本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種具有止咳功效的組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
急性支氣管炎，慢性支氣管炎急性發(fā)作，是臨床常見病，多發(fā)病。急性氣管-支氣管炎常伴隨著感冒而出現(xiàn)，一般成人每年患感冒4-6次，兒童每年患6-8次，其中咳嗽是最常見和痛苦的癥狀之一。而慢性支氣管炎根據(jù)我國70年代全國6千萬人的普查，患病率為3.82％。隨著年齡增長，患病率遞增，50歲以上的患病率高達15％或更多。若不能及時控制，反復遷延，由咳至喘，可以發(fā)展為慢性阻塞性肺氣腫、肺原性心臟病等，嚴重危害人類健康。
在急慢性支氣管炎的治療方面，應用抗炎藥及抗生素雖可消除呼吸道炎癥，殺滅病原體，但由于耐藥性等原因，有時療效并不理想。目前臨床上多以含有抗組胺劑和化痰劑的鎮(zhèn)咳藥治療咳嗽，這些藥物在某些情況下能夠暫時緩解癥狀，但多數(shù)情況下，長期療效不佳，有些甚至可能延長癥狀的持續(xù)時間。
目前應用外治法治療咳嗽的報道也很多見，主要以穴位敷貼為主。很多醫(yī)家在臨床用藥有效的基礎(chǔ)上，開展動物實驗研究，探討其作用機理。綜其所知，中醫(yī)藥治療急性支氣管炎、慢支急性發(fā)作之咳嗽具有療效確切，方法多樣，副作用少等優(yōu)勢，但目前所見報道，多局限于臨床經(jīng)驗總結(jié)及專方專藥的應用報道，由于各位學者的學術(shù)觀點和師承流派不同，對本病的辨證論治缺乏統(tǒng)一的標準，在應用外治法方面尚沒有成熟的經(jīng)驗。因此，在中醫(yī)學理論指導下，采用嚴格的科研設(shè)計，對急性氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作之咳嗽進行深入的研究，開發(fā)應用治療外感咳嗽的高效安全的中成藥和外用制劑，是一項十分重要的任務。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種具有止咳功效的藥物組合物。
本發(fā)明的另一目的是提供該具有止咳功效的藥物組合物的制備方法。
本發(fā)明還有一個目的是提供上述具有止咳功效的藥物貼劑及其制備方法。
發(fā)明人基于“肺主皮毛”理論，提出了藥物可藉皮膚、穴位及鼻三種不同途徑入肺進而實現(xiàn)調(diào)暢肺氣的新觀念；內(nèi)服治嗽之方經(jīng)合理加減后外用，其療效仍著；止咳巴布貼膏所用劑型給藥方便，易為廣大患者所接受。
本發(fā)明的目的是通過以下方式實現(xiàn)的：
一種具有止咳功效的藥物組合物，其特征在于該組合物由以下重量份的組分制成：麻黃3-7重量份，干姜5-9重量份，洋甘菊3-7重量份。
上述具有止咳功效的藥物組合物，優(yōu)選該組合物由以下重量份的組分制成：麻黃5重量份，干姜7.5重量份，洋甘菊5重量份。
上述具有止咳功效的組合物的制備方法包括以下步驟：
(1)洋甘菊、干姜加8-12倍量水，水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，提取時間5-6小時，所得揮發(fā)油，提油后得到的藥液濃縮至室溫條件下相對密度1.05～1.10，加入質(zhì)量濃度為95％乙醇調(diào)節(jié)含醇量80％，充分攪拌，靜置18小時，濾過，得濾液Ⅰ；
(2)洋甘菊、干姜提油后殘渣與麻黃加總重4-8倍量質(zhì)量濃度為70％的乙醇加熱回流提取2-3小時，每次1.5-2小時，濾過，合并兩次醇提取液，得濾液Ⅱ；
將濾液Ⅱ與濾液Ⅰ混合，在70～80℃，0.08-0.1Mpa條件下減壓回收乙醇至無醇味。
上述具有止咳功效的藥物組合物功能：解表清里，宣肅肺氣，化痰止咳。
主治：急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作之表寒肺熱證。癥見：咳嗽，氣急，咽癢，咯痰量多或伴有鼻塞、流涕、頭痛，或有惡寒發(fā)熱等表證。舌質(zhì)淡紅，苔薄白或黃，脈浮滑。所述的具有止咳功效的藥物組合物可在制備治療急性支氣管炎、慢性支氣管炎、急性發(fā)作之表寒肺熱證的藥物中應用。
中醫(yī)學認為風寒郁表日久，常會因陽郁不達而并見里熱；或平素肺有郁熱之人，又復感外寒(侵襲)，往往是風寒未盡，內(nèi)熱已生，即使夏秋燥熱之季，也多因貪涼飲冷，久享風扇、空調(diào)而起，更是風寒尚存，熱象已重，因此，臨床上寒熱夾雜之證最較為常見，最終形成表寒郁閉，肺熱壅遏，肺失宣肅，痰濕(熱)內(nèi)蘊之表寒里熱的咳嗽證候。本發(fā)明組合物正是基于這一咳嗽的臨床特點，在古方小青龍加石膏湯的基礎(chǔ)上，結(jié)合外治法的用藥特點，經(jīng)合理化裁，反復篩選及臨床驗證形成的新處方。
方中以麻黃發(fā)散風寒，宣肺平喘為君藥；干姜溫化痰飲，而為臣；洋甘菊芳香濃郁，既能引藥深入病所，更能矯正諸藥之味為病家所接受，為佐使藥。全方集辛溫散寒、清化痰熱、宣肺止咳為一體，具有散寒解表，宣肅肺氣，止咳化痰的功用，用于風寒外襲、肺有郁熱、痰涎壅阻之咳嗽病癥。
上述具有止咳功效的藥物組合物，可與藥學上可接受的輔料制成制劑，所述的制劑優(yōu)選為外用制劑，該外用制劑優(yōu)選為巴布貼膏劑。
上述巴布貼膏劑的制備方法：
(1)洋甘菊、干姜加8-12倍量水，水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，提取時間5-6小時，所得揮發(fā)油，提油后得到的藥液濃縮至室溫條件下相對密度1.05～1.10，加入質(zhì)量濃度為95％乙醇調(diào)節(jié)含醇量80％，充分攪拌，靜置18小時，濾過，得濾液Ⅰ；
(2)洋甘菊、干姜提油后殘渣與麻黃加總重4-8倍量質(zhì)量濃度為70％的乙醇加熱回流提取2-3小時，每次1.5-2小時，濾過，合并兩次醇提取液，得濾液Ⅱ；
將濾液Ⅱ與濾液Ⅰ混合，在70～80℃，0.08-0.1Mpa條件下減壓回收乙醇至無醇味；
(3)將所得組合物溶液濃縮至80℃條件下相對密度為1.25～1.30，得稠浸膏；
(4)取適量聚丙烯酸鈉、白陶土加入甘油攪拌均勻，得混合物Ⅰ；
(5)取羧甲基纖維素鈉加入羧甲基纖維素鈉7倍量水，70℃水浴加熱，攪拌至呈均勻半透明凝膠狀，緩緩加入聚維酮K30，邊加邊攪拌，直至呈乳白色均勻半流體狀，得混合物Ⅱ；
(6)取明膠加入明膠1.3倍重量的水，70℃水浴加熱，間歇攪拌至呈均勻半透明狀，與混合物Ⅱ合并，加入稠浸膏，攪拌均勻，再依次加入混合物Ⅰ、氮酮、丙二醇、揮發(fā)油、少量乙醇溶解的尼泊金乙酯，攪拌均勻，趁熱涂布，切割。
所述的涂布應保持40～50℃的溫度。
上述制備工藝中：
1.為最大限度地去粗取精，保證醇沉效果，醇沉過程中應慢加快攪，室溫充分靜置即可，放入冷庫將增加有效成分損失，
2.回收乙醇時真空度不宜太高，控制在0.08Mpa左右，且控制溫度于70～80℃以減輕麻黃堿等易揮發(fā)成分的損失。
3.藥液需保持80℃濃縮成稠浸膏，相對密度1.25～1.30(80℃測)，以控制其中的含水量，有利于制劑成型。
4.各基質(zhì)輔料溶脹混合時溫度應保持在70℃左右，加水溶脹需嚴格控制加水量。溶脹過程應在相對密閉容器中進行，以減少水分的蒸發(fā)，并充分強力攪拌均勻。
5.揮發(fā)油與透皮吸收促進劑氮酮等一起于涂布前加入，強力攪拌均勻。
6.由于巴布劑含水量較高，為保證制劑的穩(wěn)定性，加入一定的尼泊金乙酯起到防腐作用，使用時以少量乙醇溶解，于涂布前加入，攪拌均勻。
7.涂布時應保持一定的溫度(40～50℃)，使基質(zhì)能均勻地攤涂于裱背材料上。待冷卻至室溫后，按規(guī)定規(guī)格8×12cm均勻切割。
巴布劑的基本組成通常包括粘性劑、保濕劑、賦形劑、透皮吸收促進劑和藥物浸膏等幾部分。不同的基質(zhì)類型及不同的規(guī)格，基質(zhì)與藥物的比例，配制程序等均影響巴布劑的成型，應根據(jù)基質(zhì)與藥物性質(zhì)，選擇合理的制備工藝。在巴布劑的制備過程中，藥物與基質(zhì)的相容性很關(guān)鍵，藥物成分加入空白膠體后，可能會對空白膠體的性能產(chǎn)生影響，其強度、黏性與成膠時間都會有所差異。因此，在藥物與基質(zhì)融合的過程中，一方面要考察藥物與基質(zhì)的親和力，使藥物很好地溶解于水溶性基質(zhì)，從而保證藥物的治療效果；另一方面要保持巴布劑的粘性和良好的外觀性能。
根據(jù)文獻及配方需要，我們選擇了幾種基質(zhì)：聚丙烯酸鈉、明膠，羧甲基纖維素鈉，聚維酮、甘油，為解決基質(zhì)中幾種高分子材料的溶脹問題，我們對其溶脹方式、溶脹濃度等進行了系統(tǒng)而深入的研究，試驗考察結(jié)果最優(yōu)選條件為：取聚丙烯酸鈉、白陶土加入甘油攪拌均勻，得混懸液Ⅰ。取羧甲基纖維素鈉加入7倍量水，70℃水浴加熱，時時攪拌至呈均勻半透明凝膠狀，緩緩加入聚維酮K30，邊加邊攪拌，直至呈乳白色均勻半流體狀，得混合物Ⅱ；明膠加入1.3倍量水，70℃水浴加熱，間歇攪拌至呈均勻粘稠半透明狀，與混合物Ⅱ合并，攪拌均勻，加入混懸液Ⅰ，攪拌均勻，涂布。
再采用均勻設(shè)計法篩選基質(zhì)配比，考慮成型性：涂布后與背襯層緊密貼合，表面光滑平整，膏體均勻性：涂布后膏體厚薄均勻，無斷裂，光滑細膩；柔軟性：膏體柔軟，貼著舒適；以及最小投料的需求優(yōu)選出的基質(zhì)重量配比為聚丙烯酸鈉∶聚維酮K30∶甘油∶明膠∶羧甲基纖維素鈉∶白陶土＝1：4∶5∶2∶:0.5∶0.6。
該方以外貼法給藥，通過局部皮膚的吸收以及作用于分布在任脈上的“紫宮”、“玉堂”兩穴，有效地調(diào)節(jié)經(jīng)絡(luò)氣血運行、疏暢肺部氣機，進而發(fā)揮良好的止咳作用。此外，該方芳香走竄，敷貼部位近于鼻竅，從貼膏中釋放的藥物氣味可源源不斷通過鼻竅作用于肺部，發(fā)揮止咳效用。
本發(fā)明止咳巴布貼膏在研制過程中不僅積淀了豐厚的中醫(yī)傳統(tǒng)理論，同時接受了近十年的臨床實踐檢驗，其總有效率達90％以上，顯效及痊愈率大于75％，這些研究結(jié)果是開展該方深入研究及新藥開發(fā)的基礎(chǔ)。
具體實施方式
以下通過具體試驗例對本發(fā)明進行進一步說明。
實施例1
本實施例生產(chǎn)的具有止咳功效的巴布貼膏，按以下重量份的原料及輔料制成：
麻黃5份，干姜7.5份，洋甘菊5份。
該巴布貼膏的制備按照以下步驟進行：
(1)洋甘菊、干姜加10倍量水，水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，提取時間5小時。所得揮發(fā)油另器保存，備用。提油后藥液濃縮至相對密度1.05～1.10(室溫測)(1.5g生藥/ml)，加入95％乙醇調(diào)節(jié)含醇量至80％，充分攪拌，靜置18小時，濾過，得濾液Ⅰ，備用。
(2)洋甘菊、干姜提油后殘渣與麻黃加總重6倍量70％乙醇回流提取2小時，濾過；再加4倍量70％乙醇回流提取2小時，濾過，合并兩次醇提取液，得濾液Ⅱ，加入濾液Ⅰ，減壓(0.08Mpa，70～80℃)回收乙醇至無醇味。
(3)將步驟(2)所得組合物溶液濃縮至相對密度為1.25～1.30(80℃測)，得稠浸膏，備用。
(4)取聚丙烯酸鈉1份、白陶土0.6份加入甘油5份攪拌均勻，得混合物Ⅰ。
(5)取羧甲基纖維素鈉0.5份加入7倍量水，70℃水浴加熱，時時攪拌至呈均勻半透明凝膠狀，緩緩加入聚維酮K30 4份，邊加邊攪拌，直至呈乳白色均勻半流體狀，得混合物Ⅱ；
(6)明膠2份加入1.3倍量水，70℃水浴加熱，間歇攪拌至呈均勻半透明狀，與混合物Ⅱ合并，加入稠浸膏2份，攪拌均勻，再依次加入混合物Ⅰ、氮酮0.6份、丙二醇0.6份、揮發(fā)油0.01份、尼泊金乙酯0.02份(少量乙醇溶解)，攪拌均勻，趁熱涂布，切割，包裝。涂布時保持40～50℃的溫度。
實施例2
本實施例生產(chǎn)的具有止咳功效的巴布貼膏，按以下重量份的原料及輔料制成：
麻黃7份，干姜5份，洋甘菊3份。
該巴布貼膏的制備按照以下步驟進行：
(1)洋甘菊、干姜加8倍量水，水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，提取時間6小時。所得揮發(fā)油另器保存，備用。提油后藥液濃縮至相對密度1.05～1.10(室溫測)(1.5g生藥/ml)，加入95％乙醇調(diào)節(jié)含醇量至80％，充分攪拌，靜置18小時，濾過，得濾液Ⅰ，備用。
(2)洋甘菊、干姜提油后殘渣與麻黃加總重8倍量70％乙醇回流提取3小時，濾過；再加6倍量70％乙醇回流提取2小時，濾過，合并兩次醇提取液，得濾液Ⅱ，加入濾液Ⅰ，減壓(0.08Mpa，70～80℃)回收乙醇至無醇味。
(3)將步驟(2)所得組合物溶液濃縮至相對密度為1.25～1.30(80℃測)，得稠浸膏，備用。
(4)取聚丙烯酸鈉1份、白陶土0.6份加入甘油5份攪拌均勻，得混合物Ⅰ。
(5)取羧甲基纖維素鈉0.5份加入7倍量水，70℃水浴加熱，不斷攪拌至呈均勻半透明凝膠狀，緩緩加入聚維酮K30 4份，邊加邊攪拌，直至呈乳白色均勻半流體狀，得混合物Ⅱ；
(6)明膠2份加入明膠1.3倍量水，70℃水浴加熱，間歇攪拌至呈均勻半透明狀，與混合物Ⅱ合并，加入稠浸膏2份，攪拌均勻，再依次加入混合物Ⅰ、氮酮0.6份、丙二醇0.6份、揮發(fā)油0.01份、尼泊金乙酯0.02份(少量乙醇溶解)，攪拌均勻，趁熱涂布，切割，包裝。涂布時保持40～50℃的溫度。
將實施例1制備得到的貼膏劑進行藥效實驗如下：
實驗一鎮(zhèn)咳作用試驗
1.動物：小鼠，雌雄各半，體重18～22g,。
2.藥物：止咳巴布貼膏(按照實施例1方法制備得到)(0.210cm2/20g)。
1.氨水致小鼠咳嗽試驗
1.1.分組：小鼠隨機分為3組：空白對照組(基質(zhì))，咳必清組(0.013g/kg)、止咳巴布貼膏組(0.2741g生藥/cm2，1.78g/kg)三個劑量組。
1.2.實驗方法：取小鼠隨機分組，對照組和貼膏組按組別外貼給藥，每日1次，連續(xù)3天，咳必清組灌胃給藥，各組最后1天給藥后1h，將小鼠置于實驗箱內(nèi)，向?qū)嶒炏鋬?nèi)噴入25～28％氨水20s，記錄自噴霧起5min內(nèi)小鼠潛伏期和咳嗽次數(shù)。
1.3結(jié)果：止咳巴布貼膏組和陽性藥咳必清均能明顯減少氨水致小鼠5min內(nèi)的咳嗽次數(shù)，延長咳嗽潛伏期，與模型對照組比較差異均有顯著性(P<0.05或P<0.01，見表1)。
表1.止咳巴布貼膏對氨水噴霧所致小鼠咳嗽的影響
注：與模型組相比較，*P<0.05；**P<0.01
因此，止咳巴布貼膏組能減少氨水致小鼠咳嗽模型的咳嗽次數(shù)，對咳嗽潛伏期各給藥組均有延長作用，與模型組比較差異有顯著性。提示該貼膏具有良好的止咳作用。
實驗二化痰作用試驗
1.動物：小鼠，雌雄各半，體重18～22g。
2.藥物：止咳巴布貼膏(按照實施例1方法制備得到)。
方法與結(jié)果
1.對小鼠氣管酚紅排痰量的影響：
1.1.分組：小鼠隨機分為3組：空白對照組(等容積生理鹽水)，氯化銨組(1.0g/kg)、止咳巴布貼膏組(1.78g/kg)。
1.2.實驗方法：取小鼠隨機分組，空白對照組和貼膏組按組別外貼給藥，每日1次，連續(xù)5天，陽性氯化銨組灌胃給藥。第5天給藥后1h，腹腔注射5％酚紅(0.1ml/10g體重)，30min后處死小鼠。剪下小鼠自甲狀軟骨至氣管分支處的一段氣管，放入盛有2ml生理鹽水的試管中，振搖，再加入0.1ml1mol/LNaOH，用754分光光度儀(上海)在波長550nm條件下測OD值。根據(jù)酚紅標準曲線查出每鼠的氣管酚紅排出量[1]。
1.3.實驗結(jié)果：止咳巴布貼膏組能明顯增加小鼠氣管酚紅排出量，與對照組比較差異均有顯著性(P<0.05或P<0.01)(見表2)。
表2.止咳巴布貼膏對小鼠氣管酚紅排痰量的影響
注：與空白對照組比較*P<0.05；**P<0.01
實驗結(jié)果表明，止咳巴布貼膏能增加毛細管吸取氣管分泌物的液柱長度。因此提示我們止咳巴布貼膏具有化痰作用，對改善癥狀有一定的幫助。
實驗三止咳巴布貼膏抗炎作用的試驗
1.動物：KM小鼠，雌雄各半，體重18～22g。
2.藥物：止咳巴布貼膏(按照實施例1方法制備得到)
方法與結(jié)果
1.止咳巴布貼膏對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響
1.1分組：在實驗室中將小鼠飼養(yǎng)一天以適應環(huán)境，然后分籠飼養(yǎng)，隨機分為以下3組：模型對照組(基質(zhì))，陽性藥消炎痛組(0.01625g/kg)，止咳巴布貼膏組(0.2741g生藥/cm2，1.78g/kg)三個劑量組。
1.2方法：陽性藥灌胃給藥，對照組和貼膏組外貼給藥，灌胃容積均為0.2ml/10g，每日一次，連續(xù)5天。第5天于給藥1h后，將二甲苯涂于小鼠右耳前后兩面，每鼠0.08ml，左耳作對照。1h后處死動物，用9mm直徑打孔器分別在同一部位打下圓耳片，用電子天平稱重。根據(jù)公式計算小鼠耳廓腫脹率[1]。
腫脹率(100％)＝(右耳重－左耳重)/左耳重×100％[2]
腫脹抑制率％＝(對照組腫脹率－給藥組腫脹率)/對照組腫脹率×100％
1.3結(jié)果：止咳巴布貼組和陽性藥消炎痛組有明顯抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的作用，與模型組比較差異都有顯著性(見表3)。
表3.止咳巴布貼膏對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹率的影響
注：與模型組相比較，*P<0.05；**P<0.01。
止咳巴布貼膏組對小鼠急性炎癥模型均有不同程度的拮抗作用，可以對抗炎癥早期毛細血管通透性增加、炎性物質(zhì)滲出及組織水腫，提示該藥對急性炎癥可能有防治作用。
實驗四止咳巴布貼膏對免疫功能影響的試驗
1.動物：清潔級ICR小鼠，雌雄各半，體重18～22g,
2.藥物：止咳巴布貼膏(0.2741g生藥/cm2，1.78g/kg)。
3.溶菌酶檢測：溶菌酶試劑盒由南京建成生物工程研究所提供，批號：20040113。
溶菌酶含量測定：
小鼠隨機分為3組，空白對照組(基質(zhì))、陽性藥左旋咪唑組(0.033g/kg)、止咳巴布貼膏組(0.210cm2/20g)、三個劑量組。
方法：空白和陽性組小鼠灌胃給藥,貼膏組按上述劑量剪相應大小的膏藥貼膏給藥，連續(xù)6天。第6天給藥4h后小鼠球后靜脈叢取血，離心析出血清，按溶菌酶試劑盒方法測定溶菌酶含量:空白管(0.2ml蒸餾水+2ml應用菌液)；標準管(0.2ml標準液+2ml應用菌液)；測定管(0.2ml血清+2ml應用菌液)。各管混勻,37℃準確水溶15min,立即取出置于0℃以下的冰水浴中3min,逐管取出,倒入1cm光徑的比色皿,530nm處以蒸餾水調(diào)透光度100比色,測定各管透光度T15,按以下公式計算溶菌酶含量:
溶菌酶含量＝(測定管透光度UT15-空白管透光度OT15)/(標準管透光度ST15-空白管透光度OT15)×標準管濃度(100ug/ml)
結(jié)果：止咳巴布貼膏組和陽性藥物組均能提高正常小鼠血清溶菌酶含量，與對照組比較差異有顯著性(見表4)。
表4.止咳巴布貼膏對小鼠血清溶菌酶含量的影響
止咳巴布貼膏給藥組可提高血清溶菌酶含量，與模型組比較差異有顯著性。
實驗五止咳巴布貼膏的解熱作用實驗
動物：SD.大鼠，雄性，體重180～200g。藥物：止咳巴布貼膏(中劑量組0.2343g生藥/cm2(1.04cm2/100g，1.23g生藥/kg)
方法與結(jié)果
1.分組：大鼠隨機分為3組：模型對照組(貼膏基質(zhì)1.8cm2/100g)，撲熱息痛組(0.09g/kg)，中(1.04cm2/100g)三個劑量組。
2.實驗方法
鼠于實驗室環(huán)境適應一周，每日用溫度計從肛門測體溫1次，連續(xù)3次選取標準差<±0.3的動物供實驗用。將所有實驗大鼠背部皮下注入15％酵母懸液5ml/kg，于致熱后5～6h后測體溫，將體溫升高≧0.8℃的大鼠隨機分為5組，分別給藥；陰性對照組貼基質(zhì)于胸部，陽性對照組給以撲熱息痛0.09g/kg，受試藥物組分別貼上膏藥(胸部)止咳巴布貼膏中(1.04cm2/100g)后，每隔1h測試大鼠肛門溫度1次，共6次，將致熱后體溫減去基礎(chǔ)體溫，作為體溫凈增值。
表5.止咳巴布貼膏對干酵母所致大鼠發(fā)熱模型肛溫凈增值的影響
注：與模型對照組比較，*P<0.05；**P<0.01
貼膏組與模型組相比,肛溫升高比模型組緩慢,有抑制升溫的趨勢。
實驗六皮膚刺激性試驗
一次給藥的皮膚刺激性試驗：
新西蘭白兔3只，雌雄不拘，于給受試物前24h將動物背部脊柱兩側(cè)毛用8％的硫化鈉脫掉(脫毛面積約150cm2)，分為四個區(qū)：完整皮膚給藥區(qū)、破損皮膚給藥區(qū)、完整皮膚對照區(qū)、破損皮膚對照區(qū)，每區(qū)均為體表面積的4％，各區(qū)之間留有適當距離。破損皮膚用消毒的7#注射針頭作井字劃痕(局部以酒精消毒)，以滲血為度。次日將受試藥止咳巴布貼膏和基質(zhì)剪成4.5×6.0cm大中小，分別貼于相應區(qū)皮膚，然后以二層紗布覆蓋，膠布固定，分籠飼養(yǎng)。24h后揭去藥膏，以溫水洗去殘留受試藥止咳巴布貼膏(0.26g生藥/cm2) 和賦形劑，觀察1h、24h、48h、72h涂抹部位的皮膚有無紅斑和水腫等，以及上述變化的恢復情況和時間。
多次給藥的皮膚刺激實驗：新西蘭白兔3只，雌雄不拘，動物背部脫毛、分區(qū)、受損皮膚制備、給藥量、固定方法及結(jié)果觀察方法等均同一次給藥的皮膚刺激實驗，僅給藥次數(shù)改為每日換貼1次止咳巴布貼膏(0.26g生藥/cm2)，連續(xù)7天。
結(jié)果一次外貼受試藥后在觀察的時間內(nèi)完整皮膚未見紅斑和水腫發(fā)生，破損皮膚有2只家兔在去除藥膏1h局部有輕微紅腫，24h紅腫完全消失，表明該貼膏無明顯刺激性。連續(xù)7天涂抺受試藥后在觀察的時間完整皮膚未見紅斑和水腫發(fā)生；破損皮膚在給藥次日多數(shù)家兔皮膚破損處有輕微紅腫，但第三天紅腫均消失，部分可見破損處皮膚結(jié)痂。
因此，止咳巴布貼膏一次給藥和連續(xù)7天給藥對家兔完整皮膚無刺激性，一次給藥和連續(xù)7天給藥對家兔破損皮膚亦未見明顯刺激性。