本發(fā)明涉及化妝品原料領(lǐng)域，具體地涉及一種具美白能力的月季花花青素制備方法。
背景技術(shù)：
：月季花(學(xué)名：RosachinensisJacq.)：被稱為花中皇后，又稱“月月紅”，是常綠、半常綠低矮灌木，四季開花﹐一般為紅色﹐或粉色、偶有白色和黃色﹐可作為觀賞植物，也可作為藥用植物，亦稱月季。有三個自然變種，現(xiàn)代月季花型多樣，有單瓣和重瓣，還有高心卷邊等優(yōu)美花型；其色彩艷麗、豐富，不僅有紅、粉黃、白等單色，還有混色、銀邊等品種；多數(shù)品種有芳香。月季的品種繁多，世界上已有近萬種，中國也有千種以上。自然花期8月到次年4月，花成大型，由內(nèi)向外，呈發(fā)散型，有濃郁香氣，可廣泛用于園藝栽培和切花。月季的適應(yīng)性強(qiáng)，耐寒、耐寒，不論地栽、盆栽均可，適用于美化庭院、裝點園林、布置花壇、配植花籬、花架，月季栽培容易，可作切花，用于做花束和各種花籃，月季花朵可提取香精，并可入藥。也有較好的抗真菌及協(xié)同抗耐藥真菌活性。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種具美白能力的月季花花青素制備方法。本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下：本發(fā)明的目的之一，在于提供一種具美白能力的月季花花青素制備方法，包括如下步驟：以水蒸氣蒸餾法蒸餾新鮮月季花，水與花的比例為4.5-5.5:1，蒸餾之后的水蒸汽經(jīng)冷卻，得冷卻液，當(dāng)蒸餾出的冷卻液重量為加入月季花瓣重量的3-4倍時，即停止蒸餾；以水蒸氣蒸餾后，蒸餾器底部月季花殘留液與蒸餾器中月季花共同煮沸0.5-1.5小時過濾，濾液通過DIAIONHP-20管柱去除高極性成分，搜集流出液后真空濃縮抽干，再經(jīng)冷凍干燥即得月季花青素，置-20℃冰存儲藏。作為優(yōu)選，以水蒸氣蒸餾法蒸餾新鮮月季花，水與花的比例為5:1，以水蒸汽蒸餾經(jīng)冷卻所得之冷卻液，當(dāng)蒸餾出的冷卻液重量為加入月季花瓣重量的3-4倍時，即停止蒸餾；以水蒸氣蒸餾后，蒸餾器底部月季花殘留液與蒸餾器中月季花共同煮沸1小時過濾，濾液通過以配置完成的DIAIONHP-20管柱去除高極性成分，搜集流出液后真空濃縮抽干，再經(jīng)冷凍干燥24小時即得月季花青素，置-20℃冰存儲藏。本發(fā)明的又一目的，在于提供一種月季花花青素的用途，其用于抑制DPPH自由基。本發(fā)明的又一目的，在于提供一種月季花花青素的用途，其用于抑制抑制酪胺酶活性。本發(fā)明的又一目的，在于提供一種月季花花青素的用途，用于抑制黑色素細(xì)胞生成黑色素。由上述描述可知，本發(fā)明提供了一種具美白能力的月季花花青素制備方法，本發(fā)明制備的月季花花青素，可用于抑制DPPH自由基、抑制抑制酪胺酶活性或抑制黑色素細(xì)胞生成黑色素。且對人體皮膚無紅腫、浮腫、丘疹、水泡等刺激反應(yīng)。附圖說明圖1為本發(fā)明實施例5的季花青素抑制DPPH自由基的實驗結(jié)果圖；其中橫坐標(biāo)為濃度(ppm)，縱坐標(biāo)為抑制率(％)；圖2為本發(fā)明實施例8貼布實驗結(jié)果；具體實施方式實施例1月季花精露、月季花青素生產(chǎn)工藝：1.以水蒸氣蒸餾法蒸餾新鮮月季花(選擇大紅系月季花)，水與花的比例為5:1，以蒸餾后的水蒸汽經(jīng)冷卻，得冷卻液，當(dāng)蒸餾出的冷卻液重量為加入月季花瓣重量的3倍時，即停止蒸餾，此即為月季精露，含有天然月季香氣，可作為天然月季水之用。2.以水蒸氣蒸餾后，蒸餾器底部的月季花殘留液與蒸餾器中月季花共同煮沸1小時過濾，濾液通過以配置完成的DIAIONHP-20管柱去除高極性成分，搜集流出液后真空濃縮抽干，再經(jīng)冷凍干燥24小時即得月季花青素，置-20℃冰存儲藏。實施例2月季花青素之總類黃酮含量測定類黃酮化合物于堿性條件下可與氯化鋁形成穩(wěn)定的黃色錯合物，并于波長415nm下有吸光，當(dāng)顏色越深，其類黃酮含量越高。取一96孔盤加入樣品或不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品20mL再依序加入60mL乙醇(95％)、4mL10％氯化鋁(aluminumchloride)、4mL1M醋酸鉀(potassiumacetate)及112mL去離子水，在室溫下避光反應(yīng)30分鐘，由ELISAreader在波長415nm測其吸光值。依吸光值判定測試樣品中類黃酮含量多寡，利用其吸光值代入先前制作的槲皮素(quercetin)標(biāo)準(zhǔn)曲線，做出相對于槲皮素的濃度表示。最后，換算出每克樣品中含有多少毫克類黃酮含量。月季花青素之總類黃酮含量測定結(jié)果樣品總類黃酮含量(mgQuercetineq./g)月季花青素萃取物26.6±2.0實施例3月季花青素的總酚含量測定總酚含量的測定以沒食子酸(gallicacid)為標(biāo)準(zhǔn)品，制作不同濃度的沒食子酸吸光值的檢量線，利用ELISA測750nm之吸光值，以吸光值為縱軸，沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計算定量線性回歸公式。樣品所測得的吸光值由沒食子酸檢量線加以換算后，即可得到待測樣品的總多酚含量相當(dāng)于多少的沒食子酸的含量，沒食子酸的量愈高，代表化合物的抗氧化活性愈高。沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：(1)分別配制濃度為12.5、25、50、100、200及400μg/mL的沒食子酸水溶液。(2)各取50μL上述濃度之標(biāo)準(zhǔn)水溶液，加入50μL福林酚試劑(Folin-Ciocalteu'sphenolreagent)，均勻混合后于室溫靜置20分鐘。(3)再加入100μL濃度為20％Na2CO3水溶液，混勻后置于室溫反應(yīng)10分鐘，測定于750nm之吸光值(用水當(dāng)空白對照)。(4)利用吸光值為縱軸，沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計算定量線性回歸公式。月季花青素之總酚含量測定樣品總酚含量(mgGallicacideq./g)月季花青素萃取物102.2±1.4實施例4月季花青素細(xì)胞毒性評估(ColorimetricMTTassay)選用SCC25細(xì)胞(人類頭頸部鱗狀癌細(xì)胞株)與HaCaT(人類皮膚角質(zhì)細(xì)胞)評估月季花青素72小時細(xì)胞毒性實驗，結(jié)果顯示月季花青素100mg/mL對SCC25細(xì)胞略有些許毒性，但細(xì)胞存活度仍超過70％以上；對HaCaT(人類皮膚角質(zhì)細(xì)胞)顯示花青素沒有毒性。實施例5月季花青素抑制DPPH自由基的評估方法：取99μLDPPH乙醇溶液(100μL)混合1μL之萃取物后避光反應(yīng)30分鐘，最后于波長517nm下測定吸光值(BioTek,SynergyTM2,USA)。與對照組維他命C比較。結(jié)果顯示花青素在為100ppm濃度時，顯示可達(dá)到94.2％的抑制能力，顯示月季花青素有非常優(yōu)異的抑制DPPH自由基的效能。樣品名稱抑制率(％)VitC(對照組)97.7±0.9花青素94.2±0.2實施例6月季花青素抑制抑制酪胺酶活性評估于濃度100ppm下，月季花青素顯示有超過50％的抑制酪胺酸酶效果。樣品名稱抑制率(％)VitC(對照組)98.2±1.0花青素58.6±2.2實施例7月季花青素抑制黑色素細(xì)胞(B16)生成黑色素之活性評估將B16細(xì)胞，以1×105/mL之密度接種于96孔板中培養(yǎng)24小時后，將萃取物及對照組維生素C混合于含有100nMα-MSH之無酚紅(phenolredfree)培養(yǎng)液，反應(yīng)72小時后，取上清液100μL于96孔板中，于405nm波長測定吸光值(BioTek,SynergyTM2,USA)。計算萃取物和維生素C本身之吸光值，換算萃取物及維生素C作用于細(xì)胞后抑制黑色素生成量能力。結(jié)果顯示月季花青素在72小時的作用時間下，100ppm濃度下即有抑制效果，在高濃度的劑量500ppm可發(fā)現(xiàn)有顯著的抑制B16細(xì)胞生成黑色素的功效。實施例8月季花青素皮膚刺激性測試(貼布測試)評估結(jié)果：月季花青素皮膚刺激性測試結(jié)果顯示在24、48、72小時觀察均無皮膚刺激性反應(yīng)。實驗方法：根據(jù)國際接觸性皮炎研究組(ICDRG)的規(guī)定，是以視覺的方式來觀察，將所獲得樣本配置成10％之水溶液，再以移液管取0.1ml置于1.0×1.0cm附上紗布的塑料盤，另取0.1ml過濾二次水作為空白對照組，貼在上臂內(nèi)側(cè)，用透氣膠帶固定，避免洗澡弄濕，每24小時更換新的紗布，并重新添加0.1ml受測物質(zhì)及空白組，觀察72小時。觀察皮膚有無紅腫、浮腫、丘疹、水泡等刺激反應(yīng)。(實驗人次為10人)。當(dāng)前第1頁1 2 3