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醋酸奧曲肽注射液藥物組合物和醋酸奧曲肽的制作方法

文檔序號(hào):12666867閱讀:471來(lái)源:國(guó)知局

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域,更具體地,本發(fā)明公開(kāi)了一種醋酸奧曲肽注射液藥物組合物和醋酸奧曲肽,以及該醋酸奧曲肽注射液藥物組合物的制法。本發(fā)明制備的醋酸奧曲肽注射液藥物組合物和醋酸奧曲肽具有優(yōu)異的性質(zhì)。



背景技術(shù):

醋酸奧曲肽(Octreotide Acetate)是由八個(gè)氨基酸組成的合成多肽,其化學(xué)名為:D-苯丙氨酰-L-半胱氨酰-L-苯丙氨酰-D-色氨酰-L-賴氨酰-L-蘇氨酰-N-[(1R,2R)-2-羥基-1-(羥甲基)丙基]-L-半胱氨酰胺環(huán)(2→7)-二硫鍵醋酸鹽,其英文化學(xué)名為:L-Cysteinamide,D-phenylalanyl-L-cysteinyl-L-phenylalanyl-D-tryptophyl-L-lysyl-L-threonyl-N-[2-hydroxy-1-(hydroxymethyl)propyl]-,cyclic(2→7)-disulfide;[R-(R*,R*)]acetate salt,CAS:83150-76-9,其化學(xué)結(jié)構(gòu)式和分子式、分子量分別為:

或者,其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為:

自1973年Brazeau等從羊下丘腦中分離出生長(zhǎng)抑素(Somatostatin,ST)以來(lái),對(duì)ST的產(chǎn)生、分布及生物活性作了大量研究,并測(cè)定了它的一級(jí)結(jié)構(gòu)。

隨著放射免疫檢測(cè)和免疫細(xì)胞化學(xué)的進(jìn)展,發(fā)現(xiàn)ST族激素在體內(nèi)廣泛分布。如中樞神經(jīng)系統(tǒng)、下丘腦、周圍神經(jīng)系統(tǒng)、胰島D細(xì)胞、胃腸道上皮腺上皮和軸突細(xì)胞等。在垂體前葉,ST抑制生長(zhǎng)激素和促甲狀腺激素的釋放。在胰腺,ST抑制胰島和胰高血糖素的分泌。ST對(duì)胃腸道系統(tǒng)影響廣泛,抑制激素,如胃泌素、胰泌素、血管活性腸肽和其它激素的釋放,抑制胃酸、胃蛋白酶的分泌,降低內(nèi)臟血流量和腸活動(dòng),降低碳水化合物吸收,增加大腸對(duì)水和電解質(zhì)的吸收。ST還具有細(xì)胞保護(hù)作用等。因而被認(rèn)為能夠用于治療某些胃腸道及外科疾病。但ST的體內(nèi)半衰期非常短,僅有2-3min,需連續(xù)靜注,并且ST無(wú)器官特異性,停藥后易引起生長(zhǎng)激素等過(guò)度分泌,長(zhǎng)期應(yīng)用ST可導(dǎo)致腸道吸收不良和葡萄糖耐受性降低。因此ST的臨床應(yīng)用一直受到限制。

在1982年,瑞士Sandoz藥廠(現(xiàn)為Novartis Co.)合成了新一代長(zhǎng)效型生長(zhǎng)抑素類似物醋酸奧曲肽(Octreotide,Sandostatin,SMS201-995,以下簡(jiǎn)稱奧曲肽)。它是一個(gè)以ST相同,并除去了ST中6個(gè)氨基酸。它可與廣泛存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)、垂體和胰腺β細(xì)胞等處的ST受體結(jié)合產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng),而且抑制生長(zhǎng)激素(GH)、胰島素、胰高血糖素、胃酸分泌均比ST強(qiáng),特異性也較高。同時(shí),由于1,4位L-氨基酸分別被相應(yīng)D-氨基酸取代,8位為氨基L醇,故奧曲肽不易被蛋白酶迅速水解,并延長(zhǎng)了體內(nèi)半衰期,t1/2為80-160min,使用時(shí)不需連續(xù)靜注。

因此,奧曲肽除具有ST類似物的抑制功能外,還具有下列特點(diǎn):

(1)對(duì)內(nèi)分泌的抑制作用更強(qiáng),對(duì)生長(zhǎng)激素,胰離糖素和胰島素的抑制作用分別是ST的45倍、11倍和1.3倍。

(2)半衰期長(zhǎng):皮下注射半衰期為2h。

(3)停藥后不發(fā)生反跳性高分泌。

所以?shī)W曲肽近年來(lái)被用于多種疾病的治療,且副作用相對(duì)減少,已廣泛應(yīng)用于消化道腫瘤、上消化道出血、急性胰腺炎、轉(zhuǎn)移性類癌、肢端肥大癥等病的治療。

奧曲肽于1988年在新西蘭首先上市,上市劑型為注射劑,1989年美國(guó)FDA批準(zhǔn)在美國(guó)上市。醋酸奧曲肽注射液,臨床使用可靜脈注射、皮下注射、靜脈滴注(滴注給藥時(shí)間可達(dá)12小時(shí)以上),其儲(chǔ)存方式為2~8℃,避光保存,在室溫中(20~30℃)可保存14天,由此可見(jiàn)醋酸奧曲肽溶液穩(wěn)定性是其產(chǎn)品質(zhì)量?jī)?yōu)劣的重要衡量標(biāo)準(zhǔn)。

有一些文獻(xiàn)公開(kāi)了醋酸奧曲肽的制備方法。例如,

CN103965291A(專利申請(qǐng)?zhí)?01410228795.1)公開(kāi)了奧曲肽、奧曲肽醋酸鹽的制備方法。該奧曲肽的制備方法包括下述步驟:采用高效液相反相色譜法將奧曲肽粗品溶液依次進(jìn)行反相純化、反相脫鹽,即可;高效液相反相色譜法的填料為苯乙烯-二乙烯基苯(PS-DVB)共聚物。本發(fā)明將反相純化和反相脫鹽聯(lián)用,設(shè)計(jì)出聚合物填料苯乙烯-二乙烯基苯的最新應(yīng)用,可以大批量制備奧曲肽和奧曲肽醋酸鹽。

CN103965291A(專利申請(qǐng)?zhí)?01010165270.X)公開(kāi)了一種采用固相合成法制備奧曲肽的方法,包括如下步驟:(1)、將N-芴甲氧羰基-O-叔丁基蘇氨醇連接到作為載體的樹(shù)脂上獲得N-芴甲氧羰基-O-叔丁基蘇氨醇樹(shù)脂;(2)、按照Fmoc/tBu固相多肽合成的方法,根據(jù)奧曲肽的序列,將保護(hù)氨基酸按C端至N端的順序逐個(gè)偶聯(lián)到步驟(1)所得樹(shù)脂上獲得奧曲肽八肽樹(shù)脂;(3)、使用裂解劑將八肽從所述奧曲肽八肽樹(shù)脂上切下,得到線性粗肽;(4)、步驟(3)所得線性粗肽經(jīng)氧化反應(yīng)形成二硫鍵,經(jīng)制備高效液相色譜純化即得所述奧曲肽,其特征在于:步驟(4)中,所述氧化反應(yīng)在pH=7.0~7.5以及氧化劑H2O2的存在下進(jìn)行,其中H2O2與線性粗肽的投料摩爾比為7~9∶1。據(jù)信該發(fā)明采用雙氧水來(lái)氧化線性粗肽獲得奧曲肽,僅需1~3小時(shí)氧化反應(yīng)即完全,與傳統(tǒng)的空氣氧化法相比,反應(yīng)時(shí)間大大縮短,且?jiàn)W曲肽產(chǎn)品收率大幅提高,適于大規(guī)模生產(chǎn)奧曲肽及其鹽。

CN103102390A(專利申請(qǐng)?zhí)?01110352635.4)公開(kāi)了一種奧曲肽的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:步驟1:獲得氨基酸序列為D-Phe-Cys的二肽;以樹(shù)脂為載體,按照固相法合成六肽樹(shù)脂;所述六肽樹(shù)脂中氨基酸殘基序列為Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol;在堿性條件下,取所述二肽與所述六肽樹(shù)脂發(fā)生縮合反應(yīng),切肽制得線性八肽;所述線性八肽的氨基酸殘基序列為D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol;步驟2:取所述線性八肽溶于過(guò)量的N,N-二甲基甲酰胺的水溶液中,調(diào)整pH值為6.8~8.0,加入過(guò)量的氧化劑,在18~30℃環(huán)化2~3h,調(diào)整pH值為3.5~5.0,純化后,制得結(jié)構(gòu)如式Ⅰ所示的奧曲肽;其中,Thr-ol是蘇氨醇,Cys是半胱氨酸,Thr是蘇氨酸,Lys是賴氨酸,D-Trp是D型色氨酸,Phe是苯丙氨酸,D-Phe是D型苯丙氨酸。據(jù)信該發(fā)明提高了奧曲肽的收率及純度。

CN1355173A(專利申請(qǐng)?zhí)?0134258.4)公開(kāi)了制備醋酸奧曲肽的方法,其包括:a).將下式三肽R1-D-Phe-Cys(R2)-Phe-OH與下式五肽R3-D-Trp-Lys(R4)-Thr(R5)-Cys(R2)-NH-CH(CH2-OR6)-CH(OR5)-CH3反應(yīng)生成下式八肽R1-D-Phe-Cys(R2)-Phe-D-Trp-Lys(R4)-Thr(R5)-Cys(R2)-NH-CH(CH2-OR6)-CH(OR5)-CH3在上述三肽、五肽及八肽中,R1=BOC;R2=Bzl、4-Me-Bzl或4-MeO-Bzl;R3=Fmoc;R4=Z或2-Cl-Z;R5=Bzl;R6=CH3-、CH3CH2-、CH3CH2CH2-或CH3CH2CH2CH2-。b).用無(wú)水氟化氫脫除a)中所得八肽上所有側(cè)鏈保護(hù)基,得到下式還原型奧曲肽,D-Phe-Cys-Phe-D-Try-Lys-Thr-Cys-Thr-Ol;c)將b)中所得八肽的水溶液在空氣中攪拌自然氧化,得到奧曲肽,經(jīng)過(guò)純化后,奧曲肽水溶液用堿性水溶液調(diào)pH值至7.0-8.0;d)將c)中pH值為7.0-8.0的奧曲肽溶液注入非極性柱中,用乙腈水溶液洗脫,合并洗脫液,加入適量冰醋酸,得醋酸奧曲肽,如需要,所得醋酸奧曲肽經(jīng)冷凍干燥,得醋酸奧曲肽干粉。

CN1490330A(專利申請(qǐng)?zhí)?2137521.6)公開(kāi)了一種醋酸奧曲肽生產(chǎn)工藝,其特征在于:由下列工藝步驟組成,取Boc-Thr(Ac)-Wang樹(shù)脂裝入反應(yīng)容器中,加入TFA與二氯甲烷的混合液反應(yīng),洗滌后加三乙胺與二氯甲烷混合液反應(yīng),加入Fmoc-Cys(Trt)-OH,TBTU,HOBt,用接肽試劑溶解,卡氏法檢測(cè)氨基為陽(yáng)性用接肽試劑補(bǔ)接后至卡氏法檢測(cè)氨基為陰性,加入封頭試劑、脫帽試劑,洗滌,加Fmoc-Thr(tBu)-OH,TBTU,HOBt,加Fmoc-Lys(Boc)-OH,TBTU,HOBt,溶解,加Fmoc-D-Trp(Boc)-OH,TBTU,HOBt,接肽試劑溶解,加Fmoc-Phe-OH,TBTU,HOBt,加入反應(yīng)容器,洗滌抽干,加Fmoc-Cys(Trt)-OH,TBTU,HOBt,加Fmoc-D-Phe-OH,TBTU,HOBt,干燥得八肽樹(shù)脂,八肽樹(shù)脂中加入脫側(cè)鏈試劑,乙醇,硼氫化鈉和乙醇溶液,乙醇洗滌,加醋酸及滴加NHOH至pH值7.8,用冰醋酸調(diào)至pH值5.5,濾液分批經(jīng)純化后凍干得白色疏松塊狀成品。據(jù)信該發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)利用硼氫化鈉還原取代價(jià)格昂貴的L-Thr(ol),可大大降低醋酸奧曲肽生產(chǎn)合成的成本。

CN1569890A(專利申請(qǐng)?zhí)?00410010833.2)公開(kāi)了一種醋酸奧曲肽的固相合成方法,過(guò)程是:合成八肽;將八肽制成水溶液在空氣中自然氧化后制成奧曲肽;向奧曲肽水溶液中加入冰醋酸后凍干,制成醋酸奧曲肽凍干粉;其特征在于,所說(shuō)的合成八肽的過(guò)程是:將芴甲氧羰基蘇胺醇與對(duì)羧基苯甲醛反應(yīng)生成芴甲氧羰基蘇胺醇對(duì)羧基苯縮醛,將其鍵合在高分子樹(shù)脂載體上,然后按順序與保護(hù)氨基酸殘基依次鍵合后得到八肽樹(shù)脂,將八肽從樹(shù)脂上切落。據(jù)信該發(fā)明合成工藝簡(jiǎn)單,容易操作,工藝時(shí)間縮短,反應(yīng)配比小,節(jié)約原料,降低了成本,而且產(chǎn)率和純度提高,副反應(yīng)和副產(chǎn)物少,便于純化,有益于大批量生產(chǎn)。

CN1810829A(專利申請(qǐng)?zhí)?00510002874.1)公開(kāi)了一種醋酸奧曲肽的制備方法,該方法,包括以下步驟:1)用固相合成法合成具有D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr氨基酸殘基序列的直鏈八肽;2)氧化直鏈八肽,得到氧化型奧曲肽;3)將氧化型奧曲肽在醋酸鹽溶液中經(jīng)轉(zhuǎn)鹽和純化后,得到醋酸奧曲肽。本發(fā)明的醋酸奧曲肽的制備方法中,全部采用DMF,HOBT/HBTU和DIEA進(jìn)行接肽反應(yīng),具有操作簡(jiǎn)便,副反應(yīng)少的優(yōu)點(diǎn),用此方法可達(dá)到最小保護(hù)策略,并可進(jìn)行大量的合成。據(jù)信該發(fā)明具有成本低,收率高的優(yōu)點(diǎn),在醋酸奧曲肽的工業(yè)化生產(chǎn)中將具有廣闊的應(yīng)用前景。

CN1923849A(專利申請(qǐng)?zhí)?00510029221.2)公開(kāi)了一種固相多肽合成奧曲肽的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:以2-氯-三苯甲基樹(shù)脂、三苯甲基樹(shù)脂作樹(shù)脂、4-甲基三苯甲基樹(shù)脂或4-甲氧基三苯甲基樹(shù)脂為起始原料,按照固相合成的方法依次連接具有保護(hù)基團(tuán)的氨基酸,獲得保護(hù)八肽樹(shù)脂,其間依次脫去Fmoc-保護(hù)基團(tuán),用TBTU或HBTU及HOBT為縮合劑進(jìn)行接肽反應(yīng),得保護(hù)的還原型八肽樹(shù)脂后,同步進(jìn)行脫側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)及切肽,獲得還原型奧曲肽,并在pH7-11的條件下用空氣氧化,獲得奧曲肽粗品,再經(jīng)C18(或C8)柱分離純化,冷凍干燥后,制得奧曲肽精品。據(jù)信該發(fā)明的方法,具備規(guī)?;a(chǎn)能力,工藝穩(wěn)定,原輔材料來(lái)源方便,生產(chǎn)周期短,收率高,質(zhì)量穩(wěn)定,生產(chǎn)成本低,接肽收率高,避免使用氟化氫等劇毒試劑,三廢污染少,采用C18(或C8)柱進(jìn)行分離純化。

CN103351426A(專利申請(qǐng)?zhí)?01310333598.1)公開(kāi)了一種醋酸奧曲肽的多肽合成方法,其特征在于,包括如下步驟:以氯甲基樹(shù)脂為起始原料,將Boc-Thr(tBu)-OH制備成銫鹽,按照固相合成的方法依次連接具有保護(hù)基團(tuán)的氨基酸,依次為:Boc-Cys(Trt)-OH、Boc-Thr(tBu)-OH、Boc-Lys(Fmoc)-OH、Boc-D-Trp-OH、Boc-Phe-OH、Boc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-D-Phe-OH,獲得保護(hù)八肽樹(shù)脂,其間依次用HCl/異丙醇脫去Boc-保護(hù)基團(tuán),用DIC、HOBT進(jìn)行接肽反應(yīng),用鈀碳/氫氣還原,同時(shí)將肽鏈切落,獲得還原型奧曲肽,在pH7.8-9的條件下通空氣使二硫鍵成環(huán),獲得奧曲肽粗品,再采用獨(dú)特的流動(dòng)相經(jīng)C18柱分離純化,制得醋酸奧曲肽精品。據(jù)信該發(fā)明方法不采用蘇氨醇、Fmoc-蘇氨醇,生產(chǎn)成本極低,具備規(guī)?;a(chǎn)能力,工藝穩(wěn)定,原輔料來(lái)源方便,生產(chǎn)周期短,接肽收率高,質(zhì)量穩(wěn)定,避免使用氟化氫,三氟乙酸等劇毒試劑,三廢污染少。

CN106543269A(專利申請(qǐng)?zhí)?01610938844.X)公開(kāi)了一種奧曲肽工業(yè)化生產(chǎn)的合成方法,其特征在于:該合成方法依次包括以下步驟:第一步,以氨甲基樹(shù)脂為起始樹(shù)脂,將原料Fmoc-Thr-x利用縮合試劑HOBT與DIC偶聯(lián)到樹(shù)脂上,生成Fmoc-Thr-x-AM Resin,其中,所述氨甲基樹(shù)脂的替代度為0.55~0.65mmol/g,投入的所述Fmoc-Thr-x、HOBT以及DIC的摩爾量均為所需合成的奧曲肽的摩爾量的2~3倍;然后按照順序依次將氨基酸Cys、Thr、Lys、D-Trp、Phe、Cys、D-Phe逐個(gè)偶聯(lián)到Fmoc-Thr-x-AM Resin上,得到奧曲肽肽樹(shù)脂;所述Fmoc-Thr-x的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為;第二步,向所述奧曲肽肽樹(shù)脂中加入裂解液,攪拌均勻裂解2~3h,其中,奧曲肽肽樹(shù)脂與裂解液的配比為向每1g奧曲肽肽樹(shù)脂中加入10ml裂解液;裂解完成后,過(guò)濾,將濾液緩慢加入預(yù)先冰凍的無(wú)水乙醚中沉降20~40min后離心得到奧曲肽線性粗肽;第三步,將所述奧曲肽線性粗肽溶解到TFA/水混合溶液中,然后放入35℃~38℃的水浴或加熱套中加熱2~3h,使得奧曲肽線性粗肽在HPLC圖譜中的峰型單一,其中,所述奧曲肽線性粗肽與TFA/水混合溶液的配比為向每1g奧曲肽線性粗肽中加入300ml的TFA/水混合溶液,TFA/水混合溶液中TFA的體積百分含量為5‰;第四步,向所述第三步加熱后的溶解有奧曲肽線性粗肽的TFA/水混合溶液中加入DMSO后氧化1~1.5h,加入的DMSO的體積占溶解有奧曲肽線性粗肽的TFA/水混合溶液的總體積5~8%,然后,HPLC檢測(cè)環(huán)化終點(diǎn),純化分離得到奧曲肽精制品。

另外,有一些文獻(xiàn)公開(kāi)了醋酸奧曲肽藥物組合物的制備方法。例如,

CN104667258A A(專利申請(qǐng)?zhí)?01510124285.4)公開(kāi)了一種醋酸奧曲肽片劑及其制備方法,其由醋酸奧曲肽納米粒與藥學(xué)上可接受的片劑輔料制成,所述醋酸奧曲肽納米粒中包含醋酸奧曲肽、酶抑制劑以及高分子材料。本發(fā)明的醋酸奧曲肽片劑可以顯著的延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間、且相對(duì)于注射劑型其用藥方便,提高了患者的順應(yīng)性,同時(shí)由于包覆了高分子化合物并以固體形式存在,醋酸奧曲肽的保質(zhì)期限顯著延長(zhǎng)。

CN102525927A(專利申請(qǐng)?zhí)?01110456620.2)公開(kāi)了一種醋酸奧曲肽脂質(zhì)體前體及制備方法。該前體脂質(zhì)體中含有醋酸奧曲肽、負(fù)電磷脂、凍干保護(hù)劑,尚可以含有適量其它脂質(zhì),包括磷脂酰膽堿、膽固醇,也可以根據(jù)需要加入抗氧劑、pH調(diào)節(jié)劑等成分醋酸奧曲肽與負(fù)電磷脂的摩爾比小于1∶1,負(fù)電磷脂與凍干保護(hù)劑的質(zhì)量之比為1∶1~1:10。發(fā)明所采用的工藝為叔丁醇-水共溶劑冷凍干燥法。將凍干品水化后得到的醋酸奧曲肽脂質(zhì)體/膠束的包封率可達(dá)50%以上,并且凍干品和水化所得的醋酸奧曲肽脂質(zhì)體/膠束都具有良好的穩(wěn)定性,解決了蛋白質(zhì)多肽類藥物在制備成脂質(zhì)體/膠束制劑時(shí)難以包載的問(wèn)題。據(jù)信該制備方法簡(jiǎn)單易行,適合工業(yè)化大生產(chǎn)。

CN101647773A(專利申請(qǐng)?zhí)?00910074427.5)公開(kāi)了一種醋酸奧曲肽注射液,含有醋酸奧曲肽、甘露醇、吐溫-80和檸檬酸,其中醋酸奧曲肽、甘露醇、吐溫-80和檸檬酸的用量按重量比為1.2∶8~12∶0.001~0.0015∶0.1~0.5。據(jù)信該發(fā)明公開(kāi)的醋酸奧曲肽注射液具有穩(wěn)定性好的優(yōu)點(diǎn),可以在常溫下放置6個(gè)月,不需避光。

CN102526700A(專利申請(qǐng)?zhí)?01110458284.5)公開(kāi)了一種注射用醋酸奧曲肽凍干組合物,包括醋酸奧曲肽、甘露醇和適量的緩沖物質(zhì),所述醋酸奧曲肽、甘露醇的質(zhì)量比為1:450-500。所述的緩沖物質(zhì)為乳酸和碳酸氫鈉也可以為酒石酸和酒石酸鈉。本發(fā)明還提供該組合物的制備方法。本發(fā)明提供的組合物采用無(wú)菌技術(shù)生產(chǎn),通過(guò)藥液配置過(guò)程最佳pH范圍以及配制最佳溫度的技術(shù)攻關(guān)提高了產(chǎn)品穩(wěn)定性,最后制備為凍干品,采用速凍方式進(jìn)行預(yù)凍,成品有關(guān)物質(zhì)含量低、復(fù)溶性好、室溫保存時(shí)間長(zhǎng)達(dá)2個(gè)月,冷藏有效期2年,方便產(chǎn)品運(yùn)輸配送,臨床配伍使用溶液穩(wěn)定性好,局部注射刺激性低,為臨床提供了安全、有效、質(zhì)量?jī)?yōu)質(zhì)可控的供注射用醋酸奧曲肽凍干組合物。

CN104689297A(專利申請(qǐng)?zhí)?01510124765.0)公開(kāi)了一種醋酸奧曲肽凍干粉針劑及其制備方法。所述醋酸奧曲肽凍干粉針劑由醋酸奧曲肽、叔丁醇、甘露醇、右旋糖苷以及維生素C制成。其制備方法包括如下步驟:1)將維生素C、甘露醇、右旋糖酐、叔丁醇以及醋酸奧曲肽依次加入純化水中,攪拌使其完全溶解;2)將制得的藥液灌裝于安瓿瓶中,凍干。本發(fā)明獲得的醋酸奧曲肽凍干粉針劑的保質(zhì)期大大延長(zhǎng),穩(wěn)定性增高,制備方法簡(jiǎn)單。

CN102416001A(專利申請(qǐng)?zhí)?01110409545.4)公開(kāi)了注射用醋酸奧曲肽凍干粉針劑,其由醋酸奧曲肽為活性成分,甘露醇為凍干賦形劑,檸檬酸為調(diào)節(jié)劑,其特征在于,所述注射用醋酸奧曲肽凍干粉針劑的pH值為5.5~5.7。據(jù)信該發(fā)明制備的醋酸奧曲肽凍干粉針劑能夠迅速溶解,溶解度好。

CN103932996A(專利申請(qǐng)?zhí)?01410206599.4)公開(kāi)了一種注射用醋酸醋酸奧曲肽凍干組合物及其制備方法,所述的凍干組合物中含有醋酸奧曲肽、氨丁三醇和馬來(lái)酸;制備方法為:稱取醋酸奧曲肽、氨丁三醇,加入冷至10-20℃的注射用水中,攪拌溶解,采用馬來(lái)酸調(diào)節(jié)藥液pH=4.0~5.0,過(guò)濾,灌裝,凍干。與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明質(zhì)量穩(wěn)定,輔料種類少,制備工藝簡(jiǎn)單。

在國(guó)內(nèi)上市的醋酸奧曲肽注射液原研產(chǎn)品是諾華的其藥品說(shuō)明書上記載的組成成分為醋酸奧曲肽、乳酸、甘露醇、碳酸氫鈉、注射用水,以例如CN102526700B所載實(shí)施例6配方制成溶液型注射液。

然而,已經(jīng)發(fā)現(xiàn),在奧曲肽產(chǎn)品制備過(guò)程中仍然存在一些期待解決的問(wèn)題。



技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:

本發(fā)明目的在于提供一種制備醋酸奧曲肽或其注射液藥物組合物的方法并能夠克服現(xiàn)有技術(shù)存在的相關(guān)技術(shù)問(wèn)題。本發(fā)明的另一目的在于提供一種制備醋酸奧曲肽藥物組合物的方法。已經(jīng)出人意料的發(fā)現(xiàn),使用本發(fā)明方法和配方制備得到的本發(fā)明醋酸奧曲肽及其藥物組合物,能夠滿意的實(shí)現(xiàn)上述目的。

為此,本發(fā)明第一方面提供了一種制備醋酸奧曲肽的方法,包括如下步驟:

以氯甲基樹(shù)脂為起始原料,將Boc-Thr(tBu)-OH制備成銫鹽,按照固相合成的方法依次連接具有保護(hù)基團(tuán)的氨基酸,依次為:Boc-Cys(Trt)-OH、Boc-Thr(tBu)-OH、Boc-Lys(Fmoc)-OH、Boc-D-Trp-OH、Boc-Phe-OH、Boc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-D-Phe-OH,獲得保護(hù)八肽樹(shù)脂,其間依次用HCl/異丙醇脫去Boc-保護(hù)基團(tuán),用DIC、HOBT為縮合劑進(jìn)行接肽反應(yīng);

用鈀碳/氫氣還原,同時(shí)將肽鏈切落,獲得還原型奧曲肽;

在pH7.8-9的條件下通空氣使二硫鍵成環(huán),獲得奧曲肽粗品;

奧曲肽粗品經(jīng)C18柱分離純化,制得醋酸奧曲肽精品。

根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案所述方法,其中二硫鍵成環(huán)的操作步驟為:將還原型奧曲肽粗品溶于水,在攪拌下滴加2mol/L氨水至pH7.8-9,室溫通空氣24-36小時(shí)使二硫鍵成環(huán),加冰醋酸,加活性碳,過(guò)濾,得奧曲肽粗品。

根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案所述方法,其中在進(jìn)行二硫鍵成環(huán)的過(guò)程中,所用的空氣預(yù)先依次通過(guò)飽和氫氧化鈣溶液和2.5M硫酸溶液處理。

根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案所述方法,其中,依次連接具有保護(hù)基團(tuán)的氨基酸,獲得保護(hù)八肽樹(shù)脂,其間依次脫去Boc-保護(hù)基團(tuán)的方法包括如下步驟:

(1)Boc-Thr(tBu)-OCs的制備

使Boc-Thr(tBu)-OH溶于甲醇與水中,另取碳酸銫加水溶解至澄清,攪拌下加入上述Boc-Thr(tBu)-OH溶液,溶液pH7.5,減壓濃縮至干,得糖漿狀殘留物為Boc-Thr(tBu)-OCs;[在本步驟的一個(gè)實(shí)施方案中,碳酸銫的摩爾數(shù)為Boc-Thr(tBu)-OH的1~5倍]

(2)Boc-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂的制備

取氯甲基樹(shù)脂,用DMF浸泡使樹(shù)脂溶脹,加上述糖漿狀殘留物Boc-Thr(tBu)-OCs和DMF使進(jìn)行反應(yīng);過(guò)濾,樹(shù)脂用DMF洗滌二次,純化水洗滌,無(wú)水乙醇洗滌,減壓干燥,得Boc-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂[在本步驟的一個(gè)實(shí)施方案中,Boc-Thr(tBu)-OCs的摩爾數(shù)為樹(shù)脂的1~3倍;在一個(gè)實(shí)施方案中,氯甲基樹(shù)脂與Boc-Thr(tBu)-OCs的反應(yīng)溫度:40-65℃,反應(yīng)時(shí)間:36-72小時(shí)];

(3)Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂的制備:

在步驟(2)的Boc-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂中,加入2mol/L HCl/異丙醇溶液與DCM,反應(yīng),抽干,分別用DCM、無(wú)水甲醇、DCM各洗滌二次,抽干,再加10%三乙胺的DCM溶液(體積比)反應(yīng),抽干,DCM洗滌;加入Boc-Cys(Trt)-OH、DIC、HOBT、DMF,將混合物反應(yīng),抽干,分別用DMF、無(wú)水甲醇、DMF洗滌,抽干,即得[在一個(gè)實(shí)施方案中,脫除Boc-基采用2mol/L HCl/異丙醇溶液,HCl濃度為1mol/L~9mol/L;2mol/L HCl/異丙醇用量為樹(shù)脂重量的2~8倍,例如2.5~5.5倍];

(4)Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂的制備

在步驟(3)的Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂中,加入2mol/L HCl/異丙醇溶液與DCM,反應(yīng),抽干,分別用DCM、無(wú)水甲醇、DCM各洗滌二次,抽干,加10%三乙胺的DCM溶液反應(yīng),抽干,DCM洗滌;加Boc-Thr(tBu)-OH、DIC、HOBT、DMF,將混合物反應(yīng),抽干,分別用DMF、無(wú)水甲醇、DMF各洗滌三次,抽干,即得[在一個(gè)實(shí)施方案中,脫除Boc-基采用2mol/L HCl/異丙醇溶液,HCl濃度為1mol/L~9mol/L;2mol/L HCl/異丙醇用量為樹(shù)脂重量的2~8倍,例如2.5~5.5倍];

(5)Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂的制備

在步驟(4)的Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂中,加入2mol/L HCl/異丙醇溶液與DCM,反應(yīng),抽干,分別用DCM、無(wú)水甲醇、DCM各洗滌,抽干,加10%三乙胺的DCM溶液反應(yīng),抽干,DCM洗滌;加Boc-Lys(Fmoc)-OH、DIC、HOBT、DMF,將混合物反應(yīng),抽干,分別用DMF、無(wú)水甲醇、DMF洗滌,抽干,即得[在一個(gè)實(shí)施方案中,脫除Boc-基采用2mol/L HCl/異丙醇溶液,HCl濃度為1mol/L~9mol/L;2mol/L HCl/異丙醇用量為樹(shù)脂重量的2~8倍,例如2.5~5.5倍];

(6)Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂的制備

在步驟(5)的Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂中,加入2mol/L HCl/異丙醇溶液與DCM,反應(yīng),抽干,分別用DCM、無(wú)水甲醇、DCM洗滌二抽干,加10%三乙胺的DCM溶液反應(yīng),抽干,DCM洗滌;加Boc-D-Trp-OH、DIC、HOBT、DMF,將混合物反應(yīng),抽干,分別用DMF、無(wú)水甲醇、DMF洗滌三次,抽干,即得[在一個(gè)實(shí)施方案中,脫除Boc-基采用2mol/L HCl/異丙醇溶液,HCl濃度為1mol/L~9mol/L;2mol/L HCl/異丙醇用量為樹(shù)脂重量的2~8倍,例如2.5~5.5倍];

(7)Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂的制備

在步驟(6)的Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂中,加入2mol/L HCl/異丙醇與DCM與乙二硫醇的混合溶液,反應(yīng),抽干,分別用DCM、無(wú)水甲醇、DCM洗滌,抽干,加10%三乙胺的DCM溶液反應(yīng),抽干,DCM洗滌;加Boc-Phe-OH、DIC、HOBT、DMF,將混合物反應(yīng),抽干,分別用DMF、無(wú)水甲醇、DMF各洗滌,抽干,即得[在一個(gè)實(shí)施方案中,脫除Boc-基采用2mol/L HCl/異丙醇溶液與乙二硫醇的混合溶液,HCl濃度為1mol/L~9mol/L;2mol/L HCl/異丙醇用量為樹(shù)脂重量的2~8倍,例如2.5~5.5倍];

(8)Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys((tBu)-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂的制備

在步驟(7)的Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂中,加入2mol/L HCl/異丙醇與DCM與乙二硫醇的混合溶液,反應(yīng),抽干,分別用DCM、無(wú)水甲醇、DCM洗滌,抽干,加10%三乙胺的DCM溶液反應(yīng),抽干,DCM洗滌;加Boc-Cys(Trt)-OH、DIC、HOBT、DMF,將混合物反應(yīng),抽干,DMF、無(wú)水甲醇、DMF洗滌,抽干,即得[在一個(gè)實(shí)施方案中,脫除Boc-基采用2mol/L HCl/異丙醇溶液與乙二硫醇的混合溶液,HCl濃度為1mol/L~9mol/L;2mol/L HCl/異丙醇用量為樹(shù)脂重量的2~8倍,例如2.5~5.5倍];

(9)Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂的制備

在步驟(8)Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys((tBu)-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂中,加入2mol/L HCl/異丙醇與DCM與乙二硫醇的混合溶液,反應(yīng),抽干,用DCM、無(wú)水甲醇、DCM洗滌,抽干,加10%三乙胺的DCM溶液反應(yīng),抽干,DCM洗滌;加Fmoc-D-Phe-OH、DIC、HOBT、DMF,將混合物反應(yīng),抽干,DMF、無(wú)水甲醇、DMF洗滌,抽干,即得[在一個(gè)實(shí)施方案中,脫除Boc-基采用2mol/L HCl/異丙醇溶液與乙二硫醇的混合溶液,HCl濃度為1mol/L~9mol/L;2mol/L HCl/異丙醇用量為樹(shù)脂重量的2~8倍,例如2.5~5.5倍];

(10)Fmoc-D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr-Cys(SH)-Thr-O-樹(shù)脂的制備

在步驟(9)的Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂中,加入2mol/L HCl/異丙醇與DCM與乙二硫醇的混合溶液,反應(yīng),抽干,用DCM、無(wú)水甲醇、DCM洗滌,抽干;再用無(wú)水甲醇洗滌十次,抽干后,放入真空干燥器中干燥,得八肽樹(shù)脂[在一個(gè)實(shí)施方案中,脫除Boc-基采用2mol/L HCl/異丙醇溶液與乙二硫醇的混合溶液,HCl濃度為1mol/L~9mol/L;2mol/L HCl/異丙醇用量為樹(shù)脂重量的2~8倍,例如2.5~5.5倍]。

根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案所述方法,其中,用鈀/碳,氫氣還原,同時(shí)將肽鏈切落,獲得還原型奧曲肽(即D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys(SH)-Thr-ol),其方法包括如下步驟:

取所述八肽樹(shù)脂加無(wú)水甲醇、5%鈀/碳,通入氫氣,密閉,攪拌,過(guò)濾,除去碳粉和樹(shù)脂,無(wú)水甲醇洗滌,減壓濃縮至油狀物,加入六氫吡啶的無(wú)水甲醇溶液,使反應(yīng),減壓濃縮至油狀物,DMF溶解,加無(wú)水乙醚沉淀,過(guò)濾收集沉淀得還原型奧曲肽粗品[在一個(gè)實(shí)施方案中,5%鈀/碳用量為樹(shù)脂的1/10至5/10(質(zhì)量比)]。

根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案所述方法,其中,在pH7.8-9的條件下通空氣使二硫鍵成環(huán),獲得奧曲肽粗品,其方法具體實(shí)現(xiàn)為:

將還原型奧曲肽粗品溶于水,在攪拌下滴加2mol/L氨水至pH7.8-9,室溫通空氣24-36小時(shí)使二硫鍵成環(huán),加冰醋酸,加活性碳,過(guò)濾,得奧曲肽粗品。

根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案所述方法,其中在進(jìn)行二硫鍵成環(huán)的過(guò)程中,所用的空氣預(yù)先依次通過(guò)飽和氫氧化鈣溶液和2.5M硫酸溶液處理。

根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案所述方法,其中,粗品經(jīng)C18柱分離純化的方法包括如下步驟:濾液分批經(jīng)C18柱純化,流動(dòng)相:0.25-0.5mol/L醋酸鉀:乙腈=7-8:3-2;流速為:600-1000ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為:280nm;樣品峰合并后去鹽、凍干,得醋酸奧曲肽成品。

進(jìn)一步的,本發(fā)明第二方面涉及一種醋酸奧曲肽注射液藥物組合物,其組成為:醋酸奧曲肽以?shī)W曲肽計(jì)0.1g、甘露醇45g、乳酸3.4g、碳酸氫鈉適量調(diào)pH至3.7~4.7、注射用水適量加至1000ml。該注射液每瓶裝量可以是1ml。

根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案所述的醋酸奧曲肽注射液藥物組合物,其中所述醋酸奧曲肽是本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案所述方法制備得到的。

根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案所述的醋酸奧曲肽注射液藥物組合物,其是照包括如下步驟的方法制備得到的:

取處方量的甘露醇、7/10處方量的乳酸加注射用水700ml,攪拌溶解,加0.1%活性炭,加熱至80℃攪拌30分鐘,經(jīng)鈦棒循環(huán)脫炭,濾液冷卻至30℃,加入碳酸氫鈉調(diào)pH至3.7~4.7例如4.0,備用;

另取處方量的醋酸奧曲肽和余量的乳酸,加30℃注射用水100ml,加0.1%活性炭攪拌30分鐘,經(jīng)鈦棒循環(huán)脫炭,濾液加入碳酸氫鈉調(diào)pH至3.7~4.7例如4.0;

使兩種濾液合并,必要時(shí)用碳酸氫鈉調(diào)pH至3.7~4.7例如4.0,加注射用水至1000ml;經(jīng)蠕動(dòng)泵送至無(wú)菌室中,經(jīng)0.22μm的微孔濾膜過(guò)濾至澄明并除菌,按每瓶1ml的裝量灌裝于玻璃瓶中,密封,即得醋酸奧曲肽注射液藥物組合物。

再進(jìn)一步的,本發(fā)明第三方面提供了一種醋酸奧曲肽注射液藥物組合物,其組成為:醋酸奧曲肽以?shī)W曲肽計(jì)0.1g、甘露醇40~50g、乳酸3~4g、蔗糖1~3g、碳酸氫鈉適量調(diào)pH至3.7~4.7、注射用水適量加至1000ml。該注射液每瓶裝量可以是1ml。

根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案所述的醋酸奧曲肽注射液藥物組合物,其組成為:醋酸奧曲肽以?shī)W曲肽計(jì)0.1g、甘露醇42~48g、乳酸3.2~3.6g、蔗糖1.5~2.5g、碳酸氫鈉適量調(diào)pH至3.7~4.7、注射用水適量加至1000ml。

根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案所述的醋酸奧曲肽注射液藥物組合物,其組成為:醋酸奧曲肽以?shī)W曲肽計(jì)0.1g、甘露醇45g、乳酸3.4g、蔗糖2g、碳酸氫鈉適量調(diào)pH至3.7~4.7、注射用水適量加至1000ml。

根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案所述的醋酸奧曲肽注射液藥物組合物,其是照包括如下步驟的方法制備得到的:

取處方量的甘露醇、2/3~3/4處方量的乳酸加注射用水700ml,攪拌溶解,加0.1%活性炭,加熱至80℃攪拌30分鐘,經(jīng)鈦棒循環(huán)脫炭,濾液冷卻至15~30℃,加入碳酸氫鈉調(diào)pH至3.7~4.7,備用;

另取處方量的醋酸奧曲肽、蔗糖和余量的乳酸,加15~30℃注射用水100ml,加0.1%活性炭攪拌30分鐘,經(jīng)鈦棒循環(huán)脫炭,濾液加入碳酸氫鈉調(diào)pH至3.7~4.7;

使兩種濾液合并,必要時(shí)用碳酸氫鈉調(diào)pH至3.7~4.7,加注射用水至1000ml;經(jīng)蠕動(dòng)泵送至無(wú)菌室中,經(jīng)0.22μm的微孔濾膜過(guò)濾至澄明并除菌,按每瓶1ml的裝量灌裝于玻璃瓶中,密封,即得醋酸奧曲肽注射液藥物組合物。已經(jīng)出人意料的發(fā)現(xiàn),在特定的操作步驟中添加適量蔗糖,能夠避免活性藥物的過(guò)濾損失。

本發(fā)明任一方面或該任一方面的任一實(shí)施方案所具有的任一技術(shù)特征同樣適用其它任一實(shí)施方案或其它任一方面的任一實(shí)施方案,只要它們不會(huì)相互矛盾,當(dāng)然在相互之間適用時(shí),必要的話可對(duì)相應(yīng)特征作適當(dāng)修飾。下面對(duì)本發(fā)明的各個(gè)方面和特點(diǎn)作進(jìn)一步的描述。

本發(fā)明所引述的所有文獻(xiàn),它們的全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用并入本文,并且如果這些文獻(xiàn)所表達(dá)的含義與本發(fā)明不一致時(shí),以本發(fā)明的表述為準(zhǔn)。此外,本發(fā)明使用的各種術(shù)語(yǔ)和短語(yǔ)具有本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的一般含義,即便如此,本發(fā)明仍然希望在此對(duì)這些術(shù)語(yǔ)和短語(yǔ)作更詳盡的說(shuō)明和解釋,提及的術(shù)語(yǔ)和短語(yǔ)如有與公知含義不一致的,以本發(fā)明所表述的含義為準(zhǔn)。

與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明采用氯甲基樹(shù)脂為固相載體,將第一個(gè)氨基酸Boc-Thr(tBu)-OH制備成銫鹽,以DIC,HOBT為縮合劑,逐個(gè)接上保護(hù)的氨基酸,最后一個(gè)肽鏈采用Fmoc-D-Phe-OH,獲得保護(hù)八肽樹(shù)脂,不采用蘇氨醇、Fmoc-蘇氨醇,生產(chǎn)成本極低,具備規(guī)?;a(chǎn)能力,工藝穩(wěn)定,原輔料來(lái)源方便,生產(chǎn)周期短,接肽收率高,質(zhì)量穩(wěn)定,用HCl/異丙醇脫去Boc-保護(hù)基團(tuán),用鈀/碳加氫還原,同時(shí)將肽鏈切落切肽,條件溫和,避免使用氟化氫,三氟乙酸等劇毒試劑,三廢污染少。

具體實(shí)施方式

通過(guò)下面的實(shí)施例可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的描述,然而,本發(fā)明的范圍并不限于下述實(shí)施例。本領(lǐng)域的專業(yè)人員能夠理解,在不背離本發(fā)明的精神和范圍的前提下,可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種變化和修飾。本發(fā)明對(duì)試驗(yàn)中所使用到的材料以及試驗(yàn)方法進(jìn)行一般性和/或具體的描述。雖然為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的所使用的許多材料和操作方法是本領(lǐng)域公知的,但是本發(fā)明仍然在此作盡可能詳細(xì)描述。以下實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明,而不是限制本發(fā)明。

在本發(fā)明的具體實(shí)例中,制備各物料的投料量是示意性的,其可以按比例的放大或者增加操作次數(shù)。在本發(fā)明的具體實(shí)例中,采用的原料均是可通過(guò)商業(yè)途徑獲得的,例如,使用的部分原料及其來(lái)源如下:

Boc-Thr(tBu)-OH,吉爾生化(上海)公司

Boc-Cys(Trt)-OH,吉爾生化(上海)公司

Boc-Thr(tBu)-OH,吉爾生化(上海)公司

Boc-Lys(Fmoc)-OH,吉爾生化(上海)公司

Boc-D-Trp-OH,吉爾生化(上海)公司

Boc-Phe-OH,吉爾生化(上海)公司

Fmoc-D-Phe-OH,吉爾生化(上海)公司

HOBt(N-Hydroxybenzotriazole),吉爾生化(上海)公司

下文中使用的2mol/L HCl/異丙醇(氯化氫/異丙醇)溶液制備方法如下:將工業(yè)用的濃硫酸滴入食用粗鹽(已烘干)中,產(chǎn)生HCl氣體,通過(guò)二個(gè)硫酸洗氣瓶,通至盛有1000毫升(約重1050克)異丙醇吸收瓶中(先稱好毛重和凈重),待其重量增加至1123克左右即停止,裝入試劑瓶?jī)?nèi),蓋緊內(nèi)塞放入冰箱。

實(shí)施例1:醋酸奧曲肽的制備

一、合成肽鏈

(1)Boc-Thr(tBu)-OCs的制備

取Boc-Thr(tBu)-OH(FW:275.3,110mmol)30.3g,溶于250ml甲醇與250ml水中,pH2.5。另取24g碳酸銫(147mmol)加水100ml溶解至澄清,攪拌下緩緩加入上述Boc-Thr(tBu)-OH溶液,有二氧化碳?xì)怏w產(chǎn)生。溶液pH7.5。40-50℃水溶減壓濃縮至干,得糖漿狀殘留物Boc-Thr(tBu)-OCs,計(jì)54.2g。

(2)Boc-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂的制備

取氯甲基樹(shù)脂100克(100-200目,1.0mmol/g,100mmol),用DMF浸泡30分鐘,使樹(shù)脂充分溶脹,加入步驟(1)所得糖漿狀殘留物107g以及700ml的DMF,50-55℃反應(yīng)48小時(shí)。

過(guò)濾,樹(shù)脂用DMF洗滌二次,純化水洗滌20次,無(wú)水乙醇洗滌6次。50-55℃減壓干燥,得124.4g的Boc-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂。

(3)Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂的制備

上一步驟所得樹(shù)脂加入350ml的2mol/L HCl/異丙醇溶液與350ml的DCM,25℃反應(yīng)30分鐘。抽干,分別用DCM、無(wú)水甲醇、DCM各洗滌二次,抽干。加700ml的10%三乙胺的DCM溶液25℃反應(yīng)5分鐘,抽干,DCM洗滌7次。

加入Boc-Cys(Trt)-OH(MW:463.6,200mmol)92.7g、DIC(MW:126.2,200mmol)25.2g,HOBT(MW:153,200mmol)30.6g,DMF 600ml,將混合物于25℃反應(yīng)3小時(shí)。抽干。DMF、無(wú)水甲醇、DMF各洗滌三次,抽干,即得。

(4)Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂的制備

上一步驟所得樹(shù)脂加入2mol/L HCl/異丙醇溶液350ml(2mol/L HCl/異丙醇用量為樹(shù)脂重量的3.5倍)與DCM 350ml,25℃反應(yīng)30分鐘。抽干,分別用DCM、無(wú)水甲醇、DCM各洗滌二次,抽干。加10%三乙胺700ml的DCM溶液,25℃反應(yīng)5分鐘,抽干,DCM洗滌7次。

加55.1g(FW:275.3,200mmol)Boc-Thr(tBu)-OH、DIC(MW:126.2,200mmol)25.2g,HOBT(MW:153,200mmol)30.6g,DMF600ml,將混合物25℃反應(yīng)3小時(shí)。抽干,DMF、無(wú)水甲醇、DMF各洗滌三次,抽干,即得。

(5)Fmoc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂的制備

上一步驟所得樹(shù)脂加入2mol/L HCl/異丙醇溶液350ml(2mol/L HCl/異丙醇用量為樹(shù)脂重量的4倍)與DCM 350ml,25℃反應(yīng)30分鐘。抽干,分別用DCM、無(wú)水甲醇、DCM各洗滌二次,抽干。加10%三乙胺700ml的DCM溶液25℃反應(yīng)5分鐘,抽干,DCM洗滌7次。

加93.7g(FW:468.6,200mmol)Boc-Lys(Fmoc)-OH、DIC(MW:126.2,200mmol)25.2g,HOBT(MW:153,200mmol)30.6g,600mlDMF,將混合物25℃反應(yīng)1小時(shí)。抽干,DMF、無(wú)水甲醇、DMF各洗滌三次,抽干,即得。

(6)Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂的制備

上一步驟所得樹(shù)脂加入2mol/L HCl/異丙醇溶液350ml(2mol/L HCl/異丙醇用量為樹(shù)脂重量的5.5倍)與DCM 350ml,25℃反應(yīng)30分鐘。抽干,分別用DCM、無(wú)水甲醇、DCM各洗滌二次,抽干。加10%三乙胺700ml的DCM溶液25℃反應(yīng)5分鐘,抽干,DCM洗滌7次。

加60.9g(FW:304.4,200mmol)Boc-D-Trp-OH、DIC(MW:126.2,200mmol)25.2g,HOBT(MW:153,200mmol)30.6g,600mlDMF,將混合物25℃反應(yīng)1小時(shí)。抽干,DMF、無(wú)水甲醇、DMF各洗滌三次,抽干,即得。

(7)Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-脂的制備

上一步驟所得樹(shù)脂加入2mol/L HCl/異丙醇315ml(2mol/L HCl/異丙醇用量為樹(shù)脂重量的3倍)與DCM 315ml與70ml乙二硫醇的混合溶液,25℃反應(yīng)30分鐘。抽干,分別用DCM、無(wú)水甲醇、DCM各洗滌二次,抽干。加10%三乙胺700ml的DCM溶液25℃反應(yīng)5分鐘,抽干,DCM洗滌7次。

加53.1g(FW:265.3,200mmol)Boc-Phe-OH、DIC(MW:126.2,200mmol)25.2g,HOBT(MW:153,200mmol)30.6g,600mlDMF,將混合物25℃反應(yīng)l小時(shí)。抽干,DMF、無(wú)水甲醇、DMF各洗滌三次,抽干,即得。

(8)Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys((tBu)-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂的制備

上一步驟所得樹(shù)脂加入2mol/L HCl/異丙醇315ml(2mol/L HCl/異丙醇用量為樹(shù)脂重量的3.5倍)與DCM 315ml與70ml乙二硫醇的混合溶液,25℃反應(yīng)30分鐘。抽干,分別用DCM、無(wú)水甲醇、DCM各洗滌二次,抽干。加10%三乙胺700ml的DCM溶液25℃反應(yīng)5分鐘,抽干,DCM洗滌7次。

加92.7g(FW:463.6,200mmol)Boc-Cys(Trt)-OH、DIC(MW:126.2,200mmol)25.2g,HOBT(MW:153,200mmol)30.6g,600mlDMF,將混合物25℃反應(yīng)l小時(shí)。抽干,DMF、無(wú)水甲醇、DMF各洗滌三次,抽干。

(9)Fmoc-D-Phe-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-樹(shù)脂的制備

上一步驟所得樹(shù)脂加入2mol/L HCl/異丙醇315ml(2mol/L HCl/異丙醇用量為樹(shù)脂重量的3倍)與DCM 315ml與70ml乙二硫醇的混合溶液,25℃反應(yīng)30分鐘。抽干,分別用DCM、無(wú)水甲醇、DCM各洗滌二次,抽干。加10%三乙胺700ml的DCM溶液25℃反應(yīng)5分鐘,抽干,DCM洗滌7次。

加53.1g(FW:265.3,200mmol)Fmoc-D-Phe-OH、DIC(MW:126.2,200mmol)25.2g,HOBT(MW:153,200mmol)30.6g,600ml DMF,將混合物25℃反應(yīng)l小時(shí)。抽干,DMF、無(wú)水甲醇、DMF各洗滌三次,抽干。

(10)Fmoc-D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr-Cys(SH)-Thr-O-樹(shù)脂的制備

上一步驟所得樹(shù)脂加入2mol/L HCl/異丙醇630ml(2mol/L HCl/異丙醇用量為樹(shù)脂重量的4.5倍)與70ml乙二硫醇的混合溶液,25℃攪拌30分鐘。抽干,分別用DCM、無(wú)水甲醇、DCM各洗滌二次,抽干。

再用無(wú)水甲醇洗滌十次。抽干后,放入真空干燥器中干燥,稱重,得八肽樹(shù)脂約190.7g,接肽總收率約為84%。

(11)還原型奧曲肽D-Phe-Cys(SH)-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys(SH)-Thr-ol的制備

取190g八肽樹(shù)脂加無(wú)水甲醇,加10克5%鈀/碳,通入氫氣,密閉,25℃攪拌4小時(shí)以上。過(guò)濾,除去碳粉和樹(shù)脂,無(wú)水甲醇洗滌三次,減壓濃縮至油狀物。加入300毫升20%的六氫吡啶的無(wú)水甲醇溶液(體積比),25℃反應(yīng)30分鐘。減壓濃縮至油狀物。DMF溶解,加無(wú)水乙醚沉淀,過(guò)濾收集沉淀得92g還原型奧曲肽粗品。

二、二硫鍵成環(huán)

將90g還原型奧曲肽粗品溶于90L水,在攪拌下慢慢滴加2M氨水至pH7.8,室溫下向該溶液中通入空氣,以使二硫鍵進(jìn)行成環(huán)反應(yīng)約24-36小時(shí)(已經(jīng)發(fā)現(xiàn),此成環(huán)反應(yīng)在24~36小時(shí)范圍內(nèi)對(duì)于醋酸奧曲肽成品的收率沒(méi)有明顯影響,成品摩爾收率均在31~33%范圍內(nèi)),加冰醋酸調(diào)至pH5.5,加活性碳攪拌30分鐘,過(guò)濾。

三、分離純化

二硫鍵成環(huán)時(shí)所得全部濾液分批經(jīng)C18柱純化,流動(dòng)相:0.25mol/L醋酸鉀:乙腈(7.2:2.8);流速為:800ml/min;用液相色譜儀跟蹤收集所需要的流出液,檢測(cè)波長(zhǎng)為:280nm;樣品峰合并后,去鹽、凍干,白色疏松塊狀物為醋酸奧曲肽成品,從還原型奧曲肽到醋酸奧曲肽成品的收率為31.2~32.7%(以摩爾百分?jǐn)?shù)計(jì),涉及二硫鍵成環(huán)以及分離純化兩部分操作中的不同操作條件例如二硫鍵成環(huán)時(shí)的成環(huán)反應(yīng)時(shí)間約24-36小時(shí)的收率范圍,下同)。

實(shí)施例2:醋酸奧曲肽的制備

一、合成肽鏈

同實(shí)施例1。

二、二硫鍵成環(huán)

將90g還原型奧曲肽粗品溶于90L水,在攪拌下慢慢滴加2M氨水至pH7.8,室溫下向該溶液中通入空氣(所用的空氣預(yù)先依次通過(guò)飽和氫氧化鈣溶液和2.5M硫酸溶液),以使二硫鍵進(jìn)行成環(huán)反應(yīng)約24-36小時(shí),加冰醋酸調(diào)至pH5.5,加活性碳攪拌30分鐘,過(guò)濾。

三、分離純化

二硫鍵成環(huán)時(shí)所得全部濾液分批經(jīng)C18柱純化,流動(dòng)相:0.25mol/L醋酸鉀:乙腈(7.2:2.8);流速為:800ml/min;用液相色譜儀跟蹤收集所需要的流出液,檢測(cè)波長(zhǎng)為:280nm;樣品峰合并后,去鹽、凍干,白色疏松塊狀物為醋酸奧曲肽成品,從還原型奧曲肽到醋酸奧曲肽成品的收率為57.7~59.4%(以摩爾百分?jǐn)?shù)計(jì))。

實(shí)施例3:醋酸奧曲肽的制備

一、合成肽鏈

同實(shí)施例1。

二、二硫鍵成環(huán)

將90g還原型奧曲肽粗品溶于90L水,在攪拌下慢慢滴加2M氨水至pH7.8,室溫下向該溶液中通入空氣(所用的空氣預(yù)先依次通過(guò)2.5M硫酸溶液和飽和氫氧化鈣溶液),以使二硫鍵進(jìn)行成環(huán)反應(yīng)約24-36小時(shí),加冰醋酸調(diào)至pH5.5,加活性碳攪拌30分鐘,過(guò)濾。

三、分離純化

二硫鍵成環(huán)時(shí)所得全部濾液分批經(jīng)C18柱純化,流動(dòng)相:0.25mol/L醋酸鉀:乙腈(7.2:2.8);流速為:800ml/min;用液相色譜儀跟蹤收集所需要的流出液,檢測(cè)波長(zhǎng)為:280nm;樣品峰合并后,去鹽、凍干,白色疏松塊狀物為醋酸奧曲肽成品,從還原型奧曲肽到醋酸奧曲肽成品的收率為29.6~31.2%(以摩爾百分?jǐn)?shù)計(jì))。

實(shí)施例4:醋酸奧曲肽的制備

一、合成肽鏈

同實(shí)施例1。

二、二硫鍵成環(huán)

將90g還原型奧曲肽粗品溶于90L水,在攪拌下慢慢滴加2M氨水至pH7.8,室溫下向該溶液中通入空氣(所用的空氣通過(guò)2.5M硫酸溶液),以使二硫鍵進(jìn)行成環(huán)反應(yīng)約24-36小時(shí),加冰醋酸調(diào)至pH5.5,加活性碳攪拌30分鐘,過(guò)濾。

三、分離純化

二硫鍵成環(huán)時(shí)所得全部濾液分批經(jīng)C18柱純化,流動(dòng)相:0.25mol/L醋酸鉀:乙腈(7.2:2.8);流速為:800ml/min;用液相色譜儀跟蹤收集所需要的流出液,檢測(cè)波長(zhǎng)為:280nm;樣品峰合并后,去鹽、凍干,白色疏松塊狀物為醋酸奧曲肽成品,從還原型奧曲肽到醋酸奧曲肽成品的收率為25.2~27.3%(以摩爾百分?jǐn)?shù)計(jì))。

實(shí)施例5:醋酸奧曲肽的制備

一、合成肽鏈

同實(shí)施例1。

二、二硫鍵成環(huán)

將90g還原型奧曲肽粗品溶于90L水,在攪拌下慢慢滴加2M氨水至pH7.8,室溫下向該溶液中通入空氣(所用的空氣通過(guò)飽和氫氧化鈣溶液),以使二硫鍵進(jìn)行成環(huán)反應(yīng)約24-36小時(shí),加冰醋酸調(diào)至pH5.5,加活性碳攪拌30分鐘,過(guò)濾。

三、分離純化

二硫鍵成環(huán)時(shí)所得全部濾液分批經(jīng)C18柱純化,流動(dòng)相:0.25mol/L醋酸鉀:乙腈(7.2:2.8);流速為:800ml/min;用液相色譜儀跟蹤收集所需要的流出液,檢測(cè)波長(zhǎng)為:280nm;樣品峰合并后,去鹽、凍干,白色疏松塊狀物為醋酸奧曲肽成品,從還原型奧曲肽到醋酸奧曲肽成品的收率為29.3~29.8%(以摩爾百分?jǐn)?shù)計(jì))。

以下各組合物例用實(shí)施例2所得醋酸奧曲肽作為原料藥。

組合物例1:醋酸奧曲肽注射液藥物組合物的制備

醋酸奧曲肽注射液處方:

醋酸奧曲肽以?shī)W曲肽計(jì)0.1g、

甘露醇45g、

乳酸3.4g、

碳酸氫鈉適量調(diào)pH至3.7~4.7、

注射用水適量加至1000ml。

制法:

取處方量的甘露醇、7/10處方量的乳酸加注射用水700ml,攪拌溶解,加0.1%活性炭,加熱至80℃攪拌30分鐘,經(jīng)鈦棒循環(huán)脫炭,濾液冷卻至30℃,加入碳酸氫鈉調(diào)pH至4.0,備用;

另取處方量的醋酸奧曲肽和余量的乳酸,加30℃注射用水100ml,加0.1%活性炭攪拌30分鐘,經(jīng)鈦棒循環(huán)脫炭,濾液加入碳酸氫鈉調(diào)pH至4.0;

使兩種濾液合并,必要時(shí)用碳酸氫鈉調(diào)pH至4.0,加注射用水至1000ml;經(jīng)蠕動(dòng)泵送至無(wú)菌室中,經(jīng)0.22μm的微孔濾膜過(guò)濾至澄明并除菌,按每瓶1ml的裝量灌裝于玻璃瓶中,密封,即得醋酸奧曲肽注射液藥物組合物。

在本組合物例1的補(bǔ)充試驗(yàn)中,已經(jīng)發(fā)現(xiàn),用碳酸氫鈉適量調(diào)pH至3.7~4.7的整個(gè)范圍內(nèi),例如pH至3.7、pH至4.2、pH至4.6時(shí),所得注射液在檢測(cè)例2中的結(jié)果與上述組合物例1注射液相同。

組合物例2:醋酸奧曲肽注射液藥物組合物的制備

醋酸奧曲肽注射液處方:

醋酸奧曲肽以?shī)W曲肽計(jì)0.1g、

甘露醇45g、

乳酸3.4g、

碳酸氫鈉適量調(diào)pH至3.7~4.7、

注射用水適量加至1000ml。

制法:

取處方量的甘露醇和乳酸加注射用水700ml,攪拌溶解,加0.1%活性炭,加熱至80℃攪拌30分鐘,經(jīng)鈦棒循環(huán)脫炭,濾液冷卻至30℃,加入碳酸氫鈉調(diào)pH至4.0,備用;

另取處方量的醋酸奧曲肽加30℃注射用水100ml,加0.1%活性炭攪拌30分鐘,經(jīng)鈦棒循環(huán)脫炭,濾液加入碳酸氫鈉調(diào)pH至4.0;

使兩種濾液合并,必要時(shí)用碳酸氫鈉調(diào)pH至4.0,加注射用水至1000ml;經(jīng)蠕動(dòng)泵送至無(wú)菌室中,經(jīng)0.22μm的微孔濾膜過(guò)濾至澄明并除菌,按每瓶1ml的裝量灌裝于玻璃瓶中,密封,即得醋酸奧曲肽注射液藥物組合物。

組合物例3:醋酸奧曲肽注射液藥物組合物的制備(#700BE6)

醋酸奧曲肽注射液處方:

醋酸奧曲肽以?shī)W曲肽計(jì)0.1g、

甘露醇45g、

乳酸3.4g、

碳酸氫鈉適量調(diào)pH至3.7~4.7、

注射用水適量加至1000ml。

制法:

取處方量的甘露醇、乳酸加注射用水800ml,攪拌溶解后,加0.1%活性炭,加熱至80℃攪拌30分鐘,經(jīng)鈦棒循環(huán)脫炭,濾液冷卻至15℃,加入處方量的醋酸奧曲肽,攪拌溶解后,加入碳酸氫鈉調(diào)pH至4.6,加注射用水至1000ml。經(jīng)蠕動(dòng)泵送至無(wú)菌室中,經(jīng)0.22μm的微孔濾膜過(guò)濾至澄明并除菌,按每瓶1ml的裝量灌裝于玻璃瓶中,密封,即得醋酸奧曲肽注射液藥物組合物。

在本組合物例3的補(bǔ)充試驗(yàn)中,已經(jīng)發(fā)現(xiàn),用碳酸氫鈉適量調(diào)pH至3.7~4.7的整個(gè)范圍內(nèi),例如pH至3.7、pH至4.0時(shí),所得注射液在檢測(cè)例2中的結(jié)果與上述組合物例3注射液相同。

組合物例11:醋酸奧曲肽注射液藥物組合物的制備

醋酸奧曲肽注射液處方:醋酸奧曲肽以?shī)W曲肽計(jì)0.1g、甘露醇45g、乳酸3.4g、蔗糖2g、碳酸氫鈉適量調(diào)pH至4.0、注射用水適量加至1000ml。

方法制備得到的:

取處方量的甘露醇、7/10處方量的乳酸加注射用水700ml,攪拌溶解,加0.1%活性炭,加熱至80℃攪拌30分鐘,經(jīng)鈦棒循環(huán)脫炭,濾液冷卻至25℃,加入碳酸氫鈉調(diào)pH至4.0,備用;

另取處方量的醋酸奧曲肽、蔗糖和余量的乳酸,加25℃注射用水100ml,加0.1%活性炭攪拌30分鐘,經(jīng)鈦棒循環(huán)脫炭,濾液加入碳酸氫鈉調(diào)pH至4.0;

使兩種濾液合并,必要時(shí)用碳酸氫鈉調(diào)pH至4.0,加注射用水至1000ml;經(jīng)蠕動(dòng)泵送至無(wú)菌室中,經(jīng)0.22μm的微孔濾膜過(guò)濾至澄明并除菌,按每瓶1ml的裝量灌裝于玻璃瓶中,密封,即得醋酸奧曲肽注射液藥物組合物。

組合物例12:醋酸奧曲肽注射液藥物組合物的制備

醋酸奧曲肽注射液處方:醋酸奧曲肽以?shī)W曲肽計(jì)0.1g、甘露醇40g、乳酸4g、蔗糖1g、碳酸氫鈉適量調(diào)pH至3.7、注射用水適量加至1000ml。

方法制備得到的:

取處方量的甘露醇、2/3處方量的乳酸加注射用水700ml,攪拌溶解,加0.1%活性炭,加熱至80℃攪拌30分鐘,經(jīng)鈦棒循環(huán)脫炭,濾液冷卻至30℃,加入碳酸氫鈉調(diào)pH至3.7,備用;

另取處方量的醋酸奧曲肽、蔗糖和余量的乳酸,加30℃注射用水100ml,加0.1%活性炭攪拌30分鐘,經(jīng)鈦棒循環(huán)脫炭,濾液加入碳酸氫鈉調(diào)pH至3.7;

使兩種濾液合并,必要時(shí)用碳酸氫鈉調(diào)pH至3.7,加注射用水至1000ml;經(jīng)蠕動(dòng)泵送至無(wú)菌室中,經(jīng)0.22μm的微孔濾膜過(guò)濾至澄明并除菌,按每瓶1ml的裝量灌裝于玻璃瓶中,密封,即得醋酸奧曲肽注射液藥物組合物。

組合物例13:醋酸奧曲肽注射液藥物組合物的制備

醋酸奧曲肽注射液處方:醋酸奧曲肽以?shī)W曲肽計(jì)0.1g、甘露醇50g、乳酸3g、蔗糖3g、碳酸氫鈉適量調(diào)pH至4.7、注射用水適量加至1000ml。

方法制備得到的:

取處方量的甘露醇、3/4處方量的乳酸加注射用水700ml,攪拌溶解,加0.1%活性炭,加熱至80℃攪拌30分鐘,經(jīng)鈦棒循環(huán)脫炭,濾液冷卻至15℃,加入碳酸氫鈉調(diào)pH至4.7,備用;

另取處方量的醋酸奧曲肽、蔗糖和余量的乳酸,加15℃注射用水100ml,加0.1%活性炭攪拌30分鐘,經(jīng)鈦棒循環(huán)脫炭,濾液加入碳酸氫鈉調(diào)pH至4.7;

使兩種濾液合并,必要時(shí)用碳酸氫鈉調(diào)pH至4.7,加注射用水至1000ml;經(jīng)蠕動(dòng)泵送至無(wú)菌室中,經(jīng)0.22μm的微孔濾膜過(guò)濾至澄明并除菌,按每瓶1ml的裝量灌裝于玻璃瓶中,密封,即得醋酸奧曲肽注射液藥物組合物。

對(duì)于以上組合物例1、組合物例2、組合物例11、組合物例12、組合物例13,測(cè)定其第二步驟即醋酸奧曲肽與乳酸等混合并經(jīng)炭處理前后活性成分的損失情況,即醋酸奧曲肽與乳酸等混合物經(jīng)針用炭處理并經(jīng)脫炭后所得混合液除以理論投料量再乘以100%所得百分?jǐn)?shù),作為活性成分殘余百分?jǐn)?shù),此殘余百分?jǐn)?shù)越大表示活性成分在炭處理過(guò)程中的損失越小。

經(jīng)測(cè)定,組合物例1、組合物例2以及組合物例1在不同pH值設(shè)計(jì)的補(bǔ)充試驗(yàn)所得組合物注射液,它們的殘余百分?jǐn)?shù)均在92.2~93.6%范圍內(nèi),顯示有明顯的藥物損失,這種損失是由于炭吸附造成的(原因在于,經(jīng)考察,在本發(fā)明各種組合物例中,在未經(jīng)炭吸附處理的情況下藥液經(jīng)鈦棒或者微孔濾膜過(guò)濾時(shí)的藥物損失均小于0.5%即殘余百分?jǐn)?shù)均大于99.5%,例如組合物例3活性成分未與炭一起處理所得注射液的殘余百分?jǐn)?shù)為99.7%);

組合物例11、組合物例12、組合物例13所得各組合物注射液,它們的殘余百分?jǐn)?shù)均在99.4~100.1%范圍內(nèi),顯示這些實(shí)例中無(wú)活性成分的損失。

補(bǔ)充試驗(yàn)例:參照組合物例1,不同的是將小部分甘露醇即2g甘露醇在第二步驟中添加與活性藥物一起與炭處理,結(jié)果顯示此時(shí)殘余百分?jǐn)?shù)為93.3%,表明甘露醇不能獲得蔗糖的效果。

檢測(cè)例1:對(duì)醋酸奧曲肽進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)

照《中國(guó)藥典》2015年版二部第1544頁(yè)所收載的醋酸奧曲肽中的有關(guān)物質(zhì)檢查方法和含量測(cè)定方法以及其它檢測(cè)指標(biāo),測(cè)定本發(fā)明實(shí)施例1-5所得終產(chǎn)物醋酸奧曲肽成品。經(jīng)測(cè)定,實(shí)施例1-5所得五批醋酸奧曲肽成品:

比旋度均在-69.4°~-73.2°范圍內(nèi),各樣品無(wú)明顯區(qū)別且均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定;

各氨基酸的相對(duì)比值分別在如下范圍內(nèi):半胱氨酸1.93~2.10,蘇氨酸0.88~1.06,苯丙氨酸1.92~2.10,賴氨酸0.95~1.03,且均能檢出蘇氨醇,各樣品無(wú)明顯區(qū)別且均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定;

醋酸含量均在7.7%~9.2%范圍內(nèi),各樣品無(wú)明顯區(qū)別且均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定;

有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果顯示,單個(gè)雜質(zhì)均在0.17~0.28%范圍內(nèi),總雜質(zhì)均在0.66~0.75%范圍內(nèi),各樣品無(wú)明顯區(qū)別且均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定;

含量測(cè)定結(jié)果顯示,按無(wú)水、無(wú)醋酸物計(jì),含醋酸奧曲肽以?shī)W曲肽(C49H66N10O10S2)計(jì)均在97.7~100.3%范圍內(nèi),各樣品無(wú)明顯區(qū)別且均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

檢測(cè)例2:注射液藥物組合物的性質(zhì)考察:

使組合物例1-3和組合物例11-13所得6批注射液照《中國(guó)藥典》2015年版二部第1545頁(yè)所收載的醋酸奧曲肽注射液項(xiàng)下的各項(xiàng)檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示全部注射液均勻符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。并且全部注射液的澄明度(其照《中國(guó)藥典》2015年版二部第1544頁(yè)所收載的醋酸奧曲肽原料藥的溶液的澄清度與顏色項(xiàng)下的方法檢查)均勻符合規(guī)定,均為無(wú)色澄明液體。

使組合物例1-3和組合物例11-13所得6批注射液置4℃溫度環(huán)境下放置7天、再在28℃溫度環(huán)境下放置7天,如此完成一個(gè)循環(huán);進(jìn)行四個(gè)此循環(huán)共56天,在第0天以及第56天各注射液照《中國(guó)藥典》2015年版二部第1545頁(yè)所收載的醋酸奧曲肽注射液項(xiàng)下的各項(xiàng)檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè),以考察藥物在高低溫交替條件下的物理穩(wěn)定性。結(jié)果顯示,全部注射液的含量和有關(guān)物質(zhì)在0天和56天均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定,除了澄明度外的其它各項(xiàng)指標(biāo)在0天和56天亦均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。但是注射液在56天的澄明度出現(xiàn)不同的變化,即,組合物例1和組合物例11-13注射液在56天的澄明度符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定,為無(wú)色澄明液體;而組合物例2和組合物例3注射液在56天的澄明度均不符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定,均呈現(xiàn)白色混濁物。這表明,即使采用相同處方,不同方法制得的注射液呈現(xiàn)不同的物理穩(wěn)定性。

以上所述實(shí)施例僅是為充分說(shuō)明本發(fā)明而所舉的較佳的實(shí)施例,本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于此。本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明基礎(chǔ)上所作的等同替代或變換,均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明的保護(hù)范圍以權(quán)利要求書為準(zhǔn)。

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