本發(fā)明涉及改善人眼的自覺癥狀的制劑和方法。
背景技術(shù)：
：以往，眼異常的改善以外部的觀察、評價(jià)(他覺所見)為中心進(jìn)行判斷，未重視眼的不愉快感、不適感(自覺癥狀)之類的出于患者的主觀觀點(diǎn)的評價(jià)。例如，作為眼的異常之一的干眼癥的改善效果以淚液量的正常化、角結(jié)膜上皮的異常部位的減少之類的他覺所見為中心進(jìn)行評價(jià)。實(shí)際上，分別地，在日本有透明質(zhì)酸鈉、地夸磷索鈉、瑞巴派特作為干眼癥的處方滴眼藥而被承認(rèn)；在美國有環(huán)孢素作為干眼癥的處方滴眼藥而被承認(rèn)，作為在他覺所見的改善的基礎(chǔ)上，還滿足自覺癥狀的改善的藥物尚沒有被承認(rèn)。已知有鍵合有疏水基團(tuán)的透明質(zhì)酸對于干眼癥等眼的異常(例如參照日本特表2009-511423號(hào)公報(bào))的效果，但其效果如前述那樣，完全基于“他覺所見”，尚未進(jìn)行自覺癥狀的改善乃至治療之類的觀點(diǎn)上的評價(jià)本身?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)1：日本特表2009-511423號(hào)公報(bào)技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：發(fā)明要解決的問題他覺所見與自覺癥狀未必顯示出同樣的傾向，他覺所見即使良好自覺癥狀也有時(shí)不良，相反地，即使沒有自覺癥狀他覺所見也有時(shí)不良。另外，現(xiàn)有的干眼癥處方的滴眼藥需要長時(shí)間地給予直至患者中其藥效體現(xiàn)為止，癥狀重的干眼癥患者中，存在強(qiáng)烈堅(jiān)持長時(shí)間繼續(xù)給予相同滴眼藥的意思·意志本身喪失的問題，期望提供：給予開始后從初期體現(xiàn)藥效的藥劑。本發(fā)明的課題在于，提供用于改善人眼的自覺癥狀的制劑和方法。用于解決問題的方案本發(fā)明人等為了解決上述課題進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：透明質(zhì)酸(以下也稱為“ha”)共價(jià)鍵合有肉桂酸氨基烷酯的化合物發(fā)揮改善人眼的自覺癥狀的效果，完成了本發(fā)明。即，本發(fā)明提供一種人眼的自覺癥狀的改善劑(以下也稱為“本發(fā)明制劑”)，其含有：共價(jià)鍵合有肉桂酸氨基烷酯的ha。該制劑優(yōu)選為溶液且以0.3％(w/v)的濃度含有共價(jià)鍵合有肉桂酸氨基烷酯的ha。另外，優(yōu)選的是，被給予其的人是伴有干眼癥的人。另外，本發(fā)明提供人眼的自覺癥狀的改善方法(以下稱為“本發(fā)明方法”)，其包括如下步驟：對人眼給予共價(jià)鍵合有肉桂酸氨基丙酯的ha。該共價(jià)鍵合有肉桂酸氨基丙酯的ha優(yōu)選以其0.3％(w/v)的溶液進(jìn)行給予。另外，被給予的人優(yōu)選是伴有干眼癥的人。發(fā)明的效果根據(jù)本發(fā)明，提供改善人眼的自覺癥狀的ha基質(zhì)的制劑、和使用ha基質(zhì)的化合物的人眼自覺癥狀的改善方法。附圖說明圖1示出將制劑1天1次給予至模型動(dòng)物的眼時(shí)的熒光素染色的程度。圖2示出將制劑1天6次給予至模型動(dòng)物的眼時(shí)的熒光素染色的程度。圖3示出將制劑給予至人患者的眼時(shí)的自覺癥狀(眼的不愉快感)的變化。圖4示出將制劑給予至人患者的眼時(shí)的自覺癥狀(干燥感)的變化。圖5示出將制劑給予至人患者的眼時(shí)的自覺癥狀(粗糙感)的變化。圖6示出將制劑給予至人患者的眼時(shí)的各種自覺癥狀中最差的癥狀的變化。圖7示出將制劑給予至人患者的眼時(shí)的全部自覺癥狀的平均值的變化。圖8示出將制劑給予至人患者的眼時(shí)的自覺癥狀(眼的不愉快感、干燥感)的平均值的變化。圖9示出將制劑給予至人患者的眼時(shí)的熒光素染色的程度。具體實(shí)施方式本說明書中“步驟”的術(shù)語，不僅為獨(dú)立的步驟，而且與其他步驟無法明確區(qū)別的情況下，只要能夠達(dá)成該步驟的所期望的目的就也包含于本術(shù)語中。另外，對于組合物中的各成分的含量，組合物中相當(dāng)于各成分的物質(zhì)存在多個(gè)時(shí)，只要沒有特別限定，是指組合物中存在的該多個(gè)物質(zhì)的總計(jì)量。以下，對本發(fā)明的實(shí)施方式進(jìn)行說明。(1)本發(fā)明制劑本發(fā)明制劑為人眼的自覺癥狀的改善劑乃至改善用藥物，其含有：共價(jià)鍵合有肉桂酸氨基烷酯的ha(以下稱為“本化合物”)。(1-1)本化合物作為本發(fā)明制劑的有效成分的本化合物為共價(jià)鍵合有肉桂酸氨基烷酯和ha的化合物(透明質(zhì)酸衍生物)。作為“肉桂酸氨基烷酯”，例如可以舉出：肉桂酸氨基乙酯、肉桂酸氨基丙酯等。其中優(yōu)選肉桂酸2-氨基乙酯、肉桂酸3-氨基丙酯，特別優(yōu)選肉桂酸3-氨基丙酯。可以容易地理解為，包括以下的說明的、本說明書中的“肉桂酸氨基烷酯”的術(shù)語，包含這些具體的、乃至優(yōu)選的肉桂酸酯、以及能夠取代為其的物質(zhì)。這樣的“肉桂酸氨基烷酯”共價(jià)鍵合而成的ha只要為以n-乙酰基-d-葡糖胺與d-葡萄糖醛酸以β1,3鍵鍵合而成的二糖單元為構(gòu)成單元并且該二糖單元通過β1,4鍵重復(fù)鍵合而構(gòu)成的糖胺聚糖即可，沒有特別限定。另外，可以為未形成鹽的游離狀態(tài)，也可以形成藥學(xué)上能夠允許的鹽。作為ha的藥學(xué)上能夠允許的鹽，可以舉出：鈉鹽、鉀鹽等堿金屬離子鹽、鎂鹽、鈣鹽等堿土金屬離子鹽；銨鹽等與無機(jī)堿的鹽；二乙醇胺、環(huán)己基胺、氨基酸等與有機(jī)堿的鹽。作為ha鹽，更優(yōu)選與堿金屬離子的鹽，特別優(yōu)選與鈉離子的鹽。ha可以為能夠從雞冠、臍帶、軟骨、皮膚等生物體的一部分提取而得到的天然物來源的ha、經(jīng)過化學(xué)合成的ha、通過微生物的培養(yǎng)或基因工程學(xué)方法而生產(chǎn)的ha的任意者。需要說明的是，本化合物給予至生物體，因此，本化合物當(dāng)然優(yōu)選的是，作為其原料的ha也是實(shí)質(zhì)上不含有以藥物的形式不允許混入物質(zhì)的高純度的物質(zhì)。ha的重均分子量沒有特別限定，例如可以舉出1萬～500萬。ha的重均分子量可以舉出：優(yōu)選為20萬～300萬、更優(yōu)選為50萬～250萬。需要說明的是，ha的重均分子量可以利用特性粘度法測定。通過使這樣的ha與肉桂酸氨基烷酯共價(jià)鍵合，可以制造本化合物。該共價(jià)鍵的樣式也沒有限定，優(yōu)選肉桂酸氨基烷酯的氨基與ha的羧基進(jìn)行酰胺鍵的樣式。以下，列舉該共價(jià)鍵為酰胺鍵的本化合物作為例子進(jìn)行說明。本化合物中，ha中的羧基無需全部與肉桂酸氨基烷酯進(jìn)行酰胺鍵合，也可以是其一部分進(jìn)行酰胺鍵合。以下，將ha中存在的全部羧基中的形成酰胺鍵合的比率稱為“導(dǎo)入率”(ds)。ds以ha的每個(gè)構(gòu)成二糖單元的肉桂酸氨基烷酯殘基的導(dǎo)入的比率(％)計(jì)算。例如，每個(gè)構(gòu)成二糖單元導(dǎo)入了1個(gè)肉桂酸氨基烷酯殘基的ha衍生物、以及每200個(gè)糖(以構(gòu)成二糖單元計(jì)為100個(gè))導(dǎo)入了1個(gè)肉桂酸氨基烷酯殘基的ha衍生物的ds分別為100％和1％。作為本化合物中的優(yōu)選的ds，可以舉出：3～30％、更優(yōu)選10～20％、進(jìn)一步優(yōu)選12～18％。本化合物可以通過將源自構(gòu)成肉桂酸氨基烷酯的氨基烷醇(例如氨基乙醇(2-氨基乙醇等)、氨基丙醇(3-氨基丙醇等))的氨基與ha的羧基進(jìn)行酰胺鍵合來制造。上述肉桂酸氨基烷酯為肉桂酸的羧基與氨基烷醇的羥基通過酯鍵鍵合而成的酯化合物。需要說明的是，構(gòu)成肉桂酸氨基烷酯的肉桂酸也可以為具有取代基的取代肉桂酸。本化合物可以依據(jù)日本特開2002-249501號(hào)公報(bào)、wo2008/069348號(hào)小冊子等中記載的方法而制造。制造方法例如只要為能夠使肉桂酸氨基烷酯與ha通過酰胺鍵以化學(xué)方式鍵合的方法就沒有特別限定。作為制造方法，例如可以舉出：使用水溶性碳二亞胺(例如1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(edci·hcl)、1-環(huán)己基-3-(2-嗎啉代乙基)碳二亞胺-間-對甲苯磺酸鹽)等水溶性縮合劑的方法；使用n-羥基琥珀酰亞胺(hosu)、n-羥基苯并三唑(hobt)等縮合輔助劑與上述縮合劑的方法；使用4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基氯化嗎啉鎓(dmt-mm)等縮合劑的方法；活性酯法；酸酐法等。本化合物可以預(yù)先使肉桂酸與氨基烷醇(例如3-氨基丙醇。以下相同)反應(yīng)制備肉桂酸氨基烷酯(例如肉桂酸3-氨基丙酯。以下相同)，使該肉桂酸氨基烷酯的氨基與ha的羧基進(jìn)行酰胺鍵合而制備，也可以使氨基烷醇的氨基與ha的羧基進(jìn)行酰胺鍵合而制備導(dǎo)入了氨基烷醇的ha，之后，使肉桂酸的羧基與前述導(dǎo)入了氨基烷醇的ha中的源自氨基烷醇的羥基進(jìn)行酯鍵合而制備。(1-2)制劑化本發(fā)明制劑可以通過含有共價(jià)鍵合有肉桂酸氨基烷酯的ha并進(jìn)行制劑化而制造。制劑化的方法只要能夠形成給予至人眼的制劑乃至藥物就沒有特別限定，優(yōu)選為溶液形態(tài)。該溶液優(yōu)選為眼用溶液乃至滴眼溶液。另外，本化合物如后述那樣，以0.3％(w/v)的濃度發(fā)揮顯著乃至質(zhì)變的效果，因此，本發(fā)明制劑特別優(yōu)選為溶液且以0.3％(w/v)的濃度含有本化合物的方案。這樣的制劑化時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)需要適當(dāng)實(shí)施：添加藥學(xué)上允許的載體；進(jìn)行滅菌；填充至適于對人眼給予的容器等。本發(fā)明制劑中，例如可以根據(jù)需要選擇并添加：磷酸鈉、磷酸氫鈉、磷酸二氫鈉、乙酸鈉、ε-氨基己酸等緩沖化劑；氯化鈉、氯化鉀、濃甘油等等滲劑；聚氧亞乙基失水山梨醇單油酸酯、硬脂酸聚烴氧酯40、聚氧乙烯氫化蓖麻油等表面活性劑；苯扎氯銨等防腐劑等。另外，本發(fā)明制劑的ph只要處于作為眼科制劑允許的范圍內(nèi)即可，優(yōu)選為ph5～6的范圍。(1-3)本發(fā)明制劑的使用方法本發(fā)明制劑可以通過將其給予至人眼而使用。本發(fā)明制劑對人眼的給予只要以對人眼的給予的形式以醫(yī)學(xué)上允許的方式進(jìn)行、且能夠發(fā)揮本發(fā)明的效果就沒有特別限定。給予的具體方法沒有特別限定，可以根據(jù)制劑形態(tài)而適當(dāng)給予，可優(yōu)選示例滴眼。另外，本發(fā)明制劑的給予的次數(shù)·頻率等沒有特別限定，優(yōu)選示例1天1～6次、1天4次左右的給予、每天給予、14天以上的每天連續(xù)給予、28天以上的每天連續(xù)給予等，更優(yōu)選示例它們的組合(例如1天4次左右且每天給予、1天4次左右且14天以上每天的連續(xù)給予、1天4次左右且28天以上的每天連續(xù)給予)。另外，作為1次的給予量，可以示例1、2乃至3滴的給予量。通過對人眼給予本發(fā)明制劑，可以改善人眼的自覺癥狀。作為給予對象的人只要是有眼的自覺癥狀的人就沒有特別限定。另外，給予的目的也只要以改善人眼的自覺癥狀為目的就沒有特別限定。本說明書中的“眼的自覺癥狀”沒有特別限定，可以舉出：眼的不愉快感(oculardiscomfort)(不包括制劑對眼的給予其本身所導(dǎo)致的物理刺激等不愉快感。例如包括干眼癥患者通常感到的不愉快感)、干燥感(dryness)(為眼干的感覺)、灼熱感(burning)(為眼熱而刺痛那樣的感覺)、異物感(foreignbody)(為眨眼時(shí)接觸某物那樣的不適感、眼滾動(dòng)的感覺)、粗糙感(grittiness)(為眼的表面不光滑的感覺，例如為沙子進(jìn)入眼那樣的感覺)、針刺感(stinging)(是指感到用針刺那樣的疼痛)、蒙朧感、發(fā)癢、光晃眼、物模糊可見的、物體昏暗可見等癥狀，可以對這些1個(gè)或2個(gè)以上的癥狀應(yīng)用本發(fā)明制劑。本發(fā)明制劑特別是對選自由眼的不愉快感、干燥感、灼熱感、粗糙感、針刺感組成的組中的1個(gè)或2個(gè)以上的自覺癥狀、其中對選自由眼的不愉快感、干燥感、灼熱感、粗糙感組成的組中的1個(gè)或2個(gè)以上的自覺癥狀、尤其是對選自由眼的不愉快感、干燥感、粗糙感組成的組中的1個(gè)或2個(gè)以上的自覺癥狀是有效的，因此，優(yōu)選對有這些自覺癥狀的人給予，另外，優(yōu)選以改善這些癥狀為目的而給予。本發(fā)明制劑特別是給予開始后迅速地發(fā)揮自覺癥狀的改善效果，對給予開始后初期時(shí)的自覺癥狀的改善是有效的，因此，也優(yōu)選用于這樣的給予開始后初期時(shí)的自覺癥狀改善的目的。對于本說明書中“給予開始后初期”，可以示例給予開始后數(shù)周為止的期間，可以優(yōu)選示例以給予開始日為第0天，第13天左右為止的期間，可以進(jìn)一步優(yōu)選示例第6天左右為止的期間。另外，本說明書中“給予剛剛開始后”是指，給予開始的第二天。人眼的自覺癥狀中，眼的不愉快感和干燥感作為干眼癥患者的自訴病狀是最多的，占整體的約80％。通過從給予開始后初期、特別是給予剛剛開始后改善該癥狀，從而可以促進(jìn)基于干眼癥患者的自發(fā)的給予的繼續(xù)，確實(shí)地發(fā)揮所期待的治療效果。如后述的實(shí)施例所示那樣，本發(fā)明制劑在這些自覺癥狀評分的平均值的解析中，從給予剛剛開始后和給予后初期就體現(xiàn)藥效，因此，本發(fā)明制劑可以期待基于患者本身的自發(fā)給予的繼續(xù)和治療效果。另外，本發(fā)明制劑特別是對強(qiáng)烈感到前述的自覺癥狀的人(自覺癥狀強(qiáng)的人、例如自覺癥狀最強(qiáng)的平均評分顯示出2.5以上的人)的、該癥狀的改善有效，因此也優(yōu)選對這樣的人以這樣的目的進(jìn)行給予。此處所謂“評分”如后述的實(shí)施例中所說明那樣是指，給予的人本身按照自己的知覺的情況，評價(jià)前述各種感覺的0(沒有自覺癥狀)～5(自覺癥狀最強(qiáng))的分?jǐn)?shù)。針對該各種感覺的評分中，分?jǐn)?shù)最高為平均2.5以上的人為“自覺癥狀最強(qiáng)的平均評分顯示出2.5以上的人”。另外，給予了本發(fā)明制劑的人優(yōu)選伴有干眼癥(本說明書中，與干眼癥疾病、干眼癥癥候群為相同含義)的人。本發(fā)明制劑例如對一天中嚴(yán)重用眼，認(rèn)為自覺癥狀最強(qiáng)體現(xiàn)的就寢前(beforebedtime)的自覺癥狀的改善是特別有效的，因此，可以以改善這樣的就寢前的自覺癥狀為目的而使用。本說明書中自覺癥狀的“改善”是指，自覺癥狀的減少。自覺癥狀的改善可以根據(jù)自覺癥狀的評分的減少而定量地評價(jià)。(2)本發(fā)明方法本發(fā)明方法為一種人眼的自覺癥狀的改善方法，其包括如下步驟：將本化合物(當(dāng)然也包括為本發(fā)明制劑的形態(tài)的物質(zhì))給予至人眼。本發(fā)明方法可以依據(jù)前述“(1)本發(fā)明制劑”的說明而同樣地實(shí)施。因此，例如，優(yōu)選以0.3％(w/v)的溶液給予本化合物、給予的人優(yōu)選伴有干眼癥等也與前述同樣。本發(fā)明包括：本化合物在改善人眼的自覺癥狀中的應(yīng)用；和本發(fā)明制劑在改善人眼的自覺癥狀中的應(yīng)用。實(shí)施例以下，根據(jù)實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行說明。然而，本發(fā)明的保護(hù)范圍不由此限定。[實(shí)施例1]共價(jià)鍵合有肉桂酸氨基烷酯的ha的制備以重均分子量88萬(用特性粘度法測定)的ha為起始原料，依據(jù)日本特開2002-249501號(hào)公報(bào)的實(shí)施例2中記載的方法，制備共價(jià)鍵合有肉桂酸氨基丙酯的ha。以下，將該“共價(jià)鍵合有肉桂酸氨基丙酯的ha”簡記作“ha-3apc”。對制造的ha-3apc用日本特開2002-249501號(hào)公報(bào)的實(shí)施例中記載的方法進(jìn)行分析，結(jié)果，ha的每個(gè)重復(fù)二糖單元的肉桂酸氨基丙酯的導(dǎo)入率為15.3％。[實(shí)施例2]滴眼藥的制備1在實(shí)施例1中制備的ha-3apc(受試物質(zhì))中加入磷酸緩沖生理食鹽液(pbs)，制備ha-3apc的0.5w/v％、0.3w/v％和0.1w/v％的各溶液，然后用0.22μm過濾器進(jìn)行過濾滅菌，將它們作為滴眼藥。以下，將這些滴眼藥分別稱為0.5％受試物質(zhì)溶液、0.3％受試物質(zhì)溶液、0.1％受試物質(zhì)溶液。[參考例1]使用干眼癥疾病模型動(dòng)物的試驗(yàn)(1)模型動(dòng)物的制作用二乙醚對7周齡的sd系雄性大鼠(spf)進(jìn)行輕麻醉，然后在異氟烷吸入麻醉下剪去左右兩側(cè)的頰部的毛。將剪去了毛的部分用70％乙醇水溶液消毒，然后，將耳的下方約7mm的部分沿縱向切開約7mm，摘除兩眼的眼窩外淚腺。接著，在切開傷面部分涂布抗菌劑(泰利必妥(注冊商標(biāo))眼軟膏)，縫合傷面，然后將縫合部用10％聚維酮碘液消毒。從該淚腺摘除2個(gè)月后，在異氟烷吸入麻醉下，使用フローレス(注冊商標(biāo))試驗(yàn)紙(昭和藥品化工株式會(huì)社)，對兩眼的角膜上皮進(jìn)行熒光素染色。由此，角膜上皮的缺損部分(損傷部分)被熒光素染色。在裂隙燈(sl-d7、topconcorporation社制)開燈下，將角膜整體以肉眼從上分為三份，對于該各部分，按照以下基準(zhǔn)，對角膜上皮損傷的程度進(jìn)行評分化(每1個(gè)眼變成9分滿分)。各個(gè)體的評分用兩眼的平均值表示。另外，用數(shù)字拍攝單元拍攝評分化的各個(gè)體的角膜整體。(基準(zhǔn))0點(diǎn)：沒有點(diǎn)狀染色1點(diǎn)：疏(點(diǎn)狀的熒光素染色分離)2點(diǎn)：中間(疏與密的中間)3點(diǎn)：密(點(diǎn)狀的熒光素染色基本相鄰)(2)分組將如上述制作并評分化的模型動(dòng)物以組間的平均評分成為相同的方式分為表1所示的9個(gè)組。[表1]組名給予物質(zhì)動(dòng)物(眼)數(shù)給予量給予次數(shù)/天對照(1天1次)組pbs5只(10眼)1次5μl1次對照(1天6次)組pbs5只(10眼)1次5μl6次0.1％(1天1次)組0.1％受試物質(zhì)溶液5只(10眼)1次5μl1次0.3％(1天1次)組0.3％受試物質(zhì)溶液5只(10眼)1次5μl1次0.5％(1天1次)組0.5％受試物質(zhì)溶液5只(10眼)1次5μl1次0.1％(1天6次)組0.1％受試物質(zhì)溶液5只(10眼)1次5μl6次0.3％(1天6次)組0.3％受試物質(zhì)溶液5只(10眼)1次5μl6次0.5％(1天6次)組0.5％受試物質(zhì)溶液5只(10眼)1次5μl6次正常無3只(6眼)無無(3)試驗(yàn)方法依據(jù)表1對各組給予給予物質(zhì)。給予使用連續(xù)分注器(multipetteplus、eppendorf公司制)通過滴眼來進(jìn)行。需要說明的是，1天6次給予的組以1.5小時(shí)間隔1天共計(jì)6次；對于1天1次給予的組，與1天6次給予的組的初次給予相符合地1天1次，分別進(jìn)行給予，將其繼續(xù)共計(jì)21天(3周)。在給予剛剛開始后(第0周)、第3天、第1周、第2周和第3周，分別評價(jià)角膜上皮損傷的程度。評價(jià)依據(jù)前述的基準(zhǔn)，在遮擋下進(jìn)行評分化，從而進(jìn)行。各組的結(jié)果用平均值土標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。對于給予了受試物質(zhì)溶液的組的、各評價(jià)時(shí)刻時(shí)的各組的評分，根據(jù)shirley-williams檢驗(yàn)和jonckheere-terpstra檢驗(yàn)確認(rèn)用量反應(yīng)性。均使顯著性水平低于5％為顯著。(4)試驗(yàn)結(jié)果將結(jié)果示于圖1和圖2?；趕hirley-williams檢驗(yàn)的用量反應(yīng)性檢驗(yàn)中，1天1次給予的組(圖1)中，對于給予了0.5％的組，第3天以及以后的全部評價(jià)時(shí)刻下，對于給予了0.1％的組和給予了0.3％的組，在第1周和第3周，分別相對于對照(1天1次)組是顯著的。另外，1天6次給予的組(圖2)中，對于給予了受試物質(zhì)的全部組，第3天以及以后的全部評價(jià)時(shí)刻下，相對于對照(1天6次)組是顯著的。另外，基于jonckheere-terpstra檢驗(yàn)的用量反應(yīng)性的傾向檢驗(yàn)中，1天1次給予的組(圖1)中，在第3天、第2周和第3周，jonck統(tǒng)計(jì)量是顯著的；1天6次給予的組(圖2)中，在全部評價(jià)時(shí)刻下，jonck統(tǒng)計(jì)量是顯著的。1天1次給予、1天6次給予在作為最終評價(jià)時(shí)刻的第3周的兩個(gè)檢驗(yàn)均是顯著的，因此，無論1天的給予次數(shù)，均顯示出有用量反應(yīng)性。[實(shí)施例3]滴眼藥的制備2在實(shí)施例1中制備的ha-3apc中添加基材(作為等滲劑的氯化鈉、氯化鉀；作為緩沖劑的磷酸氫鈉、磷酸二氫鈉；作為穩(wěn)定化劑的依地酸二鈉和作為防腐劑的0.003％的苯扎氯銨)，以成為ph5.0～6.0的方式進(jìn)行調(diào)整，制備0.5w/v％和0.3w/v％的各ha-3apc水溶液后，用0.22μm過濾器進(jìn)行過濾滅菌，將其作為滴眼藥。以下，將它們分別稱為0.5％滴眼藥、0.3％滴眼藥。另外，將不含有ha-3apc的基材水溶液作為安慰劑。[實(shí)施例4]以干眼癥患者為對象的使用cae(注冊商標(biāo))模型的臨床試驗(yàn)(1)受試者將全部滿足下述條件a)～c)的人作為受試者。a)18歲以上b)書面同意了知情同意書c)兩眼均有干眼癥的既往病史其中，屬于以下的a)～d)中的任1者的人排除在試驗(yàn)之外。a)使用隱形眼鏡的人b)控制不良的全身性疾病的患者c)控制不良的精神疾病、藥物或酒精依賴癥的患者d)哺乳中、妊娠中或計(jì)劃妊娠的女性(2)試驗(yàn)方法在較低地維持濕度、溫度、風(fēng)的流動(dòng)、照明、和使用眼的作業(yè)得到控制的環(huán)境下進(jìn)行試驗(yàn)的、作為眼科領(lǐng)域中確立的治療評價(jià)體系的cae(注冊商標(biāo))模型(controlledadverseenvironment(cae(注冊商標(biāo)))模型、ora,inc,andover,ma,usa)(參照georgew.ousleretal.annallergyasthmaimmunol.2004；93:460-464)下，進(jìn)行多中心隨機(jī)雙盲比較試驗(yàn)。首先，作為對試驗(yàn)的導(dǎo)入，對受試者的兩眼分別以每1次1滴、1天4次(早上、中午、午后、晚上就寢前)滴眼安慰劑，將其繼續(xù)導(dǎo)入期間(2周)。對于受試者，在該滴眼期間中的每天、就寢時(shí)(就寢前的滴眼前)，針對各眼的自覺癥狀(眼的不愉快感、干燥感、灼熱感、粗糙感和針刺感)，依據(jù)自己知覺進(jìn)行評分，將其記錄于日志。評分設(shè)為0(無自覺癥狀)～5(自覺癥狀最強(qiáng))。(3)滴眼藥的給予之后，對受試者的兩眼，分別以每1次1滴、1天4次(早上、中午、午后、晚上就寢前)滴眼實(shí)施例3中制備的0.5％滴眼藥、0.3％滴眼藥或安慰劑，將其繼續(xù)4周。對于受試者，在滴眼期間中的每天、就寢時(shí)(就寢時(shí)的滴眼前)，與前述同樣地進(jìn)行評分，將其記錄于日志。(4)結(jié)果對強(qiáng)烈感到(最強(qiáng)的(分?jǐn)?shù)高)自覺癥狀評分(worstsymptomscore)的平均為2.5以上)滴眼藥給予開始的即將開始期(滴眼藥給予開始的7天前～1天前的期間)自覺癥狀的受試者進(jìn)行評價(jià)，將給予期間中的經(jīng)時(shí)變化進(jìn)行作圖化。該評價(jià)使用與各給予組中的第0天進(jìn)行的滴眼的即將開始期(滴眼藥給予開始的7天前～1天前的期間)的自覺癥狀評分平均值(基線)的差。另外，該評價(jià)使用各評價(jià)時(shí)刻中的、各給予組的、對于各自覺癥狀的評分的平均值。將結(jié)果示于圖3～圖8。需要說明的是，這些結(jié)果是1天中持續(xù)用眼的疲勞蓄積的時(shí)刻即“就寢時(shí)(就寢時(shí)的滴眼前)”的結(jié)果，是認(rèn)為自覺癥狀最強(qiáng)出現(xiàn)，對睡眠也可能有較大影響的時(shí)刻。即，以下的結(jié)果是對于自覺癥狀強(qiáng)的患者、在認(rèn)為1天中癥狀最強(qiáng)出現(xiàn)的時(shí)刻進(jìn)行評價(jià)的。需要說明的是，給予了0.5％滴眼藥、0.3％滴眼藥、安慰劑的各組的數(shù)量分別為23、26、26。(4-1)眼的不愉快感將結(jié)果示于圖3。解析的結(jié)果可見，0.3％滴眼藥組中，在以下的期間可見相對于安慰劑組統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性自覺癥狀的減少?！さ?天～第6天(p＝0.0219、t-test(t-檢驗(yàn))；p＝0.0249、ancova)·第0天～第13天(p＝0.0143、t-test；p＝0.0210、ancova)·第0天～第20天(p＝0.0387、t-test)·第7天～第13天(p＝0.0233、t-test；p＝0.0407、ancova)另一方面，0.5％滴眼藥組僅在第21天～第27天的期間，可見相對于安慰劑組統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異(p＝0.0306、檢驗(yàn)方法：t-test)。如此，0.3％滴眼藥顯示出如下令人驚奇的結(jié)果：對于人眼的自覺癥狀(眼的不愉快感)，在滴眼藥給予開始后初期(第0天～第20天)體現(xiàn)改善效果，且其效果比0.5％滴眼藥優(yōu)異。(4-2)干燥感將結(jié)果示于圖4。解析的結(jié)果，0.3％滴眼藥組中，在以下的期間可見相對于安慰劑組統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性自覺癥狀的減少。·第0天～第6天(p＝0.0480、t-test)·第0天～第13天(p＝0.0173、t-test；p＝0.0259、ancova)·第0天～第20天(p＝0.0466、t-test)·第7天～第13天(p＝0.0140、t-test；p＝0.0240、ancova)·第0天～第27天(p＝0.0365、wilcoxonranksum)另一方面，0.5％滴眼藥組中，未見統(tǒng)計(jì)學(xué)的顯著差異。如此，0.3％滴眼藥顯示出如下令人驚奇的結(jié)果：對于人眼的自覺癥狀(干燥感)，在滴眼藥給予開始后初期(第0天～第27天)體現(xiàn)改善效果，且其效果比0.5％滴眼藥優(yōu)異。(4-3)粗糙感將結(jié)果示于圖5。解析的結(jié)果，0.3％滴眼藥組中，在第0天～第13天的期間可見相對于安慰劑組統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性自覺癥狀的減少(p＝0.0286、wilcoxonranksum)另一方面，0.5％滴眼藥組中，未見統(tǒng)計(jì)學(xué)的顯著差異。如此，0.3％滴眼藥顯示出如下令人驚奇的結(jié)果：對于人眼的自覺癥狀(粗糙感)，在滴眼藥給予開始后初期(第0天～第13天)體現(xiàn)改善效果，且其效果比0.5％滴眼藥優(yōu)異。(4-4)最強(qiáng)的自覺癥狀評分圖6示出各患者中的各自覺癥狀(眼的不愉快感、灼熱感、干燥感、粗糙感和針刺感)中、最強(qiáng)者(癥狀評分高者)的結(jié)果。解析的結(jié)果，0.3％滴眼藥組中，在以下的期間可見相對于安慰劑組統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性自覺癥狀的減少?！さ?天～第13天(p＝0.0232、t-test；p＝0.0324、ancova)·第7天～第13天(p＝0.0204、t-test；p＝0.0308、ancova)另一方面，0.5％滴眼藥組中，未見統(tǒng)計(jì)學(xué)的顯著差異。如此，0.3％滴眼藥顯示出如下令人驚奇的結(jié)果：對于人眼的自覺癥狀中最強(qiáng)者，在滴眼藥給予開始后初期(第0天～第13天)體現(xiàn)改善效果，且其效果比0.5％滴眼藥優(yōu)異。(4-5)自覺癥狀評分的平均值圖7為對各患者中的各自覺癥狀(眼的不愉快感、灼熱感、干燥感、粗糙感和針刺感)的評分的平均值進(jìn)行解析的結(jié)果。0.3％滴眼藥組中，在以下的期間可見相對于安慰劑組統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性自覺癥狀的減少?！さ?天～第6天(p＝0.0481、t-test)·第0天～第13天(p＝0.0404、t-test；p＝0.0422、ancova)·第7天～第13天(p＝0.0148、wilcoxonranksum)另一方面，0.5％滴眼藥組中，未見統(tǒng)計(jì)學(xué)的顯著差異。如此，0.3％滴眼藥顯示出如下令人驚奇的結(jié)果：對于人眼的全部自覺癥狀，在滴眼藥給予開始后初期(第0天～第6天)體現(xiàn)改善效果，且其效果比0.5％滴眼藥優(yōu)異。(4-6)自覺癥狀評分(眼的不愉快感、干燥感)的平均值圖8為對各患者中的各自覺癥狀(眼的不愉快感、干燥感)的評分的平均值進(jìn)行解析的結(jié)果。0.3％滴眼藥組中，在以下的期間和天，可見相對于安慰劑組統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性自覺癥狀的減少?！さ?天～第13天(p＝0.0111、t-test；p＝0.0080、wilcoxonranksum；p＝0.0138、ancova)·第1、4、5、8、9、10天(分別地p＝0.0235、0.0066、0.0046、0.0018、0.0313、0.0145、t-test)另一方面，0.5％滴眼藥組中，未見統(tǒng)計(jì)學(xué)的顯著差異。如此，0.3％滴眼藥顯示出如下令人驚奇的結(jié)果：對于人眼的自覺癥狀中、由患者主訴的自覺癥狀特別多的、眼的不愉快感、干燥感的平均值，在滴眼藥給予剛剛開始后(令人驚奇地是，在滴眼藥給予的開始第二天)體現(xiàn)效果，另外，在滴眼藥給予開始后初期(第0天～第13天)體現(xiàn)改善效果，且其效果比0.5％滴眼藥優(yōu)異。(5)cae(注冊商標(biāo))前后的熒光素染色評分的變化對于第28天的各受試者，對cae(注冊商標(biāo))前后的、角膜整體和角結(jié)膜整體的熒光素染色(角結(jié)膜上皮異常部位的染色)評分的變化進(jìn)行評價(jià)。將結(jié)果示于圖9。解析的結(jié)果，在0.3％滴眼藥組中，角膜整體和角結(jié)膜整體這兩者中，可見相對于安慰劑組統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性染色評分的減少。另一方面，在0.5％滴眼藥組中，角膜整體和角結(jié)膜整體任一者中，未見統(tǒng)計(jì)學(xué)的顯著差異。如此，0.3％滴眼藥顯示出如下令人驚奇的結(jié)果：體現(xiàn)降低人眼的角結(jié)膜上皮損傷的發(fā)生的效果，且其效果比0.5％滴眼藥優(yōu)異。(6)安全性評價(jià)在0.3％滴眼藥組、0.5％滴眼藥組與安慰劑組之間，對于全身性的有害現(xiàn)象發(fā)現(xiàn)率、眼部的有害現(xiàn)象發(fā)現(xiàn)率和副作用發(fā)現(xiàn)率中任一者均未見統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異，未見擔(dān)心ha-3apc的安全性的現(xiàn)象。日本國專利申請2001-385072號(hào)(申請日：2001年12月18日)、日本國專利申請2008-519554號(hào)(申請日：2006年10月12日)和日本國專利申請2014-263710號(hào)(申請日：2014年12月26日)的公開內(nèi)容的整體作為參照引入至本說明書。本說明書中記載的全部文獻(xiàn)、專利申請和技術(shù)規(guī)范，與具體且分別記載各文獻(xiàn)、專利申請和技術(shù)規(guī)范作為參照被引入的情況同等程度地作為參照引入至說明書。產(chǎn)業(yè)上的可利用性本發(fā)明制劑作為改善人眼的自覺癥狀的制劑可以在產(chǎn)業(yè)上利用，本發(fā)明方法作為使用ha基質(zhì)的化合物的人眼的自覺癥狀的改善方法可以在產(chǎn)業(yè)上利用。當(dāng)前第1頁12