的制劑為甲苯磺酸索拉非尼片(sorafenibtablet)，商品名為多吉美(naiver)。白蛋白作為一種多功能的藥物靶向載體，因能被腫瘤組織優(yōu)先攝取而顯示出獨(dú)特的靶向腫瘤特性，同時(shí)白蛋白作為一種內(nèi)源性物質(zhì)能夠避免免疫系統(tǒng)的攝取。由于其結(jié)構(gòu)域i和iii均有一個(gè)疏水性的袋狀結(jié)構(gòu)，能夠容納抗癌藥等多種結(jié)構(gòu)的疏水性化合物，并且白蛋白可通過非共價(jià)鍵與物質(zhì)緊密但可逆地結(jié)合，實(shí)現(xiàn)所運(yùn)載物質(zhì)在體內(nèi)的運(yùn)輸和在細(xì)胞表面的釋放，故白蛋白可認(rèn)為是疏水性藥物在體內(nèi)的天然載體。早在20世紀(jì)70年代已有制備白蛋白納米粒的相關(guān)報(bào)道，最初僅將其作為診斷劑，經(jīng)過近40年的發(fā)展，白蛋白納米粒已成為一種相對(duì)成熟的藥物傳遞系統(tǒng)。美國abraxisbioscienceinc.公司開發(fā)的紫杉醇人血清白蛋白納米粒注射劑(商品名taxol)獲得fda批準(zhǔn)上市，成為首個(gè)白蛋白納米粒給藥系統(tǒng)的成功案例。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明目的是提供一種白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑及其制備方法，該索拉非尼納米制劑與現(xiàn)有市售索拉非尼制劑截然不同，將索拉非尼制備成白蛋白結(jié)合型納米制劑，且其工藝可行性高、制劑優(yōu)勢(shì)明顯，以期提高索拉非尼的治療效果。本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：一種白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑，由活性成份索拉非尼和白蛋白制成。所述的一種白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑，所述活性成分索拉非尼可以替換為索拉非尼鹽、索拉非尼衍生物或其前藥的至少一種。所述的一種白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑，所述活性成份與白蛋白的質(zhì)量比為0.01:1～0.2:1；優(yōu)選的，索拉非尼：白蛋白＝0.05:1～0.1:1。所述的一種白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑，所述白蛋白選自人血清白蛋白、牛血清白蛋白及其他種類白蛋白中的一種或兩種以上組合。優(yōu)選為牛血清白蛋白。一種所述白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑的制備方法，包括以下步驟：1)將活性成分索拉非尼溶于有機(jī)溶劑中配制成油相；2)將白蛋白溶于水中配制成溶液，并用一種生物相容性酸調(diào)節(jié)該溶液的ph<6.0，并加入與步驟1)相同的有機(jī)溶劑將此溶液預(yù)飽和，制得水相；3)將水相與油相混合，高速剪切后，高壓均質(zhì)，再經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，即得白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑。所述的制備方法，還包括步驟4)將白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑經(jīng)冷凍干燥，即得白蛋白結(jié)合型索拉非尼凍干粉。所述的制備方法，步驟1)的有機(jī)溶劑為一種水不溶性有機(jī)溶劑與一種水溶性有機(jī)溶劑的混合；所述水不溶性有機(jī)溶劑為乙酸乙酯、氯仿、或二氯甲烷；所述水溶性有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇或丙酮；水不溶性有機(jī)溶劑與水溶性有機(jī)溶劑的體積比為1:1～15:1，優(yōu)選3:1～5:1。所述步驟2)中與步驟1)相同的有機(jī)溶劑為水不溶性有機(jī)溶劑。所述的制備方法，步驟1)油相中活性成分濃度為0.01g/ml～0.1g/ml；步驟2)水相中白蛋白濃度為0.01g/ml～0.1g/ml。所述的制備方法，步驟2)中生物相容性酸為鹽酸、磷酸、枸櫞酸等，優(yōu)選為鹽酸。所述的制備方法，步驟3)中高速剪切的條件為：速度5000～20000r/min，剪切時(shí)間2～20min。優(yōu)選的，剪切速度12000r/min，剪切時(shí)間5min。所述的制備方法，步驟3)中高壓均質(zhì)的條件為：6000～18000psi，1～20個(gè)循環(huán)。優(yōu)選的，高壓均質(zhì)的條件為：6000psi預(yù)均質(zhì)3～4個(gè)循環(huán)，16000psi均質(zhì)10～15個(gè)循環(huán)。所述的制備方法，步驟3)中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)條件為：溫度30℃，時(shí)間5min。本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明從索拉非尼的治療用途及其自身理化性質(zhì)出發(fā)，利用納米技術(shù)使索拉非尼與白蛋白結(jié)合，提供一種工藝可行性高、制劑優(yōu)勢(shì)明顯、與現(xiàn)有市售索拉非尼制劑截然不同的索拉非尼納米制劑及其制備方法，以期提高索拉非尼的治療效果。本發(fā)明的白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑，制備過程包括索拉非尼、有機(jī)相(包括疏水性有機(jī)溶劑和親水性有機(jī)溶劑的混合)、白蛋白、水，采用白蛋白結(jié)合納米微粒方法制備而成，白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑粒徑小于300nm。本制劑可被進(jìn)一步冷凍干燥制成凍干粉，由于白蛋白本身即為凍干保護(hù)劑，故凍干過程無需額外添加凍干保護(hù)劑。本發(fā)明通過將索拉非尼與白蛋白結(jié)合，顯著提高了其溶解性及生物利用度，因而可大大降低索拉非尼的給藥量從而降低其毒副作用。同時(shí)，由于本發(fā)明所述的納米制劑可通過注射給藥，因此可消除口服給藥過程中的出現(xiàn)的影響索拉非治療效果的因素，同時(shí)克服索拉非尼口服給藥中藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)個(gè)體差異大的缺點(diǎn)。同時(shí)因?yàn)榘椎鞍卓蓛?yōu)先被腫瘤組織攝取以及納米制劑在體內(nèi)所具有的epr效應(yīng)，都能促使白蛋白結(jié)合型索拉非尼在腫瘤組織的富集，這些都是白蛋白結(jié)合型索拉非尼較之現(xiàn)有的市售索拉非尼片劑的優(yōu)異之處。附圖說明圖1為實(shí)施例1白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑的透射電鏡照片。圖2為實(shí)施例1白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑、以及索拉非尼+牛血清白蛋白物理混合物的體外釋放曲線。具體實(shí)施方式下面將結(jié)合本發(fā)明中數(shù)個(gè)具體例，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行代表性的地描述：實(shí)施例1一種白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑制備方法如下：1)水相的制備：將牛血清白蛋白1.5g溶于30ml去離子水中，攪拌使其充分溶解，用0.1mol/l的鹽酸調(diào)節(jié)其ph至6.0以下，加入微量二氯甲烷預(yù)飽和，即得水相。2)油相的制備：將3ml二氯甲烷與1ml丙酮混合得有機(jī)相，0.06g索拉非尼溶于有機(jī)相，即得油相。3)剪切過程：在7000r/min剪切轉(zhuǎn)速下，將油相緩慢逐滴加入到水相中，加入完畢后將轉(zhuǎn)速升至12000r/min，繼續(xù)剪切9min，得到粗分散的初乳。4)高壓均質(zhì)過程：將粗分散的初乳6000psi預(yù)均質(zhì)4個(gè)循環(huán)，再12000psi均質(zhì)15個(gè)循環(huán)。5)旋蒸過程：于30℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)5min，除去有機(jī)溶劑，制備得到白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑，dls測得其粒徑為270nm。圖1為該實(shí)施例制備的白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑的透射電鏡照片，由圖1可知，采用本專利的制備工藝(乳化分散—高壓均質(zhì))所得的白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑，粒子外觀呈良好的球型、粒子完整、粒度分布較均一，粒徑大小跟dls結(jié)果一直。實(shí)施例2一種白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑1)水相的制備：將牛血清白蛋白0.8g溶于60ml去離子水中，攪拌使其充分溶解，用0.1mol/l的鹽酸調(diào)節(jié)其ph至6.0以下，加入微量氯仿使其預(yù)飽和，即得水相。2)油相的制備：將1.1ml氯仿與0.1ml乙醇混合得有機(jī)相，0.04g索拉非尼溶于有機(jī)相，即得油相。3)剪切過程：在7000r/min剪切轉(zhuǎn)速下，將油相緩慢逐滴加入到水相中，加入完畢后將轉(zhuǎn)速升至12000r/min剪切9min，得到粗分散的初乳。4)高壓均質(zhì)過程：將粗分散的初乳6000psi預(yù)均質(zhì)4個(gè)循環(huán)，12000psi均質(zhì)15個(gè)循環(huán)(此時(shí)體系出現(xiàn)明顯的藍(lán)色乳光)。5)旋蒸過程：于30℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)5min，除去有機(jī)溶劑，制備得到白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑，dls測得其粒徑為200nm。實(shí)施例3一種白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑1)水相的制備：將牛血清白蛋白0.8g溶于60ml去離子水中，攪拌使其充分溶解，用0.1mol/l的鹽酸調(diào)節(jié)其ph至6.0以下，加入微量氯仿使其預(yù)飽和，即得水相。2)油相的制備：將1.1ml氯仿與0.1ml乙醇混合得有機(jī)相，0.04g索拉非尼溶于有機(jī)相，即得油相。3)剪切過程：在7000r/min剪切轉(zhuǎn)速下，將油相緩慢逐滴加入到水相中，加入完畢后將轉(zhuǎn)速升至8500r/min剪切5min，得到粗分散的初乳。4)高壓均質(zhì)過程：將粗分散的初乳6000psi預(yù)均質(zhì)4個(gè)循環(huán)，12000psi均質(zhì)10個(gè)循環(huán)(此時(shí)體系出現(xiàn)明顯的藍(lán)色乳光)。5)旋蒸過程：于30℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)5min，除去有機(jī)溶劑，制備得到的白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑，dls測得其粒徑為260nm。實(shí)施例4一種白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑1)水相的制備：將牛血清白蛋白0.8g溶于60ml去離子水中，攪拌使其充分溶解，用0.1mol/l的鹽酸調(diào)節(jié)其ph至6.0以下，加入微量氯仿使其預(yù)飽和，即得水相。2)油相的制備：將1.0ml氯仿與0.2ml丙酮混合得有機(jī)相，0.04g索拉非尼溶于有機(jī)相，即得油相。3)剪切過程：在7000r/min剪切轉(zhuǎn)速下，將油相緩慢逐滴加入到水相中，加入完畢后將轉(zhuǎn)速升至12000r/min剪切5min，得到粗分散的初乳。4)高壓均質(zhì)過程：將粗分散的初乳6000psi預(yù)均質(zhì)4個(gè)循環(huán)，16000psi均質(zhì)15個(gè)循環(huán)(此時(shí)體系出現(xiàn)明顯的藍(lán)色乳光)。5)旋蒸過程：于30℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)5min，除去有機(jī)溶劑，制備得到白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑，dls測得其粒徑為170nm。由實(shí)施例1與實(shí)施例2可知，在剪切-均質(zhì)工藝相同的情況下，改變處方(如水相和有機(jī)相的配比)可改變終產(chǎn)品的粒徑；由實(shí)施例2與實(shí)施例3可知，在處方相同的情況下，改變剪切-均質(zhì)工藝條件，可改變終產(chǎn)品的粒徑，大量實(shí)驗(yàn)表明：粒徑隨剪切時(shí)間的延長呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢(shì)，隨均質(zhì)壓力的升高和均質(zhì)次數(shù)的增加呈現(xiàn)降低趨勢(shì)。根據(jù)索拉非尼的治療用途(主要用于治療肝癌)，以及納米制劑的粒徑對(duì)其epr效應(yīng)的影響，本專利優(yōu)選實(shí)施例4(粒徑170nm)。顯然，以上所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明的原理及思路，本領(lǐng)域技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下所獲得的所有其他實(shí)施例(比如改變各有機(jī)相的組合方式，或者微調(diào)了工藝過程中剪切-均質(zhì)的時(shí)間等)，都應(yīng)屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。應(yīng)用例實(shí)施例1獲得的白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑和索拉非尼+牛血清白蛋白物理混合物的體外釋放曲線如圖2(n＝3，釋放介質(zhì)：0.5％吐溫-80，ph＝7.4)。由圖2可見，白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑(sfb-bsa-nps)較同等劑量的索拉非尼+牛血清白蛋白物理混合物(sfb+bsa)釋放前期釋放速度大致相同，從9h取樣點(diǎn)開始，sfb-bsa-nps比sfb+bsa物理混合物釋放速度明顯變快，且前者最終釋放較后者更加完全，且前者無明顯突釋現(xiàn)象，表明白蛋白結(jié)合型索拉非尼納米制劑能顯著提高藥物的釋放速度及增加體內(nèi)生物利用度。當(dāng)前第1頁12當(dāng)前第1頁12