本發(fā)明涉及中藥提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種五酯軟膠囊及其制備方法。

背景技術(shù)：

五酯軟膠囊能降低血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶，可用于慢性肝炎谷丙轉(zhuǎn)氨酶升高者。具有顯著的肝細(xì)胞損傷拮抗作用，能夠增強(qiáng)肝細(xì)胞對毒物的抵御能力和損傷修復(fù)能力以及抗突變能力，可以促進(jìn)肝細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和糖原的生物合成，加速氨基酸滲入人體肝臟速率，改善機(jī)體對糖的利用，提高機(jī)體能量供應(yīng)，有利于肝細(xì)胞功能的恢復(fù)?，F(xiàn)有技術(shù)中的制備方法，工藝粗糙、落后，雜質(zhì)多，有效成分含量低，導(dǎo)致患者用量過大，不方便服用，嚴(yán)重影響了本品在臨床上應(yīng)用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明目的：為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種五酯軟膠囊及其制備方法。

技術(shù)方案：本發(fā)明的目的是通過如下的方案實(shí)現(xiàn)的：

一種五酯軟膠囊，制備方法為：取五味子，加五味子藥材10倍重量的水，浸泡0.5h，煎煮1小時，過濾，藥渣再加入藥材8倍重量的水，煎煮1小時，藥液濾出，合并兩次煎煮液，濃縮至60℃相對密度為1.05，加乙醇使含醇量的體積百分比達(dá)75％，攪拌，靜置，過濾，濾液濃縮至65℃時相對密度為1.25，并回收乙醇，得濃縮液，使用大孔樹脂精制，所述大孔樹脂精制方法為：加到大孔吸附樹脂柱上，50％乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，添加植物油，灌裝，制備成五酯軟膠囊。

所述五酯軟膠囊的制備方法，所述大孔吸附樹脂柱型號為D101、D201、D301。

所述五酯軟膠囊，上述制備方法中三次濃縮使用裝置，包括罐體，設(shè)置在所述罐體上的進(jìn)料口和設(shè)置在所述罐體底部的出料管，在所述罐體內(nèi)設(shè)有攪拌軸，在所述攪拌軸上設(shè)有攪拌槳，在所述罐體的頂部設(shè)有與所述攪拌軸相連接的攪拌電機(jī)，在所述罐體的內(nèi)壁上設(shè)有環(huán)形凹槽，所述環(huán)形凹槽的底端靠近所述罐體的底壁，在所述環(huán)形凹槽內(nèi)設(shè)有環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊，在所述罐體的側(cè)壁內(nèi)設(shè)有驅(qū)動電機(jī)，在所述驅(qū)動電機(jī)的主軸上設(shè)有驅(qū)動齒盤，在所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊的外環(huán)面上設(shè)有與所述驅(qū)動齒盤相齒合的齒槽，在所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊的內(nèi)環(huán)面上均勻設(shè)有至少三條刮筋，所述刮筋的底壁抵壓在所述罐體的底壁上端面上，在所述罐體上設(shè)有與所述驅(qū)動電機(jī)相連接的調(diào)節(jié)器。

所述五酯軟膠囊，上述制備方法中濃縮裝置所述環(huán)形凹槽的頂壁與底壁均勻設(shè)有滾珠，所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊的上端面和下端面抵壓在所述滾珠上。

所述五酯軟膠囊，上述制備方法中濃縮裝置所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊與所述環(huán)形凹槽的連接面上設(shè)有密封金屬條，所述滾珠設(shè)置在所述密封金屬條與環(huán)形凹槽的內(nèi)側(cè)端。

所述五酯軟膠囊，上述制備方法中濃縮裝置所述出料管上還設(shè)有冷卻器，在所述罐體內(nèi)設(shè)有水份測定儀。

所述五酯軟膠囊，上述制備方法中干燥使用裝置，包括機(jī)體，設(shè)置在所述機(jī)體內(nèi)的中軸，設(shè)置在所述中軸外壁上的旋轉(zhuǎn)盛放盤，在所述中軸的下端設(shè)有震動電機(jī)，在所述機(jī)體的頂部設(shè)有熱蒸汽輸送管道，其特征在于：在所述中軸內(nèi)設(shè)有空腔，在所述中軸的頂部設(shè)有圓盤，所述圓盤設(shè)置在所述旋轉(zhuǎn)盛放盤的頂部，在所述圓盤上設(shè)有上下通透的細(xì)孔，在所述圓盤內(nèi)設(shè)有與所述空腔相連接的導(dǎo)熱柱桿，在所述空腔內(nèi)設(shè)有電加熱塊，所述導(dǎo)熱柱桿上設(shè)有導(dǎo)熱刺柱，所述導(dǎo)熱刺柱伸入所述細(xì)孔內(nèi)，在所述機(jī)體內(nèi)設(shè)有溫度傳感器、在所述空腔內(nèi)設(shè)有與所述溫度傳感器相連接的驅(qū)動器，所述驅(qū)動器與所述電加熱塊的控制開關(guān)相連接。

所述五酯軟膠囊，上述制備方法中干燥使用裝置所述細(xì)孔為頂部大底部小的喇叭狀孔，所述導(dǎo)熱刺柱伸入所述喇叭狀孔的中部，在所述喇叭狀孔上設(shè)有上下通透的傳導(dǎo)網(wǎng)孔。

所述五酯軟膠囊，上述制備方法中干燥使用裝置所述機(jī)體的底面設(shè)有箱門，所述箱門設(shè)置在旋轉(zhuǎn)盛放盤的最底端，所述導(dǎo)熱柱桿為銀或鋁或銅質(zhì)柱桿。

所述五酯軟膠囊在制備抑制中國倉鼠肺CHL細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。

現(xiàn)有技術(shù)中，五酯軟膠囊采用醇提的方法，工藝粗糙、落后，雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量過大，不方便服用，本發(fā)明制備的五味子甲素得率增加，含量高。本發(fā)明中的濃縮設(shè)備結(jié)構(gòu)簡單、操作便捷，在加熱濃縮時，可以通過驅(qū)動電機(jī)驅(qū)動環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊旋轉(zhuǎn)，從而使刮筋在罐體的底面刮動，從而可有效的防止罐體的底壁結(jié)塊，一定程度上可提高加熱濃縮效率，解決了傳統(tǒng)技術(shù)中藥濃縮設(shè)備罐底容易結(jié)塊從而影響加熱效率的技術(shù)不足，使用穩(wěn)定性好，藥物的有效成分穩(wěn)定不被破壞。本干燥設(shè)備結(jié)構(gòu)簡單，操作便捷，在中軸的頂部設(shè)有圓盤，并且在圓盤上設(shè)有細(xì)孔，可以使熱蒸汽通過圓盤，并且在中軸內(nèi)設(shè)有電加熱塊和導(dǎo)熱柱桿，可以根據(jù)需要啟動電加熱塊，并通過導(dǎo)熱柱桿實(shí)現(xiàn)溫度傳遞，并與通過圓盤的熱蒸汽進(jìn)行混合，從而可以保證熱蒸汽的溫度，調(diào)節(jié)性能好，使用穩(wěn)定性強(qiáng)，有效解決了傳統(tǒng)技術(shù)中熱蒸汽加熱干燥機(jī)中溫度無法控制的技術(shù)不足。并發(fā)現(xiàn)所述五酯軟膠囊在制備抑制中國倉鼠肺CHL細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。

附圖說明

為了使本發(fā)明的內(nèi)容更容易被清楚的理解，下面根據(jù)具體實(shí)施例并結(jié)合附圖，對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，其中：

圖1為本發(fā)明濃縮裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。

圖2為本發(fā)明干燥裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。

具體實(shí)施方式

以下通過實(shí)施例形式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

實(shí)施例1

取五味子1000g，加五味子藥材10倍重量的水，浸泡0.5h，煎煮1小時，過濾，藥渣再加入藥材8倍重量的水，煎煮1小時，藥液濾出，合并兩次煎煮液，濃縮至60℃相對密度為1.05，加乙醇使含醇量的體積百分比達(dá)75％，攪拌，靜置，過濾，濾液濃縮至65℃時相對密度為1.25，并回收乙醇，得濃縮液，使用大孔樹脂精制，加到大孔吸附樹脂柱上，50％乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，添加植物油，灌裝，制備成五酯軟膠囊。

所述五酯軟膠囊的制備方法，所述大孔吸附樹脂柱型號為D101。

見圖1：所述五酯軟膠囊的制備方法，上述三次濃縮裝置，包括罐體1，設(shè)置在所述罐體1上的進(jìn)料口2和設(shè)置在所述罐體1底部的出料管3，在所述罐體1內(nèi)設(shè)有攪拌軸4，在所述攪拌軸4上設(shè)有攪拌槳5，在所述罐體1的頂部設(shè)有與所述攪拌軸4相連接的攪拌電機(jī)6，在所述罐體1的內(nèi)壁上設(shè)有環(huán)形凹槽7，所述環(huán)形凹槽7的底端靠近所述罐體1的底壁，在所述環(huán)形凹槽7內(nèi)設(shè)有環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊8，在所述罐體1的側(cè)壁內(nèi)設(shè)有驅(qū)動電機(jī)9，在所述驅(qū)動電機(jī)9的主軸上設(shè)有驅(qū)動齒盤10，在所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊8的外環(huán)面上設(shè)有與所述驅(qū)動齒盤10相齒合的齒槽11，在所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊8的內(nèi)環(huán)面上均勻設(shè)有至少三條刮筋12，所述刮筋12的底壁抵壓在所述罐體1的底壁上端面上，在所述罐體1上設(shè)有與所述驅(qū)動電機(jī)9相連接的調(diào)節(jié)器13，調(diào)節(jié)器為市場上已使用結(jié)構(gòu)，只需要按照其連接要求連接使用即可。在使用時通過控制驅(qū)動電機(jī)，使驅(qū)動電機(jī)帶動環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊旋轉(zhuǎn)，從而使刮筋在環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊的帶動下在罐體的底壁頂面刮動，從而可以槳聚積在罐體底壁頂面的藥渣刮松，從而可防止結(jié)塊。

在所述環(huán)形凹槽7的頂壁與底壁均勻設(shè)有滾珠14，所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊8的上端面和下端面抵壓在所述滾珠14上。設(shè)有滾珠，可以保證環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊的正常旋轉(zhuǎn)，減少環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊與環(huán)形凹槽之間的摩擦，從而提高使用壽命和使用穩(wěn)定性。

在所述環(huán)形旋轉(zhuǎn)塊8與所述環(huán)形凹槽7的連接面上設(shè)有密封金屬條15，所述滾珠設(shè)置在所述密封金屬條與環(huán)形凹槽的內(nèi)側(cè)端。

在所述出料管上還設(shè)有冷卻器16，在所述罐體內(nèi)設(shè)有水份測定儀17。

見圖2，所述五酯軟膠囊的制備方法，上述干燥使用裝置，包括機(jī)體1，設(shè)置在所述機(jī)體1內(nèi)的中軸2，設(shè)置在所述中軸2外壁上的旋轉(zhuǎn)盛放盤3，在所述中軸2的下端設(shè)有震動電機(jī)4，在所述機(jī)體1的頂部設(shè)有熱蒸汽輸送管道5，在所述中軸2內(nèi)設(shè)有空腔6，在所述中軸2的頂部設(shè)有圓盤7，所述圓盤7設(shè)置在所述旋轉(zhuǎn)盛放盤3的頂部，在所述圓盤7上設(shè)有上下通透的細(xì)孔8，熱蒸汽經(jīng)過圓盤，進(jìn)入旋轉(zhuǎn)盛放盤，在所述圓盤7內(nèi)設(shè)有與所述空腔6相連接的導(dǎo)熱柱桿9，在所述空腔6內(nèi)設(shè)有電加熱塊10，所述導(dǎo)熱柱桿9上設(shè)有導(dǎo)熱刺柱11，所述導(dǎo)熱刺柱11伸入所述細(xì)孔8內(nèi)，可以大大提高熱蒸汽與電加熱塊之間的溫度混合，提高溫度控制的效率，在所述機(jī)體1內(nèi)設(shè)有溫度傳感器12、在所述空腔6內(nèi)設(shè)有與所述溫度傳感器12相連接的驅(qū)動器13，所述驅(qū)動器13與所述電加熱塊10的控制開關(guān)相連接。本實(shí)施例中溫度傳感器和驅(qū)動器為市面上已存在的產(chǎn)品，其在使用時只需要按照對應(yīng)的產(chǎn)品說明進(jìn)行連接即可。

所述細(xì)孔為頂部大底部小的喇叭狀孔，所述導(dǎo)熱刺柱伸入所述喇叭狀孔的中部，在所述喇叭狀孔上設(shè)有上下通透的傳導(dǎo)網(wǎng)孔14。

在所述機(jī)體的底面設(shè)有箱門15，所述箱門設(shè)置在旋轉(zhuǎn)盛放盤的最底端。

所述導(dǎo)熱柱桿為銀或鋁或銅質(zhì)柱桿。

實(shí)施例2

取五味子1000g，加五味子藥材10倍重量的水，浸泡0.5h，煎煮1小時，過濾，藥渣再加入藥材8倍重量的水，煎煮1小時，藥液濾出，合并兩次煎煮液，濃縮至60℃相對密度為1.05，加乙醇使含醇量的體積百分比達(dá)75％，攪拌，靜置，過濾，濾液濃縮至65℃時相對密度為1.25，并回收乙醇，得濃縮液，使用大孔樹脂精制，加到大孔吸附樹脂柱上，50％乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，添加植物油，灌裝，制備成五酯軟膠囊。

所述五酯軟膠囊的制備方法，所述大孔吸附樹脂柱型號為D201。

濃縮和干燥裝置同上。

實(shí)施例3

取五味子1000g，加五味子藥材10倍重量的水，浸泡0.5h，煎煮1小時，過濾，藥渣再加入藥材8倍重量的水，煎煮1小時，藥液濾出，合并兩次煎煮液，濃縮至60℃相對密度為1.05，加乙醇使含醇量的體積百分比達(dá)75％，攪拌，靜置，過濾，濾液濃縮至65℃時相對密度為1.25，并回收乙醇，得濃縮液，使用大孔樹脂精制，加到大孔吸附樹脂柱上，50％乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，添加植物油，灌裝，制備成五酯軟膠囊。

所述五酯軟膠囊的制備方法，所述大孔吸附樹脂柱型號為D301。

濃縮和干燥裝置同上。

上述實(shí)施例中五味子為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果實(shí)。

實(shí)施例4：本發(fā)明五酯軟膠囊中五味子甲素含量測定實(shí)驗(yàn)研究資料

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物：本發(fā)明五酯軟膠囊：按實(shí)施例1-3方法制備。對照組采用普通濃縮方法制備五酯軟膠囊。

1.2 儀器：高效液相色譜儀系統(tǒng)包括高效液相色譜儀(Waters 515)；P200高壓泵；Waters2487紫外檢測器及GJ605型高壓六通進(jìn)樣閥；數(shù)據(jù)采集及處理采用HS色譜數(shù)據(jù)工作站V4.0+(杭州英譜科技)

1.3 測定條件：照高效液相色譜法(通則0512)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(60:40)為流動相；檢測波長為250nm；理論板數(shù)按五味子甲素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。取五味子甲素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lm l含5ug的溶液，即得。供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的本品，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)30分鐘，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20ul注入液相色譜儀，測定，即得。

1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

各實(shí)施例制備的五酯軟膠囊中五味子甲素含量測定結(jié)果

根據(jù)上表的試驗(yàn)結(jié)果可知，本發(fā)明實(shí)施例1-3制備的五酯軟膠囊中五味子甲素含量明顯高于對照組。

實(shí)施例5：本發(fā)明五酯軟膠囊抑制中國倉鼠肺CHL細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究資料

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株

中國倉鼠肺CHL細(xì)胞，南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫，DMEM+10％FBS常規(guī)培養(yǎng)。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

研究藥物：本發(fā)明五酯軟膠囊：按實(shí)施例1方法制備。

藥液儲液：稱取100mg五酯軟膠囊，溶于5ml無水乙醇中，0.2μm濾器過濾，500μl doff管分裝，-20℃存儲，同時0.2μm濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑

DMEM(GIBCO公司Cat.No.12100-061Lot.No.758137)；胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.No.100419)；NaHCO3(上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat.No.11810-033 Lot.No.1088387)；Trypsin(AMRESCO公司批號：2010/04)；EDTA(AMRESCO公司批號：2009/10)；Penicillin G Sodium Salt(AMRESCO公司批號：2010242)；Streptomycin Sulfate(AMRESCO公司批號：2010382)；無水乙醇(南京化學(xué)試劑有限公司批號：080310182)；MTT(Biosharp批號：0793)；PBS(實(shí)驗(yàn)室自配)；

1.4 實(shí)驗(yàn)器材

萊卡倒置顯微鏡(德國Leica型號：DM1L)；可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD公司型號：SPECTRA MAX 190)；CO2培養(yǎng)箱(FORMA型號：3111)；超凈臺(蘇凈集團(tuán)安泰公司制造型號：SW-CJ-ZFD)；純水儀(美國Spring公司型號：S/N 020579)；精密移液器(法國吉爾森公司型號：P2)；電子天平(德國賽多利斯有限公司型號：BT323S)；全自動高壓滅菌鍋(日本SANYO公司型號：MLS-3020)；臺式電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司型號：DHG9123A)；冰箱(西門子公司型號：KG18V21TI)；液氮罐(CBS型號：2001)；低速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠型號：KA-1000)；0.2μm濾器(MILLIPORE型號：SLGP033RB)；10cm培養(yǎng)皿(NEST公司)、96孔培養(yǎng)板(NEST公司)；細(xì)胞計(jì)數(shù)板；離心管、移液管、Tips若干。

2 實(shí)驗(yàn)方法

1)中國倉鼠肺CHL細(xì)胞用DMEM+10％FBS于37℃、5％CO2進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)(10cm培養(yǎng)皿)，當(dāng)細(xì)胞生長至對數(shù)期時，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml 0.25％胰蛋白酶-0.04％EDTA，37℃消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后將其轉(zhuǎn)入離心管中，1000rpm離心5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3×104個/ml。

2)將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180μl，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中(37℃，5％CO2)常規(guī)培養(yǎng)。

3)根據(jù)細(xì)胞生長情況，一般長至50％-70％，加入五酯軟膠囊溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。

4)24h后加入20μl MTT溶液(5mg/ml，即0.5％MTT)，繼續(xù)培養(yǎng)4h。

5)4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200μl二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩10min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。

6)同時設(shè)置本底(不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液)，對照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)，每組設(shè)定6個復(fù)孔。

7)結(jié)果以藥物對細(xì)胞的抑制率表示：

細(xì)胞增值抑制率(％)＝(對照孔OD值-給藥孔OD值)/對照孔OD值×100％。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

3 統(tǒng)計(jì)處理

采用Microsoft Excel 2003軟件中的相關(guān)分析和Student t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以mean±S.D.表示。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

MTT法實(shí)驗(yàn)后統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與對照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時，對中國倉鼠肺CHL細(xì)胞增殖抑制有差異(P<0.05)，劑量在10mg/ml時該差異具有顯著性(P<0.01)，當(dāng)劑量達(dá)到15-20mg/ml時有極顯著性差異(P<0.001)。

五酯軟膠囊對中國倉鼠肺CHL細(xì)胞增殖抑制影響研究

注：與對照組比較，*P<0.01；**P<0.001

5 實(shí)驗(yàn)結(jié)論

五酯軟膠囊可以抑制中國倉鼠肺CHL細(xì)胞增殖，減少中國倉鼠肺CHL細(xì)胞的細(xì)胞生長數(shù)目，該作用呈劑量依賴性。