本發(fā)明屬于植物提取領(lǐng)域，具體而言，涉及一種治療Ⅱ型糖尿病及其并發(fā)癥的小豆蔻和小豆蔻種皮種子提取物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：糖尿病是由碳水化合物、蛋白質(zhì)和脂肪代謝紊亂引起的血糖高的疾病。據(jù)世界健康組織（WHO）統(tǒng)計(jì)，全世界有3.46億人口患有糖尿病，到2030年患病人口數(shù)目將要翻一番。葡萄糖代謝紊亂導(dǎo)致血管病變可以引發(fā)難以治愈的糖尿病并發(fā)癥。1型糖尿病是由于胰臟的β-細(xì)胞不能產(chǎn)生胰島素導(dǎo)致的，而Ⅱ型糖尿病則是由于胰島素抵抗或β-細(xì)胞功能障礙引起的。糖苷酶抑制劑能夠抑制α-淀粉酶(EC3.2.1.1)和α-葡萄糖苷酶(EC3.2.1.20)的活性，α-淀粉酶廣泛存在于胰液、唾液，能夠?qū)⒌矸劢到鉃橐孜招》肿犹牵沪?葡萄糖苷酶廣泛存在于哺乳動(dòng)物腸粘膜內(nèi)部，能夠催化淀粉降解的最后一步，使二糖降解，這兩種酶參與碳水化合物的消化吸收，能夠顯著影響餐后血糖水平。抑制α-淀粉酶和α-葡糖糖苷酶的活性能夠推遲碳水化合物在小腸內(nèi)部的降解，降低血糖上升速度。糖苷酶酶抑制劑是抗Ⅱ型糖尿病藥物的一種，其中阿卡波糖的效果最好，這類藥物最大的優(yōu)點(diǎn)就是適合不依賴胰島素型糖尿病病人，即Ⅱ型糖尿病病人的康復(fù)治療。豆蔻（Amomum），姜科植物，陸生地下莖植物屬，分布于亞洲非洲熱帶地區(qū)。不同地區(qū)性狀略有不同，黑豆蔻產(chǎn)于巴基斯坦拉合爾市，黑豆蔻種子具有興奮效果、增進(jìn)食欲、解毒、止血的功能，用于治療消化不良、嘔吐、腹部疼痛和直腸類疾病，并且能夠促進(jìn)膽汁的清除，用來(lái)治療充血性黃疸，也治療淋病的效果，從種子中提取的精油可以用于治療眼睛的發(fā)炎。干黑豆蔻具有很多功能，例如：鎮(zhèn)痛、抗炎、抗菌、抗氧化、抗?jié)?、利尿、降血糖。小豆蔻產(chǎn)于中國(guó)，用于烹飪和治療嗓子發(fā)炎、胃病。小豆蔻提取物對(duì)血糖和硫噴妥酸反應(yīng)（TBRAS）具有明顯影響，具有抗氧化的潛力。在世界上許多國(guó)家尤其是第三世界國(guó)家，植物提取物或者是幾種不同植物提取物允許被用來(lái)作為治療糖尿病或其他疾病的藥物。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)400多種植物以不同的形式可以用來(lái)治療高血糖。幾種α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制劑已經(jīng)從藥用植物中提取出來(lái)，能夠在治療糖尿病過(guò)程中比化學(xué)合成藥物產(chǎn)生較少的副作用。藥用植物提取物中不僅有這兩種酶的抑制劑，而且還含有豐富的酚酸類物質(zhì)，因此也具有抗氧化的活性。然而小豆蔻和小豆蔻作為藥用植物的研究很少，本專利首次通過(guò)體外試驗(yàn)將它們的種子和皮的抗糖尿病的活性成分進(jìn)行了研究。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：鑒于現(xiàn)有研究不足，本發(fā)明的目的在于通過(guò)對(duì)黑豆蔻和小豆蔻提取物的體外試驗(yàn)研究，提供一種治療Ⅱ型糖尿病及并發(fā)癥的黑豆蔻和小豆蔻提取物及其應(yīng)用。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的：一種治療Ⅱ型糖尿病及并發(fā)癥的黑豆蔻和小豆蔻提取物，在制備抗高血糖藥物中的應(yīng)用。一種治療Ⅱ型糖尿病及并發(fā)癥的黑豆蔻和小豆蔻提取物，在制備抗高血糖并發(fā)癥藥物中的應(yīng)用。所述的黑豆蔻種子提取物由如下方法制備得到的：黑豆蔻經(jīng)過(guò)清洗、去雜質(zhì)后室溫晾干，將種子與皮分離，用粉碎機(jī)將黑豆蔻種子研磨成粉，取10g粉末放入100ml蒸餾水中在提取溫度28℃，攪拌轉(zhuǎn)速為280rmp浸提條件下避光浸提3天，收集上清液經(jīng)過(guò)濾，濾液經(jīng)60℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮后，冷凍干燥得到黑豆蔻種子提取物。所述的黑豆蔻種皮提取物由如下方法制備得到的：黑豆蔻經(jīng)過(guò)清洗、去雜質(zhì)后室溫晾干，將種子與皮分離，用粉碎機(jī)將黑豆蔻種皮研磨成粉，取10g粉末放入100ml蒸餾水中在提取溫度28℃，攪拌轉(zhuǎn)速為280rmp浸提條件下避光浸提3天，收集上清液經(jīng)過(guò)濾，濾液經(jīng)60℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮后，冷凍干燥得到黑豆蔻種皮提取物。所述的小豆蔻種子提取物由如下方法制備得到的：小豆蔻經(jīng)過(guò)清洗、去雜質(zhì)后室溫晾干，將種子與皮分離，用粉碎機(jī)將小豆蔻種子研磨成粉，取10g粉末放入100ml蒸餾水中在提取溫度28℃，攪拌轉(zhuǎn)速為280rmp浸提條件下避光浸提3天，收集上清液經(jīng)過(guò)濾，濾液經(jīng)60℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮后，冷凍干燥得到小豆蔻種子提取物。所述的小豆蔻種皮提取物由如下方法制備得到的：小豆蔻經(jīng)過(guò)清洗、去雜質(zhì)后室溫晾干，將種子與皮分離，用粉碎機(jī)將小豆蔻種皮研磨成粉，取10g粉末放入100ml蒸餾水中在提取溫度28℃，攪拌轉(zhuǎn)速為280rmp浸提條件下避光浸提3天，收集上清液經(jīng)過(guò)濾，濾液經(jīng)60℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮后，冷凍干燥得到小豆蔻種皮提取物。所述的抗Ⅱ型糖尿病的藥物包括上述提取物和藥學(xué)上可以接受的載體或常規(guī)副食。所述的抗Ⅱ型糖尿病并發(fā)癥的藥物包括上述提取物和藥學(xué)上可以接受的載體或常規(guī)副食。有益效果]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明有以下有益的技術(shù)效果：黑豆蔻和小豆蔻種子與種皮提取物對(duì)于α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶具有明顯的抑制效果，能夠控制Ⅱ型糖尿病病人的餐后血糖升高速度，因此黑豆蔻和小豆蔻水浸提濃縮物對(duì)開發(fā)治療Ⅱ型糖尿病藥物具有潛在價(jià)值?！揪唧w實(shí)施方式】以下結(jié)合實(shí)例，對(duì)本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式詳述如下：實(shí)施例1:黑豆蔻種子提取物對(duì)α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制效果試驗(yàn)黑豆蔻種子提取物處理：稱取黑豆蔻種子提取物溶解于二甲基亞砜（DMSO(v/v1:1)）中制成0-4mg/ml濃度的溶液備用。黑豆蔻種子對(duì)α-淀粉酶抑制效果試驗(yàn)：取上述各濃度溶液500μl于試管中，向試管中加入含有0.5mg/ml的α-淀粉酶（溶解于0.02M，pH為6.9磷酸緩沖液）溶液500μl，于25℃孵育10min，再次加入1%（溶解于0.02M，pH為6.9磷酸緩沖液）的淀粉溶液500μl，于25℃孵育10min，加入顯色劑終止反應(yīng)。將試管置于沸水中加熱5min后冷卻至室溫，向試管中加入15ml蒸餾水稀釋后于540nm測(cè)定吸光度。三次平行，空白對(duì)照組為緩沖溶液代替α-淀粉酶溶液，其他條件不變。質(zhì)控組為緩沖溶液代替黑豆蔻種子提取物溶液，其他條件不變。抑制率計(jì)算公式：抑制率（%）={(Ac–Ae)/Ac}100其中Ac為質(zhì)控組吸光度，Ae為黑豆蔻種子提取液吸光度黑豆蔻種子對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制效果試驗(yàn)：取上述各濃度溶液50μl于96孔酶標(biāo)板中，向試管中加入含有1.0U/ml的α-葡萄糖苷酶（溶解于0.1M，pH為6.9磷酸緩沖液）溶液100μl，于25℃孵育10min，再次加入5mM的硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷（溶解于0.1M，pH為6.9磷酸緩沖液）溶液50μl于25℃孵育10min，在504nm測(cè)定吸光度。三次平行，空白對(duì)照組為緩沖溶液代替α-淀粉酶溶液，其他條件不變。質(zhì)控組為緩沖溶液代替黑豆蔻種子提取物溶液，其他條件不變。抑制率計(jì)算公式：抑制率（%）={(Ac–Ae)/Ac}100其中Ac為質(zhì)控組吸光度，Ae為黑豆蔻種子提取液吸光度黑豆蔻種子提取物對(duì)α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制結(jié)果：黑豆蔻種子提取物對(duì)α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶具有抑制，具有抗Ⅱ型糖尿病活性，其結(jié)果如表1、表2所示：表1：黑豆蔻種子提取物對(duì)α-淀粉酶抑制結(jié)果提取物濃度（mg/ml）淀粉酶抑制率（%）阿卡波糖抑制率（%）0.867.3327.91.672.3640.42.477.6354.13.285.1774.25487.1879.3表2：黑豆蔻種子提取物對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制結(jié)果提取物濃度（mg/ml）葡萄糖苷酶抑制率（%）阿卡波糖抑制率（%）0.810.7423.21.623.8339.62.433.9358.13.252.9464.5459.1571.2實(shí)施例2:黑豆蔻種皮提取物對(duì)α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制效果試驗(yàn)黑豆蔻種皮提取物處理：稱取黑豆蔻種皮提取物溶解于二甲基亞砜（DMSO(v/v1:1)）中制成0-4mg/ml濃度的溶液備用。黑豆蔻種皮對(duì)α-淀粉酶抑制效果試驗(yàn)：取上述各濃度溶液500μl于試管中，向試管中加入含有0.5mg/mlα-淀粉酶（溶解于0.02M，pH為6.9磷酸緩沖液）溶液500μl，于25℃孵育10min，再次加入1%（溶解于0.02M，pH為6.9磷酸緩沖液）淀粉溶液500μl，于25℃孵育10min，加入顯色劑終止反應(yīng)。將試管置于沸水中加熱5min后冷卻至室溫，向試管中加入15ml蒸餾水稀釋后于540nm測(cè)定吸光度。三次平行，空白對(duì)照組為緩沖溶液代替α-淀粉酶溶液，其他條件不變。質(zhì)控組為緩沖溶液代替黑豆蔻種皮提取物溶液，其他條件不變。抑制率計(jì)算公式：抑制率（%）={(Ac–Ae)/Ac}100其中Ac為質(zhì)控組吸光度，Ae為黑豆蔻種皮提取液吸光度黑豆蔻種皮對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制效果試驗(yàn)：取上述各濃度溶液50μl于96孔酶標(biāo)板中，向試管中加入含有1.0U/mlα-葡萄糖苷酶（溶解于0.1M，pH為6.9磷酸緩沖液）溶液100μl，于25℃孵育10min，再次加入5mM的硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷（溶解于0.1M，pH為6.9磷酸緩沖液）of溶液50μl于25℃孵育10min，在504nm測(cè)定吸光度。三次平行，空白對(duì)照組為緩沖溶液代替α-淀粉酶溶液，其他條件不變。質(zhì)控組為緩沖溶液代替黑豆蔻種子提取物溶液，其他條件不變。抑制率計(jì)算公式：抑制率（%）={(Ac–Ae)/Ac}100其中Ac為質(zhì)控組吸光度，Ae為黑豆蔻種皮提取液吸光度黑豆蔻種皮提取物對(duì)α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制結(jié)果：黑豆蔻種皮提取物對(duì)α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶具有抑制，具有抗糖尿病活性，其結(jié)果如表3、表4所示：表3：黑豆蔻種皮提取物對(duì)α-淀粉酶抑制結(jié)果提取物濃度（mg/ml）淀粉酶抑制率（%）阿卡波糖抑制率（%）0.853.2627.91.665.9340.42.475.8754.13.279.2174.25486.9379.3表4：黑豆蔻種皮提取物對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制結(jié)果提取物濃度（mg/ml）葡萄糖苷酶抑制率（%）阿卡波糖抑制率（%）0.822.9128.21.640.5546.452.443.9658.13.256.6564.5461.871.2實(shí)施例3:小豆蔻種子提取物對(duì)α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制效果試驗(yàn)小豆蔻種子提取物處理：稱取小豆蔻種子提取物溶解于二甲基亞砜（DMSO(v/v1:1)）中制成0-4mg/ml濃度的溶液備用。小豆蔻種子對(duì)α-淀粉酶抑制效果試驗(yàn)：取上述各濃度溶液500μl于試管中，向試管中加入含有0.5mg/mlα-淀粉酶（溶解于0.02M，pH為6.9磷酸緩沖液）溶液500μl，于25℃孵育10min，再次加入1%（溶解于0.02M，pH為6.9磷酸緩沖液）淀粉溶液500μl，于25℃孵育10min，加入顯色劑終止反應(yīng)。將試管置于沸水中加熱5min后冷卻至室溫，向試管中加入15ml蒸餾水稀釋后于540nm測(cè)定吸光度。三次平行，空白對(duì)照組為緩沖溶液代替α-淀粉酶溶液，其他條件不變。質(zhì)控組為緩沖溶液代替小豆蔻種子提取物溶液，其他條件不變。抑制率計(jì)算公式：抑制率（%）={(Ac–Ae)/Ac}100其中Ac為質(zhì)控組吸光度，Ae為小豆蔻種子提取液吸光度小豆蔻種子對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制效果試驗(yàn)：取上述各濃度溶液50μl于96孔酶標(biāo)板中，向試管中加入含有1.0U/mlα-葡萄糖苷酶（溶解于0.1M，pH為6.9磷酸緩沖液）溶液100μl，于25℃孵育10min，再次加入5mM的硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷（溶解于0.1M，pH為6.9磷酸緩沖液）of溶液50μl于25℃孵育10min，在504nm測(cè)定吸光度。三次平行，空白對(duì)照組為緩沖溶液代替α-淀粉酶溶液，其他條件不變。質(zhì)控組為緩沖溶液代替小豆蔻種子提取物溶液，其他條件不變。抑制率計(jì)算公式：抑制率（%）={(Ac–Ae)/Ac}100其中Ac為質(zhì)控組吸光度，Ae為小豆蔻種子提取液吸光度小豆蔻種子提取物對(duì)α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制結(jié)果：小豆蔻種子提取物對(duì)α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶具有抑制，具有抗Ⅱ型糖尿病活性，其結(jié)果如表5、表6所示：表5：小豆蔻種子提取物對(duì)α-淀粉酶抑制結(jié)果提取物濃度（mg/ml）淀粉酶抑制率（%）阿卡波糖抑制率（%）0.852.5130.91.665.1249.82.471.6460.43.279.3979.2483.9190.1表6：小豆蔻種子提取物對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制結(jié)果提取物濃度（mg/ml）葡萄糖苷酶抑制率（%）阿卡波糖抑制率（%）0.818.2631.21.634.3652.12.436.5360.43.242.4179.1454.7984.6實(shí)施例4:小豆蔻種皮提取物對(duì)α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制效果試驗(yàn)小豆蔻種皮提取物處理：稱取小豆蔻種皮提取物溶解于二甲基亞砜（DMSO(v/v1:1)）中制成0-4mg/ml濃度的溶液備用。小豆蔻種皮對(duì)α-淀粉酶抑制效果試驗(yàn)：取上述各濃度溶液500μl于試管中，向試管中加入含有0.5mg/mlα-淀粉酶（溶解于0.02M，pH為6.9磷酸緩沖液）溶液500μl，于25℃孵育10min，再次加入1%（溶解于0.02M，pH為6.9磷酸緩沖液）淀粉溶液500μl，于25℃孵育10min，加入顯色劑終止反應(yīng)。將試管置于沸水中加熱5min后冷卻至室溫，向試管中加入15ml蒸餾水稀釋后于540nm測(cè)定吸光度。三次平行，空白對(duì)照組為緩沖溶液代替α-淀粉酶溶液，其他條件不變。質(zhì)控組為緩沖溶液代替小豆蔻種皮提取物溶液，其他條件不變。抑制率計(jì)算公式：抑制率（%）={(Ac–Ae)/Ac}100其中Ac為質(zhì)控組吸光度，Ae為小豆蔻種皮提取液吸光度小豆蔻種皮對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制效果試驗(yàn)：取上述各濃度溶液50μl于96孔酶標(biāo)板中，向試管中加入含有1.0U/mlα-葡萄糖苷酶（溶解于0.1M，pH為6.9磷酸緩沖液）溶液100μl，于25℃孵育10min，再次加入5mM的硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷（溶解于0.1M，pH為6.9磷酸緩沖液）of溶液50μl于25℃孵育10min，在504nm測(cè)定吸光度。三次平行，空白對(duì)照組為緩沖溶液代替α-淀粉酶溶液，其他條件不變。質(zhì)控組為緩沖溶液代替小豆蔻種子提取物溶液，其他條件不變。抑制率計(jì)算公式：抑制率（%）={(Ac–Ae)/Ac}100其中Ac為質(zhì)控組吸光度，Ae為小豆蔻種皮提取液吸光度小豆蔻種皮提取物對(duì)α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制結(jié)果：小豆蔻種皮提取物對(duì)α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶具有抑制，具有抗Ⅱ型糖尿病活性，其結(jié)果如表7、表8所示：表7：小豆蔻種皮提取物對(duì)α-淀粉酶抑制結(jié)果提取物濃度（mg/ml）淀粉酶抑制率（%）阿卡波糖抑制率（%）0.853.2630.91.665.9349.82.475.8760.43.279.2179.2486.9390.1表8：小豆蔻種皮提取物對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制結(jié)果提取物濃度（mg/ml）葡萄糖苷酶抑制率（%）阿卡波糖抑制率（%）0.84.0231.21.68.2552.12.410.2160.43.217.9579.1429.184.6經(jīng)過(guò)體外試驗(yàn)驗(yàn)證，黑豆蔻和小豆蔻的皮和種子提取物對(duì)α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶均有抑制作用。黑豆蔻種子提取物在濃度為4mg/ml時(shí)，其對(duì)這兩種酶的抑制率為87.1%和59.1%；黑豆蔻皮提取物在該濃度時(shí)，其對(duì)這兩種酶的抑制率為86.9%和61.8%。黑豆蔻種子提取物在濃度為4mg/ml時(shí)，其對(duì)這兩種酶的抑制率為83.9%和54.7%；黑豆蔻皮提取物在該濃度時(shí)，其對(duì)這兩種酶的抑制率為69.3%和29.1%，黑豆蔻與小豆蔻種子與種皮提取物抑制試驗(yàn)分別與專門用于治療高血糖的藥物阿卡波糖作對(duì)比具有明顯的抑制作用，由此得出結(jié)論：黑豆蔻與小豆蔻具有開發(fā)為降糖藥物或副食的潛力。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3