本發(fā)明涉及一種藥物組合物，其包含五味子、杜仲和枸杞子的組合提取物，用于預(yù)防或治療代謝性骨病。
背景技術(shù)：
：骨質(zhì)疏松癥是一種疾病，其中骨骼基質(zhì)呈病理性脆弱，并降低了骨礦物質(zhì)密度和骨骼強(qiáng)度，從而可能增加骨折風(fēng)險(djl.骨質(zhì)疏松癥管理臨床指南，韓國內(nèi)科學(xué)雜志1999；57(4):801-4，djl.clinicalguideformanagementofosteoporosis,thekoreanjournalofinternalmedicine1999；57(4):801-4)。雖然骨頭是由硬組織構(gòu)成的，但它在我們整個生命中也是活動性的且不斷變化的。用裸眼將骨分為外皮質(zhì)骨(致密骨)和內(nèi)骨小梁(松質(zhì)骨)，其中皮質(zhì)骨具有保護(hù)和支撐身體的物理強(qiáng)度，骨小梁可以吸收沖擊或維持鈣的變化恒定。在生理上，骨骼也是一個持續(xù)發(fā)生骨重建的地方，以便將骨基質(zhì)替換為新的骨組織(即骨轉(zhuǎn)化)，它在骨吸收和骨形成之間進(jìn)行平衡(jeromecp.激素療法和骨質(zhì)疏松癥.ilar.2004；45(2):..170-8，jeromecphormonaltherapiesandosteoporosisilarj.2004；45(2):..170-8)。因此，由于骨重塑在骨吸收和骨形成之間相互平衡，骨礦物質(zhì)密度和強(qiáng)度在健康骨骼中保持穩(wěn)定。然而，由于骨吸收大于骨形成，因此骨重塑不平衡發(fā)生在骨質(zhì)疏松癥誘導(dǎo)的骨中這導(dǎo)致了重量和骨量減少。然后可能發(fā)生組織學(xué)骨萎縮，骨骼的物理強(qiáng)度也可能減弱，這可能增加骨折的發(fā)生率(belchetzpe.激素治療絕經(jīng)后婦女.新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志.19944月14日；330(15):1062-71，belchetzpe.hormonaltreatmentofpostmenopausalwomen.nengljmed.1994apr14；330(15):1062-71)。骨質(zhì)疏松癥是一種典型的代謝性骨性疾病，這是由于與相同年齡和性別的人相比，骨質(zhì)量的顯著定量下降引起的。riggs和melton等人將骨質(zhì)疏松分為1型骨質(zhì)疏松癥(絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥)或原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥，2型骨質(zhì)疏松癥(老年性骨質(zhì)疏松癥)或繼發(fā)性骨質(zhì)疏松癥。絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥，即1型原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥是最具代表性的代謝性骨病，在臨床上會引起更多的問題，如骨痛，骨折和老年畸形(leewsphbd.韓國婦女骨質(zhì)疏松癥患病率.韓國更年期學(xué)會雜志.2003；9(4):339-46，leewsphbd.prevalenceofosteoporosisinkoreanwomen.thejournalofkoreansocietyofmenopause.2003；9(4):339-46)。目前使用的骨質(zhì)疏松癥治療劑包括雙膦酸鹽劑(阿侖膦酸鹽、依替膦酸鹽、伊班膦酸鹽、利塞膦酸鹽、唑來膦酸鹽等)、激素(雷洛昔芬)、維生素d劑、降鈣素劑和鈣劑等。最近，甲狀旁腺激素劑如特立帕肽tm(forteotm)市售可得，對骨形成有效。然而，激素藥物需要在終身服用，長期服用則會有副作用，如乳腺癌、子宮癌、膽結(jié)石和血栓形成。維生素d劑昂貴且并非可靠有效，而降鈣素藥劑昂貴且難以施用。雖然鈣劑具有較少的副作用，但它們的功能僅限于防治而不是治療。最近商業(yè)化的甲狀旁腺激素藥物forteotm對骨形成有效，補(bǔ)償了現(xiàn)有藥物僅抑制骨吸收的缺點。然而，forteotm需要長期每天注射，并且具有過度骨形成的副作用。它的廣泛使用也很昂貴。因此，最常規(guī)的骨質(zhì)疏松癥藥物來自一系列雙膦酸鹽。這些藥物已經(jīng)證明了通過集中抑制骨吸收來增加骨礦物質(zhì)密度和預(yù)防骨折的效果。由于可以口服且成本較經(jīng)濟(jì)，它們也具有優(yōu)勢，因此已被廣泛用于骨質(zhì)疏松癥和其他鈣代謝紊亂的臨床實踐中。然而，雙膦酸鹽劑具有非常復(fù)雜的攝入指令，因為它吸收率低并且會誘導(dǎo)食管炎。因此建議在早餐前和大量的水一同攝入，并在禁食狀態(tài)下觀察至少30分鐘，并且在攝食后一段時間內(nèi)不能躺下。另外，有報道說，雙膦酸鹽劑會增加低鈣血癥的風(fēng)險。最近研究表明，雙膦酸鹽藥物具有臨床問題，例如由于通過影響骨產(chǎn)生速率，胃腸道障礙和頜骨壞死引起的過量骨吸收抑制和骨形成抑制導(dǎo)致的骨轉(zhuǎn)化率降低。根據(jù)最近的一項研究，長時間服用可能會增加骨折的風(fēng)險(andrewsneviaser等，骨科創(chuàng)傷雜志,2008,22(5),346～350，andrewsneviaseretc.,journaloforthopaedictrauma,2008,22(5),346～350)。因此，需要開發(fā)出沒有上述副作用的具有優(yōu)越療效的新物質(zhì)。北五味子(schisandrachinensis)的特征是有五種特征性口味：甜味、酸味、苦味、咸味和辛香味，主要生長在太白山頂附近。南五味子(kadsurajaponica)在南部的省份生長，黑莓木蘭藤(五味子，schisandrarepanda)生長在濟(jì)州島。已知北五味子在韓國、日本、薩哈林島和中國野生生長。五味子含有五味子素、戈米辛、檸檬醛、蘋果酸、檸檬酸等成分，能增強(qiáng)心臟能力、降低血壓以及增強(qiáng)免疫力，并被用作心臟補(bǔ)品。它也被稱為鎮(zhèn)咳和祛痰劑，有效緩解咳嗽和口渴，增強(qiáng)肺功能。杜仲樹(eucommiaecortexoliv)是一種高的落葉樹，源于中國，屬于杜仲科。其干根被皮稱為杜仲(杜)，已知具有降血壓作用和利尿作用。杜仲膠、生物堿、果膠、金邦(jingbang，)和樹脂已知包括在其中(未經(jīng)修飾的天然草藥詞典,bo-seop,jeong等,青木出版社,p605-606,1998，unabridgeddictionaryofnativeherbalmedicines,bo-seop,jeongetal.,younglimpublishingco.,p605-606,1998),以及桃葉珊瑚苷和梔子苷(在杜仲橄欖葉中天鵝糖酸和桃葉珊瑚苷對膠原合成的促進(jìn)作用./liy,satot,metorik,koikek,cheqm,takahashis/生物與藥物通報[1998,21(12):1306-1310]，thepromotingeffectsofgeniposidicacidandaucubinineucommiaecortexoliverleavesoncollagensynthesis./liy,satot,metorik,koikek,cheqm,takahashis/biological&pharmaceuticalbulletin[1998,21(12):1306-1310)。枸杞子是中華枸杞(lyciumchinensemiller)或藥用枸杞(lyciumbarbarumlinne)的果實，含有類胡蘿卜素、膽堿、肉豆蔻酸、玉米黃質(zhì)、酸漿苦素(二棕櫚(dipalmity)-玉米黃質(zhì))、甜菜堿、β-谷甾醇、維生素b1，蘆丁和不飽和脂肪酸等。不僅如此，有各種研究和報告支持它具有抗氧化、抗衰老、抗細(xì)菌和抗糖尿病的作用，它能改善肝功能、降低血壓、增強(qiáng)免疫系統(tǒng)、降低膽固醇、預(yù)防心血管相關(guān)疾病，并具有抗癌作用。雖然已經(jīng)公開了包含五味子、杜仲或枸杞子的組合提取物的各種提取物，但從未有關(guān)于包含五味子，杜仲和枸杞子的所有組合提取物的公開內(nèi)容。此外，沒有現(xiàn)有技術(shù)提出其協(xié)同效應(yīng)。技術(shù)實現(xiàn)要素：技術(shù)問題本發(fā)明目的是提供一種藥物組合物，該藥物組合物確保了用于預(yù)防或治療代謝性骨病的合成化學(xué)物質(zhì)的安全性。技術(shù)方案本發(fā)明提供一種藥物組合物，其包含組合草藥提取物作為活性成分用于預(yù)防或治療代謝性骨病。本發(fā)明還提供一種食品組合物，其包含草藥的組合提取物作為活性成分用于預(yù)防或改善代謝性骨病。以下，對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。藥物組合物在本發(fā)明中，草藥組合提取物包括五味子，杜仲和枸杞子。在本發(fā)明中，可使用的五味子來自北五味子的果實。在本發(fā)明中，可使用的杜仲來自杜仲樹(eucommiaecortexoliv)的干燥樹皮。在本發(fā)明中，使用的枸杞子來自中華枸杞或同一屬的另一種植物。在本發(fā)明中，五味子、杜仲和枸杞可以以的比例混合，優(yōu)選比例為此外，更優(yōu)選以的重量比混合，最優(yōu)選的重量比為在上述比例時觀察到最優(yōu)異的治療效果。根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，本發(fā)明的草藥組合提取物可以是五味子，杜仲和枸杞子的混合物的提取物。根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方案，本發(fā)明中草藥組合提取物可以是五味子提取物、杜仲提取物和枸杞子提取物的混合物。本發(fā)明的組合提取物可在所述草藥干燥小時后進(jìn)行使用，即將其洗滌次，以預(yù)先從表面除去雜質(zhì)和鹽。在本發(fā)明中，提取溶劑優(yōu)選使用選自水、醇及其混合溶劑。醇可以是甲醇、乙醇、異丙醇、正丙醇、正丁醇、異丁醇、叔丁醇等，最優(yōu)選甲醇或乙醇。在與水和醇混合的溶劑中，其含量可以為10％(v/v)至99％(v/v)。在本發(fā)明中，提取物在溶劑萃取后濃縮，并通過凍干粉碎。然后根據(jù)需要，溶劑提取物還可以用選自己烷、二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯、氯仿及其混合物的溶劑進(jìn)一步分餾。在分餾中可以使用至少一種上述溶劑。振蕩提取法、索氏提取法或回流提取法可用于該提取方法，但不限于此。提取物的制備溫度可以為但不限于此。提取時間沒有特別限制，但可以使用常規(guī)的熱水提取器、超聲波研磨提取器或分餾器提取至少30分鐘至7天。然后將所制備的提取物減壓過濾或凍干以除去溶劑。獲得的組合提取物可以在其準(zhǔn)備使用之前儲存在深凍器中。此外，組合提取物可以通過濃縮和凍干方法完全除去水分，并且可以粉碎或溶解在蒸餾水或任何常規(guī)溶劑中以供使用。與對照組相比，包含組合提取物作為活性成分的本發(fā)明藥物組合物使卵巢切除小鼠模型中的髁狀突的結(jié)構(gòu)正常化并減少了生長板厚度的增加。它還證實了增加骨礦物質(zhì)含量和骨礦物質(zhì)密度，以及成骨細(xì)胞分化因子骨鈣素的水平。因此，其被證實對代謝性骨病有預(yù)防和治療作用。在本發(fā)明中，代謝性骨病可以選自骨質(zhì)疏松癥、骨質(zhì)減少癥、骨軟化癥、骨營養(yǎng)不良和佩吉特氏病。優(yōu)選可以是骨質(zhì)疏松癥，更優(yōu)選為絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥。絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥是由激素異常癥狀引起的，例如雌激素分泌減少，從而加強(qiáng)破骨細(xì)胞活性，促進(jìn)骨骼破壞并減少骨鈣化。也就是說，它是由成骨細(xì)胞活化減弱引起的骨質(zhì)疏松癥。本發(fā)明的藥物組合物顯示出優(yōu)異的藥理活性，無副作用，因為它含有草藥成分，而不是合成化學(xué)品。因此，對于長期給藥來說是安全的。本發(fā)明中的“給藥”是指使用適當(dāng)?shù)姆椒▽⒈景l(fā)明的藥物組合物引入患者，只要達(dá)到目標(biāo)組織，就可以使用任何常規(guī)的給藥途徑施用本發(fā)明的藥物組合物。可采用(但不限于)以下方法：口服給藥、腹膜內(nèi)給藥、靜脈內(nèi)給藥、肌內(nèi)給藥、皮下給藥、皮內(nèi)給藥、鼻內(nèi)給藥、肺內(nèi)給藥、直腸內(nèi)給藥和鞘內(nèi)給藥。例如，它可以通過口服、直腸或靜脈、肌肉、皮下、子宮內(nèi)膜、硬膜外或腦血管(腦室內(nèi))注射施用。此外，本發(fā)明的藥物組合物可以以規(guī)定的時間間隔施用一次、或多次。根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，本發(fā)明的藥物組合物可以配制成口服給藥的片劑、丸劑、粉劑、顆粒劑、膠囊劑等。本發(fā)明的藥物組合物可以在不損害本發(fā)明的效果的范圍內(nèi)包含藥學(xué)上可接受的添加劑，例如稀釋劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、ph調(diào)節(jié)劑、抗氧化劑和增溶劑?？梢允褂锰?、淀粉、微晶纖維素、乳糖(乳糖水合物)、葡萄糖、d-甘露糖醇、藻酸鹽、堿土金屬鹽、粘土、聚乙二醇、無水磷酸氫鈣或它們的混合物作為稀釋劑?？梢允褂玫矸邸⑽⒕Юw維素、高分散性二氧化硅、甘露醇、d-甘露醇、蔗糖、乳糖水合物、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮(聚維酮)、聚乙烯吡咯烷酮共聚物(共聚維酮)、羥丙甲纖維素、羥丙基纖維素、天然膠、合成膠、共聚維酮、明膠或其混合物作為粘合劑。作為崩解劑的有，淀粉或改性淀粉如淀粉羥乙酸鈉、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉或預(yù)膠化淀粉；粘土如膨潤土、蒙脫石或硅酸鎂鋁；纖維素如微晶纖維素、羥丙基纖維素或羧甲基纖維素；藻酸鹽如藻酸鈉或藻酸；交聯(lián)纖維素如交聯(lián)羧甲基纖維素鈉；膠類如瓜爾膠或黃原膠；交聯(lián)聚合物如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮(交聚維酮)；泡騰劑如碳酸氫鈉或檸檬酸、或其混合物?？梢允褂没⒂仓?、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、月桂基硫酸鈉、氫化植物油、苯甲酸鈉、硬脂基富馬酸鈉、山崳酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯、棕櫚酰硬脂酸甘油酯、膠態(tài)二氧化硅或其混合物作為潤滑劑。作為ph調(diào)節(jié)劑的，可以使用酸化劑例如醋酸、己二酸、抗壞血酸、抗壞血酸鈉、酒石酸鈉、蘋果酸、琥珀酸、酒石酸、富馬酸、檸檬酸等；可以使用堿化劑例如沉淀碳酸鈣、氨水、葡甲胺、碳酸鈉、氧化鎂、碳酸鎂、檸檬酸鈉、磷酸三鈣等?？梢允褂枚』u基甲苯丁基化羥基苯甲醚、乙酸生育酚酯、生育酚、沒食子酸丙酯、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉作為抗氧化劑?？梢允褂迷鹿鸹蛩徕c、聚山梨醇酯、多庫酯鈉、泊洛沙姆等聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯作為增溶劑。此外，根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方案，本發(fā)明的藥物組合物可以包含無菌水溶液、非水性溶液、懸浮液、乳劑、凍干制劑和栓劑，以制備用于腸胃外給藥的制劑。丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄欖油和可注射的酯如油酸乙酯可用作非水溶液或懸浮液?？梢允褂脀itepsol、聚乙二醇、吐溫61、可可油、月桂酸油、甘油-明膠等作為栓劑基質(zhì)?；诮M合物的總重量，本發(fā)明的藥物組合物可以含有的組合提取物，優(yōu)選含有更優(yōu)選含有然而，根據(jù)使用的方法和目的，它可以適當(dāng)調(diào)節(jié)活性成分的含量。本發(fā)明的藥物組合物可以根據(jù)預(yù)期的方法進(jìn)行口服或腸胃外給藥(例如靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)或局部施用)，其劑量可以患者的體重、年齡、性別、健康狀況和飲食，給藥時間及方法、排泄率和疾病的嚴(yán)重程度而變化。本發(fā)明組合提取物的成人用日劑量可以約為0.001mg/kg至約8,000mg/kg，優(yōu)選為約1mg/kg至約4000mg/kg，更優(yōu)選為約10mg/kg至約1000mg/kg，最優(yōu)選為約30mg/kg至約300mg/kg。本發(fā)明的藥物組合物可以包含至少一種或多種具有預(yù)防或治療代謝性骨病相同或相似功能的活性成分。本發(fā)明的藥物組合物可以獨立地用于預(yù)防或治療代謝性骨病，或者與其他方法如外科手術(shù)、激素治療、藥物治療和使用生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑的方法組合使用。此外，本發(fā)明提供了通過給藥本發(fā)明藥物組合物來預(yù)防或治療包括人的哺乳動物的代謝性骨病的方法。食品組合物本發(fā)明提供含有組合提取物的食品組合物，所述組合提取物包含五味子、枸杞子和杜仲，作為預(yù)防或改善代謝性骨病的活性成分。組合提取物可以以與本發(fā)明的藥物組合物相同的方式制備。由于本發(fā)明的食品組合物對代謝性骨病具有治療效果，因此也可以用于預(yù)防或改善代謝性骨病，在本發(fā)明中代謝性骨病的范圍與藥物組合物的范圍相同。根據(jù)本發(fā)明的食品組合物可以原樣加入到本發(fā)明的組合提取物中，或進(jìn)一步包括在可用于另一種食物組合物、保健品或飲料中的常規(guī)添加劑中。例如，本發(fā)明的食品組合物可以包含甜味劑，例如白糖、結(jié)晶果糖、葡萄糖、d-山梨糖醇、甘露醇、異麥芽低聚糖、甜菊苷、阿斯巴甜、乙酰磺胺酸鉀和三氯蔗糖；酸化劑如無水檸檬酸、dl-蘋果酸、琥珀酸及其鹽；防腐劑如苯甲酸及其衍生物；各種營養(yǎng)素；維生素；礦物質(zhì)(電解質(zhì))；調(diào)味劑如合成和天然的調(diào)味劑；著色劑；增強(qiáng)劑如奶酪、巧克力等；果膠酸及其鹽；藻酸及其鹽；有機(jī)酸；保護(hù)膠體增稠劑；ph調(diào)節(jié)劑；穩(wěn)定劑；防腐劑；甘油；醇和用于碳酸飲料的碳酸化劑。此外，本發(fā)明的食品組合物可以含有果肉以制備天然果汁和蔬菜飲料?；?00重量份的本發(fā)明的食品組合物，添加劑的量可以在約20重量份以下的范圍內(nèi)。在本發(fā)明的食物組合物制備為飲料的情況下，其還可以包含有益或天然碳水化合物。天然碳水化合物可以是單糖如葡萄糖和果糖；雙糖如麥芽糖和蔗糖；多糖如糊精和環(huán)糊精；或糖醇如木糖醇、山梨糖醇和赤蘚糖醇。此外，風(fēng)味可以包括天然風(fēng)味劑，例如甜菜堿和甜葉菊提取物(甜菊苷a，甘草甜素等)；或合成風(fēng)味如糖精，阿斯巴甜等。當(dāng)食物組合物制備成飲料時，每100ml組合物中通常含有約1至20g(或優(yōu)選約5至12g)天然碳水化合物的量。本發(fā)明的食品組合物可以以粉末、顆粒、片劑、膠囊或飲料形式制備，因此可以作為食品、飲料、口香糖、茶、維生素復(fù)合物或保健品進(jìn)行施用。此外，本發(fā)明的食物組合物可以添加到藥物、食品和飲料中以防止或改善代謝性骨病。例如，本發(fā)明的食品組合物可以添加到食品、飲料、口香糖、茶葉、維生素復(fù)合物、保健品等中?？梢詫⒈景l(fā)明的食物組合物加入到食品或飲料中以預(yù)防或改善代謝性骨病。本發(fā)明的組合物可以相對于食物總重量的的量進(jìn)行添加，并且每100毫升的飲料可以以0.02g至10g，更優(yōu)選0.3g至1g的量進(jìn)行添加。本發(fā)明的組合物的用途、及其使用對代謝性骨病的預(yù)防，改善或治療本發(fā)明還提供本發(fā)明的草藥組合提取物用于制備預(yù)防或治療代謝性骨病例如骨質(zhì)疏松癥的藥物的用途。此外，本發(fā)明提供了通過將上述藥物組合物或食品組合物給予需要的對象來預(yù)防、改善或治療代謝性骨病的方法。在本發(fā)明中，受試者包括哺乳動物，特別是人。上述代謝性骨病與本公開中所述的相同。有益效果本發(fā)明天然來源獲得的組合提取物中，沒有觀察到副作用，本發(fā)明的組合提取物減少了生長板厚度的增加，增加了骨礦物質(zhì)含量和骨礦物質(zhì)密度，并且增強(qiáng)了卵巢切除小鼠模型中的成骨細(xì)胞分化因子的表達(dá)，如轉(zhuǎn)錄因子(runx2)和鋅指結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)錄因子(osterix)。因此，本發(fā)明的組合提取物可用于預(yù)防或治療代謝性骨病。附圖說明圖1是確認(rèn)每個給藥組中股骨生長板厚度變化的照片。圖2是比較股骨中骨礦物質(zhì)含量變化的圖。圖3是比較股骨中骨礦物質(zhì)密度變化的圖。圖4是確認(rèn)saos-2細(xì)胞中runx2和osterix表達(dá)的結(jié)果。最佳模式引入如下優(yōu)選的制備實施例和實施例以幫助理解本發(fā)明。然而，這些制備實施例和實施例僅僅是為了幫助理解本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明的范圍。在下文中，將參照實施例進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明，但是本發(fā)明的范圍不僅限于這些實施例。此外，根據(jù)以下實驗結(jié)果，在使用anovaa＝0.5水平進(jìn)行驗證后，對對照組、比較組和試驗組的顯著性，使用薛費(scheffe)法和邦弗朗尼(bonferroni)法多次進(jìn)行比較。制備實施例1.本發(fā)明的組合提取物的制備從jeongdosaengyak有限公司(首爾)購買的五味子、杜仲和枸杞子經(jīng)干燥后稱重，如表1所示，并研磨。然后加入70％乙醇，相當(dāng)于樣品重量的10倍，然后在室溫下萃取24小時。使用旋轉(zhuǎn)式真空濃縮器將所得提取物減壓濃縮，得到濃縮物，然后用-70℃冷凍干燥機(jī)冷凍成粉末狀。然后將獲得的凍干粉末用作下列實驗中的最終提取物。表1五味子杜仲枸杞子制備實施例1200g100g100g制備實施例2至4.制備五味子提取物，杜仲提取物和枸杞子提取物除了根據(jù)表2所示的重量單獨制備的提取物外，以與制備實施例1中所示相同的方式分別制備五味子、杜仲和枸杞子的單一提取物。表2五味子杜仲枸杞子制備實施例1400g制備實施例2400g制備實施例3400g發(fā)明實施方式實施例1.確定對卵巢切除小鼠代謝性骨病的治療效果1-1.提供卵巢子宮切除術(shù)和藥物治療為了測量制備實施例1的組合提取物對代謝性骨病的治療活性，將28只平均體重為30g的白色6周齡白色雌性icr小鼠(韓國羅溫生物有限公司(raonbioco.))飼養(yǎng)于的溫度和的相對濕度下。用固體飼料(韓國大韓生物科技有限公司，daehanbiolinkco.,therepublicofkorea))飼喂動物，食物和水可自由獲取。試驗動物分為①正常組，其中通過切割(假手術(shù))確認(rèn)卵巢后對腹部進(jìn)行縫合手術(shù)；②對照組(ovx)，其中進(jìn)行卵巢切除且沒有施用藥物；③陽性對照組(e2)，其中進(jìn)行卵巢摘除，并施用雌二醇(雌二醇；e2)，哺乳動物雌激素；④組合組，給予本發(fā)明組合提取物(制備實施例1)200mg/kg；⑤五味子組，施用100mg/kg本發(fā)明的五味子提取物(制備實施例2)；⑥杜仲組，其中給予50mg/kg的杜仲提取物(制備實施例3)；和⑦枸杞子組，其中施用50mg/kg的枸杞子提取物(制備實施例4)。用舒泰(zoletil)和隆本(rumpun)以1：1(體積比)混合麻醉試驗動物后進(jìn)行卵巢摘除術(shù)。動物每1g體重注射0.002ml混合物。當(dāng)動物達(dá)到深度麻醉時，從位于脊柱兩側(cè)的腎臟切口處移除卵巢，縫合切口部位。每天口服上述組合提取物和單一提取物，其中制備實施例1至4中所示的實驗樣本中，將其按溶解于200μl蒸餾水中的劑量從卵巢摘除后第六周開始口服。正常組和對照組給予與試驗組相同量的蒸餾水。陽性對照組卵巢摘除后第6周每日腹膜內(nèi)給藥，劑量為雌二醇10μg/kg，溶于200μl蒸餾水中。1-2.測量生長板厚度收集的股骨骨組織用經(jīng)10％福爾馬林固定的水性甲酸脫鈣。通過手術(shù)刀解剖骨組織的觀察區(qū)域，在的醇和丙酮中脫水，然后在進(jìn)行石蠟包埋之前用二甲苯洗滌。然后將石蠟包埋的骨組織用微量元件切片至5μm，用蘇木精和伊紅(h&e)染色，用光學(xué)顯微鏡確認(rèn)結(jié)果(參見圖1)。卵巢切除對照組(ovx)中生長板的厚度與正常組相比迅速增加，而施用本發(fā)明組合提取物的股骨生長板的厚度明顯降低。因此，證明本發(fā)明的組合提取物通過抑制骨組織的變化來改善骨質(zhì)疏松癥的組織學(xué)癥狀。1-3.比較股骨礦物質(zhì)含量和股骨礦物質(zhì)密度收集的股骨用于比較股骨礦物質(zhì)密度。解剖左股骨的骨骺，并使用piximus裝置進(jìn)行雙能x射線吸收分析。然后比較每個對照組和試驗組中從小鼠獲得的股骨礦物質(zhì)含量(bmc)和股骨礦物質(zhì)密度(bmd)(見圖2和圖3)。卵巢切除對照組(ovx)的骨礦物質(zhì)含量和骨礦物質(zhì)密度明顯低于正常組。當(dāng)施用本發(fā)明的組合提取物時，得到的股骨bmc和bmd與陽性對照組中的水平相當(dāng)。這確認(rèn)了當(dāng)將本發(fā)明中所公開的組合提取物分別與五味子、杜仲和枸杞子的單一提取物相比時，其具有更優(yōu)異的效果。因此，本發(fā)明的組合提取物可用于通過抑制bmc和bmd來預(yù)防或治療代謝性骨病如骨質(zhì)疏松癥。實施例2.在saos-2細(xì)胞中確認(rèn)runx2和osterix的表達(dá)為了確認(rèn)成骨細(xì)胞增殖相關(guān)性因子的表達(dá)，將測試物質(zhì)在成骨細(xì)胞樣細(xì)胞系saos-2細(xì)胞中處理24小時。100μg/ml的組合提取物、50μg/ml的五味子提取物、25μg/ml的枸杞子提取物和25μg/ml的杜仲提取物處理的受試物質(zhì)濃度。然后通過蛋白質(zhì)印跡(westernblot)測定證實osterix和runx2(runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2)(為成骨細(xì)胞增殖促進(jìn)因子)的表達(dá)。結(jié)果，本發(fā)明的組合提取物顯著增加了與成骨細(xì)胞增殖相關(guān)因素的表達(dá)，其分別顯著大于五味子、杜仲和枸杞的單一給藥組中的水平。<制劑實施例>包含本發(fā)明組合提取物的藥物組合物的制備a.制備粉末制劑組合提取物200毫克乳糖100毫克滑石10毫克混合上述組分并將其填充到氣密包裝中以產(chǎn)生粉末。b.制備片劑制劑組合提取物200毫克玉米淀粉100毫克乳糖100毫克硬脂酸鎂2mg根據(jù)常規(guī)的片劑制備方法，通過壓片混合上述組分并制成片劑。c.制備膠囊制劑組合提取物200毫克結(jié)晶纖維素3mg乳糖14.8毫克硬脂酸鎂0.2mg根據(jù)常規(guī)的膠囊制備方法混合上述組分并將其填充到明膠膠囊中。d.準(zhǔn)備注射制劑組合提取物200毫克甘露醇180毫克注射無菌蒸餾水2974毫克na2hpo4·12h2o26mg按照常規(guī)的注射方法準(zhǔn)備具有上述內(nèi)容物的各安瓿(2毫升)。e.制備液體制劑組合提取物200毫克異構(gòu)體10g甘露醇5克檸檬調(diào)味適量凈化水適量根據(jù)用于制備液體制劑的常規(guī)方法將上述組分溶解在純水中，并加入適量的檸檬香料。然后，將其全部混合并將其用純化水調(diào)節(jié)至總計100ml，然后將其裝入棕色瓶子并對其進(jìn)行滅菌。本發(fā)明的簡單修改或改變可以由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易地實現(xiàn)，因此這些修改或變化被認(rèn)為包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明的工業(yè)實用性本發(fā)明的組合提取物可用于預(yù)防或治療代謝性骨病。當(dāng)前第1頁12