本申請(qǐng)要求提交于2014年6月4日的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)No.62/007,768的優(yōu)先權(quán)。

背景技術(shù)：

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及皮膚護(hù)理領(lǐng)域。

相關(guān)技術(shù)說(shuō)明

外皮或皮膚是身體最大的器官，占體重的16％，表面積為1.8m²。皮膚具有若干功能，最重要的是形成對(duì)環(huán)境的物理屏障，允許和限制水、電解質(zhì)和各種物質(zhì)向內(nèi)和向外透過(guò)，同時(shí)提供針對(duì)微生物、紫外線輻射、毒性制劑和外力損傷的保護(hù)。皮膚具有三個(gè)結(jié)構(gòu)層：表皮、真皮和皮下組織。表皮包括五層：角質(zhì)層、透明層、顆粒層、有棘層和基底層。

角質(zhì)層是表皮的五層中的最外層，主要負(fù)責(zé)皮膚的重要屏障功能。人們已將角質(zhì)層的結(jié)構(gòu)描述為“磚塊和砂漿”型結(jié)構(gòu)。在這個(gè)比喻中，角質(zhì)細(xì)胞是磚塊。角質(zhì)細(xì)胞是由組織化基質(zhì)中角蛋白的微小絲狀物構(gòu)成的蛋白質(zhì)復(fù)合物。角蛋白可以在纖維/絲狀物之間保持大量的水。角質(zhì)層包括12至16層角質(zhì)細(xì)胞，每個(gè)角質(zhì)細(xì)胞的平均厚度為約1微米。

介于角質(zhì)細(xì)胞之間的“砂漿”含有游離脂肪酸和神經(jīng)酰胺，它們?cè)诮琴|(zhì)形成細(xì)胞成熟為角質(zhì)層時(shí)自角質(zhì)形成細(xì)胞的層狀體中釋放出來(lái)。因?yàn)榇嬖趦煞N類型的脂質(zhì)，所以該層被稱為層狀脂雙層。該脂雙層在維持皮膚的屏障特性方面起到主要作用。角質(zhì)細(xì)胞還含有天然保濕因子(NMF)，它是水溶性化合物的聚集體。這些化合物構(gòu)成角質(zhì)細(xì)胞干重的約20％至30％。NMF組分從大氣中吸收水，并且將水與其自身的水含量結(jié)合，使得角質(zhì)層的最外層即便暴露于自然環(huán)境，也仍然保持濕潤(rùn)。

因此，表皮，尤其是角質(zhì)層，在保護(hù)身體免受感染和防止水分過(guò)多透過(guò)皮膚流失方面起到很大的作用。因?yàn)楫?dāng)表皮屏障被破壞時(shí)，感染和水分流失的風(fēng)險(xiǎn)急劇上升，所以存在使傷口愈合的自然過(guò)程，以盡可能快地修復(fù)該破壞并且保護(hù)身體。人們?cè)絹?lái)越清楚地認(rèn)識(shí)到，表皮中較小和較不明顯的破壞也會(huì)帶來(lái)問(wèn)題。特應(yīng)性皮炎的研究表明，至少在一些情況下，該病癥與表皮屏障的遺傳缺陷相關(guān)，該遺傳缺陷會(huì)使刺激物、微生物和過(guò)敏原穿透皮膚并且引起通常與特應(yīng)性皮炎相關(guān)的不良反應(yīng)。

若人體的自然過(guò)程不能修復(fù)表皮破壞，則后果嚴(yán)重。在美國(guó)，有大約300萬(wàn)至600萬(wàn)人受到傷口不愈合的影響，其中65歲及以上的人群占到了85％。傷口不愈合導(dǎo)致了巨大的醫(yī)療保健支出，總成本估計(jì)超過(guò)每年30億美元。此外，根據(jù)國(guó)家關(guān)節(jié)炎和肌肉骨骼和皮膚疾病研究所(National Institute of Arthritis and Musculoskeletal and Skin Disease)的數(shù)據(jù)，特應(yīng)性皮炎目前影響了美國(guó)10％至20％的兒童，在2013年直接醫(yī)療保健費(fèi)用超過(guò)30億美元/年。

因此，需要開(kāi)發(fā)用于保護(hù)皮膚和改善皮膚質(zhì)量(例如干燥、發(fā)紅、脫屑、發(fā)癢、皮疹、抵抗或控制感染的能力、或愈合傷口的能力)的組合物和方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本文提供了解決現(xiàn)有技術(shù)的問(wèn)題或不足之處的組合物和方法。具體地講，本文提供了用于改善受試者皮膚質(zhì)量的方法，該方法包括向皮膚施用藥物組合物，該藥物組合物包含與親水性聚合物共價(jià)結(jié)合的多肽和/或與親水性聚合物共價(jià)結(jié)合的多糖。本發(fā)明的驚人發(fā)現(xiàn)是，含有角蛋白多肽和親水性聚合物的組合物當(dāng)施用于皮膚時(shí)改善了一項(xiàng)或多項(xiàng)皮膚質(zhì)量。皮膚質(zhì)量包括但不限于干燥、發(fā)紅、脫屑、發(fā)癢、皮疹、抵抗或控制感染的能力以及愈合傷口的能力。

在一些實(shí)施例中，該親水性聚合物具有選自以下的結(jié)構(gòu)式：

i.Ia

ii.Ib以及

iii.Ic

其中R₁是羥基、羧基、乙胺、2-吡咯烷酮、羥乙基甲基丙烯酸、甲胺、膦酸、磺酸、羥基或SO4-；其中R₂是氫、甲基唑啉、乙基唑啉或丙基唑啉；并且其中n介于1和1500之間。在一些實(shí)施例中，式Ia、式Ib或式Ic中的“n”介于1和1000、1和500、1和250、或1和125之間。在一些實(shí)施例中，式Ia、式Ib或式Ic中的“n”介于約100和約125之間。在其他實(shí)施例中，“n”為約114。

附圖說(shuō)明

圖1是在聚乙二醇聚合物末端位置的官能反應(yīng)性琥珀酰亞胺戊酸酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)。

圖2的柱狀圖示出了100μg/mL角蛋白-聚乙二醇杜氏磷酸緩沖液(DPBS)組合物對(duì)成人原代角質(zhì)形成細(xì)胞的影響(對(duì)比單獨(dú)的培養(yǎng)基)。

具體實(shí)施方式

定義

本申請(qǐng)通篇使用的術(shù)語(yǔ)要采用對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)普通和典型的意思來(lái)解釋。然而，申請(qǐng)人希望以下術(shù)語(yǔ)被賦予如下所限定的具體定義。

如在說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中所使用的，單數(shù)形式的“一個(gè)”、“一種”和“所述”包括復(fù)數(shù)形式的指代，除非上下文另有明確指示。例如，術(shù)語(yǔ)“一種細(xì)胞”包括多個(gè)細(xì)胞，包括其混合物。

如本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所理解的，術(shù)語(yǔ)“約”和“大約”被定義為“接近”。在一個(gè)非限制性實(shí)施例中，該術(shù)語(yǔ)被定義為在10％以內(nèi)。在另一非限制性實(shí)施例中，該術(shù)語(yǔ)被定義為在5％以內(nèi)。在另一非限制性實(shí)施例中，該術(shù)語(yǔ)被定義為在1％以內(nèi)。

本文使用的術(shù)語(yǔ)“特應(yīng)性皮炎”是指也稱為濕疹的皮膚病癥，其可以包括或?qū)е赂稍?、皮疹、發(fā)紅、發(fā)癢和充滿流體的瘡中的一者或多者。

“組合物”旨在包括活性劑與另一種化合物或組合物的組合，所述另一種活性化合物或組合物為惰性的(例如可檢測(cè)的試劑或標(biāo)記)或活性的(例如輔劑)。

如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“包含”旨在表示組合物和方法包括所敘述的要素，但不排除其他要素。當(dāng)使用“基本上由…組成”定義組合物和方法時(shí)，應(yīng)意味著排除對(duì)該組合具有任何實(shí)質(zhì)意義的其他要素。因此，基本上由本文定義的要素組成的組合物不會(huì)排除來(lái)自分離和純化方法的痕量污染物和藥學(xué)上可接受的載體，例如磷酸鹽緩沖鹽水、防腐劑等?！坝伞M成”應(yīng)意味著不僅僅排除其他成分的痕量元素和用于施用本發(fā)明組合物的實(shí)質(zhì)性方法步驟。由這些轉(zhuǎn)折術(shù)語(yǔ)中的每一者所限定的實(shí)施例均在本發(fā)明的范圍內(nèi)。

術(shù)語(yǔ)“共價(jià)結(jié)合”意味著在親水性聚合物的一部分和多肽之間存在共價(jià)鍵，或在多肽的一部分和親水性聚合物之間存在共價(jià)鍵。因此，術(shù)語(yǔ)“共價(jià)結(jié)合”既指直接共價(jià)鍵(在親水性聚合物的原子和多肽的原子之間共享電子對(duì))也指間接共價(jià)鍵(在親水性聚合物的原子和包含多肽的組合物的原子之間共享電子對(duì)，或在多肽的原子和包含親水性聚合物的組合物的原子之間共享電子對(duì))。

術(shù)語(yǔ)“表皮破壞”是指至少在皮膚的角質(zhì)層中發(fā)生的屏障特性的損失或減少?！捌琳咸匦浴笔侵缸柚够衔锘蛭⑸锿高^(guò)皮膚進(jìn)入或離開(kāi)的能力。在一些實(shí)施例中，表皮破壞包括傷口。在其他實(shí)施例中，表皮破壞是由特應(yīng)性皮炎引起的。術(shù)語(yǔ)“表皮破壞”還包括燒傷、瘡(包括諸如潰瘍瘡的口瘡)和手術(shù)切口(包括整容手術(shù)切口和口腔手術(shù)切口)。

用于治療目的的“哺乳動(dòng)物”是指歸類為哺乳動(dòng)物的任何動(dòng)物，包括人、家畜和農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物、非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物以及諸如狗、馬、貓、牛等動(dòng)物園動(dòng)物、競(jìng)技動(dòng)物或?qū)櫸铩?/p>

“藥物組合物”旨在包括活性劑與藥學(xué)上可接受的惰性或活性的載體或賦形劑的組合，使得組合物適用于體內(nèi)或體外診斷或治療。

術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的載體”意味著可用于制備大體上安全無(wú)毒的藥物組合物的載體或賦形劑，并且包括獸和/或人的藥用可接受的載體。如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的載體”涵蓋任何標(biāo)準(zhǔn)藥物載體，諸如磷酸鹽緩沖鹽溶液、水和乳液(例如油/水或水/油乳液)，以及各種類型的潤(rùn)濕劑。如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“載體”涵蓋本領(lǐng)域眾所周知用于藥物制劑中且如下進(jìn)一步描述的任何賦形劑、稀釋劑、填充劑、鹽、緩沖劑、穩(wěn)定劑、增溶劑、脂質(zhì)、穩(wěn)定劑或其他物質(zhì)。藥物組合物也可包括防腐劑。在說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中使用的“藥學(xué)上可接受的載體”既包括一種此類載體，也包括一種以上的此類載體。

術(shù)語(yǔ)“治療有效量”或“治療有效劑量”是指化合物(諸如角蛋白-親水聚合物組合物)的這樣的量：其在一般性的時(shí)間段內(nèi)將引起組織、系統(tǒng)、動(dòng)物或人發(fā)生研究人員、獸醫(yī)、醫(yī)學(xué)醫(yī)生或其他臨床醫(yī)生所尋求的生物學(xué)或醫(yī)學(xué)響應(yīng)。在一些實(shí)施例中，期望的反應(yīng)是皮膚質(zhì)量改善。在一些情況下，在幾天、幾周或幾年的時(shí)間內(nèi)向受試者施用多種或多個(gè)劑量的組合物后，實(shí)現(xiàn)期望的生物學(xué)或醫(yī)學(xué)響應(yīng)。

術(shù)語(yǔ)“受試者”在本文中定義為包括動(dòng)物。在一些實(shí)施例中，動(dòng)物是非哺乳動(dòng)物，諸如爬行動(dòng)物或鳥(niǎo)類。在一些實(shí)施例中，動(dòng)物是哺乳動(dòng)物，包括但不限于靈長(zhǎng)類動(dòng)物(例如人)、牛、綿羊、山羊、馬、狗、貓、兔、大鼠、小鼠等。在一些實(shí)施例中，受試者是人。在一些實(shí)施例中，受試者是兒童。

術(shù)語(yǔ)“傷口”在本文中是指對(duì)皮膚的損傷，其中皮膚的表皮層的至少一部分被損傷。術(shù)語(yǔ)“傷口”包括一級(jí)擦傷、二級(jí)擦傷、三級(jí)擦傷、裂傷、切口、穿刺傷口和穿透?jìng)凇?/p>

具體實(shí)施方式

本文提供了用于改善受試者皮膚質(zhì)量的方法，該方法包括向皮膚施用藥物組合物，該藥物組合物包含與親水性聚合物共價(jià)結(jié)合的多肽和/或與親水性聚合物共價(jià)結(jié)合的多糖。與親水性聚合物結(jié)合的多肽包括但不限于以下物質(zhì)的多肽：角蛋白、膠原、彈性蛋白、絲心蛋白、乳源蛋白(諸如酪蛋白、β-乳球蛋白和α-乳清蛋白)以及谷物蛋白(諸如小麥蛋白)。在某些實(shí)施例中，諸如角蛋白的疏水性多肽可以是優(yōu)選的。本文還提供了包含與多糖共價(jià)結(jié)合的親水性聚合物的組合物，其中多糖為諸如殼聚糖、幾丁質(zhì)或幾丁質(zhì)葡聚糖。

本發(fā)明的驚人發(fā)現(xiàn)是，含有角蛋白多肽和親水性聚合物的組合物當(dāng)施用于皮膚時(shí)改善了一項(xiàng)或多項(xiàng)皮膚質(zhì)量。皮膚質(zhì)量包括但不限于干燥、發(fā)紅、脫屑、發(fā)癢、皮疹、抵抗或控制感染的能力，以及愈合表皮破壞(包括傷口)的能力。術(shù)語(yǔ)“角蛋白”是指纖維結(jié)構(gòu)蛋白家族，該纖維結(jié)構(gòu)蛋白家族存在于哺乳動(dòng)物的毛發(fā)、皮膚、指甲、爪和蹄中(α-角蛋白)，以及在爬行動(dòng)物的鱗片、爪和殼中，以及在鳥(niǎo)的羽毛、喙和爪中，以及在豪豬的刺中(β-角蛋白)。α-角蛋白也稱為細(xì)胞角蛋白，并且進(jìn)一步細(xì)分為軟α-角蛋白(上皮細(xì)胞角蛋白)和硬α-角蛋白(毛細(xì)胞(trichocyte)角蛋白)。所有角蛋白都是I型角蛋白和II型角蛋白的雜聚物。國(guó)際人類基因組組織基因命名委員會(huì)(HUGO Gene Nomenclature Committee)將以下確定為已知的角蛋白多肽編碼基因：KRT1、KRT2、KRT3、KRT4、KRT5、KRT6A、KRT6B、KRT6C、KRT7、KRT8、KRT9、KRT10、KRT12、KRT13、KRT14、KRT15、KRT16、KRT17、KRT18、KRT19、KRT20、KRT23、KRT24、KRT25、KRT26、KRT27、KRT28、KRT31、KRT32、KRT33A、KRT33B、KRT34、KRT35、KRT36、KRT37、KRT38、KRT39、KRT40、KRT71、KRT72、KRT73、KRT74、KRT75、KRT76、KRT77、KRT78、KRT79、KRT80、KRT81、KRT82、KRT83、KRT84、KRT85、KRT86、KRT222。因此，本發(fā)明的角蛋白多肽可由選自以下的一種或多種基因編碼：KRT1、KRT2、KRT3、KRT4、KRT5、KRT6A、KRT6B、KRT6C、KRT7、KRT8、KRT9、KRT10、KRT12、KRT13、KRT14、KRT15、KRT16、KRT17、KRT18、KRT19、KRT20、KRT23、KRT24、KRT25、KRT26、KRT27、KRT28、KRT31、KRT32、KRT33A、KRT33B、KRT34、KRT35、KRT36、KRT37、KRT38、KRT39、KRT40、KRT71、KRT72、KRT73、KRT74、KRT75、KRT76、KRT77、KRT78、KRT79、KRT80、KRT81、KRT82、KRT83、KRT84、KRT85、KRT86和KRT222。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“多肽”以其最廣泛的含義用于指兩個(gè)或超過(guò)兩個(gè)的氨基酸、氨基酸類似物或肽模擬物亞單位構(gòu)成的化合物。亞單位可通過(guò)肽鍵連接。在另一個(gè)實(shí)施例中，亞單位可通過(guò)例如酯、醚等其他鍵連接。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“氨基酸”是指天然和/或非天然或者合成的氨基酸，包括甘氨酸及D旋光異構(gòu)體和L旋光異構(gòu)體兩者，以及氨基酸類似物和肽模擬物。如果肽鏈短，例如小于約25個(gè)氨基酸，則可將三個(gè)或更多個(gè)氨基酸的肽稱為寡肽。術(shù)語(yǔ)“多肽”可包括天然存在的全長(zhǎng)蛋白質(zhì)以及這些蛋白質(zhì)的功能片段。在本發(fā)明的情形中，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)片段實(shí)現(xiàn)了全長(zhǎng)蛋白質(zhì)的期望結(jié)果時(shí)，則蛋白質(zhì)片段是功能性的。例如，如果是如下情形，則本發(fā)明涵蓋與親水性聚合物共價(jià)結(jié)合的角蛋白片段：使用本發(fā)明的方法將角蛋白-親水性聚合物施用于皮膚時(shí)，該聚合物提供皮膚改善效果。多肽可源自天然來(lái)源或經(jīng)合成制備，包括通過(guò)使用大規(guī)模蛋白質(zhì)表達(dá)機(jī)制來(lái)制備。多肽可以是水解的或非水解的，并且在一些實(shí)施例中，多肽是非水解的。

應(yīng)當(dāng)理解，角蛋白多肽可為天然來(lái)源的或經(jīng)合成制備的。角蛋白多肽可從各種天然來(lái)源純化得到或經(jīng)商購(gòu)獲得。角蛋白多肽的分子量可為自約0.5kDa至約60kDa，或自約2kDa至約6kDa，或自約20kDa至約40kDa。在一些實(shí)施例中，角蛋白多肽為約5kDa。在一些實(shí)施例中，角蛋白多肽為約45kDa至約55kDa。在其他實(shí)施例中，角蛋白多肽為約52kDa。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“親水性聚合物”包括多肽、碳水化合物、核酸、聚(乙二醇)、聚(唑啉)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、聚(丙烯酰胺)、聚(丙烯酸)、聚(烯丙胺)、聚(甲基丙烯酸羥乙酯)、聚(乙烯亞胺)、聚(乙烯基膦酸)、聚(乙烯基硫酸酯)、聚(乙烯基磺酸)、聚(乙烯醇)、丙氧基化甘油、羥乙基淀粉(HES)。在一個(gè)實(shí)施例中，親水性聚合物是選自以下的合成親水性聚合物：聚(乙二醇)、聚(唑啉)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、聚(丙烯酰胺)、聚(丙烯酸)、聚(烯丙胺)、聚(甲基丙烯酸羥乙酯)、聚(乙烯亞胺)、聚(乙烯基膦酸)、聚(乙烯基硫酸酯)、聚(乙烯基磺酸)、聚(乙烯醇)、丙氧基化甘油和羥乙基淀粉(HES)。在一些實(shí)施例中，親水性聚合物的分子量為介于約0.5kDa和約80kDa之間，介于約0.5kDa和約40kDa或介于約0.5kDa和約10kDa之間。在一些實(shí)施例中，親水性聚合物的分子量為介于約2kDa和約10kDa之間。在一些實(shí)施例中，親水性聚合物的分子量為介于約20kDa和約40kDa之間。在一個(gè)實(shí)施例中，親水性聚合物的分子量為約5kDa。在另一個(gè)實(shí)施例中，親水性聚合物的分子量為約30kDa。

在其他或另外的實(shí)施例中，親水性聚合物具有選自以下的式：

Ia

Ib和

Ic

其中R₁是羥基、羧基、乙胺、2-吡咯烷酮、羥乙基甲基丙烯酸、甲胺、膦酸、磺酸、羥基或SO4-；其中R₂是氫、甲基唑啉、乙基唑啉或丙基唑啉；并且其中n介于1和1500之間。在一些實(shí)施例中，式Ia、式Ib或式Ic中的“n”介于1和1000、1和500、1和250、或1和125之間。在一些實(shí)施例中，式Ia、式Ib或式Ic中的“n”介于約100和約125之間。在其他實(shí)施例中，“n”為約114。在另外的實(shí)施例中，式Ia、式Ib或式Ic中的“n”可選自：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23和24。

在又一個(gè)實(shí)施例中，親水性聚合物與角蛋白多肽共價(jià)結(jié)合，并且親水性聚合物的式為：

Ia

其中n介于1和1,500之間。在一些實(shí)施例中，式Ia、式Ib或式Ic中的“n”介于1和1000、1和500、1和250、或1和125之間。在一些實(shí)施例中，式Ia、式Ib或式Ic中的“n”介于100和125之間。在其他實(shí)施例中，“n”為約114。在另外的實(shí)施例中，式Ia、式Ib或式Ic中的“n”可選自：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23和24。

式Ia的化合物作為聚乙二醇(或者說(shuō)是PEG)化合物是本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知的。可使用的PEG化合物范圍很廣—這些化合物可為直鏈的或支鏈的，在一端或兩端是反應(yīng)性的(單官能或雙官能)或在傳統(tǒng)意義上是非反應(yīng)性的。本發(fā)明所涵蓋的PEG化合物能夠在多肽上的反應(yīng)性部分處與多肽共價(jià)結(jié)合，或者與被修飾以包括這樣的反應(yīng)性部分的多肽共價(jià)結(jié)合，然而本發(fā)明不受共價(jià)連接方法的限制。在一些實(shí)施例中，PEG化合物被官能化以便與多肽反應(yīng)。在一些實(shí)施例中，親水性聚合物是在伯胺(例如賴氨酸殘基)處共價(jià)結(jié)合多肽的PEG化合物。在其他實(shí)施例中，親水性聚合物是在巰基(例如半胱氨酸殘基)處共價(jià)結(jié)合多肽的PEG化合物。

屬于本發(fā)明的親水性PEG聚合物的非限制性例子是MS(PEG)₄(美國(guó)伊利諾伊州羅克福德的賽默飛世爾科技公司(Thermo Scientific,Rockford,IL,USA))、MS(PEG)₈(美國(guó)伊利諾伊州羅克福德的賽默飛世爾科技公司(Thermo Scientific,Rockford,IL,USA))、MS(PEG)₁₂(美國(guó)伊利諾伊州羅克福德的賽默飛世爾科技公司(Thermo Scientific,Rockford,IL,USA))、MS(PEG)₂₄(美國(guó)伊利諾伊州羅克福德的賽默飛世爾科技公司(Thermo Scientific,Rockford,IL,USA))、TMS(PEG)₁₂(美國(guó)伊利諾伊州羅克福德的賽默飛世爾科技公司(Thermo Scientific,Rockford,IL,USA))、TMM(PEG)₁₂(美國(guó)伊利諾伊州羅克福德的賽默飛世爾科技公司(Thermo Scientific,Rockford,IL,USA))、MM(PEG)₁₂(美國(guó)伊利諾伊州羅克福德的賽默飛世爾科技公司(Thermo Scientific,Rockford,IL,USA))、MM(PEG)₂₄(美國(guó)伊利諾伊州羅克福德的賽默飛世爾科技公司(Thermo Scientific,Rockford,IL,USA))，以及其他N-羥基琥珀酰亞胺官能化的PEG、mPEG-琥珀酰亞胺基-琥珀酸酯(分子量為2kDa、5kDa、10kDa、20kDa或30kDa)(美國(guó)亞拉巴馬州阿拉伯的Laysan Bio公司(Laysan Bio.,Inc.,Arab,AL,USA))、mPEG-碳酸硝基苯酯(分子量為2kDa、5kDa、10kDa、20kDa或30kDa)(美國(guó)亞拉巴馬州阿拉伯的Laysan Bio公司(Laysan Bio.,Inc.,Arab,AL,USA))、mPEG-琥珀酰亞胺戊酸酯(分子量為2kDa、5kDa、10kDa、20kDa、30kDa、40kDa或60kDa)(美國(guó)亞拉巴馬州阿拉伯的Laysan Bio公司(Laysan Bio.,Inc.,Arab,AL,USA))和mPEG-琥珀酰亞胺基戊二酸酯(分子量為2kDa、5kDa、10kDa、20kDa或30kDa)(美國(guó)亞拉巴馬州阿拉伯的Laysan Bio公司(Laysan Bio.,Inc.,Arab,AL,USA))?！爸ф湹摹本垡叶冀M合物包括TMS(PEG)₁₂、TMM(PEG)₁₂和任何其他多臂聚乙二醇組合物。在一個(gè)實(shí)施例中，親水性聚合物是約5kDa的mPEG-琥珀酰亞胺基-琥珀酸酯聚合物，并且其中“n”為約114。

存在于或引入到本發(fā)明的多肽或多糖中的官能反應(yīng)性部分可與存在于或引入到本發(fā)明的親水性聚合物中的官能反應(yīng)性部分反應(yīng)，以在多肽和親水性聚合物之間形成共價(jià)鍵。例如，可用于本發(fā)明的官能反應(yīng)性部分包括用于點(diǎn)擊化學(xué)(click chemistry)、馬來(lái)酰亞胺化學(xué)(maleimide chemistry)和NHS-酯等中的那些官能反應(yīng)性部分。參與點(diǎn)擊化學(xué)的官能反應(yīng)性部分包括但不限于通過(guò)Huisgen環(huán)加成過(guò)程形成三唑環(huán)的疊氮化物和炔烴(參見(jiàn)美國(guó)專利No.7,375,234，其全文并入本文)。馬來(lái)酰亞胺化學(xué)涉及馬來(lái)酰亞胺烯烴與親核試劑(諸如–OH、–SH或–NH₂)的反應(yīng)以形成穩(wěn)定的鍵。其他官能反應(yīng)性部分包括Bioconjugate Techniques,Greg T.Hermanson,Academic Press,2nd ed.,2008(《生物偶聯(lián)技術(shù)》，Greg T.Hermanson，美國(guó)學(xué)術(shù)出版社，第2版，2008年)(其全文并入本文)中所述的那些。就親水性聚合物聚乙二醇而言，作為非限制性例子，通常在聚乙二醇聚合物的一端或兩端引入官能活性部分，如圖1所示，其中官能反應(yīng)性琥珀酰亞胺戊酸酯顯示在聚乙二醇聚合物的末端位置。

表1中示出了存在于或引入到親水性聚合物中的官能反應(yīng)性部分與通常存在于或引入到多肽或多糖中的一些官能反應(yīng)性部分的反應(yīng)的一些非限制性例子。

表1

R’是C_1-6烷基、C_3-6環(huán)烷基或具有5-8個(gè)內(nèi)環(huán)原子的芳基；

R”是H、C_1-6烷基、C_3-6環(huán)烷基或具有5-8個(gè)內(nèi)環(huán)原子的芳基；

R”’是羰基衍生物*-(C＝O)-、*-(C＝O)-(CH₂)_1-8-*-(C＝O)-(CH₂)_1-8-S-S-、*-(C＝O)-(CH₂)_1-8-(C＝O)-O-、*-(C＝O)-(CH₂)_1-8-O-(C＝O)-、*-(C＝O)-(CH₂)_1-8-(C＝O)-NH-或*-(C＝O)-(CH₂)_1-8-NH-(C＝O)-，或者R”’是以下形式的羰基衍生物：*-(C＝O)-O-(CH₂)_1-8-S-S-、*-(C＝O)-O-(CH₂)_1-8-(C＝O)-O-、*-(C＝O)-O-(CH₂)_1-8-(C＝O)-O-(CH₂)_1-8-*-(C＝O)-O-(CH₂)_1-8-O-(C＝O)-、*-(C＝O)-O-(CH₂)_1-8-(C＝O)-NH-或*-(C＝O)-O-(CH₂)_1-8-NH-(C＝O)-，其中“*”表示與琥珀酰亞胺基或苯并三唑基的連接點(diǎn)；

X和Y分別是多肽和親水性聚合物。

可在藥物組合物中提供本文所述的角蛋白-親水性聚合物化合物。藥物組合物包括治療有效量的本文所述的角蛋白-親水性聚合物化合物與藥學(xué)上可接受的載體的組合。在一些實(shí)施例中，藥物組合物具有抗菌特性。

如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“載體”包括本領(lǐng)域眾所周知的用于藥物制劑中的任何賦形劑、稀釋劑、填充劑、鹽、緩沖劑、穩(wěn)定劑、增溶劑、脂質(zhì)、穩(wěn)定劑或其他物質(zhì)。用于組合物中的載體的選擇將取決于組合物的預(yù)期施用途徑。藥學(xué)上可接受的載體和含有這些物質(zhì)的制劑的制備描述于例如Remington's Pharmaceutical Sciences,21st Edition,University of the Sciences in Philadelphia,Lippincott,Williams&Wilkins,Philadelphia Pa.,2005(《雷明頓藥物科學(xué)》，第21版，費(fèi)城科學(xué)大學(xué)，利平科特·威廉斯·威爾金斯出版公司，賓夕法尼亞州費(fèi)城，2005年)。生理學(xué)上可接受的載體的例子包括生理鹽水、甘油、DMSO、緩沖液(諸如磷酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液以及含有其他有機(jī)酸的緩沖液)、抗氧化劑(包括抗壞血酸)、低分子量(小于約10個(gè)殘基)的多肽、蛋白質(zhì)(諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白)、親水性聚合物(諸如聚乙烯吡咯烷酮)、氨基酸(諸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或賴氨酸)、單糖、二糖和其他碳水化合物(包括葡萄糖、甘露糖或糊精)、螯合劑(諸如EDTA)、糖醇(諸如甘露醇或山梨醇)、成鹽抗衡離子(諸如鈉)和/或非離子表面活性劑(諸如吐溫(TWEEN)，美國(guó)新澤西州布里奇沃特的ICI公司(ICI,Inc.；Bridgewater,New Jersey))、聚乙二醇(PEG)和PLURONICS(新澤西州弗洛勒姆帕克的巴斯夫公司(BASF；Florham Park，NJ))。為了提供用于所需治療性處理的這種劑量的施用，本文所公開(kāi)的組合物可基于包括載體或稀釋劑的總組合物的重量計(jì)，有利地包含介于約0.1重量％和99重量％之間的一種或多種角蛋白-親水性聚合物組合物總和。

將上文和本文其他地方所描述的多肽-親水性聚合物和多糖-親水性聚合物藥物組合物施用于受試者的皮膚以改善皮膚質(zhì)量。在一些實(shí)施例中，術(shù)語(yǔ)“皮膚”包括指甲。術(shù)語(yǔ)“施用”是指口服、局部、靜脈內(nèi)、皮下、經(jīng)皮、透皮、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、腸胃外、動(dòng)脈內(nèi)、皮內(nèi)、心室內(nèi)、顱內(nèi)、腹膜內(nèi)、病灶內(nèi)、鼻內(nèi)、直腸內(nèi)、陰道內(nèi)通過(guò)吸入或經(jīng)由植入儲(chǔ)庫(kù)施用。術(shù)語(yǔ)“腸胃外”包括皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸骨內(nèi)、鞘內(nèi)、肝內(nèi)、病灶內(nèi)和顱內(nèi)注射或輸注技術(shù)。

用于局部施用本文所述藥物組合物的劑型包括軟膏劑、凝膠劑、糊劑、液體劑、溶液劑、霜?jiǎng)?、油、泡沫、摩絲、散劑、氣溶膠和噴霧劑。藥物組合物還可以施用于傷口敷料，諸如貼劑、創(chuàng)可貼和紗布材料。增稠劑、潤(rùn)膚劑和穩(wěn)定劑可用于制備本發(fā)明的局部藥物組合物。增稠劑的例子包括凡士林、蜂蠟、黃原膠或聚乙二醇，濕潤(rùn)劑諸如山梨醇，潤(rùn)膚劑諸如礦物油、羊毛脂及其衍生物或角鯊烯。本文所述的藥物組合物在無(wú)菌條件下與藥學(xué)上可接受的載體和任何防腐劑、緩沖劑、增稠劑、化妝劑、防曬劑或可能需要的推進(jìn)劑混合。

多肽-親水性聚合物和多糖-親水性聚合物藥物組合物可以治療有效量施用于皮膚。本領(lǐng)域的技術(shù)人員將理解，用于任何具體受試者的特定劑量水平和劑量頻率可變化，并且將取決于多種因素，包括所使用的特定化合物的活性，該化合物的代謝穩(wěn)定性和作用時(shí)間長(zhǎng)度，受試者的種族、年齡、體重、一般健康狀況、性別和飲食，施用的模式和時(shí)間，排泄率，藥物組合和具體病癥的嚴(yán)重性。在一些實(shí)施例中，角蛋白-親水性聚合物藥物組合物在一天內(nèi)向皮膚施用一次、兩次、三次、四次、五次、六次或更多次以上。角蛋白-親水性聚合物藥物組合物可施用于皮膚保持任何時(shí)間長(zhǎng)度，包括但不限于約一天、約兩天、約三天、約四天、約五天、約六天、約一周、約兩周、約三周、約四周或更長(zhǎng)時(shí)間。

以治療有效量向皮膚施用多肽-親水性聚合物和/或多糖-親水性聚合物藥物組合物，可使皮膚質(zhì)量改善。皮膚質(zhì)量包括但不限于干燥、發(fā)紅、脫屑、發(fā)癢、皮疹、抵抗或控制感染的能力以及愈合表皮破壞的能力(包括愈合傷口的能力)。在一些實(shí)施例中，將治療有效量的多肽-親水性聚合物和/或多糖-親水性聚合物藥物組合物施用于顯示干燥的皮膚區(qū)域，可使干燥的大小或嚴(yán)重程度減小。在一些實(shí)施例中，將治療有效量的多肽-親水性聚合物和/或多糖-親水性聚合物藥物組合物施用于顯示發(fā)紅的皮膚區(qū)域，可使發(fā)紅的大小或嚴(yán)重程度減小。在一些實(shí)施例中，將治療有效量的多肽-親水性聚合物和/或多糖-親水性聚合物藥物組合物施用于顯示皮疹的皮膚區(qū)域，可使皮疹的大小或嚴(yán)重程度減小。在一些實(shí)施例中，將治療有效量的多肽-親水性聚合物和/或多糖-親水性聚合物藥物組合物施用于顯示發(fā)癢的皮膚區(qū)域，可使發(fā)癢的大小或嚴(yán)重程度減小。在一些實(shí)施例中，將治療有效量的多肽-親水性聚合物和/或多糖-親水性聚合物藥物組合物施用于顯示感染跡象的皮膚區(qū)域，可使感染的大小或嚴(yán)重程度減小。在一些實(shí)施例中，將治療有效量的多肽-親水性聚合物和/或多糖-親水性聚合物藥物組合物施用于皮膚區(qū)域，可使得與對(duì)照相比皮膚感染發(fā)生的可能性降低。在一些實(shí)施例中，將治療有效量的多肽-親水性聚合物和/或多糖-親水性聚合物藥物組合物施用于含有傷口的皮膚區(qū)域，可使得與對(duì)照相比更快或更完全地減小傷口的大小。在一些實(shí)施例中，將治療有效量的多肽-親水性聚合物和/或多糖-親水性聚合物藥物組合物施用于含有傷口的皮膚區(qū)域，可使傷口部位的疤痕形成減少。

在一些實(shí)施例中，治療有效量的多肽-親水性聚合物和/或多糖-親水性聚合物藥物組合物可修復(fù)或覆蓋其所施用的皮膚區(qū)域中的表皮破壞。修復(fù)或覆蓋可為全部的或部分的，但是效果是增加其所施用的皮膚的屏障特性。在一些實(shí)施例中，屏障特性涉及水的包含或保留。在其他或另外的實(shí)施例中，屏障特性涉及排除過(guò)敏原或刺激物。過(guò)敏原包括那些是特應(yīng)性皮炎的致病因素的過(guò)敏原。在其他或另外的實(shí)施例中，屏障特性涉及排除微生物。術(shù)語(yǔ)“微生物”包括但不限于細(xì)菌、病毒和真菌。細(xì)菌包括但不限于那些通常通過(guò)皮膚中的破壞處進(jìn)入的細(xì)菌，諸如葡萄球菌屬(Staphylococcus)物種(例如金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus))、彎曲桿菌屬(Campylobacter)物種、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)、大腸桿菌(Escherichia coli)、犬咬二氧化碳嗜纖維菌(Capnocytophaga canimorsus)、創(chuàng)傷弧菌(Vibrio vulnificus)、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)和沙門(mén)氏菌屬(Salmonella)物種。

還應(yīng)當(dāng)理解，前述內(nèi)容涉及本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，并且在不脫離本發(fā)明的范圍的情況下可以作出許多改變。本發(fā)明通過(guò)以下實(shí)例進(jìn)一步說(shuō)明，但無(wú)論如何不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的范圍施加限制。相反，應(yīng)當(dāng)清楚地理解，可采用各種其他實(shí)施例、修改及其等同形式，在閱讀本文的說(shuō)明書(shū)之后，在不脫離本發(fā)明的精神和/或所附權(quán)利要求的范圍的情況下，各種其他實(shí)施例、修改及其等同形式對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的。出于所有目的，本文引用的所有公布、專利和專利申請(qǐng)的全文據(jù)此以引用方式并入。

實(shí)例

實(shí)例1

角蛋白-聚乙二醇組合物的制備

使用以下設(shè)備和材料制備角蛋白-聚乙二醇組合物：

渦漩器

搖床

移液管(1000微升)

注射器(1cc)

1.50mL管

Mettler Malani Ser#172447分析天平

通風(fēng)櫥

DPBS-杜氏磷酸鹽緩沖鹽水(1x)，目錄號(hào)14190-144，批號(hào)

901681，吉布科英杰公司(Gibco Invitrogen)。

N,N-二甲基甲酰胺，目錄號(hào)D119-500，批號(hào)963760

MS(PEG)₄；[MS4]目錄號(hào)22341，批號(hào)MI162217，賽默飛世爾

科技公司(Thermo Scientific)(Pierce)

MS(PEG)₁₂；[MS12]目錄號(hào)22685，批號(hào)MI162218，賽默飛世

爾科技公司(Thermo Scientific)(Pierce)

MS(PEG)₂₄；[MS24]目錄號(hào)22687，批號(hào)MH161869，賽默飛世

爾科技公司(Thermo Scientific)(Pierce)

TMS(PEG)₁₂；[TMS12]目錄號(hào)22421，批號(hào)MD157106，賽默飛

世爾科技公司(Thermo Scientific)(Pierce)

角蛋白[K]目錄號(hào)K3030，批號(hào)1AG0185，斯百全公司(Spectrum)

使用上述材料和設(shè)備，將10mg角蛋白粉末置于1.5mL離心管(數(shù)量為5個(gè))中。將五個(gè)樣品標(biāo)記為K、K+MS4、K+MS12、K+MS24和K+TMS12。將1毫升磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)加入到每個(gè)10mg角蛋白樣品中，并且搖動(dòng)45分鐘。然后向每個(gè)角蛋白樣品管中加入15μL的約250mM MS4、MS12、MS24和TMS12聚乙二醇化儲(chǔ)備溶液，并且置于搖床上30分鐘。使用以下計(jì)算式制備聚乙二醇化儲(chǔ)備溶液：

角蛋白分子量＝52.5kDa

1mL綴合蛋白×10mg/1mL×1/52500×20/1＝0.003809mmol聚乙

二醇化試劑。然后0.003809×1,000,000μL/L×L/250mmol＝15.23。

約15μL的250mM聚乙二醇化試劑儲(chǔ)備液。將材料在室溫下平衡。

MS4將1.1mL DMF加入到100mg儲(chǔ)備液MS4

MS12將485μL DMF加入到100mg儲(chǔ)備液MS12

MS24將230μL DMF加入到100mg儲(chǔ)備液MS24

TMS12將65μL DMF加入到100mg儲(chǔ)備液TMS12

將所得溶液儲(chǔ)存在具有干燥劑的冷凍盒中，并且放回-20℃冷凍庫(kù)中直至使用。

實(shí)例2

角蛋白-聚乙二醇(SVA)組合物的制備

使用以下材料和設(shè)備制備角蛋白-聚乙二醇組合物：

1.移液管

2.注射器

3.1.5mL離心管

4.Mettler分析天平

5.甲氧基-聚(乙二醇)-琥珀酰亞胺戊酸酯，批號(hào)120-176；Laysan Bio公司(Laysan Bio Inc.)5000MW(SVA PEG)(5k SVA PEG)

6.DPBS-杜氏磷酸鹽緩沖鹽水，目錄號(hào)14190，批號(hào)1048427，吉布公司(Gibco)

7.角蛋白，目錄號(hào)K3030，批號(hào)1AG0185，斯百全公司(Spectrum)

使用上述材料和設(shè)備，制備具有角蛋白多肽和SVA PEG聚合物比例(1:1)的反應(yīng)樣品。按如下步驟制備樣品：

在1.5mL離心管中加入1mL DPBS。樣品管如下標(biāo)記：

1.K:P；1:1＝稱出50mg SVA PEG，并且加入到1ml D-PBS+5mg角蛋白中

然后將[5mg]量的角蛋白加入1mL D-PBS中，并且用手搖動(dòng)以溶解。稱出SVA PEG的量并且加入到PBS-角蛋白溶液中。SVA PEG的量為50mg。然后用手搖動(dòng)管并且用Parafilm封口膜密封。

實(shí)例3

給皮膚施用角蛋白-聚乙二醇組合物

在數(shù)天、數(shù)周或數(shù)月的期間內(nèi)將實(shí)例1中所述的角蛋白-聚乙二醇組合物施用給年齡為10歲至67歲的各種個(gè)體(男性和女性)的皮膚。這樣的施用導(dǎo)致皮膚干燥減少、皮膚柔軟度增加以及其他皮膚改善。

實(shí)例4

增殖與遷移-細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定

圖2是示出100μg/mL如實(shí)例1和實(shí)例2所述的角蛋白-聚乙二醇組合物對(duì)成人原代角質(zhì)形成細(xì)胞的影響(對(duì)比單獨(dú)的培養(yǎng)基)的柱狀圖。在Oris細(xì)胞遷移測(cè)定中，角蛋白-聚乙二醇組合物增加了人角質(zhì)形成細(xì)胞遷移。將原代角質(zhì)形成細(xì)胞在具有人角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)補(bǔ)充劑(HKGS)和青霉素/鏈霉素的合適生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，直到細(xì)胞達(dá)到鋪滿，然后在測(cè)定法中進(jìn)行接種。

在Oris細(xì)胞遷移測(cè)定法(Oris Cell Migration Assay)中，用25,000個(gè)人原代角質(zhì)形成細(xì)胞接種由Platypus Technologies公司提供的96孔板，并且設(shè)置Oris細(xì)胞接種塞子(Oris Cell Seeding Stoppers)以防止細(xì)胞粘附在每個(gè)孔的中心。使用生長(zhǎng)培養(yǎng)基加HKSG將細(xì)胞孵育24小時(shí)，然后更換為培養(yǎng)基HKSG孵育16小時(shí)。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到鋪滿時(shí)，移除Oris細(xì)胞接種塞子，在每個(gè)孔中暴露出均勻的圓形“傷口”。在移除每個(gè)塞子之后，立即以指定的濃度加入測(cè)試化合物。100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、10μg/mL的SLP001和SLP002。

在處理后的0小時(shí)(移除塞子后立即)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)和96小時(shí)，使用明場(chǎng)顯微鏡記錄細(xì)胞遷移(漸進(jìn)傷口裂口閉合)。遷移是通過(guò)由遷移入并且填充傷口裂口的細(xì)胞覆蓋傷口裂口的時(shí)間和百分比來(lái)測(cè)量，并且使用具有Cell Biolabs優(yōu)化的插件的CellProfiler細(xì)胞圖像分析軟件來(lái)定量。

與僅在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的對(duì)照細(xì)胞相比，當(dāng)角質(zhì)形成細(xì)胞在用角蛋白-聚乙二醇組合物處理的情況下生長(zhǎng)時(shí)，在24小時(shí)內(nèi)觀察到增強(qiáng)的遷移并且持續(xù)至96小時(shí)。

實(shí)例5

一名具有嵌甲癥感染史的12歲女性，用如實(shí)例2所述的角蛋白-聚乙二醇組合物治療患有感染的腳指甲。首先清洗一個(gè)或多個(gè)腳趾，然后干燥。然后施用角蛋白-聚乙二醇組合物并且保持暴露24小時(shí)至48小時(shí)。在8小時(shí)內(nèi)可觀察到明顯的改善，并且傷口的疼痛消失了。在48小時(shí)后，在一個(gè)或多個(gè)腳趾下方或周圍沒(méi)有明顯的傷口跡象。在1年的時(shí)間內(nèi)，在每次發(fā)病時(shí)均施加角蛋白-聚乙二醇組合物，并且發(fā)病率隨著時(shí)間推移減少，現(xiàn)在該女性很少患嵌甲癥感染。

實(shí)例6

一個(gè)具有稀薄細(xì)軟成熟頭發(fā)的70歲婦人由于焦慮性抓痕癥(anxious picking)而造成頭皮損傷。她將實(shí)例2中所述的角蛋白-聚乙二醇應(yīng)用于配制的局部溶液中，該配制的局部溶液是用于施用的常見(jiàn)賦形劑。在每次洗頭后將溶液施用于頭皮，持續(xù)2個(gè)月。該女子在之前在她的頭皮上發(fā)生損傷處長(zhǎng)出了新的頭發(fā)，并且?guī)缀跛械膿p傷均已完全得到治愈。

實(shí)例7

一個(gè)73歲的老人報(bào)告說(shuō)她的手指關(guān)節(jié)撞到了桌角上，并且這一創(chuàng)傷令她的皮膚裂開(kāi)了一道血口。通過(guò)施用如實(shí)例2所述的角蛋白-聚乙二醇組合物，裂傷在24小時(shí)內(nèi)愈合/穩(wěn)定，并且在關(guān)節(jié)/皮膚活動(dòng)時(shí)沒(méi)有再出血。一個(gè)月后，皮膚愈合而沒(méi)有留下疤痕。在同一周，她手指上還有沒(méi)有經(jīng)過(guò)處理的第二個(gè)傷口。在第二個(gè)位置上仍能夠看到疤痕。因此，本發(fā)明的組合物預(yù)防了疤痕。

實(shí)例8

最初獸醫(yī)用口服抗生素和局部軟膏處理一只狗的前肢上的傷口2周，沒(méi)有改善。不幸的是，狗還患上了腹瀉，并且過(guò)度舔舐接受了兩種抗生素治療的傷口。經(jīng)過(guò)一周“沖洗期”后，每天清潔傷口，然后施用如實(shí)例2所述的角蛋白-聚乙二醇組合物，每天1次，持續(xù)3天。不覆蓋傷口。狗不再受治療煩擾。一個(gè)月后，傷口消失了，毛長(zhǎng)出來(lái)了。

實(shí)例9

一只狗(長(zhǎng)期受到皮膚干燥的煩擾，類似于特應(yīng)性皮炎的癥狀，并且不斷地搔抓自己)用清潔溶液浸洗，然后用如實(shí)例1所述的在局部配制溶液中的角蛋白聚乙二醇組合物浸洗。狗主人注意到狗的搔抓明顯減少，并且毛皮狀況變得柔軟、光滑和蓬松。用如實(shí)例1所述的在局部制劑中的樣品角蛋白-聚乙二醇組合物每隔2周或3周浸洗和調(diào)理狗，持續(xù)3個(gè)月。沒(méi)有觀察到不良影響，并且搔抓消退。