本發(fā)明涉及一種化妝品，具體涉及一種用于祛除日曬斑的化妝品。
背景技術(shù)：
：日曬斑，主要以紫外線、毒素累積、細(xì)胞遭受刺激等因素造成。日曬斑的形狀呈現(xiàn)橢圓形突起或者平滑，顏色一深棕色或淡褐色為主。容易出現(xiàn)的位置有前臀外側(cè)、手背、小腿前側(cè)及臉部，出現(xiàn)日曬斑初期會(huì)感覺(jué)疼痛、發(fā)癢、脫皮、最后形成色斑。辨別臉部日曬斑主要看是否出現(xiàn)在鼻梁和面頰外側(cè)，以顆粒點(diǎn)狀棕褐色為主的斑點(diǎn)?，F(xiàn)有技術(shù)中針對(duì)日曬斑的保養(yǎng)的化妝品有很多種，比如，CN103655387A公開(kāi)了一種防治日曬瘡植物精華面膜，具有如下的配方(組分及其重量百分比％):當(dāng)歸尾6.0-12.0；銀丹草4.0-10.0；滑石粉10.0-15.0；蘆薈6.0-15.0；天花粉3.0-6.0；薏苡仁9.0-30.0；冰片3.0-10.0；佩蘭6.0-12.0；蜂蜜3.0-10.0。該化妝品精選合理配伍的中草藥成份，經(jīng)特殊工藝配置而成。但是該面膜中添加了大量的中草藥成分，結(jié)果復(fù)雜，制備不容易，并且成本也較為高昂，在經(jīng)濟(jì)性上有待于進(jìn)一步提高。CN104306861A中公開(kāi)了一種日曬斑的藥物，包括雙花4-10份、連翹2-5份、羅漢果10-25份、維生素B63-8份、黨參5-11份、益母草6-11份、蘿卜皮5-10份、西瓜翠衣5-10份、仙人掌6-8份、薄荷5-6份、砂仁5-12份、麩子8-12份、鈣片2-5份、紅酒12-15和白扁豆5-12份制備而成的。該藥物富含大量維生素，而且含有大量有效的修復(fù)皮膚膠原蛋白的成分，有利于消除日曬斑和修復(fù)皮膚。可以有效的消除日曬斑并且修復(fù)肌膚的膠原蛋白層。并且在配伍健康合理，符合皮膚和身體的健康需求。但是，同樣的該藥物也是使用了大量的中草藥，成分特別復(fù)雜，對(duì)于藥效的均一性和穩(wěn)定性也有待于商榷，而且制備工藝復(fù)雜，成本同樣比較高昂。CN106265414A中公開(kāi)了一種祛日曬斑面膜，其有效成分包括以下重量份原料：蘆薈提取物5-8份、銀杏葉提取物0.5-0.8份、蜂蛹提取物1-2份、紅花提取物0.2-0.4份，每張面膜載體載有所述有效成分15-25ml。該發(fā)明的面膜針對(duì)日曬斑具有顯著作用。該發(fā)明中使用的銀杏葉提取物和蜂蛹提取物都是成本比較高昂的物質(zhì)，并且提取的工藝也較為復(fù)雜，質(zhì)控并不特別容易實(shí)現(xiàn)，并且在效果方面并沒(méi)有特別顯著的效果，因此，有巨大的改進(jìn)空間。基于現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，針對(duì)治療日曬斑的化妝品在現(xiàn)有技術(shù)中有巨大的需求，因此，基于上述缺陷，本發(fā)明提出了如下的技術(shù)方案。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供一種化妝品，可以有效的祛除日曬斑。本發(fā)明的一個(gè)方面，提供一種能夠殺死人黑色素細(xì)胞的化妝品，其中包括使用SEQIDNo:1-11任一所述的多肽，所述的多肽分別對(duì)應(yīng)命名為RGT-1～11所示。該多肽是申請(qǐng)人通過(guò)前期通過(guò)文庫(kù)篩選獲得的。本發(fā)明另外提供一種化妝品，該化妝品除了含有SEQIDNo:1-11任一所述的多肽之外，還有有花青素。本發(fā)明另外提供一種化妝品，為面霜，包括下述質(zhì)量百分比含量的組分：SEQIDNo:1-11任一所述的多肽0.01％、羊毛脂7-10％、凡士林5-9％、角鯊?fù)?-8％、甘油單硬脂酸酯6％、蓖麻油1％、美白劑0.1-0.25％、甘油15-20％、軟骨素硫酸鈉0.1-0.5％、花青素1％，水余量。本發(fā)明另外提供一種制備成人黑色素細(xì)胞懸浮液的方法，首先，利用水泡吸附法取得成人的表皮組織。在此步驟中，以酒精將皮膚消毒后，將針筒放置于皮膚上，以200-300毫米汞柱的吸力吸附皮膚長(zhǎng)達(dá)60-120分鐘，使皮膚形成水泡，再將表皮組織剪下，一般而言，表皮組織上含有約86-90％的角質(zhì)細(xì)胞及5-7％的黑色素細(xì)胞。接著，將剪下的表皮組織切碎后，先以胰蛋白溶液浸泡，再移入胰蛋白-乙二胺四乙酸(trypsin-EDTA)溶液中，使黑色素細(xì)胞從表皮組織分離，最后以離心的方式收集表皮細(xì)胞，并于細(xì)胞培養(yǎng)皿中培養(yǎng)。其中角質(zhì)細(xì)胞因無(wú)法生長(zhǎng)而迅速減少，黑色素細(xì)胞則持續(xù)增生，而得到接近純黑色素細(xì)胞的細(xì)胞族群。由于黑色素細(xì)胞屬于粘附型細(xì)胞(adherentcell)，因此需利用胰蛋白酶(Trypsin)分解細(xì)胞與培養(yǎng)皿間的附著蛋白，讓黑色素細(xì)胞脫落下來(lái)，這是收集粘附型細(xì)胞常用的方法。接著，洗滌取得的黑色素細(xì)胞。之后，以約1.2-1.5X106/ml的密度，將黑色素細(xì)胞重新懸浮于漢氏培養(yǎng)液(Ham'sF12)中。漢氏培養(yǎng)液(Ham'sF12)為常見(jiàn)的市售培養(yǎng)液，內(nèi)含氨基酸、糖類(lèi)、脂肪酸、鹽類(lèi)等基本細(xì)胞生長(zhǎng)必須物質(zhì)。除了漢氏培養(yǎng)液(Ham'sF12)外，也可采用DMEM、最低基本培養(yǎng)液(MEM)、磷酸生理食鹽水(PBS)、1640培養(yǎng)液、一般生理食鹽水(normalsaline)或其它生理兼容溶液來(lái)配制。最后，將黑色素細(xì)胞懸浮液細(xì)胞計(jì)數(shù)，等量分裝入試管中，以進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。本發(fā)明另外提供一種人黑色素細(xì)胞殺死實(shí)驗(yàn)方法，將本發(fā)明SEQIDNO：1～11任一所述的多肽，添加進(jìn)入含有黑色素細(xì)胞培養(yǎng)液中，加入量為0.01％(m/v)；細(xì)胞在37℃中培養(yǎng)5h，10h，12h，分別檢測(cè)其中活細(xì)胞的數(shù)量，分析細(xì)胞殺死率。技術(shù)效果本發(fā)明通過(guò)提供特異性的黑色素細(xì)胞殺死多肽，特異性的殺死局部的黑色素細(xì)胞，從而為徹底去除日曬斑提供了最后的保障。另外，在化妝品中通過(guò)添加花青素，從而有效的消除皮膚表面的已經(jīng)形成的日曬斑，二者有機(jī)結(jié)合，再通過(guò)添加美白劑以及其他物質(zhì)的組合，從而治標(biāo)治本，從而徹底祛除日曬斑達(dá)到不復(fù)發(fā)的效果。而且本發(fā)明的化妝品，營(yíng)養(yǎng)豐富，滑爽而油潤(rùn)，對(duì)提高皮膚張力和抗皺有顯著效果，特別還具有美白肌膚的效果。最為重要的是，本發(fā)明成本低廉，取材容易，特別適宜大面積的推廣使用。附圖說(shuō)明圖1是培養(yǎng)人黑色素細(xì)胞流程圖；圖2治療前面部皮膚的對(duì)照?qǐng)D；圖3治療后面部皮膚的對(duì)照?qǐng)D。具體實(shí)施方式以下實(shí)施例說(shuō)明了本發(fā)明的各方面內(nèi)容。他們僅用以說(shuō)明，并不限定本發(fā)明的范圍，本領(lǐng)域技術(shù)人員在此基礎(chǔ)上進(jìn)行的常規(guī)的改變或者添加，也都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍，應(yīng)加以限制。實(shí)施例1人黑色素細(xì)胞的批量獲得首先，利用水泡吸附法取得成人的表皮組織。在此步驟中，以酒精將皮膚消毒后，將針筒放置于皮膚上，以200-300毫米汞柱的吸力吸附皮膚長(zhǎng)達(dá)100分鐘，使皮膚形成水泡，再將表皮組織剪下，一般而言，表皮組織上含有約86-90％的角質(zhì)細(xì)胞及5-7％的黑色素細(xì)胞。接著，將剪下的表皮組織切碎后，先以5％胰蛋白溶液浸泡，再移入胰蛋白-乙二胺四乙酸(trypsin-EDTA)溶液中，使黑色素細(xì)胞從表皮組織分離，最后以5000g離心的方式收集表皮細(xì)胞，并于細(xì)胞培養(yǎng)皿中培養(yǎng)。其中角質(zhì)細(xì)胞因無(wú)法生長(zhǎng)而迅速減少，黑色素細(xì)胞則持續(xù)增生，而得到接近純黑色素細(xì)胞的細(xì)胞族群。由于黑色素細(xì)胞屬于粘附型細(xì)胞(adherentcell)，因此需利用3％胰蛋白酶(Trypsin)分解細(xì)胞與培養(yǎng)皿間的附著蛋白，讓黑色素細(xì)胞脫落下來(lái)。接著，PBS洗滌取得的黑色素細(xì)胞。之后，以約1.5X106/ml的密度，將黑色素細(xì)胞重新懸浮于漢氏培養(yǎng)液(Ham'sF12)中。最后，將黑色素細(xì)胞懸浮液細(xì)胞計(jì)數(shù)，等量分裝入試管中，每個(gè)試管中細(xì)胞的密度為100g/mL左右，以進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。實(shí)施例2多肽的制備以多肽合成的方式，或者以本領(lǐng)域技術(shù)人員常用的原核表達(dá)的方式來(lái)表達(dá)并純化獲得SEQIDNO：1～11所示的多肽，分別命名為RGT-1～11所示。實(shí)施例3黑色素細(xì)胞殺死實(shí)驗(yàn)將本發(fā)明SEQIDNO：1～11任一所述的多肽，添加進(jìn)入含有黑色素細(xì)胞培養(yǎng)液試管中，原始細(xì)胞濃度為200個(gè)/mL，多肽的加入量為0.01％(m/v)；細(xì)胞在37℃中培養(yǎng)5h，10h，12h，分別檢測(cè)其中活細(xì)胞的數(shù)量，分析細(xì)胞殺死率(每一個(gè)做3個(gè)重復(fù))。結(jié)果如下表1所示，每一個(gè)結(jié)果P值均小于0.05。產(chǎn)品種類(lèi)5h活細(xì)胞剩余量10h活細(xì)胞剩余量12h活細(xì)胞剩余量PBS對(duì)照195183170RGT-1多肽22181RGT-2多肽40232RGT-3多肽43201RGT-4多肽50191RGT-5多肽39304RGT-6多肽40312RGT-7多肽32295RGT-8多肽29304RGT-9多肽55388RGT-10多肽60438RGT-11多肽46325表1從表1的結(jié)果可以看出，本發(fā)明的多肽具有較好的殺死黑色素細(xì)胞的效果，并且殺死的時(shí)間較短，具有殺死效果顯著的特性。而且，通過(guò)電鏡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，黑色素細(xì)胞的細(xì)胞核先溶解導(dǎo)致的細(xì)胞死亡。實(shí)施例4化妝品的制備分別取SEQIDNo:1所述的RGT-1多肽0.01％、羊毛脂10％、凡士林5％、角鯊?fù)?％、甘油單硬脂酸酯6％、蓖麻油1％、美白劑0.25％、甘油20％、軟骨素硫酸鈉0.5％、花青素1％，充分?jǐn)嚢枋雇耆芙猓靹?，調(diào)節(jié)溶液的pH至6.5,最后用純化水補(bǔ)足配方總量，除菌過(guò)濾，分裝，即為成品化妝品。實(shí)施例5化妝品RGT-2～11的制備按照實(shí)施例4的方法，將SEQIDNO：2～11多肽分別替換RGT-1多肽，其余組分和制備方法和實(shí)施例4相同，制備得到所述化妝品。實(shí)施例6安全性驗(yàn)證試驗(yàn)材料和方法動(dòng)物：普通級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大白兔。體查動(dòng)物未見(jiàn)異常。環(huán)境條件：室溫：25℃，相對(duì)濕度：68％；試驗(yàn)方法：依據(jù)《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》(2007年版)急性皮膚刺激性試驗(yàn)，試驗(yàn)前24小時(shí)，將試驗(yàn)動(dòng)物背部脊柱兩側(cè)毛剪掉，去毛范圍3厘米X3厘米。取受試無(wú)原性0.5克直接涂抹在右側(cè)皮膚上，以潔凈紗布覆蓋，用無(wú)刺激性膠布固定2小時(shí)。另外一側(cè)為陰性對(duì)照。除去受試物后的1小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)72小時(shí)觀察受試動(dòng)物接觸部位皮膚反應(yīng)并做記錄。結(jié)論：在本試驗(yàn)條件下，受試物含有本發(fā)明多肽的化妝品對(duì)大白兔急性皮膚刺激試驗(yàn)按皮膚刺激強(qiáng)度分級(jí)為無(wú)刺激性。對(duì)照化妝品也無(wú)刺激性。實(shí)施例7祛斑效果驗(yàn)證1、患者選擇:選擇日曬斑患者(簽署知情同意書(shū)并經(jīng)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn))，均為女性，隨機(jī)分為兩組。治療組:220例,每個(gè)多肽對(duì)應(yīng)20例，平均年齡25歲，病程1個(gè)月，采用實(shí)施例4和5的多肽化妝品進(jìn)行治療；對(duì)照組:20例，平均年齡25歲，病程3個(gè)月，使用不含有多肽的實(shí)施例4的化妝品進(jìn)行治療。兩組在年齡、性別、病情的輕重、病程等方面比較，具有可比性(P>0.05)。2、治療方法：治療組為分別基于實(shí)施例4和5制備得到的化妝品，早晚各涂抹在日曬斑患病處1次，療程1個(gè)月；對(duì)照組:給予實(shí)施例4中不含有多肽的化妝品作為對(duì)照，也涂抹在日曬斑患病處1次，療程1個(gè)月。治療期問(wèn)，所有患者均停用其它一切功效型化妝品，外出注意防曬。對(duì)照組患者需定期監(jiān)測(cè)肝功和血脂，無(wú)異常可繼續(xù)服用。30d為1個(gè)療程。3、療效判定評(píng)分方法:①根據(jù)皮損面積評(píng)分:無(wú)皮損為0分，皮損面積<3cm2為1分，皮損面積3-5cm2為2分，皮損面積>5cm2為3分；②根據(jù)皮損顏色深淺評(píng)分:正常膚色為0分；若呈淺褐色為1分，深褐色為2分，黑褐色為3分；③總積分為面積積分與顏色積分的總和。指數(shù)的計(jì)算方法為:(治療前總積分一治療后總積分)/治療前總積分。療效判定標(biāo)準(zhǔn):基本治愈:肉眼可見(jiàn)色斑的面積消退超過(guò)90％，色斑顏色已基本消失，按照評(píng)分法計(jì)算，治療后的下降指數(shù)≥0.8；顯效；肉眼可見(jiàn)色斑面積消退超過(guò)60％，色斑的顏色與治療前相比明顯變淡，按照評(píng)分法計(jì)算，治療后的下降指數(shù)≥0.5；有效:肉眼可見(jiàn)色斑面積消退超過(guò)30％，色斑顏色變淡，按照評(píng)分法計(jì)算，治療后的下降指數(shù)≥0.3；無(wú)效:肉眼可見(jiàn)色斑的面積消退不足30％,且色斑顏色并無(wú)明顯變化，按照評(píng)分法計(jì)算，治療后下降指數(shù)小于等于0?？傆行剩?基本治愈十顯效十有效)例數(shù)/總例數(shù)×100％。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS15.0進(jìn)行資料分析，計(jì)數(shù)資料與計(jì)量資料分別采用χ2檢驗(yàn)與t檢驗(yàn)的方法，P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。療效比較:兩組患者均完成治療觀察，治療組總有效率大于95％，對(duì)照組為0％，療效比較有顯著性差異(χ2<2.21,P<0.05)，見(jiàn)表2。表2從表2可以看出，本發(fā)明的治療效果較好，具有較好的應(yīng)用前景。在使用RGT-1多肽化妝品治療的一位患者通過(guò)拍照，從圖2和圖3的結(jié)果可以看出，治療后面部斑得到的較好的治療基本痊愈。其余多肽效果類(lèi)似，在此不一一貼圖。實(shí)施例8化妝品保濕度及保濕時(shí)間檢測(cè)MMV(moisturemeasurementvalue)法檢測(cè)MMV值反映皮膚角質(zhì)層結(jié)合水的能力。采用CM825型皮膚油水酸堿測(cè)試儀測(cè)試皮膚的水合作用。它的測(cè)定原理是由于角質(zhì)層含有大量的電解質(zhì)，存在水中的電解質(zhì)具有導(dǎo)電性，這種現(xiàn)象也產(chǎn)生在皮膚表面，通過(guò)測(cè)試探頭與皮膚接觸后，電導(dǎo)率的變化來(lái)反映皮膚的水合狀態(tài)。受試者為健康無(wú)皮膚病的志愿者。試驗(yàn)條件為測(cè)試期間環(huán)境的溫度和濕度恒定，溫度為25℃±2℃，相對(duì)濕度為40％～60％。選取健康無(wú)皮膚病的志愿者12名，進(jìn)行測(cè)試。測(cè)試方法為：①確定左右前臂4塊測(cè)試區(qū)域，區(qū)域面積為4cmX4cm，分別測(cè)試該區(qū)域的空白值。②將樣本涂敷于測(cè)試區(qū)域，用量為2mg/cm2。③使用后120min進(jìn)行最終的測(cè)試，每塊區(qū)域測(cè)試5個(gè)點(diǎn)，取平均值。保濕效果評(píng)價(jià)的評(píng)價(jià)公式：相對(duì)保濕率/％＝(P樣t＝x-P空白)/(P標(biāo)t＝x-P空白)X100％式中：P樣t＝x-使用一定時(shí)間后產(chǎn)品的電導(dǎo)率；P空白-未涂樣品的電導(dǎo)率；P標(biāo)t＝x-使用一定時(shí)間后參照物的電導(dǎo)率，本發(fā)明的化妝品以及甘油比較的保濕率情況(％)結(jié)果如下表所示：產(chǎn)品種類(lèi)保濕率對(duì)照0.48RGT-1多肽0.78RGT-2多肽0.75RGT-3多肽0.74RGT-4多肽0.76RGT-5多肽0.74RGT-6多肽0.70RGT-7多肽0.80RGT-8多肽0.76RGT-9多肽0.77RGT-10多肽0.75RGT-11多肽0.76表3從以上表格看，本發(fā)明的化妝品的保濕率明顯高于甘油的保濕情況，同時(shí)也說(shuō)明本發(fā)明的多肽對(duì)于提高化妝品的保濕效果具有顯著的促進(jìn)作用。以上內(nèi)容是結(jié)合具體的優(yōu)選實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明所作的進(jìn)ー步詳細(xì)說(shuō)明，不能認(rèn)定本發(fā)明的具體實(shí)施只局限于這些說(shuō)明。對(duì)于本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干簡(jiǎn)單推演或替換，都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。序列表〈110〉金鑫〈120〉一種化妝品〈160〉11〈210〉1〈211〉27〈212〉PRT〈213〉人工序列〈400〉RGT-1RIWPVMDQRDRQQHHPWYQRAPCRNQG〈210〉2〈211〉25〈212〉PRT〈213〉人工序列〈400〉RGT-2VCCCRSTHKPQFCLQLMINFKQFAP〈210〉3〈211〉24〈212〉PRT〈213〉人工序列〈400〉RGT-3IMGHREQFPRIPRNRPKWHAHWWW〈210〉4〈211〉26〈212〉PRT〈213〉人工序列〈400〉RGT-4STRRWPKPSTPQSYLEVEQEEMYQPR〈210〉5〈211〉21〈212〉PRT〈213〉人工序列〈400〉RGT-5IQIPTKSSSRTFLSKIPLDMP〈210〉6〈211〉20〈212〉PRT〈213〉人工序列〈400〉RGT-6NAEQLYDHNIQWLYAMYWVE〈210〉7〈211〉23〈212〉PRT〈213〉人工序列〈400〉RGT-7QHPQRLKRSRPETHSMMQPKVWY〈210〉8〈211〉25〈212〉PRT〈213〉人工序列〈400〉RGT-8DYGPRVVFQQWMKSNRWNWHMNDVV〈210〉9〈211〉27〈212〉PRT〈213〉人工序列〈400〉RGT-9GHQWYSQTRFEYDDLKIWGKCTFHELS〈210〉10〈211〉26〈212〉PRT〈213〉人工序列〈400〉RGT-10WHGTTMWHVQFRSSFWAAWWMTPRLC〈210〉11〈211〉17〈212〉PRT〈213〉人工序列〈400〉RGT-11WHTSHRFKRHPEWHLLI當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3