本發(fā)明涉及一種維甲酸多藥共遞送納米粒及其作為腫瘤治療藥物的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1988年，我國(guó)學(xué)者成功應(yīng)用全反式維甲酸(ATRA)對(duì)急性早幼粒細(xì)胞性白血病進(jìn)行分化治療，使急性早幼粒細(xì)胞白血病的緩解率由傳統(tǒng)化療的46％左右提升至95％左右。由此可見(jiàn)，分化治療可能是根治惡性腫瘤的一個(gè)突破口。然而，目前在臨床上，維甲酸僅用于治療急性早幼粒細(xì)胞白血病，而并未用于其它惡性腫瘤的分化治療。雖然在細(xì)胞水平，維甲酸及其衍生物的確能誘導(dǎo)一些實(shí)體瘤細(xì)胞分化與凋亡，但是維甲酸對(duì)這些腫瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)分化作用十分有限，并且，很多腫瘤細(xì)胞，包括急性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞也對(duì)維甲酸出現(xiàn)了不同程度的耐藥。如果這種耐藥問(wèn)題得以解決，就為維甲酸應(yīng)用于其它惡性腫瘤的分化治療攻破了第一道屏障。

早期研究發(fā)現(xiàn)，組蛋白去乙?；敢种苿?duì)急性粒細(xì)胞白血病的維甲酸耐受具有逆轉(zhuǎn)作用；近期研究表明，全反式維甲酸與組蛋白去乙酰化酶抑制劑聯(lián)合應(yīng)用也對(duì)其他腫瘤細(xì)胞，例如成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞產(chǎn)生抑制生長(zhǎng)的作用。13-順式維甲酸與組蛋白去乙酰化酶抑制劑聯(lián)合應(yīng)用治療實(shí)體瘤已有一期臨床報(bào)道，并取得了很好的療效。2014年，Cancer Research上的一篇文章從另一個(gè)角度揭示了維甲酸對(duì)很多其他惡性腫瘤療效甚微的原因：星形細(xì)胞上調(diào)基因1(AEG-1)的過(guò)表達(dá)通過(guò)多種途徑阻斷了維甲酸的信號(hào)通路。AEG-1在胰腺癌、肺癌、骨肉瘤、胃癌等多種實(shí)體瘤組織中過(guò)表達(dá)，極有可能是阻礙維甲酸對(duì)這些腫瘤組織誘導(dǎo)分化的重要環(huán)節(jié)。

維甲酸、組蛋白去乙?；敢种苿┮约癆EG-1抑制劑聯(lián)用，構(gòu)成以維甲酸為核心，多種藥物輔助增效的多藥體系，將有可能大幅提高實(shí)體瘤對(duì)維甲酸的敏感性，從而為維甲酸誘導(dǎo)實(shí)體瘤分化凋亡的臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。如果利用納米材料對(duì)腫瘤組織的被動(dòng)靶向性，將此維甲酸多藥體系制成納米粒，其療效可能進(jìn)一步提高。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)目前實(shí)體瘤對(duì)維甲酸耐受等問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種維甲酸多藥共遞送納米粒的配方及制備方法，并將其應(yīng)用于惡性腫瘤的治療。

該配方搭配合理，各藥物間協(xié)同作用機(jī)制明確，制備方法簡(jiǎn)便易行，所得納米材料具有較高的穩(wěn)定性及很好的抗腫瘤活性，是一種良好的抗腫瘤藥物制劑。

本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：

1.一種維甲酸多藥共遞送納米粒溶液，除水溶劑外，此納米粒溶液還包含以下溶質(zhì)成分，溶質(zhì)成分的質(zhì)量組成為：維甲酸或其異構(gòu)體1％-20％；組蛋白去乙?；敢种苿?.5％-25％；哌立福辛0.5％-25％；基質(zhì)0％-90％，乳化劑0％-90％，助溶劑0％-10％。

2.技術(shù)方案1所述的納米粒，其制備方法由以下步驟組成：

(1)將維甲酸、組蛋白去乙?；敢种苿⑦吡⒏Ｐ?、乳化劑、基質(zhì)、助溶劑溶于適量有機(jī)溶劑；

(2)將步驟(1)所制得的溶液在高速攪拌下加至水中，制得納米粒；

(3)將步驟(2)所制得的納米粒以透析、超濾、蒸發(fā)、冷凍干燥或噴霧干 燥的方法除去有機(jī)溶劑、部分或全部水；得納米?；蚣{米粒水溶液；

(4)納米?；蚣{米粒水溶液放入水中，調(diào)成所需維甲酸多藥共遞送納米粒溶液。

3.技術(shù)方案1所述的維甲酸或其異構(gòu)體是全反式維甲酸、9-順式維甲酸、13-順式維甲酸中的一種或二種以上的任意比例組成的混合物。

4.技術(shù)方案1所述的組蛋白去乙?；敢种苿┦欠⒅Z他、西達(dá)本胺之中的一種或二種以任意比例組成的混合物。

5.技術(shù)方案1所述的基質(zhì)是聚己內(nèi)酯、聚己內(nèi)酯-聚乙二醇嵌段共聚物、聚乳酸、聚羥基乙酸、乳酸-羥基乙酸共聚物中的一種或二種以上的任意比例組成的混合物。

6.技術(shù)方案1所述的乳化劑是卵磷脂、豆磷脂、泊洛沙姆188、聚氧乙烯蓖麻油、吐溫80中的一種或二種以上的任意比例組成的混合物。

7.技術(shù)方案1所述的助溶劑是乙二胺、乙醇胺中的一種或二種以任意比例組成的混合物。

8.技術(shù)方案2中，步驟(1)所述有機(jī)溶劑是乙醇、丙酮、四氫呋喃中的一種或二種以上的任意比例組成的混合物。

9.技術(shù)方案1所述納米粒溶液作為腫瘤治療藥物的應(yīng)用。

配方中的基質(zhì)、乳化劑、助溶劑為輔料，起到穩(wěn)定納米粒及調(diào)節(jié)粒徑的作用；組蛋白去乙酰化酶抑制劑、哌立福辛作為輔助藥物，用于逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞對(duì)維甲酸類藥物的耐受；維甲酸及其異構(gòu)體作為主藥，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化與凋亡。各個(gè)成分相輔相成，協(xié)同發(fā)揮作用。本發(fā)明藥物搭配合理，作用機(jī)制明確，制備工藝簡(jiǎn)單，具有腫瘤被動(dòng)靶向性，有望應(yīng)用于腫瘤治療領(lǐng)域。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

將30.0mg全反式維甲酸、26.4mg伏立諾他、46.2mg哌立福辛、1.00g泊洛沙姆188、7μl乙二胺溶于20ml熱乙醇。在高速攪拌下，將上述乙醇溶液緩緩加入80ml水中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，得分散于水中的納米粒。

實(shí)施例2

將300mg 9-順式維甲酸、26.4mg伏立諾他、46.2mg哌立福辛、400mg聚己內(nèi)酯、1.60g吐溫80溶于由10ml乙醇及10ml丙酮組成的混合物中。在高速攪拌下，將上述溶液緩緩加入80ml水中，透析除去丙酮及乙醇，得分散于水中的納米粒。

實(shí)施例3

將30mg全反式維甲酸、105.6mg伏立諾他、46.2mg哌立福辛、300mg聚己內(nèi)酯-聚乙二醇嵌段共聚物溶于由10ml乙醇及10ml丙酮組成的混合物中。在高速攪拌下，將上述溶液緩緩加入80ml水中，先在真空下低溫蒸發(fā)除去大部分丙酮及乙醇，隨后冷凍干燥，得納米粒粉末。

實(shí)施例4

將30mg全反式維甲酸、52.8mg伏立諾他、23.1mg哌立福辛、200mg卵磷脂、100mg泊洛沙姆溶于20ml熱乙醇，在高速攪拌下，將上述乙醇溶液緩緩加入80ml水中，真空下低溫蒸發(fā)除去大部分乙醇，得分散于水中的納米粒。

實(shí)施例5

將30mg全反式維甲酸、39.0mg西達(dá)本胺、46.2mg哌立福辛、400mg 聚己內(nèi)酯、1.60g吐溫80溶于由10ml乙醇及10ml丙酮組成的混合物中。在高速攪拌下，將上述溶液緩緩加入80ml水中，透析除去丙酮及乙醇，得分散于水中的納米粒。

實(shí)施例6

將300mg全反式維甲酸、16.5mg伏立諾他、28.9mg哌立福辛、300mg聚己內(nèi)酯、900mg泊洛沙姆溶于由10ml乙醇及10ml丙酮組成的混合物中。在高速攪拌下，將上述溶液緩緩加入80ml水中，透析除去丙酮及乙醇，并重新稀釋到100ml，得分散于水中的納米粒溶液。

另將MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞以8000cells/well的密度接種于96孔板中，孵育24h以使細(xì)胞貼壁。將上述納米粒溶液以1640培養(yǎng)基稀釋390倍，與細(xì)胞共培養(yǎng)48h，同時(shí)以不含藥物的空白納米粒作參照，以MTT法計(jì)算增殖率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，上述納米粒能明顯抑制MDA-MB-231細(xì)胞的增殖，具有較好的抗腫瘤效果。