本發(fā)明涉及一種中藥組合物，具體涉及一種可阻斷巨細(xì)胞病毒在母嬰之間傳遞的藥物組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
人巨細(xì)胞病毒(HCMV)在人群中感染非常普遍，大多數(shù)在臨床上呈隱形或潛伏感染的特點(diǎn)。該病毒是引起先天性及圍產(chǎn)期感染的重要病原，妊娠期HCMV活動(dòng)性感染可以通過胎盤垂直傳播，導(dǎo)致流產(chǎn)、畸形、死胎及新生兒神經(jīng)系統(tǒng)和臟器損害。然而孕婦感染巨細(xì)胞病毒后的自然轉(zhuǎn)陰率大約在40％左右，為了防止胎兒宮內(nèi)和經(jīng)產(chǎn)道感染巨細(xì)胞病毒，降低感染幾率，預(yù)防早產(chǎn)、流產(chǎn)、胎兒畸形等出生缺陷，需要用藥物對(duì)該病毒在孕婦體內(nèi)的繁殖進(jìn)行干預(yù)和阻斷。HCMV圍產(chǎn)期感染的預(yù)防和治療時(shí)國內(nèi)外醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)，雖然西藥更昔洛韋治療巨細(xì)胞病毒感染療效確切，但是更昔洛韋是在HCMV進(jìn)入靶細(xì)胞后通過競爭性抑制HCMV DNA多聚酶，并摻入病毒以及宿主細(xì)胞的DNA中，從而抑制DNA合成而起作用的，因此更昔洛韋抗HCMV有效率較低，不僅如此，更昔洛韋有導(dǎo)致哺乳動(dòng)物胎仔致畸的危險(xiǎn)，因此不宜應(yīng)用于孕婦。
中藥在抗病毒方面尤其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，特別是不良反應(yīng)相對(duì)較低，不易形成耐藥性，目前在病毒性疾病的治療中占有重要地位。有文獻(xiàn)報(bào)道運(yùn)用金葉敗毒顆粒治療育齡期婦女巨細(xì)胞病毒感染取得了良好的臨床療效，前瞻性隨機(jī)對(duì)照臨床研究證實(shí)該藥可使孕婦HCMV-IgM和HCMV晚期mRNA轉(zhuǎn)陰率從自然狀態(tài)下的42.64％提高到71.43％，宮內(nèi)傳播率從自然狀態(tài)下47.5％下降至20.0％，并使流產(chǎn)、先天畸形、死胎等子代生長發(fā)育異常大大減少。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種不僅可以防止HCMV侵入靶細(xì)胞，即阻斷HCMV與靶細(xì)胞膜粘附、結(jié)合或融合，還可以抑制HCMV在侵入靶細(xì)胞后的復(fù)制與表達(dá)，全面阻斷巨細(xì)胞病毒在母嬰之間傳遞。
本發(fā)明提供的技術(shù)方案是一種可阻斷巨細(xì)胞病毒在母嬰之間傳遞的藥物組合物，包括以下重量份的組分：蟲草0.1～0.5份、藍(lán)莓1～2份、黑木耳0.5～1份和羅漢果8～10份。
上述組方中各原料的功效如下：
蟲草又名冬蟲夏草，是我國民間慣用的一種名貴滋補(bǔ)藥材，其營養(yǎng)成分高于人參，可入藥，也可食用，是上乘的佳肴，具有很高的營養(yǎng)價(jià)值。冬蟲夏草可以增強(qiáng)機(jī)體的免疫力，滋補(bǔ)肺腎，對(duì)肺癌、肝癌等有明顯的抑制作用。在臨床上對(duì)肺虛久咳，氣喘，肺結(jié)核咯血，盜汗，腎虛腰膝酸痛，陽痿遺精，神經(jīng)衰弱及化療、放療后的紅細(xì)胞下降都有療效。蟲草的活性成分主要包括蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖、甾醇等。
藍(lán)莓，屬杜鵑花科，越橘屬植物。藍(lán)莓果實(shí)中含有豐富的營養(yǎng)成分，具有防止腦神經(jīng)老化、保護(hù)視力、強(qiáng)心、抗癌、軟化血管、增強(qiáng)人機(jī)體免疫等功能，營養(yǎng)成分高。
黑木耳，又名黑菜，桑耳、本菌、樹雞、木蛾、木茸，因形似耳，加之其顏色黑褐色而得名，黑木耳為木耳科植物，其性平味甘，人胃、大腸經(jīng)。具有滋補(bǔ)、潤燥、養(yǎng)血益胃、活血止血、潤肺、潤腸的作用。
羅漢果，葫蘆科多年生藤本植物的果實(shí)，主要產(chǎn)于廣西壯族自治區(qū)桂林市永?？h龍江鄉(xiāng)、龍勝和百壽等鎮(zhèn)。羅漢果是桂林名貴的土特產(chǎn)，也是國家首批批準(zhǔn)的藥食兩用材料之一，其主要功效是能止咳化痰。果實(shí)營養(yǎng)價(jià)值很高，含豐富的維生素C(每100克鮮果中含400毫克～500毫克)以及糖甙、果糖、葡萄糖、蛋白質(zhì)、脂類等。
作為優(yōu)選，各組分的重量份為：蟲草0.1～0.2份、藍(lán)莓1～1.5份、黑木耳0.5～0.6份和羅漢果8～10份。
本發(fā)明還公開了上述可阻斷巨細(xì)胞病毒在母嬰之間傳遞的藥物組合物的制備方法，包括以下步驟：
1)將配方量的蟲草、藍(lán)莓、黑木耳粉碎，以乙醇為溶媒進(jìn)行提取，將提取液過濾，取濾渣備用；
2)將步驟1)的濾渣加水提取，將提取液過濾，取濾液備用；
3)將羅漢果粉碎，以乙醇為溶媒進(jìn)行提取，將提取液過濾，取濾渣備用；
4)將步驟3)的濾渣加水提取，將提取液過濾，取濾液備用；
5)將步驟4)的濾液過截留分子量為1000道爾頓的膜過濾裝置，收集流出液；
6)將步驟2)的濾液過截留分子量為15000道爾頓的膜過濾裝置，收集濃縮液；
7)將步驟5)的流出液和步驟6)的濃縮液混勻，濃縮，干燥，即得。
步驟1)和步驟3)中，由于蟲草、藍(lán)莓、黑木耳和羅漢果中含有蛋白質(zhì)和碳水化合物，采用乙醇為溶媒，不利于蛋白質(zhì)和碳水化合物的溶解，可減少雜質(zhì)成分的溶出。
步驟1)和步驟3)中，乙醇的用量為藥材粉末重量的8～10倍，回流提取1～3次，每次1～3h。即步驟1)中，乙醇的用量為蟲草、藍(lán)莓和黑木耳混合粉末重量的8～10倍，回流提取1～3次，每次1～3h。步驟3)中，乙醇的用量為羅漢果粉末重量的8～10倍，回流提取1～3次，每次1～3h。
作為優(yōu)選，乙醇的體積濃度為90～95％。
步驟2)和步驟4)中，以水為溶媒，可以提取濾渣中的大分子多糖和小分子糖苷，水的加入量為濾渣重量的8～10倍，回流提取1～3次，每次1～3h。
步驟5)中，將羅漢果的多糖和小分子糖苷提取液過截留分子量為1000道爾頓的膜過濾裝置，收集流出液是分子量小于1000的小分子糖苷。羅漢果小分子糖苷可以將阻遏HCMV糖蛋白與靶細(xì)胞膜結(jié)合，阻止HCMV進(jìn)入受體細(xì)胞，形成了抗HCMV病毒的第一道防線。
步驟6)中，將蟲草、藍(lán)莓和黑木耳的多糖和小分子糖苷的提取液過截留分子量為15000道爾頓的膜過濾裝置，收集的濃縮液中含有分子量大于15000道爾頓的大分子多糖，可保護(hù)宿主細(xì)胞的HFF細(xì)胞，明顯抑制宿主細(xì)胞內(nèi)早期立即蛋白IE1、IE2及早期蛋白UL84的表達(dá)，由于IE1、IE2作為轉(zhuǎn)錄因子，其表達(dá)在HCMV的早期復(fù)制中具有重要作用，IE1、IE2的表達(dá)缺失，導(dǎo)致HCMV某些基因不表達(dá)，故抑制HCMV多種復(fù)制啟動(dòng)因子的轉(zhuǎn)錄。此外，早期蛋白UL84的表達(dá)是形成HCMV病毒復(fù)制中心體的必經(jīng)途徑，由于濃縮液中混合大分子多糖的作用，早期蛋白UL84表達(dá)缺失，導(dǎo)致UL44、IE2不參與HCMV復(fù)制體，從而導(dǎo)致HCMV在宿主細(xì)胞內(nèi)不能復(fù)制。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的藥物組合物既可以阻止HCMV進(jìn)入受體細(xì)胞，形成了抗HCMV病毒的第一道防線，又可以全面阻遏HCMV在宿主細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制，可有效阻遏巨細(xì)胞病毒在母嬰之間傳遞，保證母嬰安全。
具體實(shí)施方式
以下具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但不作為對(duì)本發(fā)明的限定。
實(shí)施例1
配方：蟲草0.1份、藍(lán)莓1份、黑木耳0.5份和羅漢果8份。
制備方法：
1)將配方量的蟲草、藍(lán)莓、黑木耳粉碎，以90v％乙醇為溶媒進(jìn)行提取，乙醇的用量為混合粉末重量的8倍，回流提取1h，將提取液過濾，取濾渣備用；
2)將步驟1)的濾渣加水提取，水的加入量為濾渣重量的8倍，回流提取1h，將提取液過濾，取濾液備用；
3)將羅漢果粉碎，以90v％乙醇為溶媒進(jìn)行提取，乙醇的用量為羅漢果粉末重量的8倍，回流提取1h，將提取液過濾，取濾渣備用；
4)將步驟3)的濾渣加水提取，水的加入量為濾渣重量的8倍，回流提取1h，將提取液過濾，取濾液備用；
5)將步驟4)的濾液過截留分子量為1000道爾頓的膜過濾裝置，收集流出液；
6)將步驟2)的濾液過截留分子量為15000道爾頓的膜過濾裝置，收集濃縮液；
7)將步驟5)的流出液和步驟6)的濃縮液混勻，濃縮，干燥，即得。
實(shí)施例2
配方：蟲草0.5份、藍(lán)莓2份、黑木耳1份和羅漢果10份。
制備方法：
1)將配方量的蟲草、藍(lán)莓、黑木耳粉碎，以95v％乙醇為溶媒進(jìn)行提取，乙醇的用量為混合粉末重量的10倍，回流提取3次，每次3h，將提取液合并，過濾，取濾渣備用；
2)將步驟1)的濾渣加水提取，水的加入量為濾渣重量的10倍，回流提取3次，每次3h，將提取液合并，過濾，取濾液備用；
3)將羅漢果粉碎，以95v％乙醇為溶媒進(jìn)行提取，乙醇的用量為羅漢果粉末重量的10倍，回流提取3次，每次3h，將提取液合并，過濾，取濾渣備用；
4)將步驟3)的濾渣加水提取，水的加入量為濾渣重量的10倍，回流提取3次，每次3h，將提取液合并，過濾，取濾液備用；
5)將步驟4)的濾液過截留分子量為1000道爾頓的膜過濾裝置，收集流出液；
6)將步驟2)的濾液過截留分子量為15000道爾頓的膜過濾裝置，收集濃縮液；
7)將步驟5)的流出液和步驟6)的濃縮液混勻，濃縮，干燥，即得。
實(shí)施例3
配方：蟲草0.2份、藍(lán)莓1.5份、黑木耳0.6份和羅漢果9份。
制備方法：
1)將配方量的蟲草、藍(lán)莓、黑木耳粉碎，以92v％乙醇為溶媒進(jìn)行提取，乙醇的用量為混合粉末重量的9倍，回流提取2次，每次2h，將提取液合并，過濾，取濾渣備用；
2)將步驟1)的濾渣加水提取，水的加入量為濾渣重量的9倍，回流提取2次，每次2h，將提取液合并，過濾，取濾液備用；
3)將羅漢果粉碎，以90v％乙醇為溶媒進(jìn)行提取，乙醇的用量為羅漢果粉末重量的9倍，回流提取2次，每次2h，將提取液合并，過濾，取濾渣備用；
4)將步驟3)的濾渣加水提取，水的加入量為濾渣重量的9倍，回流提取2次，每次2h，將提取液合并，過濾，取濾液備用；
5)將步驟4)的濾液過截留分子量為1000道爾頓的膜過濾裝置，收集流出液；
6)將步驟2)的濾液過截留分子量為15000道爾頓的膜過濾裝置，收集濃縮液；
7)將步驟5)的流出液和步驟6)的濃縮液混勻，濃縮，干燥，即得。
實(shí)施例4
配方：蟲草0.1份、藍(lán)莓2份、黑木耳0.5份和羅漢果10份。
制備方法：
1)將配方量的蟲草、藍(lán)莓、黑木耳粉碎，以90v％乙醇為溶媒進(jìn)行提取，乙醇的用量為混合粉末重量的10倍，回流提取1次，每次3h，將提取液合并，過濾，取濾渣備用；
2)將步驟1)的濾渣加水提取，水的加入量為濾渣重量的8倍，回流提取3次，每次1h，將提取液合并，過濾，取濾液備用；
3)將羅漢果粉碎，以95v％乙醇為溶媒進(jìn)行提取，乙醇的用量為羅漢果粉末重量的8倍，回流提取3次，每次1h，將提取液合并，過濾，取濾渣備用；
4)將步驟3)的濾渣加水提取，水的加入量為濾渣重量的10倍，回流提取1次，每次3h，將提取液過濾，取濾液備用；
5)將步驟4)的濾液過截留分子量為1000道爾頓的膜過濾裝置，收集流出液；
6)將步驟2)的濾液過截留分子量為15000道爾頓的膜過濾裝置，收集濃縮液；
7)將步驟5)的流出液和步驟6)的濃縮液混勻，濃縮，干燥，即得。
實(shí)驗(yàn)例
選婦產(chǎn)科門診病例2800例進(jìn)行篩查，檢測(cè)血清中人巨細(xì)胞病毒HCMV-IgG、HCMV-IgM，發(fā)現(xiàn)HCMV-IgM陽性者150例作為研究對(duì)象，隨機(jī)分為5組，每組30人，分為實(shí)驗(yàn)組1～4，對(duì)照組。
1、病例納入標(biāo)準(zhǔn)
年齡為22-35歲懷孕婦女，均為非素食者，全身一般情況以及營養(yǎng)狀況良好。
2、排除標(biāo)準(zhǔn)
排除心、肝、腎、肺等臟器重大疾病患者，煙酒嗜好者和重金屬元素接觸史者。
3、對(duì)照組1用金葉敗毒顆粒(武漢中聯(lián)藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)，組成為大青葉、蒲公英、金銀花、魚腥草，每袋10g)治療，每日3次，每次1袋；實(shí)驗(yàn)組服用實(shí)施例1～4制得的藥物，一日3次，每次用量5mg。兩組連續(xù)服用14天，停藥1周后無菌抽取靜脈血4ml，取血清于-20℃保存，復(fù)查HCMV-IgM轉(zhuǎn)陰率。
待嬰兒出生2周后，無菌抽取嬰兒靜脈血4ml，取血清于-20℃保存，復(fù)查HCMV-IgM，統(tǒng)計(jì)嬰兒陽性病例數(shù)。
4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
注：與對(duì)照組相比，*P＜0.05；**P＜0.01。