本發(fā)明涉及一種利用青錢柳經菌體發(fā)酵制得的生物菌液，特別是涉及一種用于降血糖的經青錢柳發(fā)酵所得菌液。
背景技術：
：糖尿病是臨床常見的內分泌疾病，以II型糖尿病最為常見，是長期以來擺在我們面前的一道難題，為取得治療II型糖尿病更好的療效，本發(fā)明進行了全新的探索，經試驗驗證效果顯著。近年來，人們對青錢柳降糖作用的研究越來越深入，其作用機理越來越明確，效果越來越被證實，在醫(yī)療和養(yǎng)生保健領域的應用也越來越廣泛。但在復方制劑和新型制劑的開發(fā)方面尚顯不足，尤其對適于長期服用口感較好效果顯著的新型制劑的創(chuàng)新性開發(fā)尚顯不足。技術實現要素：本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種具有降血糖功能的生物菌液及其制備方法，該生物菌液可以做為生物藥劑或養(yǎng)生保健功能性飲品應用，可直接飲用或和青錢柳和其復配方劑的水煎液(培養(yǎng)基液)調配飲用，一方面使青錢柳或其復配方劑、益生菌、益生菌將青錢柳或其復配方劑發(fā)酵產生的次生代謝產物共同作用于人體達到三效合一之功效，另一方面使青錢柳制劑獲得良好良好的口感適于長期服用。本發(fā)明涉及一種具有降血糖功能的生物菌液的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：一、青錢柳培養(yǎng)基的制備：按照質量份數稱取1～6份的基料、3～10份的木糖醇和100～200份的水，混合后加熱至100℃，保持5～30min，冷卻至1～45℃，過濾去除藥渣后即制得青錢柳培養(yǎng)基；二、接種：將步驟一制得的青錢柳培養(yǎng)基轉移至培養(yǎng)容器中，將菌種接種于青錢柳培養(yǎng)基中；三、發(fā)酵：將培養(yǎng)容器用滅菌后的毛巾或紗布封口后，發(fā)酵溫度為10～45℃，發(fā)酵7～60d，即制得本發(fā)明的治療胃腸疾病的生物菌液；所述步驟一中的基料包括青錢柳；所述步驟二中的菌種包括醋酸菌、酵母菌、乳酸菌、雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、嗜熱鏈球菌、糞腸球菌、BF-839脆弱擬桿中的一種或多種。其中，上述醋酸菌(Acetobactersp)、酵母菌(Candidaalbicans)和乳酸菌(Lactobacillusacidophilus)為紅茶菌的主要菌種，雙歧桿菌(Bifidobacterium)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophylus)、嗜熱鏈球菌(Streptococcusthermophilus)、BF-839脆弱擬桿菌(B.fragilis-839)、糞腸球菌(Escherichiacoli)屬于胃腸益生菌。優(yōu)選地，所述步驟一中基料還包括輔助成分桑葉、杜仲中的一種或兩種。優(yōu)選地，所述步驟一中基料中的青錢柳與桑葉的質量比為1:1；基料中青錢柳與杜仲的質量比為1:0.5。優(yōu)選地，所述步驟二中的菌種還包括冠突散囊菌、德氏乳桿菌等其他人體益生菌種。所述菌種中除了包括德氏乳桿菌(Lactobacillusdelbrueckiisubsp)、冠突散囊菌(Eurotiumcristatum)以外，菌種中還可以包含其他胃腸道益生菌和/或紅茶菌中的菌種。優(yōu)選地，所述步驟三中封口的毛巾的厚度為2～3層，封口的紗布厚度為5～8層。優(yōu)選地，所述步驟三中發(fā)酵溫度為20～35℃。本發(fā)明還涉及一種具有降血糖功能的生物菌液，所述生物菌液是由上述的方法制備得到的。本發(fā)明具有降血糖功能的生物菌液及其制備方法與現有技術不同之處在于：1、本發(fā)明的生物菌液制備方法將青錢柳(或青錢柳、桑葉、杜仲復配方劑)和木糖醇相結合制作的培養(yǎng)基接種人體益生菌，經發(fā)酵得到厚厚的菌膜和高濃度的多元菌共生液。2、本發(fā)明的生物菌液巧妙的利用了青錢柳、人體益生菌液以及青錢柳發(fā)酵過程中次生代謝產物對高血糖的三重作用，使得所得產品降血糖效果優(yōu)異。3、本發(fā)明的技術方案中采用木糖醇發(fā)酵巧妙的回避了傳統紅茶菌食用糖發(fā)酵產生高糖含量菌液的弊端。4、本發(fā)明的技術方案中采用的青錢柳無毒性，以其浸提物作為培養(yǎng)基而制作的多元生物菌液即可做為治療藥劑，也可做為功能性飲料長期服用。5、本發(fā)明的制備方法易于取材，工藝簡單，易于推廣。具體實施方式通過以下實施例和驗證試驗對本發(fā)明的具有降血糖功能的生物菌液及其制備方法作進一步的說明。實施例1本實施例的具有降血糖功能的生物菌液按以下步驟制備：一、青錢柳培養(yǎng)基的制備：分別稱取基料、木糖醇和水，混合后加熱至100℃，保持5min，冷卻至45℃，過濾去除藥渣后即制得青錢柳培養(yǎng)基；二、接種：將步驟一制得的青錢柳培養(yǎng)基轉移至培養(yǎng)容器中，將菌種接種于青錢柳培養(yǎng)基中；三、發(fā)酵：將培養(yǎng)容器用滅菌后的紗布封口，封口的紗布厚度為6層，發(fā)酵溫度為35℃，發(fā)酵15d，即制得本實施例的治療胃腸疾病的生物菌液。本實施例中培養(yǎng)基中基料的選擇及其他原料的量見表1，菌種的選擇見表2。實施例2本實施例的具有降血糖功能的生物菌液按以下步驟制備：一、青錢柳培養(yǎng)基的制備：分別稱取基料、木糖醇和水，混合后加熱至100℃，保持20min，冷卻至25℃，過濾去除藥渣后即制得青錢柳培養(yǎng)基；二、接種：將步驟一制得的青錢柳培養(yǎng)基轉移至培養(yǎng)容器中，將菌種接種于青錢柳培養(yǎng)基中；三、發(fā)酵：將培養(yǎng)容器用滅菌后的毛巾封口，封口的毛巾的厚度為2層，發(fā)酵溫度為20℃，發(fā)酵20d，即制得本實施例的治療胃腸疾病的生物菌液。本實施例中培養(yǎng)基中基料的選擇及其他原料的量見表1，菌種的選擇見表2。實施例3本實施例的具有降血糖功能的生物菌液按以下步驟制備：一、青錢柳培養(yǎng)基的制備：分別稱取基料、木糖醇和水，混合后加熱至100℃，保持30min，冷卻至1℃，過濾去除藥渣后即制得青錢柳培養(yǎng)基；二、接種：將步驟一制得的青錢柳培養(yǎng)基轉移至培養(yǎng)容器中，將菌種接種于青錢柳培養(yǎng)基中；三、發(fā)酵：將培養(yǎng)容器用滅菌后的紗布封口，封口的紗布厚度為8層，發(fā)酵溫度為25℃，發(fā)酵10d，即制得本實施例的治療胃腸疾病的生物菌液。本實施例中培養(yǎng)基中基料的選擇及其他原料的量見表1，菌種的選擇見表2。實施例4本實施例的具有降血糖功能的生物菌液按以下步驟制備：一、青錢柳培養(yǎng)基的制備：分別稱取基料、木糖醇和水，混合后加熱至100℃，保持15min，冷卻至30℃，過濾去除藥渣后即制得青錢柳培養(yǎng)基；二、接種：將步驟一制得的青錢柳培養(yǎng)基轉移至培養(yǎng)容器中，將菌種接種于青錢柳培養(yǎng)基中；三、發(fā)酵：將培養(yǎng)容器用滅菌后的紗布封口，封口的紗布厚度為5層，發(fā)酵溫度為45℃，發(fā)酵7d，即制得本實施例的治療胃腸疾病的生物菌液。本實施例中培養(yǎng)基中基料的選擇及其他原料的量見表1，菌種的選擇見表2。實施例5本實施例的具有降血糖功能的生物菌液按以下步驟制備：一、青錢柳培養(yǎng)基的制備：分別稱取基料、木糖醇和水，混合后加熱至100℃，保持10min，冷卻至10℃，過濾去除藥渣后即制得青錢柳培養(yǎng)基；二、接種：將步驟一制得的青錢柳培養(yǎng)基轉移至培養(yǎng)容器中，將菌種接種于青錢柳培養(yǎng)基中；三、發(fā)酵：將培養(yǎng)容器用滅菌后的毛巾封口，封口的毛巾的厚度為3層，發(fā)酵溫度為10℃，發(fā)酵60d，即制得本實施例的治療胃腸疾病的生物菌液。本實施例中培養(yǎng)基中基料的選擇及其他原料的量見表1，菌種的選擇見表2。表1實施例1-5中各原料的選擇及用量(單位：g)注：上表中未填寫即為無。表2實施例1-5中采用的菌種注：上表中未填寫即為無。以上表格中，長雙歧桿菌(Bifidobacteriumlongum)、短雙歧桿菌Bifidobacteriumbreve、嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophylus)、嗜熱鏈球菌(Streptococcusthermophilus)、BF-839脆弱擬桿菌(B.fragilis-839)、糞腸球菌(Escherichiacoli)屬于胃腸益生菌，醋酸菌(Acetobactersp)、酵母菌(Candidaalbicans)和乳酸菌(Lactobacillusacidophilus)為紅茶菌的主要菌種。另外還列舉了德氏乳桿菌(Lactobacillusdelbrueckiisubsp)、冠突散囊菌(Eurotiumcristatum)。驗證試驗對比觀察本發(fā)明的生物菌液與青錢柳水煎液治療80例II型糖尿病的療效的效果。方法：將80例II型糖尿病患者隨機分為本發(fā)明觀察組和青錢柳水煎液對照組，分別采用本發(fā)明和青錢柳水煎液治療，8周后比較兩組空腹血糖，餐后2小時后血糖以及癥狀改善情況。結果：兩組治療前血糖水平無顯著性差異(P>0.05)，治療8周后觀察組血糖水平下降水平明顯優(yōu)于對照組(p<0.05)，癥狀改善明顯優(yōu)于對照組(p<0.05)。結論本發(fā)明治療II型糖尿病降糖和改善癥狀效果顯著。1臨床資料1.1一般資料本次實驗驗證的病例共80例，其中男48例，女32例，隨機分為2組，每組40例。觀察組男24例，女16例。期中，最大年齡65歲，最小年齡43歲，平均58歲，對照組男男24例，女16例。期中，最大年齡67歲，最小年齡42歲，平均59歲，兩組一般資料比較無顯著性差異(P>0.05)，具有可比性。1.2診斷標準(1)西醫(yī)診斷標準，參照1999年WTO建議II型糖尿病診斷標準①：(靜脈血漿葡萄糖值mmol/L)空腹血糖≥7.0或隨機血糖≥11.1或OGTT2h≥11.1②：從胰島素抵抗為主伴胰島素相對不足到胰島素分泌不足為主伴胰島素抵抗又無其他明確各種原因的糖尿病。(2)中醫(yī)診斷標準與辨證分型：參照國家中醫(yī)藥管理局發(fā)布的《中醫(yī)病癥診斷療效標準》及《中醫(yī)內科學》消渴由稟賦不足，陰虛燥熱所致，口渴引飲為上消，善食易饑為中消，飲一漫一為下消，統稱消渴，包括糖尿病，尿崩癥。2治療方法本發(fā)明觀察組采用：青錢柳降糖多元菌液(每100ML基液，基料青錢柳干品5克)口服，每天三次，每次300ML，連續(xù)服用8周；對照組采用：青錢柳水煎液(每100ML，青錢柳干品5克)，每天三次，每次300ML，連續(xù)服用8周。用藥及隨訪期間禁用其他藥物，停藥后進行臨床檢查，記錄結果。3治療結果3.1療效判定：顯效：癥狀消失空腹血糖降至正?；蜉^治療前下降40％以上,餐后兩小時血糖降至<8mmol/L；有效：癥狀明顯減輕，空腹血糖下降20％-30％，餐后兩小時血糖降至<10mmol/L；無效：癥狀無明顯改善或加重，空腹血糖等指標達不到上述標準。3.2結果3.2.1兩組治療前后血糖比較：兩組治療前血糖水平無顯著性差異(P>0.05)，治療8周后觀察組空腹血糖，餐后2小時后血糖水平下降明顯優(yōu)于對照組(p<0.05)，見表3。表3兩組治療前后血糖比較p<0.05差異有顯著性。3.2.1兩組治療前后的癥狀改善比較：觀察組在治療兩周內口渴多飲，消谷善饑，尿多等癥狀有改善的28例，兩周后有改善的12例；對照組在治療兩周內有改善的12例，兩周后有改善的38例。兩組治療兩周內癥狀改善比較，差異有顯著性(p<0.05)。見表4。表4兩組療效比較組別例數顯效有效無效總有效率觀察組4028120100％對照組40187587％P<0.05差異有顯著性。本發(fā)明治療II型糖尿病典型治療病例：1、趙某，男，57歲，因多食、多飲、消瘦一年就診?；颊呓荒隉o明顯誘因逐漸食量增加，由原來的每天500克左右到每天600左右克，有時甚至達到800克，但是，體重不增返降，近3個月來內體重減輕了4kg以上，同時還感覺口渴，喜歡多喝水，小便增多，渾身乏力等癥狀。既往體健，無藥物過敏史。個人史及家族史無特殊。查體：T36℃，P80次/分，R18次/分，BP120/80mmHg。皮膚無黃染，淋巴結無腫大，甲狀腺(-),心肺(-)，腹平軟，肝脾未觸及。雙下肢無水腫，腱反射正常。Babinski征(-)。實驗室檢查：Hb120g/L，WBC7.6×109/L。PLT267×109/L；尿常規(guī)：尿蛋白(-)，尿糖(++)，；空腹血糖10.98mmol/L。初步診斷：糖尿病II型。診斷依據：1.病史中有典型的多飲、多食、多尿和消瘦。2.尿糖(++)，空腹血糖>7.0mmol/L。治療方案：1.采用本發(fā)明青錢柳降糖生物菌液(基料青錢柳)治療2.飲食調理，低糖，低鹽，低脂飲食，高纖維素。3.生活要規(guī)律，預防感染，有問題隨診。服藥兩周周后，病人睡眠，多飲，多尿等癥狀有好轉。服藥1個療程，病人“多飲、多食、消瘦”癥狀明顯減輕。服藥2個療程，病人病情基本穩(wěn)定，目前鞏固治療中。2、李某，男，58歲，半年來無明顯誘因出現疲乏無力，伴惡心嘔吐，醫(yī)院診為“慢性腎功能不全”，住院治療一月，效果一般。來診時患者現：自覺疲乏無力，惡心，時覺心悸，胸悶痛，手足心熱，納差，二便正常。查體見：貧血貌，面色萎黃，口唇色淡，雙下肢無浮腫，腎區(qū)無叩擊痛，肝脾未及。BP：150/90mmHg，實驗室檢查：尿常規(guī)：PRO(+2)，BLD(-)。血常規(guī)：WBC：5.9×108/L，RBC：2.7×1011/L。Hb：89g/L，PLT：287×109/L。Cr：383μmol/L，BUN：5.2mmol/L，CO2-CP：18.6mmol/L。糖尿病史12年，高血壓5年，冠心病3年。診斷：1、慢性腎功能不全；2、糖尿病腎?。?、II型糖尿??；4、冠心病。治療：采用本發(fā)明青錢柳降糖生物菌液(基料青錢柳、杜仲)治療，一個月后復診精神狀態(tài)大有好轉，食欲轉佳，胸悶減輕，無惡心嘔吐，BP：140/80mmHg，查尿蛋白(++)，尿糖(+)，Cr：295mmol/L，BUN10、6mmol/L，Glu6、8mmol/L。繼續(xù)服用一個月后，惡心嘔吐消失，無胸悶，食量增加?；災虻鞍?+)，尿糖(+)，Cr：245μmol/L，BUN：9.7mmol/L，Glu：6.8mmol/L。3、李某，男，62歲，自訴于近期感冒后咳嗽，咯痰，惡心嘔吐，疲乏無力，大醫(yī)院就診查尿蛋白(+3)，尿糖(+3)，Cr：866μmol/L，BUN：18.6mmol/L，Glu7.8mmol/L。診斷為糖尿病腎病腎功能衰竭?？垢腥炯皩ΠY治療同時，進行血液透析，每周2次，每次透析前Cr：500～600mmol/L，自覺效果不理想，今天來診?；颊咦愿行貝灒袗盒膰I吐，納差食少，神疲乏力，氣短懶言，腰膝酸軟，手足逆冷，查體見精神萎靡，面色晦暗，舌淡胖大有齒痕、苔黃厚膩，脈濡無力，尿蛋白(+3)，尿糖(+3)，Cr：596μmol/L，Glu：6.9mmol/L。BP：170/100mmHg，診斷：糖尿病腎病，腎功能衰竭，高血壓病。采用本發(fā)明青錢柳降糖生物菌液(基料青錢柳、桑葉)治療，半月后二診，惡心嘔吐消失，諸癥悉減，治療期間一直未作透析，查尿蛋白(+3)，尿糖(+3)，Cr：531μmol/L，Glu：7.1mmol/L。BP：160/100mmHg，一個月后復診，精神轉佳，查尿蛋白(+3)，尿糖(+2)，Cr：348μmol/L，Glu：6.6mmol/L。BP：150/90mmHg，繼續(xù)加量服用1月后，查尿蛋白(+)，尿糖(+2)，Cr：226μmol/L。4、劉某，男，59歲初診日期：2002年3月。患糖尿病15年，5年前開始出現蛋白尿，伴雙下肢間斷水腫，乏力，視物不清，化驗蛋白尿(+2)尿糖(+2)血糖12.8mmol/L，尿素氮：17.2mmol/L，肌酐：446.4μmol/L，T：41g/L，A：25.1g/L，G：16g/L，診斷為糖尿病腎病，慢性腎功能不全氮質血癥。采用本發(fā)明青錢柳降糖生物菌液(基料青錢柳、桑葉、杜仲)治療，連用一個月來診復查，自覺癥狀明顯減輕浮腫消失，尿常規(guī)蛋白(+)，T：53g/L，A：36.2g/L，G：17g/L，尿糖(+)，血糖7.6mmol/L，尿素氮9.8mmol/L，肌酐316μmol/L，繼續(xù)用上方加用活血化淤生欣膠囊，連續(xù)服用一個月復查，蛋白(+)，尿糖(-)，血糖5.1mmol/L，尿素氮8.0mmol/L，肌酐205μmol/L，繼服一個月，諸證悉除，化驗指標基本正常。連續(xù)服用清腎加糖安三個月癥狀完全緩解各項指標趨于正常。停藥后隨訪一年無復發(fā)。通過上述驗證試驗與典型病例可知，采用本發(fā)明的技術方案通過用益生菌對青錢柳進行發(fā)酵，所得生物菌液降血糖效果優(yōu)異，顯著提高了其對II型糖尿病的治療效果。雖然以上描述了本發(fā)明的具體實施方式，但是本領域的技術人員應當理解，這些僅是舉例說明，本發(fā)明的保護范圍是由所附權利要求書限定的。本領域的技術人員在不背離本發(fā)明的原理和實質的前提下，可以對這些實施方式作出多種變更或修改，但這些變更和修改均落入本發(fā)明的保護范圍。當前第1頁1 2 3