本發(fā)明涉及一種石斛和黃精膏滋劑的制備方法。

背景技術(shù)：

我國傳統(tǒng)的名貴中草藥石斛、黃精的藥用歷史悠久。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為石斛具有補五臟虛勞羸瘦、強陰、久服厚腸胃功效；黃精具有養(yǎng)陰潤肺；補脾益氣，滋腎填精功效。兩藥均為滋陰藥，但治病側(cè)重點不同，聯(lián)用具有藥效協(xié)同增強作用。現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)研究表明，從石斛、黃精中分離出來的石斛多糖、黃精多糖的藥效成分，具有廣泛的藥理活性，對預(yù)防腫瘤、免疫缺陷等多種疾病具有防治效果。

研究顯示，天然的石斛多糖分子量在40萬左右，表觀結(jié)構(gòu)分析石斛多糖化合物主要由葡萄糖、甘露糖以不同鍵位連接而成。黃精多糖分子量1萬左右，初步結(jié)構(gòu)分析表明黃精多糖主要葡萄糖、半乳糖、甘露糖、果糖以不同鍵連接而成。

在提取石斛多糖時由常規(guī)水提醇沉法中所得多糖含量在80%左右，含有淀粉、蛋白質(zhì)、灰分，淀粉類多糖藥理活性甚微。高純度高活性石斛多糖很多報道主要是通過有機溶劑脫蛋白而得，很難用于實際生產(chǎn)。高純度多糖在實際生產(chǎn)中技術(shù)瓶頸較多：石斛粘性強導(dǎo)致有效成分溶出難；石斛多糖主要為堿溶性多糖，分子量較大在水中溶解較慢；石斛多糖粗品灰分重金屬含量較大，去除較難，酸處理在去除部分鹽重金屬的同時也很容易破壞多糖結(jié)構(gòu)；常規(guī)有機溶劑氯仿、正丁醇脫蛋白很難用于工業(yè)化，還容易有機溶劑殘留，單一的蛋白質(zhì)沉淀劑、離子交換等均很難達到徹底脫除蛋白的目的；石斛多糖在傳統(tǒng)烤干，真空干燥過程中很難干燥，此外容易發(fā)生分子聚合導(dǎo)致藥性改變，水溶性大大降低。在制備高純度黃精多糖工藝中傳統(tǒng)的水提醇沉法會把一部分甾體皂苷類化合物和大部分膠類多糖沉淀下來，導(dǎo)致多糖純度不高，無效雜質(zhì)或無效生理活性多糖較多。為發(fā)揮石斛、黃精多糖藥理活性達到療效確切的臨床用藥要求，因此，長期以來高純度石斛多糖、黃精多糖的制備方法一直是研究熱點。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的提取缺陷，提供一種石斛和黃精膏滋劑的制備方法，該方法能有效去除雜質(zhì)、提高有效多糖的純度。

本發(fā)明方法通過以下具體步驟實現(xiàn)本發(fā)明目的：

（1）在石斛鮮條中加水粉碎，在粉碎漿料中加入石斛鮮條質(zhì)量0.2-0.5%的鏈霉素、石斛鮮條質(zhì)量2%-5%的復(fù)合酶，于40-50℃酶解2小時；

（2）在步驟（1）酶解產(chǎn)物中加入氫氧化鈉、硼氫化鈉或硼氘化鈉混勻，其中混合物中氫氧化鈉的質(zhì)量百分比濃度為0.1-0.2%，硼氫化鈉或硼氘化鈉的質(zhì)量百分比濃度為0.1-0.2%，然后在溫度90-100℃下熱回流提取2小時，反復(fù)提取2-3次，合并提取液和藥渣，離心得離心液；

（3）調(diào)節(jié)步驟（2）離心液ph值為7，然后50-60℃低溫真空濃縮至2倍生藥量，去沉淀得上清液；上清液凍融處理1-2次，每次凍融后離心去除沉淀，收集離心液；沉淀主要為色素、淀粉、蛋白；

（4）步驟（3）離心液使用納濾膜脫雜質(zhì)，所得截留液為粗多糖液，其中納濾膜的截留分子量為300-500道爾頓；納濾膜能起到脫鹽、脫單糖、脫水、脫色的作用；

（5）在步驟（4）粗多糖液中加入多糖液質(zhì)量4-5倍的醇沉淀多糖，得到多糖；多糖為膠狀，具粘著性；

（6）在步驟（5）多糖中加入多糖質(zhì)量3-4倍的純凈水，由于醇沉導(dǎo)致一定程度上的多糖改性降低了多糖的水溶性，再加入多糖質(zhì)量0.1%-0.5%的乙酸鋅或磷酸氫二鈉對多糖進行促溶，得到石斛多糖流浸膏，備用；

（7）在粉碎后的黃精粉中加入其質(zhì)量5-8倍的純凈水，在90-100℃提取2-3次，每次提取時間1.5-2小時，合并提取液過濾得黃精粗提液；

（8）將步驟（7）中黃精粗提液過非極性大孔樹脂，收集流出液；非極性大孔樹脂吸附雜質(zhì)，雜質(zhì)主要為黃精甾體皂苷、酚類等物質(zhì)；

（9）在步驟（8）流出液中加入流出液質(zhì)量0.05-0.1%的活性炭脫去脂溶性色素，混勻后濃縮液體至流出液體積的1/5后，采用鈦棒過濾器過濾；

（10）在步驟（9）濾液中加入乙醇進行2次醇沉，第一次醇沉濾液中乙醇體積濃度為40%，靜置處理8小時后，過濾去除沉淀，沉淀主要為蛋白質(zhì)、過膠、樹脂膠、鞣質(zhì)等大分子生理活性較低的物質(zhì)，取上清液；在上清液繼續(xù)加入乙醇使得上清液中乙醇體積濃度為90-95%，收集沉淀得黃精總多糖；

（11）將步驟（10）的黃精總多糖干燥得黃精多糖提取物；

（12）將石斛多糖流浸膏和黃精多糖提取物粉末按質(zhì)量比4:1-5:1混勻，按常規(guī)劑量加入防腐劑，混勻后滅菌封裝即得石斛和黃精膏滋劑。

所述步驟（1）在石斛鮮條中添加石斛鮮條質(zhì)量7-10倍的水。

所述步驟（1）中復(fù)合酶是果膠酶和酸性蛋白酶按質(zhì)量比3:2-3:1的比例混合制得。

所述步驟（3）中離心轉(zhuǎn)速為20000-25000轉(zhuǎn)/min。

所述步驟（5）中的醇為乙醇。

所述防腐劑為常規(guī)乙酸鈉、山梨酸鉀等防腐劑。

所述非極性大孔樹脂為苯乙烯非極性大孔樹脂d101、hpd100或ab-8。

本發(fā)明優(yōu)點和技術(shù)效果：

1、本發(fā)明方法采用鏈霉素、復(fù)合酶處理能有效酶解蛋白質(zhì)、果膠等雜質(zhì)使得生理活性石斛多糖有效溶出；采用堿和硼氫化物能高效富集堿性多糖；

2、本發(fā)明方法采用凍融去除石斛提取液里部分大分子淀粉類雜質(zhì)；

3、本發(fā)明方法采用納濾脫鹽、脫小分子物質(zhì)去除提取石斛時添加的化學(xué)試劑、灰分、小分子雜質(zhì)、部分色素等；使得提取物理石斛活性多糖含量大于90%；

4、本發(fā)明方法采有益人體健康的食品添加劑乙酸鋅或磷酸氫二鈉對多糖進行促溶，大大改善石斛堿溶性多糖被乙醇改性后復(fù)溶水溶解度低的問題；

5、本發(fā)明方法采用苯乙烯大孔吸附樹脂吸附黃精提取液里有機物、提高流出液里多糖含量、去除甾體、黃酮類等苦澀味雜質(zhì)，使得該天然提取物口感類似蜂蜜；

5、本發(fā)明方法采用分級醇沉去除乙?；z、樹脂膠等大分子低活性多糖，保留黃精活性多糖；

6、本發(fā)明方法簡單易操作，適于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)和市場推廣應(yīng)用。

具體實施方式

下面通過實施例對本發(fā)明做進一步詳細(xì)說明，但本發(fā)明保護范圍不局限于所述內(nèi)容。

實施例1：本石斛和黃精膏滋劑的制備方法，其特征在于步驟如下：

（1）在鐵皮石斛鮮條中加入石斛鮮條質(zhì)量7倍的水，采用組織搗碎機粉碎，在粉碎漿料中加入石斛鮮條質(zhì)量0.2%的鏈霉素、石斛鮮條質(zhì)量3%的復(fù)合酶（果膠酶和酸性蛋白酶按質(zhì)量比3:2的比例混合），然后在40℃下攪拌處理2小時；

（2）在步驟（1）酶解產(chǎn)物中加入氫氧化鈉、硼氫化鈉混勻，其中混合物中氫氧化鈉、硼氫化鈉的質(zhì)量百分比濃度均為0.1%，然后在溫度90℃下熱回流提取2小時，反復(fù)提取2次，合并提取液和藥渣于三足離心機中，離心得離心液；

（3）用稀鹽酸調(diào)節(jié)步驟（2）離心液ph值為7，然后50℃真空濃縮至2倍生藥量，去沉淀得上清液；上清液凍融處理1次，凍融后2萬轉(zhuǎn)/分鐘離心去除沉淀，收集離心液；

（4）步驟（3）離心液使用納濾膜脫雜質(zhì)，所得截留液為粗多糖液，其中納濾膜的截留分子量為300道爾頓；

（5）在步驟（4）粗多糖液中加入多糖液質(zhì)量4倍的乙醇沉淀多糖，得到多糖；

（6）在步驟（5）多糖中加入多糖質(zhì)量3倍的純凈水，再加入多糖質(zhì)量0.2%的乙酸鋅對多糖進行促溶，得到石斛多糖流浸膏，備用；

（7）在粉碎后的黃精粉中加入其質(zhì)量6倍的純凈水，在100℃提取2次，每次提取時間1.5小時，合并提取液過濾得黃精粗提液；

（8）將步驟（7）中黃精粗提液過非極性大孔樹脂d101，收集流出液；

（9）在步驟（8）流出液中加入流出液質(zhì)量0.05%的活性炭，混勻后濃縮液體至流出液體積的1/5后，采用鈦棒過濾器過濾；

（10）在步驟（9）濾液中加入乙醇進行2次醇沉，第一次醇沉濾液中乙醇體積濃度為40%，靜置處理8小時后，過濾去除沉淀，取上清液；在上清液繼續(xù)加入乙醇使得上清液中乙醇體積濃度為90%，收集沉淀得黃精總多糖；

（11）將步驟（10）的黃精總多糖干燥得黃精多糖提取物；

（12）將石斛多糖流浸膏和黃精多糖提取物粉末按質(zhì)量比4:1混勻，按質(zhì)量百分比0.003%劑量加入乙酸鈉，混勻后滅菌封裝即得石斛和黃精膏滋劑。

實施例2：本石斛和黃精膏滋劑的制備方法，其特征在于步驟如下：

（1）在鐵皮石斛鮮條中加入石斛鮮條質(zhì)量8倍的水，采用組織搗碎機粉碎，在粉碎漿料中加入石斛鮮條質(zhì)量0.3%的鏈霉素、石斛鮮條質(zhì)量5%的復(fù)合酶（果膠酶和酸性蛋白酶按質(zhì)量比3:1的比例混合），然后在50℃下攪拌處理2小時；

（2）在步驟（1）酶解產(chǎn)物中加入氫氧化鈉、硼氫化鈉混勻，其中混合物中氫氧化鈉、硼氫化鈉的質(zhì)量百分比濃度均為0.2%，然后在溫度100℃下熱回流提取2小時，反復(fù)提取2次，合并提取液和藥渣于三足離心機中，離心得離心液；

（3）用稀鹽酸調(diào)節(jié)步驟（2）離心液ph值為7，然后55℃真空濃縮至2倍生藥量，去沉淀得上清液；上清液凍融處理，凍融后2.5萬轉(zhuǎn)/分鐘離心去除沉淀，收集離心液，離心液再凍融處理1次，離心去除沉淀，收集液體；

（4）步驟（3）離心液使用納濾膜脫雜質(zhì)，所得截留液為粗多糖液，其中納濾膜的截留分子量為500道爾頓；

（5）在步驟（4）粗多糖液中加入多糖液質(zhì)量5倍的乙醇沉淀多糖，得到多糖；

（6）在步驟（5）多糖中加入多糖質(zhì)量4倍的純凈水，再加入多糖質(zhì)量0.3%的磷酸氫二鈉對多糖進行促溶，得到石斛多糖流浸膏，備用；

（7）在粉碎后的黃精粉中加入其質(zhì)量8倍的純凈水，在90℃提取3次，每次提取時間2小時，合并提取液過濾得黃精粗提液；

（8）將步驟（7）中黃精粗提液過非極性大孔樹脂hpd100，收集流出液；

（9）在步驟（8）流出液中加入流出液質(zhì)量0.1%的活性炭，混勻后濃縮液體至流出液體積的1/5后，采用鈦棒過濾器過濾；

（10）在步驟（9）濾液中加入乙醇進行2次醇沉，第一次醇沉濾液中乙醇體積濃度為40%，靜置處理8小時后，過濾去除沉淀，取上清液；在上清液繼續(xù)加入乙醇使得上清液中乙醇體積濃度為95%，收集沉淀得黃精總多糖；

（11）將步驟（10）的黃精總多糖干燥得黃精多糖提取物；

（12）將石斛多糖流浸膏和黃精多糖提取物粉末按質(zhì)量比5:1混勻，按質(zhì)量百分比0.003%劑量加入乙酸鈉，混勻后滅菌封裝即得石斛和黃精膏滋劑。

實施例3：本石斛和黃精膏滋劑的制備方法，其特征在于步驟如下：

（1）在鐵皮石斛鮮條中加入石斛鮮條質(zhì)量10倍的水，采用組織搗碎機粉碎，在粉碎漿料中加入石斛鮮條質(zhì)量0.5%的鏈霉素、石斛鮮條質(zhì)量4%的復(fù)合酶（果膠酶和酸性蛋白酶按質(zhì)量比2:1的比例混合），然后在45℃下攪拌處理2小時；

（2）在步驟（1）酶解產(chǎn)物中加入氫氧化鈉、硼氘化鈉混勻，其中混合物中氫氧化鈉、硼氘化鈉的質(zhì)量百分比濃度均為0.15%，然后在溫度95℃下熱回流提取2小時，反復(fù)提取2次，合并提取液和藥渣于三足離心機中，離心得離心液；

（3）用稀鹽酸調(diào)節(jié)步驟（2）離心液ph值為7，然后55℃真空濃縮至2倍生藥量，去沉淀得上清液；上清液凍融處理，凍融后2.2萬轉(zhuǎn)/分鐘離心去除沉淀，收集離心液，離心液再凍融處理1次，離心去除沉淀，收集液體；

（4）步驟（3）離心液使用納濾膜脫雜質(zhì)，所得截留液為粗多糖液，其中納濾膜的截留分子量為400道爾頓；

（5）在步驟（4）粗多糖液中加入多糖液質(zhì)量5倍的乙醇沉淀多糖，得到多糖；

（6）在步驟（5）多糖中加入多糖質(zhì)量4倍的純凈水，再加入多糖質(zhì)量0.3%的磷酸氫二鈉對多糖進行促溶，得到石斛多糖流浸膏，備用；

（7）在粉碎后的黃精粉中加入其質(zhì)量7倍的純凈水，在95℃提取2次，每次提取時間2小時，合并提取液過濾得黃精粗提液；

（8）將步驟（7）中黃精粗提液過非極性大孔樹脂ab-8，收集流出液；

（9）在步驟（8）流出液中加入流出液質(zhì)量0.08%的活性炭，混勻后濃縮液體至流出液體積的1/5后，采用鈦棒過濾器過濾；

（10）在步驟（9）濾液中加入乙醇進行2次醇沉，第一次醇沉濾液中乙醇體積濃度為40%，靜置處理8小時后，過濾去除沉淀，取上清液；在上清液繼續(xù)加入乙醇使得上清液中乙醇體積濃度為95%，收集沉淀得黃精總多糖；

（11）將步驟（10）的黃精總多糖干燥得黃精多糖提取物；

（12）將石斛多糖流浸膏和黃精多糖提取物粉末按質(zhì)量比5:1混勻，按質(zhì)量百分比0.003%劑量加入乙酸鈉，混勻后滅菌封裝即得石斛和黃精膏滋劑。