本發(fā)明屬于眼科疾病藥品制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及脂聯(lián)素(包括脂聯(lián)素成分以及脂聯(lián)素與胰島素混合液成分)在制備改善眼表狀態(tài)、治療角膜上皮及神經(jīng)損傷等制品中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

角膜含有豐富的神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)，為人體中神經(jīng)分布最密集的組織之一，對(duì)于冷、熱、痛、觸壓等都有敏銳的感覺。角膜神經(jīng)由三叉神經(jīng)眼支發(fā)出，從角膜基質(zhì)層進(jìn)入，分為基質(zhì)神經(jīng)叢、上皮下神經(jīng)叢和上皮內(nèi)神經(jīng)叢。角膜神經(jīng)損傷后會(huì)引起角膜知覺減退，導(dǎo)致神經(jīng)營養(yǎng)性角膜上皮病變，主要表現(xiàn)包括反復(fù)的上皮糜爛、上皮再生遲緩、持續(xù)性上皮缺損、潰瘍以及持續(xù)性炎癥反應(yīng)等。

當(dāng)今，隨著人們生活水平，生活方式的改變，糖尿病發(fā)病率在全球范圍內(nèi)呈現(xiàn)出越來越高的特點(diǎn)，嚴(yán)重影響人們的生活以及生存質(zhì)量。糖尿病周圍神經(jīng)病變(diabeticperipheralneuropathy，dpn)是糖尿病的最常見的慢性并發(fā)癥，約60％的患者會(huì)在糖尿病進(jìn)程中發(fā)生該種病變，其主要原因?yàn)殚L期的高血糖及由此導(dǎo)致的代謝障礙、微循環(huán)異常、神經(jīng)營養(yǎng)因子缺乏、氧化應(yīng)激自由基增多和自身免疫紊亂等。角膜神經(jīng)病變(diabeticneurotrophickeratopathy)屬于糖尿病周圍神經(jīng)病變的一種，長期的高血糖水平會(huì)使患者角膜上皮下神經(jīng)的神經(jīng)纖維長度、神經(jīng)分支密度及神經(jīng)曲折度出現(xiàn)明顯損害，導(dǎo)致角膜的營養(yǎng)與代謝發(fā)生障礙，是引起角膜病變反復(fù)發(fā)作、難以治療的根本原因。同時(shí)糖尿病患者，在接受其他眼部手術(shù)后，眼表狀態(tài)相比較于正?；颊?，更加容易出現(xiàn)其他并發(fā)癥狀：角膜上皮不愈合，干眼癥等。而臨床上以往并沒有對(duì)糖尿病患者的這些癥狀和需求過多重視與治療。有研究證實(shí)，部分神經(jīng)營養(yǎng)因子對(duì)神經(jīng)存在保護(hù)和修復(fù)作用，但是治療的重點(diǎn)多專注于視神經(jīng)、視網(wǎng)膜神經(jīng)等方面，對(duì)角膜神經(jīng)的損傷修復(fù)治療未見有詳細(xì)的報(bào)道。同時(shí)，單純神經(jīng)營養(yǎng)因子治療存在以下幾個(gè)不足：價(jià)格昂貴，提取困難；臨床應(yīng)用轉(zhuǎn)化率低。另外在給藥方式上也多以全身注射和局部玻璃體腔注射為主，因此在藥物劑量控制和藥物代謝速率方面很難做到特定部位藥物濃度精準(zhǔn)的把握，增加了藥物副作用的影響。目前運(yùn)用神經(jīng)因子對(duì)糖尿病的治療多集中于外周神經(jīng)的損傷修復(fù)治療，對(duì)于角膜組織中神經(jīng)纖維損傷修復(fù)的研究較少。針對(duì)以上特點(diǎn)，尋找到一種靶向性強(qiáng)、治療周期短、毒副作用小的藥物，將對(duì)臨床上治療糖尿病患者角膜神經(jīng)損傷修復(fù)等問題帶來重要福音。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是闡明脂聯(lián)素(adiponectin)和脂聯(lián)素/胰島素混合液(adiponectin/insulin)在促進(jìn)角膜上皮損傷及神經(jīng)損傷修復(fù)中的應(yīng)用，具體涉及adiponectin在制備眼科藥物及藥物組合物中的用途，可用于改善眼表狀態(tài)，促進(jìn)角膜上皮損傷及神經(jīng)損傷修復(fù)的治療等。其主要機(jī)理在于增強(qiáng)局部胰島素敏感性，增強(qiáng)p-akt、p-erk等通路，促進(jìn)細(xì)胞增殖。

本發(fā)明提供一種脂聯(lián)素(adiponectin)和脂聯(lián)素/胰島素混合液(adiponectin/insulin)的新用途，即在制備局部應(yīng)用治療角膜神經(jīng)修復(fù)制品中的應(yīng)用；

所述的制品為滴眼液或凝膠或眼膏，其中包含有藥理有效濃度的脂聯(lián)素(adiponectin)或脂聯(lián)素/胰島素混合液(adiponectin/insulin)成分；

上述滴眼液的濃度根據(jù)糖尿病角膜病變嚴(yán)重程度優(yōu)選adiponectin濃度為0.001-0.01％，insulin濃度為0.1-1iu/ml；

adiponectin和adiponectin/insulin混合劑可用于眼表角膜上皮損傷以及神經(jīng)損傷修復(fù)(主要為糖尿病角膜神經(jīng)病變)的治療。

本發(fā)明的有益效果在于：

1.本發(fā)明發(fā)現(xiàn)局部應(yīng)用adiponectin和adiponectin/insulin混合劑可以促進(jìn)小鼠的角膜上皮及神經(jīng)的修復(fù)；

2.首次報(bào)道了活體角膜局部應(yīng)用adiponectin滴眼液或adiponectin/insulin混合劑能夠顯著促進(jìn)糖尿病角膜上皮損傷修復(fù)以及改善神經(jīng)敏感度。

附圖說明

圖1：局部應(yīng)用adiponectin和adiponectin/insulin混合劑點(diǎn)眼對(duì)小鼠眼壓及角膜上皮的影響。

圖2：局部應(yīng)用adiponectin和adiponectin/insulin混合劑點(diǎn)眼對(duì)糖尿病小鼠淚液分泌的影響。

圖3：局部應(yīng)用adiponectin和adiponectin/insulin混合劑滴眼對(duì)小鼠角膜上皮以及神經(jīng)修復(fù)的影響。

具體實(shí)施方式

為使本發(fā)明實(shí)施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。顯然，所描述的實(shí)施例是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

本發(fā)明涉及的adiponectin是一種主要由脂肪細(xì)胞分泌的具有廣泛生物活性的激素物質(zhì)。在以往，盡管許多研究證實(shí)adiponectin在糖尿病患者血液以及組織含量降低，但其臨床應(yīng)用并未有較深進(jìn)展。有研究證實(shí)，脂聯(lián)素在促進(jìn)脂肪組織損傷愈合方面可能具有積極作用。

本發(fā)明首次詳細(xì)闡述了局部應(yīng)用adiponectin和adiponectin/insulin混合劑點(diǎn)眼可以在治療角膜病上皮及神經(jīng)損傷修復(fù)領(lǐng)域中的作用。在對(duì)正常以及糖尿病小鼠進(jìn)行的0.001-0.01％濃度的adiponectin以及adiponectin/insulin(insulin濃度為1iu/ml)混合劑局部應(yīng)用研究中，adiponectin和adiponectin/insulin混合劑能夠有效的促進(jìn)小鼠角膜上皮及神經(jīng)修復(fù)。

實(shí)施例1：局部應(yīng)用胰島素滴眼液對(duì)眼表對(duì)眼壓及角膜上皮的影響。

對(duì)糖尿病小鼠進(jìn)行局部adiponectin和adiponectin/insulin混合劑滴眼液點(diǎn)眼，每日四次，持續(xù)兩周。結(jié)果如圖1顯示，adiponectin(圖1a)和adiponectin/insulin混合劑(圖1b)滴眼后，小鼠角膜熒光素鈉染色陰性，提示角膜上皮無明顯損害。同時(shí)，眼壓檢測顯示與對(duì)照組無明顯差異(圖1c，p＞0.05)。

以上結(jié)果說明，局部應(yīng)用adiponectin和adiponectin/insulin混合劑不會(huì)對(duì)眼表和眼壓產(chǎn)生明顯不良影響。

實(shí)施例2：局部應(yīng)用adiponectin和adiponectin/insulin混合劑點(diǎn)眼對(duì)糖尿病小鼠淚液分泌的影響。

對(duì)糖尿病小鼠進(jìn)行局部adiponectin和adiponectin/insulin混合劑滴眼液點(diǎn)眼，每日四次，持續(xù)兩周。結(jié)果如圖2顯示，adiponectin和adiponectin/insulin混合劑滴眼后，治療組小鼠淚液分泌明顯增加(p＜0.05)。

以上結(jié)果說明，局部應(yīng)用adiponectin和adiponectin/insulin混合劑可以改善糖尿病小鼠眼表狀況，促進(jìn)淚液分泌。

實(shí)施例3：局部應(yīng)用adiponectin和adiponectin/insulin混合劑滴眼對(duì)小鼠角膜上皮以及神經(jīng)修復(fù)的影響。

該實(shí)驗(yàn)共分為正常對(duì)照組(生理鹽水點(diǎn)眼)，糖尿病對(duì)照組(生理鹽水點(diǎn)眼)，糖尿病局部應(yīng)用adiponectin組以及糖尿病局部應(yīng)用adiponectin/insulin混合劑組。各組小鼠每日點(diǎn)眼4次(adiponectin：0.01％濃度；insulin：1iu/ml)，對(duì)照組點(diǎn)用生理鹽水。點(diǎn)眼1周后，刮除角膜上皮(直徑2.75mm)，繼續(xù)點(diǎn)用相關(guān)滴眼液。熒光素鈉染色觀察記錄角膜上皮愈合情況。

刮除上皮后四組小鼠分別繼續(xù)用藥至2周。利用角膜知覺計(jì)檢測角膜神經(jīng)敏感度。由圖3a各組小鼠角膜上皮機(jī)械損傷48小時(shí)后愈合情況，圖3b角膜上皮缺損面積比和圖3c角膜神經(jīng)敏感度檢測統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以看出，局部應(yīng)用adiponectin和adiponectin/insulin混合劑組小鼠相比于糖尿病對(duì)照組小鼠，刮除角膜上皮后48小時(shí)愈合速度明顯加快(p＜0.05)。2周后，其神經(jīng)敏感度明顯高于對(duì)照組小鼠(p＜0.05)。

以上結(jié)果說明，局部應(yīng)用adiponectin和adiponectin/insulin混合劑滴眼能明顯促進(jìn)小鼠角膜上皮損傷修復(fù)以及基底層神經(jīng)和末梢神經(jīng)的再生。