本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，特別是涉及一種細(xì)胞因子類創(chuàng)傷修復(fù)藥物噴霧劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
：：創(chuàng)傷修復(fù)一直是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，皮膚作為人體最大最外部的器官極易遭受創(chuàng)傷，近年來(lái)隨著工業(yè)科技的不斷發(fā)展，各種急性創(chuàng)傷傷員數(shù)量不斷增加，同時(shí)因糖尿病、截癱和局部射線照射等所致的慢性難愈性創(chuàng)面也相應(yīng)增多。據(jù)統(tǒng)計(jì)，美國(guó)每年大約有110萬(wàn)人遭受急性創(chuàng)傷，大約有30萬(wàn)住院治療。但目前創(chuàng)傷修復(fù)的水平與質(zhì)量經(jīng)常無(wú)法滿足患者的要求，因此，進(jìn)一步了解創(chuàng)傷修復(fù)的機(jī)制，完善現(xiàn)有治療方法以及發(fā)現(xiàn)新的治療方法需要國(guó)內(nèi)外學(xué)者們進(jìn)行大量的研究工作。創(chuàng)傷后組織修復(fù)一般經(jīng)歷炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖修復(fù)和組織的成熟與重建這三個(gè)緊密聯(lián)系的階段。創(chuàng)傷修復(fù)的過程，不僅是各種細(xì)胞增殖、分化、遷移、凋亡和消失的過程，同時(shí)也是一系列不同類型細(xì)胞、結(jié)構(gòu)蛋白、細(xì)胞因子和蛋白激酶等形成網(wǎng)絡(luò)式交互作用的結(jié)果。細(xì)胞因子是一類對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化有明顯調(diào)控作用的小分子生物活性多肽，因具有多效性、高效性和網(wǎng)絡(luò)性等特點(diǎn)，通過調(diào)節(jié)創(chuàng)傷修復(fù)過程中的多種細(xì)胞反應(yīng)，影響細(xì)胞增殖、遷移、細(xì)胞外基質(zhì)合成和釋放，在創(chuàng)傷愈合過程中扮演了重要的角色。涉及創(chuàng)傷修復(fù)的細(xì)胞因子主要有：表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(EGF)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β)、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)、血小板源性生長(zhǎng)因子(PDGF)、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)等，它們?cè)诖龠M(jìn)細(xì)胞的趨化、合成和增殖分化方面發(fā)揮著各自的作用。成纖維細(xì)胞是創(chuàng)傷修復(fù)的主要細(xì)胞，在創(chuàng)傷修復(fù)中，研究較多的是堿性FGF(bFGF)，它是體內(nèi)廣泛存在的一類活性多肽，具有促血管生成作用，調(diào)節(jié)血管壁細(xì)胞的生長(zhǎng)及其功能，趨化炎性細(xì)胞和組織修復(fù)細(xì)胞向創(chuàng)面聚集。EGF通過刺激表皮細(xì)胞和組織成纖維細(xì)胞分裂，加強(qiáng)其它生長(zhǎng)因子的合成和作用，從而顯著促進(jìn)表皮再生。VEGF通過其受體特異性作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移、增殖和分化。PDGF通過增加血管內(nèi)皮細(xì)胞上的PDGFR數(shù)量而促進(jìn)VEGF轉(zhuǎn)錄和分泌，從而促進(jìn)創(chuàng)傷修復(fù)。HGF促進(jìn)創(chuàng)傷修復(fù)的作用也與VEGF有關(guān)。TGF-β在維持組織動(dòng)態(tài)平衡中也具有重要作用，創(chuàng)傷愈合過程中幾乎所有細(xì)胞都可分泌TGF-β，包括角質(zhì)細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和黑色素細(xì)胞等，它可以促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)沉積和纖維化形成，這是傷后疤痕出現(xiàn)的重要原因。研究表明，細(xì)胞生長(zhǎng)因子作為藥物可以加速組織的修復(fù)和逆轉(zhuǎn)不良修復(fù)狀態(tài)。近年來(lái)，已有富含生長(zhǎng)因子的藥物應(yīng)用于臨床，以加速創(chuàng)傷愈合，含生長(zhǎng)因子創(chuàng)傷敷料也已成為醫(yī)用敷料領(lǐng)域發(fā)展的新亮點(diǎn)。目前上市的用于創(chuàng)傷修復(fù)的細(xì)胞因子類制劑多為凝膠劑和液體制劑，如重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子凝膠(商品名：貝復(fù)新)、重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子外用溶液(商品名：貝復(fù)濟(jì))、重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子滴眼液(商品名：貝復(fù)舒)、重組人表皮生長(zhǎng)因子凝膠(商品名：易孚)、重組人表皮生長(zhǎng)因子噴劑(商品名：金因肽)、重組人表皮生長(zhǎng)因子滴眼液(商品名：易貝)，但市售的凝膠劑在涂抹時(shí)易造成傷口疼痛和間接的細(xì)菌感染，患者順應(yīng)性不佳，而液體制劑易揮發(fā)，不易在創(chuàng)面處形成藥膜，造成藥物療效短暫。而且細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)溫度敏感，在水溶液中不穩(wěn)定，易發(fā)生降解反應(yīng)而失去活性，因此其水溶液必須在低溫條件下保存。因此在臨床上必須運(yùn)用一種高效安全的新型制劑，彌補(bǔ)目前傳統(tǒng)制劑在創(chuàng)傷修復(fù)治療中的不足，提高創(chuàng)傷愈合的療效及患者順應(yīng)性。溶致液晶主要是由一種或多種兩親性化合物組成的化學(xué)體系，即兩親性化合物和溶劑形成的有序的體系。當(dāng)兩親性分子與水(或有機(jī)溶劑)混合時(shí)，水分子或溶劑分子根據(jù)自身的極性分配在兩親性分子的極性端或非極性端，破壞了兩親性分子本身晶體的有序取向，而使分子在一維或多維空間上有序地排列形成液晶態(tài)，因而被稱為溶致液晶。隨著結(jié)構(gòu)中溶劑的含量改變，溶致液晶結(jié)構(gòu)也會(huì)發(fā)生相態(tài)的轉(zhuǎn)變。溶致液晶獨(dú)特的結(jié)構(gòu)具備既可以容納極性分子也可容納非極性分子的優(yōu)點(diǎn)，因而溶致液晶作為藥物載體引起了許多研究者的興趣。溶致液晶作為藥物載體主要有三種形式：前體，凝膠及粒子分散體系。前體以固態(tài)或液態(tài)形式存在，在外因如接觸液體的誘導(dǎo)下形成層狀液晶、立方液晶或六角液晶；凝膠是一種光學(xué)各向同性的立方液晶或光學(xué)各向異性的六角液晶，粘稠透明，可與水平衡共存，常用于透皮給藥系統(tǒng)；液晶粒子分散體系為液晶材料與水形成了立方液晶后以納米尺寸分散在過量的水溶液中。目前還沒有將溶致液晶運(yùn)用于創(chuàng)傷修復(fù)的相關(guān)報(bào)道。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：基于此，本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有的細(xì)胞因子類創(chuàng)傷修復(fù)藥物市售制劑的不足，提供一種細(xì)胞因子類創(chuàng)傷修復(fù)藥物的新制劑。實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的的具體技術(shù)方案如下：一種溶致液晶前體噴霧劑，主要由以下質(zhì)量百分比的原料制備而成：所述細(xì)胞因子類創(chuàng)傷修復(fù)藥物選自重組人表皮生長(zhǎng)因子、重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、重組人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子、重組人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、重組人血小板源性生長(zhǎng)因子中的至少一種；所述分散介質(zhì)選自乙醇、N-N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、丙二醇、2-吡咯烷酮、5-甲基吡咯烷酮、1,5-二甲基吡咯酮、N-乙基吡咯酮、5-羧基吡咯酮、苯甲醇、油酸乙酯、大豆油、苯甲酸芐酯中的至少一種；所述釋放調(diào)節(jié)劑選自聚乙二醇、吐溫20、吐溫40、吐溫60、吐溫80、正丁醇和乙二醇中至少一種。在其中一些實(shí)施例中，所述聚乙二醇選自聚乙二醇400、聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇600。在其中一些實(shí)施例中，所述聚乙二醇為聚乙二醇400。在其中一些實(shí)施例中，所述分散介質(zhì)為乙醇和/或N-N-二甲基乙酰胺。在其中一些實(shí)施例中，所述溶致液晶前體噴霧劑主要由以下質(zhì)量百分比的原料制備而成：在其中一些實(shí)施例中，所述溶致液晶前體噴霧劑主要由以下質(zhì)量百分比的原料制備而成：在其中一些實(shí)施例中，所述細(xì)胞因子類創(chuàng)傷修復(fù)藥物為重組人表皮生長(zhǎng)因子。在其中一些實(shí)施例中，所述溶致液晶前體噴霧劑主要由以下質(zhì)量百分比的原料制備而成：在其中一些實(shí)施例中，所述溶致液晶前體噴霧劑，主要由以下質(zhì)量百分比的原料制備而成：在其中一些實(shí)施例中，所述溶致液晶前體噴霧劑，主要由以下質(zhì)量百分比的原料制備而成：本發(fā)明還提供了上述溶致液晶前體噴霧劑的制備方法。具體技術(shù)方案如下：一種上述的溶致液晶前體噴霧劑的制備方法，包括以下步驟：將分散介質(zhì)與釋放調(diào)節(jié)劑混合均勻后，加入甘油單油酸酯，渦旋混勻后，再加入細(xì)胞因子類創(chuàng)傷修復(fù)藥物的水溶液，不斷渦旋使其形成均一穩(wěn)定的溶致液晶前體溶液，即得。本發(fā)明的細(xì)胞因子類創(chuàng)傷修復(fù)藥物溶致液晶前體噴霧劑具有以下優(yōu)點(diǎn)和有益效果：(1)發(fā)明人通過長(zhǎng)期的經(jīng)驗(yàn)積累和大量的實(shí)驗(yàn)研究，篩選不同的液晶材料和其它輔料，再通過調(diào)節(jié)藥物與各組分的配比得到了本發(fā)明的細(xì)胞因子類創(chuàng)傷修復(fù)藥物溶致液晶前體噴霧劑。該噴霧劑粘度適中，具有很好的流動(dòng)性和噴霧效果，遇少量水即能迅速形成溶致液晶凝膠，噴于創(chuàng)面處后，遇生理鹽水即可立即形成溶致液晶凝膠，膠凝時(shí)間短，可在創(chuàng)面處形成一層保護(hù)膜，可有效抵抗外界刺激，避免細(xì)菌感染，使傷口部位濕潤(rùn)，加速愈合進(jìn)程，給藥方便安全，且具有良好的生物相容性、黏膜粘附性和潤(rùn)滑性。該噴霧劑既克服了傳統(tǒng)噴霧劑易揮發(fā)、成膜難以及迅速流失的缺點(diǎn)，又避免了半固體制劑涂抹時(shí)帶來(lái)的疼痛和間接感染。(2)本發(fā)明的噴霧劑在體外情況下為液態(tài)，易于工業(yè)化生產(chǎn)，使用方便，劑量易準(zhǔn)確控制，噴于創(chuàng)面后，均勻鋪展，粘附于創(chuàng)面形成溶致液晶凝膠，由于溶致液晶獨(dú)特的結(jié)構(gòu)，且噴霧劑中溶劑用量較小，能夠增加細(xì)胞因子類創(chuàng)傷修復(fù)藥物在制劑中的物理穩(wěn)定性和化學(xué)穩(wěn)定性，有效地保護(hù)了藥物的活性，增強(qiáng)了藥物療效。(3)本發(fā)明的噴霧劑中通過進(jìn)一步加入釋放調(diào)節(jié)劑(優(yōu)選PEG400、PEG200、PEG300、PEG600，更優(yōu)選PEG400)，可以進(jìn)一步調(diào)節(jié)噴霧劑的粘度，減少溶劑的用量，減少有機(jī)溶劑對(duì)藥物活性的影響，進(jìn)一步保護(hù)的藥物活性。(4)本發(fā)明的噴霧劑噴于創(chuàng)面后，與生理鹽水立即形成的溶致液晶凝膠，通過釋放調(diào)節(jié)劑(優(yōu)選PEG400、PEG200、PEG300、PEG600，更優(yōu)選PEG400)與各組分的復(fù)配調(diào)節(jié)作用，在不引起溶致液晶前體組合物原位性能改變的條件下，降低了藥物在溶致液晶中的分配系數(shù)，改善藥物的釋放特征，促使藥物在換藥周期內(nèi)釋放完全，即：相比現(xiàn)有制劑具有很好的緩慢釋藥的效果，沒有藥物突釋現(xiàn)象，同時(shí)不會(huì)使釋放率過低，具有良好的48小時(shí)的緩釋效果，提高藥物的治療效果。(5)本發(fā)明的噴霧劑噴于創(chuàng)面后，與生理鹽水立即形成溶致液晶凝膠，其晶相不隨人體體溫變化而變化，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，可穩(wěn)定地發(fā)揮療效。附圖說(shuō)明圖1為實(shí)施例9中溶致液晶前體的BSA體外釋放結(jié)果圖；圖2為實(shí)施例6和實(shí)施例7的溶致液晶前體的rhEGF體外釋放結(jié)果圖；圖3為實(shí)施例6～7的溶致液晶前體的差示掃描量熱圖譜。具體實(shí)施方式以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明。以下實(shí)施例中所用的試劑均為市售普通試劑，其中：重組人表皮生長(zhǎng)因子(rhEGF)：純度≥97％，批號(hào)HLM7615081，R&DSystems；甘油單油酸酯(GMO)：批號(hào)116703，MO/DKOSHER；植烷三醇(PYT)：批號(hào)UQ90818031，DSM；乙醇(EtOH)：批號(hào)20120216，天津市永大化學(xué)試劑有限公司；N-N-二甲基乙酰胺(DMAC)：純度≥99.5％，批號(hào)20130616，天津市富宇精細(xì)化工公司；N-甲基吡咯烷酮(NMP)：純度≥99.0％，批號(hào)20120216，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所；聚乙二醇400(PEG400)：批號(hào)20150514，天津市大茂化學(xué)試劑廠。實(shí)施例1按照表1中的實(shí)施例1的組成，將GMO與分散介質(zhì)(EtOH)渦旋混勻后即得溶致液晶前體初級(jí)溶液。表1實(shí)施例1～7與對(duì)比例1-3的處方組成實(shí)施例2～3采用與實(shí)施例1相同的制備方法，由表1中實(shí)施例2-3的組成制得實(shí)施例2～3的溶致液晶前體初級(jí)溶液。實(shí)施例4按照表1中的實(shí)施例4的組成，將rhEGF溶于超純水中，再將分散介質(zhì)(EtOH)與GMO渦旋混勻，接著加入rhEGF的水溶液，不斷渦旋使其形成均一穩(wěn)定的重組人表皮生長(zhǎng)因子溶致液晶前體溶液，即重組人表皮生長(zhǎng)因子溶致液晶前體噴霧劑。實(shí)施例5采用與實(shí)施例4相同的制備方法，由表1中實(shí)施例5的組成制得實(shí)施例5的重組人表皮生長(zhǎng)因子溶致液晶前體溶液。實(shí)施例6按照表1中的實(shí)施例6的組成，將rhEGF溶于超純水中；將分散介質(zhì)(EtOH)與PEG400混合均勻后，加入GMO，渦旋混勻；再加入rhEGF的水溶液，不斷渦旋使其形成均一穩(wěn)定的重組人表皮生長(zhǎng)因子溶致液晶前體溶液。實(shí)施例7采用與實(shí)施例6相同的制備方法，由表1中實(shí)施例7的組成制得實(shí)施例7的重組人表皮生長(zhǎng)因子溶致液晶前體溶液。對(duì)比例1采用與實(shí)施例4相同的制備方法，由表1中對(duì)比例1的組成制得對(duì)比例1的重組人表皮生長(zhǎng)因子溶致液晶前體溶液。對(duì)比例2按照表1中的對(duì)比例2的組成，將rhEGF溶于超純水中；將分散介質(zhì)(EtOH)與PEG400混合均勻后，加入PYT，渦旋混勻；再加入rhEGF的水溶液，不斷渦旋使其形成均一穩(wěn)定的重組人表皮生長(zhǎng)因子溶致液晶前體溶液。對(duì)比例3采用與對(duì)比例2相同的制備方法，由表1中對(duì)比例3的組成制得對(duì)比例3的重組人表皮生長(zhǎng)因子溶致液晶前體溶液。實(shí)施例8對(duì)實(shí)施例1～7與對(duì)比例1～3的溶致液晶前體初級(jí)溶液或者重組人表皮生長(zhǎng)因子溶致液晶前體溶液進(jìn)行流變學(xué)考察、噴霧效果評(píng)價(jià)及膠凝時(shí)間的測(cè)定。流變學(xué)考察采用旋轉(zhuǎn)流變儀(KinexusLab+，MalvernInstrumentsLimitsCo.)，測(cè)定各實(shí)施例和對(duì)比例在剪切速率為10s-1條件下的剪切粘度，選用的測(cè)量夾具型號(hào)為CP1/60SR0909SS，測(cè)定溫度為25±0.5℃。膠凝時(shí)間測(cè)定指將生理鹽水于水浴中加熱至32℃，分別取實(shí)施例1～7與對(duì)比例1-3的前體溶液，用滴管滴入32℃的生理鹽水中，記錄膠凝時(shí)間。表2實(shí)施例1～7與對(duì)比例1～3的流變學(xué)數(shù)據(jù)及噴霧效果(n＝3)由表2結(jié)果可知，實(shí)施例1～2中，液晶材料GMO均可均勻地分散在介質(zhì)EtOH或DMAC中，其單體性質(zhì)得到良好的抑制，前體初級(jí)溶液均勻且穩(wěn)定，流動(dòng)性和噴霧效果良好，遇水立即膠凝；而實(shí)施例3中采用NMP為分散介質(zhì)，前體初級(jí)溶液粘度增加，霧化阻力增大，噴霧效果一般，比實(shí)施施例1-2的效果差；實(shí)施例4～7中，GMO均可均勻地分散在介質(zhì)EtOH/PEG400、DMAC/PEG400或較多量的EtOH或DMAC中，制備得到的重組人表皮生長(zhǎng)因子溶致液晶前體溶液均勻且穩(wěn)定，流動(dòng)性和噴霧效果良好，遇水立即膠凝。當(dāng)前體溶液剛接觸到水時(shí)，先是外層形成了凝膠膜，當(dāng)凝膠膜的強(qiáng)度及水對(duì)凝膠的壓強(qiáng)足以抵抗凝膠膜內(nèi)部流體的張力，則凝膠的形狀保持為剛滴加入水的形狀。接著外界的水介質(zhì)逐漸向凝膠內(nèi)部擴(kuò)散和滲透，逐漸形成穩(wěn)定的、水量分布均勻的凝膠。由對(duì)比例1與實(shí)施例2的比較可知：對(duì)比例1中DMAC與GMO的配比與實(shí)施例2相同，實(shí)施例2制備得到的液晶前體溶液均勻且穩(wěn)定，流動(dòng)性和噴霧效果良好，但是對(duì)比例1中加入重組人表皮生長(zhǎng)因子的水溶液后制備得到的液晶前體溶液，由于受具體藥物溶液的影響，少量的DMAC無(wú)法抑制GMO的單體性質(zhì)，導(dǎo)致溶致液晶前體溶液的粘度大大增加，霧化阻力增大，噴霧效果較差。由對(duì)比例1與實(shí)施例7的比較可知：實(shí)施例7中由于加入了聚已二醇400，通過聚已二醇與各組分的協(xié)同作用，降低了制備得到的溶致液晶前體溶液的粘度，霧化阻力降低，噴霧效果良好。由于大量的分散介質(zhì)會(huì)對(duì)重組人表皮生長(zhǎng)因子的活性造成影響，因此溶劑用量不宜過大，聚已二醇400的加入可以降低溶劑的用量，從而降低溶劑對(duì)重組人表皮生長(zhǎng)因子的活性的影響，提高了重組人表皮生長(zhǎng)因子在制劑中的穩(wěn)定性。由對(duì)比例2～3與實(shí)施例6-7比較可知：當(dāng)采用PYT代替GMO作為液晶材料，制備得到的重組人表皮生長(zhǎng)因子溶致液晶前體溶液的粘度增加，霧化阻力增大，無(wú)法達(dá)到良好的噴霧效果。實(shí)施例9按實(shí)施例4-7的組成以及制備方法，將其中的重組人表皮生長(zhǎng)因子替換為牛血清白蛋白(BSA)，制備得到實(shí)施例9a-9d的牛血清白蛋白的溶致液晶前體溶液(處方組成如下表)。以實(shí)施例9a-9d的溶致液晶前體溶液考察各處方組成對(duì)藥物釋放的影響。采用無(wú)膜溶出法考察實(shí)施例9a-9d的溶致液晶前體中BSA的體外釋放特性。分別將0.300g溶致液晶前體滴入10ml的PBS(pH7.4)中，并在37℃，100rpm的搖床中模擬體外釋放，分別在投樣后1、3、6、12、24、48h取1ml樣品于經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾并于4℃保存待測(cè)，每次取樣后需加入等量釋放介質(zhì)繼續(xù)按上述條件模擬體外釋放。結(jié)果如圖1所示。由圖1可知，實(shí)施例9a和實(shí)施例9b的溶致液晶前體溶液在48h的BSA累積釋放率僅達(dá)到12％，而實(shí)施例9c和實(shí)施例9d的溶致液晶前體溶液，其制備原料中由于加入一定比例的PEG400，其48h的BSA累積釋放率達(dá)50％以上，說(shuō)明PEG400大大提高了BSA在溶致液晶凝膠中的釋放。由于溶致液晶凝膠致密的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)對(duì)藥物具有較強(qiáng)的緩釋效果，導(dǎo)致BSA在48h的累積釋放率極低，而臨床換藥頻率大約是兩天換一次藥，導(dǎo)致藥物在換藥周期內(nèi)釋放率較低無(wú)法達(dá)到良好的治療效果，且造成藥物的浪費(fèi)。實(shí)施例9c和實(shí)施例9d由于加入了適量的親水性物質(zhì)PEG400，在不引起溶致液晶前體組合物原位性能改變的條件下，降低了藥物在溶致液晶中的分配系數(shù)，促使藥物在換藥周期內(nèi)釋放完全，且PEG400的親水性質(zhì)還可促進(jìn)藥物的擴(kuò)散行為，從而加速藥物的釋放，改善藥物的釋放特征，提高藥物的治療效果。實(shí)施例10對(duì)實(shí)施例6和實(shí)施例7的重組人表皮生長(zhǎng)因子溶致液晶前體溶液進(jìn)行體外釋放度的測(cè)定。采用無(wú)膜溶出法考察溶致液晶前體中rhEGF的體外釋放特性。分別將0.135g溶致液晶前體滴入10ml的PBS(pH7.4)中，并在37℃，100rpm的搖床中模擬體外釋放，分別在投樣后1、3、6、12、24、48h取1ml樣品于經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾并于4℃保存待測(cè)，每次取樣后需加入等量釋放介質(zhì)繼續(xù)按上述條件模擬體外釋放。結(jié)果如圖2所示。由圖2可知，rhEGF液體制劑(將rhEGF溶于無(wú)菌PBS緩沖液中，載藥量與實(shí)施例6相同)的釋放呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，rhEGF藥物在液體介質(zhì)中容易降解，48h的降解率接近80％，說(shuō)明rhEGF在溶液中及其不穩(wěn)定。rhEGF在實(shí)施例6和實(shí)施例7的溶致液晶前體中的釋放顯示了低突釋率和平穩(wěn)的緩釋效果，在48小時(shí)內(nèi)，二者的累積釋放率均達(dá)到了70％以上。本發(fā)明的溶致液晶前體噴霧劑在使用時(shí)與水可立即形成液晶凝膠，不僅可以很好的調(diào)節(jié)藥物的釋放，既有較好的緩釋效果，又不至于使釋放率過低，同時(shí)顯著提高了rhEGF的穩(wěn)定性，有效保持了藥物的生物活性。通過Origin軟件可擬合出rhEGF在實(shí)施例6和實(shí)施例7的溶致液晶前體中的釋放模型均較符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)模型。實(shí)施例11對(duì)實(shí)施例4～7的重組人表皮生長(zhǎng)因子溶致液晶前體溶液進(jìn)行凝膠制備和機(jī)械性質(zhì)的測(cè)定。凝膠制備方法如下：在攪拌過程中，逐漸向溶致液晶前體溶液中加入過量水，于室溫條件下靜置平衡，凝膠呈均勻的狀態(tài)，于4000rpm轉(zhuǎn)速下離心10min，除去多余的水，制備成界面為水平面的凝膠。凝膠機(jī)械性質(zhì)包括凝膠強(qiáng)度和粘附性，本實(shí)施例使用TA.XTPlus質(zhì)構(gòu)儀(StableMicroSystemsLtd)對(duì)上述性質(zhì)進(jìn)行定量測(cè)定。實(shí)驗(yàn)中選擇凝膠凍力專用探針P/0.5，垂直伸入凝膠中，當(dāng)探針接觸到凝膠界面時(shí)，以0.5mm·s-1的速度深入到凝膠5mm深度處，此時(shí)測(cè)定的值為凝膠的強(qiáng)度。接著探針以0.5mm·s-1的速度緩緩從凝膠中退出，此時(shí)便得到凝膠對(duì)探針的粘附力。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后軟件自動(dòng)繪出隨時(shí)間變化探針受力的變化曲線圖，其中力的最大正值則是凝膠強(qiáng)度值，力的最大負(fù)值則是凝膠的粘附力(參見表3)。表3實(shí)施例4～7的凝膠機(jī)械性質(zhì)(n＝3)由表3結(jié)果可知，實(shí)施例4～7中，凝膠強(qiáng)度均較大，且由實(shí)施例6～7的溶致液晶前體溶液制備的凝膠，其強(qiáng)度大于實(shí)施例4-5，說(shuō)明本發(fā)明的溶致液晶前體噴霧劑與水形成的溶致液晶凝膠，其分子間作用力較大，所形成的分子結(jié)構(gòu)較穩(wěn)定，材料本身不易被損壞。另外，凝膠的粘附力均較大，具有良好的生物相容性和黏膜粘附性，且實(shí)施例6～7大于實(shí)施例4-5。實(shí)施例12對(duì)實(shí)施例6～7的溶致液晶前體噴霧劑進(jìn)行凝膠晶相變化觀察。采用熱臺(tái)偏光顯微鏡觀察實(shí)施例6～7的溶致液晶前體噴霧劑制備的凝膠液晶相態(tài)隨溫度變化的改變，熱臺(tái)從25℃升溫至40℃，升溫速率為2℃/min。在此過程中用MShot軟件拍攝偏光顯微鏡中的液晶雙折射圖案判斷晶相。結(jié)果顯示，當(dāng)熱臺(tái)從25℃升溫至40℃的過程中，實(shí)施例6～7的溶致凝膠液晶在偏光顯微鏡下的視野均為暗視野，即凝膠液晶相態(tài)在此溫度范圍內(nèi)均為立方液晶相，由此可推測(cè)在臨床給藥過程中，本發(fā)明的溶致液晶前體噴霧劑與水形成的立方液晶凝膠，其晶相不隨人體體溫變化而變化，可穩(wěn)定地發(fā)揮療效。實(shí)施例13對(duì)實(shí)施例6～7的溶致液晶前體噴霧劑進(jìn)行相轉(zhuǎn)變溫度的測(cè)定。采用差示掃描量熱法(DSC)測(cè)定相轉(zhuǎn)變溫度，取約5～10mg的各實(shí)施例的溶致液晶前體噴霧劑制備的凝膠于鋁坩堝中，DSC溫度掃描范圍為25～40℃，掃描速率為5℃/min。結(jié)果如圖3所示，從25℃升溫至40℃過程中，DSC圖譜不出現(xiàn)任何吸熱峰，由此更證明了在臨床用藥時(shí)，本發(fā)明的溶致液晶前體噴霧劑與水形成的溶致液晶凝膠，其晶相不隨人體體溫變化而變化，療效穩(wěn)定。以上所述實(shí)施例的各技術(shù)特征可以進(jìn)行任意的組合，為使描述簡(jiǎn)潔，未對(duì)上述實(shí)施例中的各個(gè)技術(shù)特征所有可能的組合都進(jìn)行描述，然而，只要這些技術(shù)特征的組合不存在矛盾，都應(yīng)當(dāng)認(rèn)為是本說(shuō)明書記載的范圍。以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3 當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3