本發(fā)明涉及一種化妝品，用于皮膚的防衰老、美白、保濕。

背景技術(shù)：

皮膚是覆蓋于人體表面的ー個(gè)重要器官，由表皮、真皮、皮下組織和皮膚的附屬器官構(gòu)成。皮膚是外界環(huán)境和機(jī)體之間的一道天然屏障，保護(hù)機(jī)體中的器官免受溫度和濕度變化的影響，以及外界環(huán)境(如紫外線和污染物等)的影響，然而，皮膚的保護(hù)作用是有限的，當(dāng)外界的影響超過一定的程度，皮膚老化就成為了ー種必然。

抗衰老化妝品已占化妝品市場(chǎng)的50％以上。皮膚衰老的最主要因素之一，是皮膚長期受紫外輻射引起的皮膚光性老化。皮膚的光老化是由于皮膚中自由基含量增加，自由基可損傷生物膜，促使彈性纖維發(fā)生交聯(lián)和聚合，加速皮膚的老化。對(duì)抗和消除自由基防止自由基的損傷作用，往往通過抗氧化劑實(shí)現(xiàn)。目前的抗氧化劑分為兩類：一是非酶類抗氧化劑，如VE、VC等；另一類是酶類抗氧化劑，其中使用最廣泛的是超氧化物歧化酶。這兩類抗氧化劑加入到化妝品中后，酶類抗氧化劑在化妝品中的穩(wěn)定性差，并且由于分子量較大，滲入皮膚受到限制，因此它的使用仍有局限性。因此，使用小分子非酶類抗氧化劑更為看好。而維生素系列非酶類抗氧化劑由于穩(wěn)定性較差，也限制了其在化妝品中的應(yīng)用。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，從植物、中草藥等中提取的小分子抗氧化物質(zhì)比如多肽有些是有抗氧化作用，但是其效果還不是很明顯。

石榴為石榴科(Punicaceae)，石榴屬，落葉灌木或小喬木。石榴營養(yǎng)豐富，含糖量高達(dá)11％～14％，果酸0.4％～1.0％，含水分79％，蛋白質(zhì)、脂肪各占0.6％，維生素C的含量是蘋果和梨的2～3倍，尤以磷的含量最為突出，每百克達(dá)145毫克，在水果中名列前茅。石榴汁紅色素對(duì)DPPH有一定清除能力，其抗氧化作用與Vc相近，2.Omg/ml的石榴汁紅色素對(duì)DPPH的清除率達(dá)91.48％，表明石榴汁紅色素具有良好的抗氧化活性。石榴汁紅色素添加到化妝品配方中，經(jīng)測(cè)試發(fā)現(xiàn)：該化妝品在使用28天后，表皮幼紋祛除明顯，皮膚緊制度提升，延緩衰老的功效明顯。但是，目前以石榴為基礎(chǔ)的化妝品開發(fā)尚未成熟，未有相關(guān)的運(yùn)用。具有很大的應(yīng)用前景。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種以石榴提取多肽為主要活性成分的抗衰老化妝品，利用提取出的石榴多肽添加到化妝品配方中，配以其它輔料和組分制備而成的化妝品。經(jīng)過測(cè)試該化妝品具有良好的抗衰老的功效。

本發(fā)明提出ー種外用的抗衰老化妝品，其特征在于，由如下重量份的各組分構(gòu)成：石榴多肽0.1份，橄欖油2份，D-泛醇0.5份，維生素E 0.5份，谷胱甘肽0.1份，吡咯烷酮羧酸鈉1份，甘油2份，乳酸鈉1份，香精0.1份,5份純化水。

本發(fā)明另外提供一種石榴多肽的制備方法，(1)將石榴清洗干凈，絞碎，榨汁，加入木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，加酶量20000IU/g石榴，酶解溫度55℃，pH值7.0，酶解時(shí)間3h，酶解完成后92℃滅酶13min；

(2)滅酶后的物料過濾除去不溶物，得到溶液，所得多肽溶液加入4％活性炭吸附脫色，用葡聚糖G-50(Sephadex G-50)進(jìn)行多肽分離，20mmol/L HCl溶液洗脫，流速1.3mL/分鐘，分別收集不同時(shí)間段的洗脫產(chǎn)物，調(diào)節(jié)溶液至pH7.0，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，經(jīng)大孔樹脂DA201-C脫鹽處理后，真空濃縮，上清液冷凍干燥備用；經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)，回收小分子量的條帶，其中經(jīng)過功能驗(yàn)證，共得到60個(gè)小肽的序列具有抗衰老的功能。根據(jù)色譜柱中不同的峰值分離時(shí)間，可以批量獲得相應(yīng)的小肽，也可人工合成所述的多肽。所述多肽的序列如SEQ ID NO：1-60所示。

本發(fā)明的有益效果是:

本發(fā)明的化妝品原料價(jià)格低廉，來源豐富。石榴多肽與其他活性物質(zhì)結(jié)合，能更好的滋養(yǎng)皮膚，有效預(yù)防及對(duì)抗皺紋生成，增加皮膚彈性，延緩衰老。本發(fā)明采用石榴多肽為原料制備得到的化妝品，天然、溫和、對(duì)皮膚無刺激，而且多種活性物質(zhì)協(xié)同作用于皮膚，其效果要優(yōu)于普通化妝品。

優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述

以下實(shí)施例說明了本發(fā)明的各方面內(nèi)容。他們僅用以說明，并不限定本發(fā)明的范圍。

實(shí)施例1多肽的制備

(I)將石榴清洗干凈，絞碎，榨汁，加入木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，加酶量20000IU/g石榴，酶解溫度55℃，pH值7.0，酶解時(shí)間3h，酶解完成后92℃滅酶13min；

(2)滅酶后的物料過濾除去不溶物，得到溶液，所得多肽溶液加入4％活性炭吸附脫色，用葡聚糖G-50(Sephadex G-50)進(jìn)行多肽分離，20mmol/L HCl溶液洗脫，流速1.3mL/分鐘，分別收集不同時(shí)間段的洗脫產(chǎn)物，調(diào)節(jié)溶液至pH7.0，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，經(jīng)大孔樹脂DA201-C脫鹽處理后，真空濃縮，上清液冷凍干燥備用；經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)，回收小分子量的條帶，其中經(jīng)過功能驗(yàn)證，共得到60個(gè)小肽的序列具有抗衰老的功能。所述多肽的序列如SEQ ID NO：1-60所示，分別對(duì)應(yīng)的名稱為HFP-1～HFP-60。

實(shí)施例2化妝品的制備

分別取石榴多肽HFP-1 0.1份，用甘油2份和橄欖油2份進(jìn)行溶解。在攪拌下依次加入D-泛醇0.5份，維生素E 0.5份，谷胱甘肽0.1份，吡咯烷酮羧酸鈉1份，乳酸鈉1份，香精0.1份，充分?jǐn)嚢枋雇耆芙?，混勻，調(diào)節(jié)溶液的pH至5.5～6.5,最后用5份純化水補(bǔ)足配方總量，除菌過濾，分裝，即為成品化妝品。

實(shí)施例3化妝品HFP-2～60的制備

按照實(shí)施例2的方法，將石榴多肽分別替換為HFP-2～60共59種形式，其余組分和制備方法和實(shí)施例2相同，制備得到所述化妝品。

實(shí)施例4對(duì)照化妝品的制備

按照實(shí)施例2的方法，其中不加入相應(yīng)的石榴多肽，其余組分和方法與實(shí)施例2相同，制備得到相應(yīng)的化妝品。

實(shí)施例5安全性驗(yàn)證

試驗(yàn)材料和方法

動(dòng)物：普通級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大白兔。體查動(dòng)物未見異常。

環(huán)境條件：室溫：22℃—23℃，相對(duì)濕度：66％—68％；

試驗(yàn)方法：

依據(jù)《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》(2007年版)急性皮膚刺激性試驗(yàn)，試驗(yàn)前24小時(shí)，將試驗(yàn)動(dòng)物背部脊柱兩側(cè)毛剪掉，去毛范圍3厘米X 3厘米。取受試無原性0.5克直接涂抹在右側(cè)皮膚上，以潔凈紗布覆蓋，用無刺激性膠布固定2小時(shí)。另外一側(cè)為陰性對(duì)照。除去受試物后的1小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)72小時(shí)觀察受試動(dòng)物接觸部位皮膚反應(yīng)并做記錄。

結(jié)論：

在本試驗(yàn)條件下，受試物含有石榴多肽的化妝品對(duì)大白兔急性皮膚刺激試驗(yàn)按皮膚刺激強(qiáng)度分級(jí)為無刺激性。對(duì)照化妝品也無刺激性。

實(shí)施例6化妝品保濕度及保濕時(shí)間檢測(cè)

MMV(moisturemeasurementvalue)法檢測(cè)MMV值反映皮膚角質(zhì)層結(jié)合水的能力。采用CM825型皮膚油水酸堿測(cè)試儀測(cè)試皮膚的水合作用。它的測(cè)定原理是由于角質(zhì)層含有大量的電解質(zhì)，存在水中的電解質(zhì)具有導(dǎo)電性，這種現(xiàn)象也產(chǎn)生在皮膚表面，通過測(cè)試探頭與皮膚接觸后，電導(dǎo)率的變化來反映皮膚的水合狀態(tài)。

受試者為健康無皮膚病的志愿者。試驗(yàn)條件為測(cè)試期間環(huán)境的溫度和濕度恒定，溫度為25℃±2℃，相對(duì)濕度為40％～60％。

選取健康無皮膚病的志愿者62名，進(jìn)行測(cè)試。測(cè)試方法為：①確定左右前臂4塊測(cè)試區(qū)域，區(qū)域面積為4cmX4cm，分別測(cè)試該區(qū)域的空白值。②將樣本涂敷于測(cè)試區(qū)域，用量為2mg/cm²。③使用后120min進(jìn)行最終的測(cè)試，每塊區(qū)域測(cè)試5個(gè)點(diǎn)，取平均值。保濕效果評(píng)價(jià)的評(píng)價(jià)公式：相對(duì)保濕率/％＝(P樣t＝x-P空白)/(P標(biāo)t＝x-P空白)X100％式中：P樣t＝x-使用一定時(shí)間后產(chǎn)品的電導(dǎo)率；P空白-未涂樣品的電導(dǎo)率；P標(biāo)t＝x-使用一定時(shí)間后參照物的電導(dǎo)率，本發(fā)明的化妝品以及甘油比較的保濕率情況(％)結(jié)果如下表所示：

從以上表格看，本發(fā)明的化妝品的保濕率明顯高于甘油的保濕情況，同時(shí)也說明本發(fā)明的多肽對(duì)于提高化妝品的保濕效果具有顯著的促進(jìn)作用。

實(shí)施例6抗衰老功效性評(píng)價(jià)試驗(yàn)

化妝品對(duì)皮膚的抗衰老效果檢測(cè)

自由基是生命活動(dòng)過程中生物化學(xué)反應(yīng)的中間產(chǎn)物，與生命老化有關(guān)的生物自由基主要是一些含氧的自由基，抗氧化劑可提供質(zhì)子給過氧化物自由基，因而能夠抑制脂質(zhì)自氧化的連鎖反應(yīng)。通常使DPPH·來檢驗(yàn)抗氧化劑提供質(zhì)子的能力。DPPH·是一種很穩(wěn)定的自由基，其甲醇溶液在517nm處有極強(qiáng)的吸光度，但當(dāng)被氧化劑(AH)或自由基(RO還原時(shí)，其吸光度會(huì)降低或消失。由此，可利用樣品在517nm處的吸光度來判定樣品是否有清除自由基的能力。

取化妝品，用PBS配置成100mg化妝品/ml的溶液，分別與3.8ml甲醇溶液、Iml(DPPH)radical甲醇溶液(2Xl0-4mol/L)，充分混和均勻，靜置30min后，以分光光度計(jì)測(cè)517nm處吸光度，并以公式計(jì)算其自由基清除率。自由基清除率(％)＝[(Ac-As/Ac)]X100％As:含有待測(cè)物的樣品在517nm處的吸光度；Ac:不含待測(cè)物的樣品在517nm處的吸光度不同體積的中藥提取物的自由基清除率(％)，其結(jié)果如下(結(jié)果的單位％)：

從表中可以看出，本發(fā)明的化妝品對(duì)于自由基清除率較高。說明本發(fā)明的化妝品具有良好的抗衰老能力。

實(shí)施例7護(hù)膚霜美白效果檢測(cè)

選擇膚色較深的男女志愿者各61名，早晚潔面后對(duì)右臉用本發(fā)明的化妝品，進(jìn)行早晚間隔12h的涂抹，左臉作為對(duì)照，只涂抹實(shí)施例4的化妝品，試用四周，根據(jù)感官評(píng)價(jià)填寫試用評(píng)價(jià)表。最高分4分為效果顯著，最低分為1，對(duì)比效果不明顯。分別在第四周利用卡方進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

通過檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，含有HFP-1～60多肽的化妝品在使用了四周后，右臉出現(xiàn)了明顯的斑點(diǎn)淡化效果(P<0.05)。以上數(shù)據(jù)說明本發(fā)明具有美白之功效。而右臉使用甘油的左右臉部沒有顯著差異，說明本發(fā)明的化妝品具有較為顯著的美白功效。

序列表

〈110〉顧銀鳳

〈120〉一種具有防衰老、美白、保濕功效的化妝品

〈160〉60

〈210〉1

〈211〉19

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-1

RFIVHSLPKPSMHPAQRRR

〈210〉2

〈211〉19

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-2

PQQCVLVQTTWMSLEGGRS

〈210〉3

〈211〉18

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-3

PPRPYYPQQTEFSHDQRK

〈210〉4

〈211〉18

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-4

RLLSSDWNQLQEYWRYMV

〈210〉5

〈211〉17

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-5

WRHRNWQGQGLGRGDDD

〈210〉6

〈211〉16

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-6

DRDMLIAQTMKGTVTS

〈210〉7

〈211〉17

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-7

GIFFTETLNSNCTETYP

〈210〉8

〈211〉16

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-8

LWAKWWHLIYPHHYIH

〈210〉9

〈211〉19

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-9

MKHWLRNEWRIERVMDQQA

〈210〉10

〈211〉18

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-10

PDLMYSYPPTIQIIGLNT

〈210〉11

〈211〉17

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-11

AMGKMTNFVLSHNPTST

〈210〉12

〈211〉16

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-12

TITYSTQLIRRYRSHM

〈210〉13

〈211〉19

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-13

DSCVQAIHWMWWDEVLSGY

〈210〉14

〈211〉18

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-14

INKPWQQSGHFADSWKRG

〈210〉15

〈211〉17

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-15

VMFTDIKCPCQFAHMND

〈210〉16

〈211〉16

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-16

LPIPRKTSPWCIWSYN

〈210〉17

〈211〉19

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-17

RVSMYWERSDNGFHQRQES

〈210〉18

〈211〉18

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-18

LPGDTHAPWWWRPVLIAK

〈210〉19

〈211〉17

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-19

AMHGMFSTEGTPQEDAP

〈210〉20

〈211〉16

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-20

RSHWHEAWHLVCIGGH

〈210〉21

〈211〉19

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-21

IPHQELWQKYSQIFLPWTS

〈210〉22

〈211〉19

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-22

RLESKRIPFQRGEPRGPMY

〈210〉23

〈211〉18

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-23

EWCHQCWMCGVAQMWGHF

〈210〉24

〈211〉17

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-24

PYMAGPPRDREGIHFLH

〈210〉25

〈211〉16

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-25

EYEGGWPNEQAPAPKG

〈210〉26

〈211〉18

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-26

NPPHRCADHQQEVMVSFH

〈210〉27

〈211〉17

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-27

KKFFTEWGVGSQQGAPN

〈210〉28

〈211〉16

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-28

LFIHCRVKKRMTCHEW

〈210〉29

〈211〉19

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-29

EMIWKGRRTPVTDIARPLV

〈210〉30

〈211〉18

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-30

NPWRCRVMRPERCHDINQ

〈210〉31

〈211〉17

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-31

IWHMCTKTWRFIDSFEK

〈210〉32

〈211〉16

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-32

WVSRWVMFSPHPLPVM

〈210〉33

〈211〉19

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-33

MGIRSWWCILMIWQHPRQY

〈210〉34

〈211〉18

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-34

IITQYVYPDLWYVQPWGI

〈210〉35

〈211〉17

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-35

LSDFTWMNLREGWGGVE

〈210〉36

〈211〉16

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-36

VYSHRYCLTWEHNLHA

〈210〉37

〈211〉18

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-37

GYHSHGLWHFRWHLIYMR

〈210〉38

〈211〉17

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-38

VFRNTWWVEHYDGTSNR

〈210〉39

〈211〉16

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-39

LQLPRVPTHMYPSHLN

〈210〉40

〈211〉19

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-40

VYDLWTDQQSWDFGRHIPP

〈210〉41

〈211〉19

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-41

QYRNPEFQHNSWTSDIKNI

〈210〉42

〈211〉19

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-42

WDHARRWHHDYEWPRSCRR

〈210〉43

〈211〉18

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-43

KMEMHDDYSYKFICSQQWG

〈210〉44

〈211〉18

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-44

GSWLNNPRNSVGDPECFG

〈210〉45

〈211〉19

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-45

FKGGHPDQVDFKRLRYQHP

〈210〉46

〈211〉19

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-46

PHNMMLVHLVLHSGNQYGH

〈210〉47

〈211〉18

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-47

FCSWQFPDELCYTSISSY

〈210〉48

〈211〉17

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-48

IGETRCQQNQFKLLRGG

〈210〉49

〈211〉16

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-49

PKPGANIIYERECPPY

〈210〉50

〈211〉18

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-50

DQWSWPQEHKLPSRGSQQ

〈210〉51

〈211〉17

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-51

NCEGTKRISELICIIKH

〈210〉52

〈211〉16

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-52

NTCWSRDHMICFWHVC

〈210〉53

〈211〉17

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-53

SSINQHQYGNRAESHLM

〈210〉54

〈211〉16

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-54

IWWVLFFPQIYWTGPH

〈210〉55

〈211〉18

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-55

EYKSSLHLGRWSWWSMNG

〈210〉56

〈211〉17

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-56

TDPFNFNSMTYHRRHCV

〈210〉57

〈211〉16

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-57

CHTYPSPLNAYHWFKS

〈210〉58

〈211〉18

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-58

DKQGQILTETKKSSQEQC

〈210〉59

〈211〉17

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-59

WGSVTSRMGHVADPQLH

〈210〉60

〈211〉16

〈212〉PRT

〈213〉人工序列

〈400〉HFP-60

NHCMHFHNCYHPCRCW