本發(fā)明總體涉及治療化合物領域。更具體地，本發(fā)明涉及特定的二烷基-膦酰基-烷烴，即在本文中稱為“DAPA-2-5”的1-二仲丁基膦?；焱椋布?-[(二仲丁基)-膦?；鵠-戊烷。令人驚訝地并且出乎意料地，DAPA-2-5能夠選擇性地治療(例如，抑制)來自非角化性復層上皮(non-keratinizngstratifiedepithelium)(NKSE)的感覺不適，即，不存在刺痛、刺激、或使人不愉快的味道的問題，例如，如利用結構上類似的化合物所發(fā)現(xiàn)的(問題)。如在本文中描述的，DAPA-2-5能夠在非角化性體表面(包括，例如口咽表面、食管表面、以及肛門與生殖器(anogenital)表面)上引起動態(tài)冷卻感覺，其不會伴隨有刺痛或其他使人不愉快的感覺。因此，例如，DAPA-2-5可用于治療包括以下的障礙(例如，疾病)：來自非角化性復層上皮(NKSE)組織的感覺不適、上呼吸消化道不適(包括呼吸上皮的非角化性假復層上皮組織)、口咽不適、食管不適、喉嚨刺激、咳嗽、胃灼熱、胸痛、肝門與生殖器不適、或非角化性復層上皮(NKSE)組織炎癥。本發(fā)明還涉及包含DAPA-2-5的藥物組合物，以及DAPA-2-5和DAPA-2-5組合物在例如治療中和作為用于鑒別診斷的藥劑的用途。
背景技術：
：：在本文中引用了大量出版物以更全面地描述和公開本發(fā)明以及本發(fā)明所屬領域的現(xiàn)狀。這些出版物中的每一個都通過引用以其全部并入本公開，以達到就像每個單獨的出版物具體地、單獨地表明通過引用并入的相同程度。貫穿本說明書，包括所附權利要求，除非上下文另外要求，否則將單詞“包括”及變形如“包含”和“含有”理解為暗示包含所述整體或步驟或者整體或步驟的組，但不排除任何其他整體或步驟或者整體或步驟的組。必須指出的是，除非上下文另外清楚地規(guī)定，否則如在說明書和所附的權利要求書中使用的，單數(shù)形式“一個”、“一種”和“該”包括復數(shù)指示物。因此，例如，提及“一種藥物載體”包括兩種或更多種這類載體的混合物等。在本文中，通常以從“約”一個特定值和/或至“約”另一個特定值表示范圍。當表示這種范圍時，另一個實施方式包括從一個特定值和/或至其他特定值。類似地，當通過使用先行詞“約”將值表示為近似值時，將理解的是，該特定值形成另一個實施方式。本公開包括在理解本發(fā)明中可能有用的信息。不承認的是，在本文中提供的任何信息是現(xiàn)有技術或與目前所請求保護的發(fā)明相關，或任何明確或暗示引用的出版物是現(xiàn)有技術。熱舒適、感覺不適、以及傷害感受“熱舒適”是在人類工程學、服裝業(yè)、工程學、以及建筑學中發(fā)展良好的概念。該術語是指其中穿著正常量的衣服的人感覺既不太冷又不太熱的狀況。熱舒適對于一個人的幸福感和生產(chǎn)力是重要的。當空氣溫度、濕度、以及空氣運動在稱為“舒適區(qū)”的指定范圍[對于UK和USA是24℃至27℃]內(nèi)時，實現(xiàn)熱舒適。由Bedford和ASHRAE[美國加熱冷凍及空調(diào)工程師協(xié)會]開發(fā)了熱舒適的標準化描述符。冷卻等級的表來自Auliciems和Szokolay：ThermalComfort,2007，如在以下表中示出的。已經(jīng)在感覺量表上添加了數(shù)字-4，以描述寒冷或刺痛、冰冷或“北極的冷”。針對具有角蛋白層和受交感神經(jīng)神經(jīng)支配并且響應冷而收縮的血管的皮膚狀況，開發(fā)了熱舒適的概念。當環(huán)境溫度是23℃時，腳和手的皮膚溫度例如將分別下降至25℃和30℃，但直腸溫度和口腔溫度從環(huán)境的23℃至34℃保持恒定在36℃至37℃。對于非角化性組織，如口腔粘膜、咽粘膜、或者食管或直腸粘膜，內(nèi)部血流提供了熱，并且組織溫度保持恒定。因此，利用物理方法如冰或冷液體，難以在這些組織中維持排熱感覺?？梢詫Ω惺芏x為傷害性刺激的神經(jīng)編碼和處理。在此特別感興趣的是周圍地起作用并且能夠局部施加的抗感受傷害性藥物。通過“抗感受傷害性(anti-nociceptive)”，意指藥物抑制傷害性刺激的心理和生理感知和對于傷害性刺激的反應。通過“周圍地(末梢地，peripherally)”，意指藥物作用的主要位點位于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的外部，即，腦和脊髓的外部。目前，存在周圍地起作用以削弱傷害性(有害的)信號至中樞神經(jīng)系統(tǒng)的傳遞的兩大類抗感受傷害性藥物。一類是在周圍神經(jīng)纖維的鈉通道上起作用以抑制傷害性信號朝向中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)傳遞的局部麻醉劑如普魯卡因和利多卡因。另一類是抑制某些前列腺素的合成的藥劑如阿司匹林和布洛芬。當在損傷或炎癥期間由組織釋放時，這些前列腺素降低了響應于傷害性刺激的感覺神經(jīng)纖維的放電(firing)閾值。又一類抗感受傷害性藥物是麻醉鎮(zhèn)痛劑，其不是通過周圍作用(末梢作用)抑制疼痛，而是直接作用在腦和脊髓中的神經(jīng)元件(neuronalelement)上。由查爾斯謝靈頓爵士定義為“強制保護性反射的心理輔助(psychicaladjunctofanimperativeprotectivereflex)”的疼痛由稱為多形態(tài)C纖維的無髓鞘小直徑感覺纖維的排出增多激活。將疼痛分類為傷害性的或神經(jīng)性的。傷害性疼痛由細胞損傷引起，而神經(jīng)性疼痛由傳輸疼痛信號的神經(jīng)纖維的損害引起。存在產(chǎn)生疼痛的多種情況，最常見的是，例如創(chuàng)傷、炎癥、以及免疫紊亂?？赡馨殡S疼痛的感覺是刺激、瘙癢(癢)、灼熱感(感覺遲鈍)、以及不舒服和不滿的感覺。如在本文中使用的，將傷害感受的心理輔助一起分類為“感覺不適”。存在四種基本類型的動物組織：結締組織、肌肉組織、神經(jīng)組織、以及上皮組織。上皮細胞排列在整個身體器官的管道、空腔和表面。當層是一個細胞厚時，將其稱為單層上皮。如果存在兩層或更多層細胞時，將其稱為復層上皮。復層上皮主要由鱗狀(扁平)細胞和一些立方細胞(cuboidalcell)組成。在歷史上，將復層上皮劃分為兩大類：角化復層上皮和非角 化復層上皮。角化上皮如皮膚的表皮具有由堅韌和不透水的角蛋白組成的死細胞的外層[角質(zhì)層]。角蛋白還覆蓋了舌頭的絲狀乳頭。相比之下，非角化性復層上皮不包含顯著的角蛋白層，并且主要存在于以下之上：鼻腔內(nèi)層(lining)、口腔部分如內(nèi)唇、咽表面、食管表面、呼吸樹內(nèi)層、以及肛門與生殖器(anogenital)表面。針對角蛋白覆蓋組織如指甲、頭發(fā)和腳，已經(jīng)傳統(tǒng)地保留了術語“角質(zhì)化上皮(角化上皮，cornifiedepithelia)”。與非角化性組織相比，角化性組織較好地耐損傷。非角化性上皮表面必須通過腺狀(漿液狀和粘液性)分泌物保持濕潤，以避免干燥。角蛋白層是藥物接近嵌入在角蛋白下面的組織中的神經(jīng)元感受野(receptivefield)的巨大障礙。由于該障礙不存在或減小，因此非角化性上皮表面對感覺劑更加敏感。近年來，已經(jīng)意識到，角蛋白是蛋白質(zhì)家族，并且角蛋白絲形成所有上皮細胞的細胞骨架的組成部分。因此，術語“非角化復層上皮(non-keratinizedstratifiedepithelia)”不再準確并且可能最終過時。此時，優(yōu)選的術語“非角化性復層上皮(non-keratinizingstratifiedepithelia)”暗示這些細胞不會形成外部角蛋白層。Bragulla和Homberger[Structureandfunctionsofkeratinproteinsinsimple,stratified,keratinizedandcornifiedepithelia.JournalofAnatomy,214:516-59,2009]已經(jīng)提出將復層上皮分為“角質(zhì)化上皮”和“角化上皮”，但尚未清楚是否接受了這種新術語。在本申請中，術語“角化性復層上皮”和“非角化性復層上皮”將用于在兩類組織之間進行區(qū)分。在本申請的名稱中使用了術語“非角化復層上皮”，以保持與傳統(tǒng)命名法一致。目前，不存在對于來自非角化性復層上皮(NKSE)的感覺不適具有強功效的局部抗感受傷害性(疼痛抑制劑)化合物。這對于來自口腔、咽表面、以及食管表面的感覺不適尤其如此。有時，將局部麻醉劑化合物如利多卡因用于來自肛門與生殖器表面(例如，針對外陰陰道疼痛)和來自咽(例如，針對咽炎)的疼痛和不適，但這些藥物能夠引起超敏反應，并且具有使組織對觸摸和壓力麻木的不期望的性能。由于這類藥物抑制上皮細胞生長，因此延長使用是危險的。非甾體抗炎化合物(NSAID)(例如，酮咯酸)不會對由肛門與生殖器或口腔NKSE引起的疼痛起作用。通過減少炎癥，抗炎甾體能夠減輕傷害感受，但抗感受傷害性作用不是立即開始的。在用于直腸及肛門不適的藥膏中，薄荷醇具有一些有限的止痛作用。在錠劑和糖果中，薄荷醇對于疼痛或喉嚨刺激以及對于咳嗽具有一些益處。在角化皮膚上，能夠施加高濃度的薄荷醇(例如，按重量計大于2％)，而不會直接刺激皮膚。例如，能夠?qū)粗亓坑?％薄荷醇的局部貼劑(例如，IcyHotMedicatedPatch；Chattem,Inc.)施加至軀干的皮膚上，以減輕肌肉疼痛。然而，在非角化性上皮上，薄荷醇的刺激作用限制了其在口腔中的應用，例如，每單位包含多于8mg薄荷醇的錠劑具有冷人厭惡的味道，高濃度下的薄荷醇刺激鼻膜，并且吸入薄荷醇將增加鼻分泌物。Watson等人[“CompoundswiththeMentholCoolingEffect”,J.Soc.Cosmet.Chem.29:185-200,1978]已經(jīng)描述了對于角化上皮如皮膚和舌頭具有生理學上的冷卻效果的多種薄荷醇相關化合物。[Rowsell等人“Phosphineoxideshavingaphysiologicalcoolingeffect”,USPatentNumber4,070,496,1978]描述了具有“生理學上的冷卻作用”的三烷基氧化膦。由于大多數(shù)測試在舌頭上進行并且舌頭是角化的，因此其中描述的研究涉及影響角化表面上的感覺過程的化合物。但沒有清楚地識別或系統(tǒng)地研究這些分子對于非角化性組織的抗感受傷害性作用。對于能夠選擇性地抑制由非角化性復層上皮(NKSE)引起的感覺不適，而不存在令人厭惡的味道、刺激、或毒性問題的新類別的藥理學藥劑，存在需要。如果考慮由NKSE引起的感覺，與角化皮膚相比，存在明顯的性質(zhì)上的差別。注意，例如，在暴露于乙醇氣體之后來自眼睛的刺痛和疼痛；鼻膜與水的反應；喉嚨中紅辣椒的窒息感；以及口中反胃酸的酸味和辛辣味。這些感覺明顯不同于在皮膚上所能夠感受到的。在此，報告來自NKSE的有害信號的神經(jīng)末梢主要起源于腦神經(jīng)如三叉神經(jīng)(5th)、舌咽神經(jīng)(9th)、和迷走神經(jīng)(10th)，以及來自NKSE的一些脊髓感覺傳入神經(jīng)，但不是來自皮膚或舌頭。如在本文中討論的，設計用于減輕來自NKSE的感覺不適的藥劑的效果明顯不同于設計用于角化皮膚的藥劑的效果。Wei先前已經(jīng)描述了相對于冷卻角化人中皮膚，選擇性地冷卻眼睛表面的兩種化合物(均是對薄荷烷甲酰胺氨基酸酯(p-menthanecarboxamide aminoacidester)衍生物)[Wei,Sensory/coolingagentsforskindiscomfort.JournalSkinBarrierResearch.14:5-12,2012,和US084226463,2013年4月23日]。這些觀察提供了在NKSE上能夠?qū)崿F(xiàn)選擇性抗傷害感受的第一證據(jù)。這些化合物產(chǎn)生在ASHRAE標準上對應于-1[溫和涼爽]、-2[涼爽]、以及-3[冷]的排熱感覺。“舒適”是優(yōu)化的感覺輸入的結果，并且還能夠?qū)⑨槍腔つw的熱舒適概念應用至非角化性組織。在炎癥中，損傷組織中的主要癥狀是熱[灼熱]、紅[紅色]、以及疼痛[痛]的感覺，并且可以預期的是排熱感覺將減輕感覺不適。因此，在不存在組織溫度降低的情況下，可以使用刺激排熱感覺的化學品，以產(chǎn)生“舒適”或減輕不適。在此描述了關于具有在NKSE上獲得舒適或減輕不適所必須的特有期望感覺的分子設計的進一步改進。特別地，如果候選化合物在NKSE表面上引起“動態(tài)涼爽”而不存在刺激，即，ASHRAE感覺在-2和-3之間，那么其是治療來自該組織的感覺不適的良好候選物。具有期望性質(zhì)并且選擇用于該應用的特殊化合物是DAPA-2-5。已知的氧化膦1-二烷基膦?；闊N，即，1-[(二烷基)-膦?；鵠-烷烴，[碳的總數(shù)≤15]是僅需要幾個[1至3]合成步驟的類溶劑分子。也將它們稱為三烷基氧化膦，但現(xiàn)在優(yōu)選的術語是二烷基-膦酰基-烷烴[在此縮寫為DAPA]。Rowsell等人，1978，描述了對于皮膚以及對于身體(尤其是鼻子、口、喉嚨和胃腸道)粘膜具有生理學上的冷卻效果的一系列氧化膦。參見，例如其中第3欄和第4欄中的表。該表中的第18項是1-二仲丁基膦酰基戊烷，即，1-[(二仲丁基)-膦?；鵠-戊烷，在本文中稱為DAPA-2-5。Wei[Ophthalmiccompositionsandmethodfortreatingeyediscomfortandpain，US專利公開號2005/0059639A1,2005]描述了某些氧化膦的用途以及通過給予在眼用溶液中包含那些化合物的滴眼液來治療眼睛不適。參見，例如其中第4頁上的表1。該表中的第13項是1-二仲丁基膦?；焱椋诒疚闹蟹Q為DAPA-2-5。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明涉及特定的二烷基-膦?；?烷烴，即在本文中稱為“DAPA-2-5”的1-二仲丁基膦?；焱?，即，1-[(二仲丁基)-膦?；鵠-戊烷。令人驚訝地并且出乎意料地，DAPA-2-5能夠選擇性地治療(例如，抑制)來自非角化性復層上皮(NKSE)的感覺不適，即，不存在刺痛、刺激、或令人不愉快的味道的問題，例如，如利用結構上類似的化合物所發(fā)現(xiàn)的(問題)。如在本文中描述的，DAPA-2-5能夠在非角化性體表面(包括，例如口咽表面、食管表面、以及肛門與生殖器表面)上引起動態(tài)冷卻感覺，其不會伴隨有刺痛或其他使人不愉快的感覺。因此，例如，DAPA-2-5可用于治療包括以下的障礙(例如，疾病)：來自非角化性復層上皮(NKSE)組織的感覺不適、上呼吸消化道不適、口咽不適、食管不適、喉嚨刺激、咳嗽、胃灼熱、胸痛、肝門與生殖器不適、或非角化性復層上皮(NKSE)組織炎癥。此外，可以將其用作用于非心源性疼痛相對心源性疼痛的鑒別診斷劑。本發(fā)明還涉及尤其用作具有礦物賦形劑的制劑的包含DAPA-2-5的藥物組合物，以及DAPA-2-5和DAPA-2-5組合物例如在治療中的用途。本發(fā)明的一個方面涉及特定的二烷基-膦?；?烷烴，即用在治療(例如，選擇性治療)如在本文中描述的某些障礙(例如，疾病)的方法中的在本文中稱為“DAPA-2-5”的1-二仲丁基膦酰基戊烷。本發(fā)明的另一個方面涉及DAPA-2-5在制備用于如在本文中描述的治療(例如，選擇性治療疾病)的藥物中的用途。本發(fā)明的另一個方面涉及治療(例如，選擇性治療)如在本文中描述的某些障礙(例如，疾病)的方法，包括：將治療有效量的DAPA-2-5優(yōu)選以藥物組合物的形式給予需要治療的患者。本發(fā)明的另一個方面涉及優(yōu)選以混合有無機礦物賦形劑的藥物組合物且以口腔溶解片劑(口溶片，orallydissolvingtablet)的合適壓制狀態(tài)提供、用于局部遞送至上消化道并且包含如在本文中描述的(a)DAPA化合物的制劑組合物。本發(fā)明的另一個方面涉及包含以下的試劑盒：(a)如在本文中描述的DAPA-2-5，作為用于非心源性疼痛相對心源性疼痛的鑒別診斷的工具；以及(b)使用說明，例如，關于如何給藥和使用化合物的書面說明。本發(fā)明的另一個方面涉及包含以下的試劑盒：(a)如在本文中描述的DAPA-2-5，優(yōu)選地，以藥物組合物并且在合適的容器中和/或用合適的包裝提供；以及(b)使用說明，例如，關于如何給予化合物的書面說明。如本領域技術人員將理解的，本發(fā)明的一個方面的特征和優(yōu)選實施方式也將涉及本發(fā)明的其他方面。附圖說明圖1是由利用TRPM8(瞬時型感受器電位蛋白M8，transientreceptorpotentialM8)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的細胞引起的測試化合物的熒光(相對熒光單位：％最大值)作為針對DAPA-2-4(圓形)、DAPA-2-5(正方形)、DAPA-2-6(倒三角形)、DAPA-2-7(菱形)、以及DAPA-2-8(星形)中的每一種測試化合物的濃度(μM)的對數(shù)的函數(shù)的曲線圖。圖2示出了用于抑制麻醉的大鼠爪中的熱引起的水腫的DAPA化合物的相對活性。相對于對側(cè)爪，DAPA-2-5暴露顯著將熱引起的水腫抑制了12.9％(P<0.01)。利用測試的其他DAPA化合物沒有看到該效果，并且其表明DAPA-2-5具有抗炎性能。圖3A-3D示出了在將0.1N的HCl灌注在口咽中之后，從麻醉大鼠的下頜舌骨肌記錄的肌動電流圖(肌電圖)(EMG)活動的振幅(mV)的圖。吞咽動作由酸刺激物引起。這些反應由在前灌注的DAPA-2-5抑制。圖3A：在酸之后47次吞咽。圖3B：0.4mg/mL的DAPA-2-5將酸反應減少為3min內(nèi)3次吞咽。圖3C：在DAPA-2-5之后，抑制持續(xù)了8min，在酸刺激及之后，具有9次吞咽。圖3D：在DAPA-2-5之后的22min，反應逐漸恢復，具有27次吞咽。圖4示出了各種DAPA化合物用于抑制酸誘導的吞咽[IC50]和用于TRPM8受體激活[EC50]的相對功效的比較。相對功效與IC50值和EC50值的倒數(shù)成比例(正比)。圖5A-5B示出了在第一跡線圖5A(“野生型”)中說明由以1mg/mL傾注的DAPA-2-5引起的離體(分離的)小鼠迷走神經(jīng)的辣椒素誘導的去極化的抑制、以及在第二跡線圖5B(“TRPM8KO”)中說明由以1mg/mL傾注的DAPA-2-5引起的離體TRPM8KO小鼠迷走神經(jīng)的抑制的顯著缺乏的極化跡線。圖6示出了暴露于檸檬酸霧的豚鼠的咳嗽頻率。暴露于1M的檸檬酸溶液的豚鼠(N＝20)具有每10min觀察期間19.9±3.9次咳嗽的咳嗽頻率。一周后，遞送至口咽區(qū)域中的鹽水不會影響咳嗽頻率(18.0±4.0次咳嗽)，但以75μL/動物遞送的鹽水中的2mg/mL的DAPA-2-5抑制了咳嗽(6.7±1.6次咳嗽，P<0.01曼-惠特尼U檢驗(Mann-WhitneyUtest))。具體實施方式實施方式1：1-二仲丁基膦酰基戊烷在制備用于治療來自非角化性復層上皮組織的感覺不適的藥物中的用途。實施方式2：根據(jù)實施方式1所述的用途，其中，所述非角化性復層上皮組織位于上呼吸消化道表面上。實施方式3：根據(jù)實施方式1所述的用途，其中，所述非角化性復層上皮組織位于口腔表面上、呼吸上皮表面上、鼻腔膜表面上、鼻內(nèi)膜表面上、口咽表面上，或咽表面上。實施方式4：根據(jù)實施方式1所述的用途，其中，位于咽表面上的來自非角化性復層上皮組織的所述感覺不適由吞咽困難引起。實施方式5：根據(jù)實施方式1所述的用途，其中，位于咽表面上的來自非角化性復層上皮組織的所述感覺不適由胃內(nèi)容物反流引起。實施方式6：根據(jù)實施方式1所述的用途，其中，位于咽表面上的來自非角化性復層上皮組織的所述感覺不適由喉咽反流引起。實施方式7：根據(jù)實施方式1所述的用途，其中，位于咽表面上的來自非角化性復層上皮組織的所述感覺不適由胃食管反流引起。實施方式8：根據(jù)實施方式1所述的用途，其中，位于咽表面上的來自非角化性復層上皮組織的所述感覺不適由打嗝引起。實施方式9：根據(jù)實施方式1所述的用途，其中，位于咽表面上的來自非角化性復層上皮組織的所述感覺不適由咽炎引起。實施方式10：根據(jù)實施方式1所述的用途，其中，位于咽表面上的來自非角化性復層上皮組織的所述感覺不適由扁桃體炎引起。實施方式11：根據(jù)實施方式1所述的用途，其中，位于咽表面上的來自非角化性復層上皮組織的所述感覺不適由粘膜炎引起。實施方式12：根據(jù)實施方式1所述的用途，其中，位于咽表面上的來自非角化性復層上皮組織的所述感覺不適由過敏癥引起。實施方式13：根據(jù)實施方式1所述的用途，其中，位于咽表面上的來自非角化性復層上皮組織的所述感覺不適由咳嗽引起。實施方式14：根據(jù)實施方式1所述的用途，其中，位于咽表面上的來自非角化性復層上皮組織的所述感覺不適由咽表面對刺激物的超敏反應引起。實施方式15：根據(jù)實施方式1所述的用途，其中，所述非角化性復層上皮組織位于食管表面上。實施方式16：根據(jù)實施方式1所述的用途，其中，位于食管表面上的來自非角化性復層上皮組織的所述感覺不適由胃內(nèi)容物反流引起。實施方式17：根據(jù)實施方式1所述的用途，其中，位于食管表面上的來自非角化性復層上皮組織的所述感覺不適由胃食管反流引起。實施方式18：根據(jù)實施方式1所述的用途，其中，所述非角化性復層上皮組織位于肛門與生殖器表面上。實施方式19：1-二仲丁基膦?；焱樵谥苽溆糜谥委熒虾粑啦贿m的藥物中的用途。實施方式20：根據(jù)實施方式19所述的用途，其中，所述上呼吸消化道不適由氣道或咽中的粘液、痰、或炎性滲出物引起。實施方式21：根據(jù)實施方式19所述的用途，其中，所述上呼吸消化道不適由與感染有關的氣道或咽中的粘液、痰、或炎性滲出物引起。實施方式22：根據(jù)實施方式19所述的用途，其中，所述上呼吸消化道不適由與哮喘有關的氣道或咽中的粘液、痰、或炎性滲出物引起。實施方式23：根據(jù)實施方式19所述的用途，其中，所述上呼吸消化道不適由與阻塞性肺疾病有關的氣道或咽中的粘液、痰、或炎性滲出物引起。實施方式24：根據(jù)實施方式19所述的用途，其中，所述上呼吸消化道不適與鼻炎、鼻竇炎、鼻充血、鼻堵塞、勉力呼吸、呼吸困難、打鼾、或睡眠呼吸暫停有關。實施方式25：1-二仲丁基膦?；焱樵谥苽溆糜谥委熝什贿m的藥物中的用途。實施方式26：根據(jù)實施方式25所述的用途，其中，所述咽不適由胃內(nèi)容物反流引起。實施方式27：根據(jù)實施方式25所述的用途，其中，所述咽不適由喉咽反流引起。實施方式28：根據(jù)實施方式25所述的用途，其中，所述咽不適由胃食管反流引起。實施方式29：根據(jù)實施方式25所述的用途，其中，所述咽不適由打嗝引起。實施方式30：根據(jù)實施方式25所述的用途，其中，所述咽不適由咽炎引起。實施方式31：根據(jù)實施方式25所述的用途，其中，所述咽不適由扁桃體炎引起。實施方式32：根據(jù)實施方式25所述的用途，其中，所述咽不適由粘膜炎引起。實施方式33：根據(jù)實施方式25所述的用途，其中，所述咽不適由過敏癥引起。實施方式34：根據(jù)實施方式25所述的用途，其中，所述咽不適由咳嗽引起。實施方式35：根據(jù)實施方式25所述的用途，其中，所述咽不適由咽表面對刺激物的超敏反應引起。實施方式36：1-二仲丁基膦?；焱樵谥苽溆糜谥委熓彻懿贿m的藥物中的用途。實施方式37：根據(jù)實施方式36所述的用途，其中，所述食管不適與胃內(nèi)容物反流有關。實施方式38：根據(jù)實施方式36所述的用途，其中，所述食管不適與胃食管反流有關。實施方式39：1-二仲丁基膦?；焱樵谥苽溆糜谥委熀韲荡碳さ乃幬镏械挠猛?。實施方式40：1-二仲丁基膦?；焱樵谥苽溆糜谥委熆人缘乃幬镏械挠猛?。實施方式41：1-二仲丁基膦?；焱樵谥苽溆糜谥委煔獾乐械恼骋悍置谶^多的藥物中的用途。實施方式42：1-二仲丁基膦?；焱樵谥苽溆糜谥委熚缸茻岬乃幬镏械挠猛?。實施方式43：1-二仲丁基膦?；焱樵谥苽溆糜谥委熗萄世щy的藥物中的用途。實施方式44：1-二仲丁基膦?；焱樵谥苽溆糜谥委熜赝吹乃幬镏械挠猛尽嵤┓绞?5：1-二仲丁基膦?；焱樵谥苽溆糜谥委煾亻T與生殖器不適的藥物中的用途。實施方式46：1-二仲丁基膦?；焱樵谥苽溆糜谥委煼墙腔詮蛯由掀そM織炎癥的藥物中的用途。實施方式47：一種口腔崩解片劑，其選擇性地用于治療來自非角化性復層上皮組織的感覺不適，所述口腔崩解片劑包含：從約0.5mg至8mg的活性劑，所述活性劑選自由以下組成的組：1-二仲丁基膦?；焱?、1-二仲丁基膦?；和?、1-二仲丁基膦酰基庚烷、以及它們的組合；以及按重量計從約2％至20％的礦物賦形劑。實施方式48：根據(jù)實施方式47所述的口腔崩解片劑，其中，所述活性劑基本上由1-二仲丁基膦酰基戊烷組成。實施方式49：根據(jù)實施方式47所述的口腔崩解片劑，其中，所述口腔崩解片劑重量為約40mg至150mg。實施方式50：根據(jù)實施方式47所述的口腔崩解片劑，其中，所述感覺不適包括咳嗽或喉嚨刺激。實施方式51：根據(jù)實施方式47所述的口腔崩解片劑，其中，所述礦物賦形劑適合于將化合物遞送至上消化道膜上。實施方式52：根據(jù)實施方式47所述的口腔崩解片劑，其中，所述礦物賦形劑是由經(jīng)驗式Al2O3·MgO·2SiO2·xH2O表示的硅酸鋁鎂。實施方式53：根據(jù)實施方式47所述的口腔崩解片劑，其中，所述礦物賦形劑是CaHPO4、噴霧干燥顆粒、無水二堿式磷酸鈣、無水磷酸氫鈣。將薄荷醇用在皮膚上(例如，冰冷貼劑、Ben-Gay油膏)、口中(例如，以糖果和錠劑)、以及鼻子中(例如，Vick的vapo吸入器)以減輕感覺不適，但其對于不具有堅韌的角蛋白覆蓋(即，除皮膚和舌頭之外的組織)的表面的作用受刺激作用和有限的作用時間限制。約三十年前，Watson等人合成了超過1200種化合物，試圖發(fā)現(xiàn)具有比薄荷醇好的性能的冷卻劑[Newcompoundswiththementholcoolingeffect.J.Soc.Cosmet.Chem.29:185-200,1978]。該研究已來，N-烷基-環(huán)烷基-咪唑羧酰胺和N-烷基-烷基-咪唑羧酰胺，WS-3、WS-5和WS-23已上市，并且現(xiàn)今將其用作用于糖果、食物(例如，口香糖)、以及化妝品的添加劑。這些科學家還描述了具有冷卻性能的氧化膦[Rowsell等人，1978]。然而，沒有開發(fā)或商業(yè)化氧化膦。通過將浸漬有已知量的化合物的濾紙(1x1cm)放置在測試患者的舌頭的背面上，Watson等人[美國專利號4,178,459]對志愿者測試了冷卻劑(包括氧化膦)的性能。在30s之后，需要受試者報告存在或不存在冷卻效果。以“閾值，μg”記錄這些數(shù)據(jù)，并且其是指在施加至人類志愿者小組的舌頭平面上時產(chǎn)生冷卻感覺的測試物質(zhì)的閾值量。6個受試者的(-)-薄荷醇的平均閾值是0.25μg，但在個體靈敏度中存在100倍的變化。舌頭表面 角化，并且其對溫度感知相對不敏感。此外，從舌頭的背面檢測的涼爽信號可能與味覺、嗅覺、以及其他變量混淆。如在本文中描述的，在找到最佳候選物以安撫非角化性組織如口、喉嚨、食管、以及肛門與生殖器表面，但不存在刺激特性或不期望特性的目標下，發(fā)明人已經(jīng)再次檢查了已知的氧化膦化合物。目標是找到能夠用作用于藥物的單個藥劑，而不是用于食物或化妝品的另一藥劑的新化學實體。因此，篩選法、生物測定、以及動物模型旨在達到藥物終點和應用，以及旨在用于非角化性的靶表面。令人驚訝地并且出乎意料地，發(fā)現(xiàn)了在本文中稱為DAPA-2-5的一種化合物具有理想的性能組合。研究中的描述如下：●DAPA-2-5在NKSE上引起動態(tài)冷卻感覺而不存在冷不適(研究3)，利用10個其他類似物沒有看到該效果?！馜APA-2-5的動態(tài)冷卻感覺得到充分的延長[10min至15min]，并且留下殘余的抗感受傷害性作用從而具有治療益處。●DAPA-2-5抑制紅辣椒醬對于志愿受試者的喉嚨的刺激作用(研究4)?！窀鶕?jù)DAPA-2-5的TRPM8受體激活效能，尚不能夠預測其不同尋常的性能(研究5)，而是必須通過實驗才能發(fā)現(xiàn)。在EC50[TRPM8效能的測量]和針對大量測試類似物中的NKSE上的抗傷害感受的功效之間，不存在直接關系。●DAPA-2-5選擇性地抑制麻醉動物模型中的熱引起的水腫(研究6)，并且其自身不會刺激炎癥(研究6)，利用結構上相關的類似物沒有看到該效果。●DAPA-2-5有效地并且選擇性地抑制麻醉動物模型中的酸誘導的吞咽(研究8)，該效果明顯地將其與其他結構上相關的類似物區(qū)別開?！馜APA-2-5抑制了離體小鼠迷走神經(jīng)中的辣椒素誘導的去極化(研究9)，以及豚鼠中的檸檬酸酸誘導的咳嗽模型的咳嗽頻率(研究10)。多個測試系統(tǒng)中的這些結果表明，DAPA-2-5表現(xiàn)出不同尋常的選擇性藥物作用。因此，例如，DAPA-2-5選擇性地可用于治療以下的障礙(例如，疾病)：來自非角化性復層上皮(NKSE)組織的感覺不適、上呼吸消化道不適、口咽不適、食管不適、喉嚨刺激、咳嗽、胃灼熱、胸痛、肝門與生殖器不適、或非角化性復層上皮(NKSE)組織炎癥。DAPA化合物本發(fā)明涉及特定化合物，其作為稱為氧化膦的化合物(其具有以下通式)的組的實例，并且更具體地，稱為二烷基-膦?；?烷烴(在本文中稱為“DAPA化合物”)的組的實例(其中，R1、R2以及R3各自是烷基基團)。(O＝)PR1R2R3更具體地，本發(fā)明涉及特定的二烷基-膦酰基-烷烴，即在本文中稱為“DAPA-2-5”的1-二仲丁基膦?；焱椤１景l(fā)明的化合物也可稱為磷酸的衍生物，而不是次膦酸的衍生物，在這種情況下，稱為二烷基-磷?；?烷烴而不是二烷基-膦酰基-烷烴。DAPA-2-5在室溫下是液體，具有～0.85g/cm3的密度以及112-120℃的沸點。注意，DAPA-2-5的每個仲丁基基團具有手性中心，并且每個手性中心可以獨立地是(R)構型或(S)構型。因此，DAPA-2-5具有四種可能的立體異構體：兩種旋光立體異構體(即，R,R和S,S)和兩種不旋光的內(nèi)消旋形式(即，R,S和S,R)。除非另外指出，否則提及DAPA-2-5旨在提及四種立體異構體中的任何一種，以及四種立體異構體的任何兩種或更多種的任何混合物。在廣泛的研究之后，發(fā)明人已經(jīng)將DAPA-2-5確定為用于治療由包括例如上呼吸消化道，例如口咽(包括，例如咽)、和上食管表面、以及肛門與生殖器表面的粘膜的非角化性復層上皮(NKSE)引起的感覺不適和炎癥的特殊藥劑。如在本文中描述的，對于引起口咽中的局部“動態(tài)涼爽”而不存在不適，DAPA-2-5是選擇性的并且是理想的。對于口咽/食管不適，該“動態(tài)涼爽”是期望的感覺質(zhì)量[產(chǎn)生涼爽/冷的清新感覺]。此外，其在紅辣椒測試中具有良好的活性。其對于熱引起的水腫具有抗炎活性，阻礙酸刺激的吞咽作用，并且對抗辣椒素對于離體迷走神經(jīng)的活性。這些屬性使得DAPA-2-5成為減輕由非角化性復層上皮(NKSE)(尤其是口咽膜和食管膜)引起的感覺不適和炎癥的理想的活性成分。DAPA-2-5具有選擇性感覺效果和該感覺的局部分布。在動物模型中，其選擇性地有效抑制0.1N的鹽酸對于咽膜、NKSE表面的刺激作用。當將其遞送至人類志愿者的口腔上時，其具有最小的刺激性并且發(fā)揮了期望的抗感受傷害性作用。當傾注至體外迷走神經(jīng)上時，其阻礙了響應于眾所周知的感覺刺激物辣椒素的去極化。將其在迷走神經(jīng)中的接受元件進一步表征為TRPM8(離子通道受體)。此外，不同于相關類似物，甚至當將劑量增加至8mg/片劑時，DAPA-2-5也不會產(chǎn)生刺痛、不利味道、或者“冰冷”或冷不適。對于喉嚨和上食管，DAPA-2-5的活性保持局部化，并且不存在系統(tǒng)冷卻(全身冷卻)。由于立即開始和動態(tài)涼爽感覺，因此具有喉嚨不適的個體偏愛DAPA-2-5。將利用其他DAPA化合物(DAPA-1-6、DAPA-1-7、DAPA-2-6、以及DAPA-2-7)看到的“冰冷”認為太冷，盡管這些化合物對于喉嚨是長效的。其他DAPA化合物(DAPA-1-6、DAPA-1-7、DAPA-2-6、以及DAPA-2-7)的活性擴散到胸骨后面，擴散至胸腔中，這很可能是由于食管內(nèi)層中感覺元件的激活。與寬范圍的結構類似化合物相比，發(fā)現(xiàn)DAPA-2-5在動物模型中具有用于抗傷害感受的期望感覺質(zhì)量而不存在過多刺激性，其高度有效，具有足夠的作用持續(xù)時間以成為治療學上有用的，以及具有抗炎活性。化學合成通過以下通用方法制備DAPA化合物：在氮氣下，將100mL(23.7g，～200mmol)的仲丁基鎂氯化物或溴化物(二異丙基鎂氯化物或溴化物)(獲得自Acros，以四氫呋喃(THF)中的25％溶液)放置在500mL燒瓶(帶有攪拌棒)中。逐滴添加THF中的亞磷酸二乙酯溶液(來自Aldrich,D99234；8.25g，50mL中的60.6mmol)。在約30min之后，將反應混合物溫熱至沸騰。將反應混合物攪拌另外的30min，隨后逐滴添加THF中的適當?shù)恼榛饣锶芤?來自TCI；20mL中的60mmol)。然后，在室溫下將反應混合物攪拌過夜。將反應化合物用水稀釋，轉(zhuǎn)移至分液漏斗，用乙酸(～10mL)酸化，并且用醚(ether)萃取兩次。將醚層用水洗滌并且蒸發(fā)(RotaVapBuchi，浴溫40℃)。在高真空下蒸餾淺棕色油。由通過質(zhì)譜法測定的質(zhì)量驗證的最終產(chǎn)物是無色或微淺黃色的透明液體。通過該方法制備了以下化合物：組合物本發(fā)明還涉及包含DAPA-2-5以及藥學上可接受的載體、稀釋劑、或賦形劑的組合物(例如，藥物組合物)。本發(fā)明還涉及組合物(例如，藥物組合物)的制備方法，包括使DAPA-2-5以及藥學上可接受的載體、稀釋劑、或賦形劑混合。在一個實施方式中，組合物以0.005-2.0％wt/v的濃度包含DAPA-2-5。在一個實施方式中，組合物是液體組合物，并且以0.5-20mg/mL的濃度包含DAPA-2-5。在一個實施方式中，組合物是液體組合物，并且以1-5mg/mL的濃度包含DAPA-2-5。在一個實施方式中，組合物是凝膠組合物，并且以1-20mg/mL的濃度包含DAPA-2-5?？梢栽谶m當?shù)陌b和/或適當?shù)娜萜髦刑峁┙M合物。例如，組合物可以是包括DAPA-2-5的口服劑型的形式，例如錠劑、果凍杯、可食用膜條(ediblefilmstrip)、或口腔崩解片(ODT)。類似地，可以以攜帶DAPA-2-5或包含DAPA-2-5的組合物的棉簽、擦拭布(wipe)、襯墊、或小毛巾(towellette)(例如，適當?shù)胤庋b在包裝中)提供組合物。類似地，例如，可以以貼劑(例如，適用于施加至皮膚的控釋貼劑)提供組合物。類似地，可以以從加壓容器遞送的霧化噴霧劑提供組合物。類似地，可以以連接至包括DAPA-2-5或含有DAPA-2-5的組合物的貯存器，例如能夠遞送單位體積(例如，0.05mL至0.15mL)至例如皮膚或粘膜表面的手動啟動噴霧器(例如，具有適當小的孔)提供組合物。在治療方法中的用途本發(fā)明的一個方面涉及用在治療(例如，選擇性治療)如在本文中描述的某些障礙(例如，疾病)的方法中的DAPA-2-5。在藥物制備中的用途本發(fā)明的另一個方面涉及DAPA-2-5在制備用于治療(例如，選擇性治療)，例如治療(例如，選擇性治療)如在本文中描述的某些障礙(例如，疾病)的藥物中的用途。在一個實施方式中，藥物包含DAPA-2-5。在一個實施方式中，藥物包含配制為具有礦物賦形劑的ODT的DAPA-2-5。治療方法本發(fā)明的另一個方面涉及治療(例如，選擇性治療)如在本文中描述的某些障礙(例如，疾病)的方法，包括：將治療有效量的DAPA-2-5優(yōu)選以藥物組合物的形式給予需要治療的患者。治療的障礙在(例如，在治療方法中應用的、在藥物制備中應用的、治療方法的)一個實施方式中，治療是治療(例如，選擇性治療)以下各項：來自非角化性復層上皮(NKSE)組織的感覺不適、上呼吸消化道不適、口咽不適、食管不適、喉嚨刺激、咳嗽、胃灼熱、胸痛、肝門與生殖器不適、或非角化性復層上皮(NKSE)組織炎癥。治療的障礙-來自NKSE組織的感覺不適在(例如，在治療方法中應用的、在藥物制備中應用的、治療方法的)一個實施方式中，治療是治療(例如，選擇性治療)來自非角化性復層上皮(NKSE)組織的感覺不適。如在本文中使用的，術語“感覺不適”涉及刺激、疼痛、癢、或來自非角化性復層上皮(NKSE)組織的感覺遲鈍的其他形式。該術語暗示位于NKSE和身體組織中的感覺神經(jīng)末梢上的傷害感受器的激活，以及由傷害感受器的激活產(chǎn)生的感覺對抗。傷害感受器由例如高溫或低溫、機械壓力、化學品(例如，辣椒素、酸性物等)、損傷、以及炎癥介質(zhì)刺激。可以將降低感覺不適的DAPA化合物(如DAPA-2-5)稱為抗感受傷害性藥劑。如在本文中使用的，術語“感覺遲鈍”涉及異常感覺，并且除了刺激、癢、以及疼痛之外，包括諸如灼燒、干燥、濕潤、發(fā)麻的感覺，以及感覺異物存在。在一個實施方式中，NKSE組織位于以下(表面)之上：-上呼吸消化道表面；-口腔表面；-呼吸組織表面；-鼻膜表面；-口咽表面(包括，例如咽表面)；-食管表面；或-肛門與生殖器表面。在實施方式中，NKSE組織位于上呼吸消化道表面上，位于口腔表面上，位于口腔的內(nèi)層上，或嘴唇的內(nèi)部，位于呼吸組織表面上，位于呼吸道上皮表面上，位于鼻膜表面上，位于鼻膜的管腔內(nèi)層(lumenallining)上。在實施方式之一中，NKSE組織位于口咽表面上，或咽表面上。在實施方式之一中，來自NKSE組織的感覺不適由以下引起：吞咽困難、胃內(nèi)容物反流(例如，咽喉反流(喉咽反流，laryngopharyngealreflux))、打嗝、咽炎、扁桃體炎、粘膜炎、過敏癥、咳嗽、或咽表面對于刺激物的超敏反應。在實施方式之一中，NKSE組織位于食管表面上，并且位于食管表面上的感覺不適由胃內(nèi)容物反流(例如，胃食管反流)引起。治療的障礙-局部不適在(例如，在治療方法中應用的、在藥物制備中應用的、治療方法的)一個實施方式中，治療是治療(例如，選擇性治療)上呼吸消化道不適。在一個實施方式中，上呼吸消化道不適由氣道或咽中的過多粘液和炎性滲出物(例如，與鼻炎、鼻竇炎、哮喘、阻塞性肺疾病等有關)引起。在一個實施方式中，上呼吸消化道不適與勉力呼吸(labouredbreathing)、呼吸困難、打鼾、或睡眠呼吸暫停有關。在一個實施方式中，治療是治療(例如，選擇性治療)口咽不適。在一個實施方式中，口咽不適與胃內(nèi)容物反流有關。在一個實施方式中，口咽不適與咽喉反流有關。在一個實施方式中，治療是治療(例如，選擇性治療)食管不適。在一個實施方式中，食管不適與胃內(nèi)容物反流有關。在一個實施方式中，食管不適與胃食管反流有關。在一個實施方式中，治療是治療(例如，選擇性治療)喉嚨刺激。在一個實施方式中，治療是治療(例如，選擇性治療)咳嗽。在一個實施方式中，治療是治療(例如，選擇性治療)胃灼熱。在一個實施方式中，治療是治療(例如，選擇性治療)胸痛。在一個實施方式中，治療是治療(例如，選擇性治療)肛門與生殖器不適。治療的障礙-NKSE組織炎癥在(例如，在治療方法中應用的、在藥物制備中應用的、治療方法的)一個實施方式中，治療是治療(例如，選擇性治療)非角化性復層上皮(NKSE)組織的炎癥。治療如在本文中使用的，在治療障礙的上下文中，術語“治療”通常涉及人類或動物(例如，在獸醫(yī)應用中)的治療，其中，達到了一些期望的治療效果，例如，抑制障礙的發(fā)展，并且包括減緩發(fā)展的速度、暫停發(fā)展的速度、減輕障礙的癥狀、改善障礙、以及治愈障礙。治療作為預防措施(即，預防)也包括在內(nèi)。例如，運用到尚未患有障礙，但有發(fā)展障礙風險的患者，包含在術語“治療”內(nèi)。藥理術語中的術語“選擇性”涉及在結構上相關的同源物的組中表現(xiàn)出將其與其他類似物區(qū)別開的定性或定量性能的分子。如在本文中使用的，在治療具有“動態(tài)涼爽”的排熱感覺的障礙的上下文中，術語“選擇性治療”涉及治療(例如，抑制)來自非角化性復層上皮(NKSE)的感覺不適，而不存在刺痛、刺激、或其他不利影響[例如，口腔中的使人不愉快的味道]的問題。如在本文中所用的，術語“治療有效量”涉及化合物、或包含化合物的物質(zhì)、組合物或劑型的量，當根據(jù)期望的治療方案給藥時，這對產(chǎn)生一些期望的治療效果有效，與合理的效益/風險比相當。聯(lián)合療法術語“治療”包括治療和療法的聯(lián)合，其中，例如，依次地或同時地聯(lián)合了兩種或更多種的治療或療法。例如，本文中描述的化合物也可以例如與其他藥劑聯(lián)合用于聯(lián)合療法。本發(fā)明的一個方面涉及與一種或多種(例如，1、2、3、4種等)另外的治療劑聯(lián)合的DAPA-2-5。具體的組合將由醫(yī)生決定，該醫(yī)生將使用他的公知常識和熟練從業(yè)者已知的劑量方案來選擇劑量。另外的治療劑的實例包括：抗炎甾體劑(anti-inflammatorysteroidalagents)、抗炎止痛劑、抗組胺劑、擬交感神經(jīng)興奮胺血管收縮劑(sympathomimeticaminevasoconstrictor)、局部麻醉劑、抗生素、抗痤瘡劑、外用維A酸(局部維A酸，topicalretinoid)、用于咳嗽的藥物、用于粘液分泌的藥物、用于吞咽困難的藥物(包括香料)、用于生殖器疣的藥物、用于皺紋的藥物、用于老化皮膚的藥物、抗痔劑、用于外陰瘙癢的藥物、護膚液、以及用于治療角質(zhì)層分離(keratolysis)的藥劑。甾體抗炎劑的實例包括：氫化可的松、氯倍他索、丙酸氯倍他索、烏倍他索、潑尼松龍、地塞米松、曲安奈德、氟輕松、醋酸氟輕松、醋酸氫化可的松、醋酸潑尼松龍、甲潑尼龍、醋酸地塞米松、倍他米松、倍他米松戊酸酯、氟米松、氟替卡松、氟米龍、以及丙酸倍氯米松?？寡字雇磩┑膶嵗ǎ核畻钏峒柞?、水楊酸羥乙酯、阿司匹林、吲哚美辛、雙氯芬酸、布洛芬、酮洛芬、萘普生、普拉洛芬、非諾洛芬、舒林酸、芬氯酸、環(huán)氯茚酸、氟比洛芬、芬替酸、丁苯羥酸、吡羅昔康、以及噴他佐辛?？菇M胺劑的實例包括：鹽酸苯海拉明、水楊酸苯海拉明、苯海拉明、馬來酸氯苯那敏、以及鹽酸異丙嗪。擬交感神經(jīng)興奮胺血管收縮劑的實例包括：鹽酸去氧腎上腺素、羥甲唑啉、萘甲唑啉，以及用于鼻血管收縮藥活性(鼻解充血藥活性，nasaldecongestantactivity)的其他咪唑啉受體激動劑。局部麻醉劑的實例包括：鹽酸奴白卡因、地布卡因、鹽酸利多卡因、利多卡因、苯佐卡因、鹽酸丙嗎卡因、丁卡因、鹽酸丁卡因、鹽酸羥基普魯卡因、馬比佛卡因(甲哌卡因，mepivacaine)、以及鹽酸哌羅卡因。用于咳嗽的藥物和用于粘液分泌的藥物的實例包括：右美沙芬、氫溴酸右美沙芬、可待因、二氯非尼拉敏(dichloropheniramine)、愈創(chuàng)甘油醚、以及苯酚。護膚液的實例包括：保濕劑、潤膚劑、以及防腐劑這三類。諸如尿素、甘油、以及α-羥基酸的保濕劑幫助從空氣中吸收水分并且將其保持在皮膚中。諸如羊毛脂、礦物油、以及凡士林油的潤膚劑幫助填充皮膚細胞之間的空間，使皮膚潤滑和平滑。防腐劑幫助防止?jié)櫇衤吨械募毦L。潤濕露可包含的其他成分可以包括：維生素、礦物、植物提取物和香料?？股氐膶嵗ǎ盒旅顾?、紅霉素、以及抗病毒劑二十二醇局部抗痤瘡劑的實例包括：過氧苯甲酰、間苯二酚、單乙酸雷瑣辛(resorcinolmonoacetate)、苯酚、以及水楊酸。外用維A酸的實例包括：阿達帕林和異維A酸(Retin-A、Differen、以及Tazorac)。角質(zhì)層分離劑(keratolytics)的實例包括：α-羥基酸、乙醇酸、以及水楊酸。試劑盒本發(fā)明的一個方面涉及包含以下的試劑盒：(a)DAPA-2-5，或包含DAPA-2-5的組合物，例如，優(yōu)選地，在適當?shù)娜萜髦泻?或用適當?shù)陌b提供；以及(b)使用說明，例如，關于如何給予化合物或組合物的書面說明。書面說明也可以包括活性成分適合治療的適應癥的列表。書面說明(例如，小冊子或包裝標簽)可以包括劑量和給藥說明、制劑組合物(組成)的細節(jié)、臨床藥理學、抗藥性、藥代動力學、吸收、生物利用度、以及禁忌征候。診斷方法還可以將DAPA-2-5用于胸痛的鑒別診斷。更具體地，還可以將DAPA-2-5用于區(qū)別心源性疼痛與非心源性疼痛?，F(xiàn)有技術未知該類型的簡單診斷工具。能夠?qū)⒖诜o予(例如，以錠劑或口腔崩解片(ODT))的DAPA化合物如DAPA-2-5或DAPA-2-7用于提供胸痛的鑒別診斷，例如用于將非心源性胸痛(NCCP)與心源性疼痛區(qū)別開。給藥途徑例如，如在本文中描述的，可以將DAPA-2-5或含有DAPA-2-5的藥物組合物適當?shù)鼐植拷o藥給受試者。如在本文中使用的，術語“局部施加”是指遞送至與空氣接觸的身體的表面上，所述表面包括皮膚，肛門與生殖器表面，眼眶、嘴唇、鼻子、以及肛門的移向上皮表面，以及呼吸消化道(aerodigestivetract)(鼻膜、咽和食管表面)，呼吸道(respiratorytract)，以及胃腸道的管腔。在(例如，在治療方法中應用的、在藥物制造中應用的、治療方法的)一個實施方式中，治療是通過局部給藥治療。在一個實施方式中，治療是通過局部給藥給如在本文中描述的非角化性復層上皮(NKSE)組織來治療。例如，在一個實施方式中，NKSE組織位于以下表面之上：-上呼吸消化道表面；-口腔表面；-呼吸組織表面；-鼻膜表面；-口咽表面(包括，例如咽表面)；-食管表面；或-肛門與生殖器表面。例如，在一個實施方式中，NKSE組織位于以下表面之上：-口咽表面(包括，例如咽表面)；-食管表面；或-肛門與生殖器表面。受試者/患者受試者/患者可以是哺乳動物，例如，有袋動物(例如，袋鼠、袋熊)、嚙齒動物(例如，豚鼠、倉鼠、大鼠、小鼠)、鼠科動物(例如，小鼠)、兔類動物(例如，兔子)、鳥類(例如，鳥)、犬齒類(例如，狗)、貓科動物(例如，貓)、馬科動物(例如，馬)、豬(例如，小豬)、羊(例如，綿羊)、牛族動物(例如，母牛)、靈長類動物、猿類(例如，猴子或猿)、猴子(例如，絨猴、狒狒)、猿(例如，大猩猩、黑猩猩、猩猩、長臂猿)、或人類。在一個優(yōu)選的實施方式中，受試者/患者是人類。制劑盡管DAPA-2-5可以單獨給藥，但優(yōu)選其作為藥物制劑(如組合物、制劑(制備品)、藥物)給出，所述藥物制劑包含DAPA-2-5連同一種或多種本領域技術人員熟知的其他藥學上可接受的成分，包括但不限于，藥學上可接受的載體、稀釋劑、賦形劑、輔助劑(佐劑)、填料(填充劑)、緩沖劑、防腐劑、抗氧化劑、潤滑劑、穩(wěn)定劑、增溶劑、表面活性劑(例如，潤濕劑)、掩蔽劑、著色劑、調(diào)味劑、以及增甜劑。制劑可以進一步包含其他活性劑。因此，本發(fā)明進一步提供了如以上描述的藥物組合物，以及制備如以上描述的藥物組合物的方法。如果配制成離散單元(例如，擦拭布、襯墊、小毛巾等)，每個單元包含預定量(劑量)的化合物。如在本文中使用的，術語“藥學上可接受的”，涉及化合物、成分、物質(zhì)、組合物、劑型等，在可靠的醫(yī)學判斷的范圍之內(nèi)，它們適用于與所討論的受試者(例如，人)的組織接觸，而沒有過多的毒性、刺激、過敏性反應，或其他問題或并發(fā)癥，與合理的效益/風險比相應。在與制劑的其他成分相容的意義上，每種載體、稀釋劑、賦形劑等也必須是“可接受的”。合適的載體、稀釋劑、賦形劑等可以在標準藥物教科書中找到，例如，Remington′sPharmaceuticalSciences,18thedition,MackPublishingCompany,Easton,Pa.,1990；以及HandbookofPharmaceuticalExcipients,5thedition,2005。制劑可以通過任何藥學領域中熟知的方法來制備。這類方法包括將化合物與構成一種或多種輔助成分的載體結合(association)的步驟。一般而言，制劑通過均勻并且緊密地將化合物與載體(例如，液體載體、細碎的固體載體等)結合以及如有必要隨后使產(chǎn)物成型來制備。制劑可以適當?shù)貫橐韵滦问剑阂后w、溶液(例如，含水的、無水的)、懸浮液(例如，含水的、無水的)、乳劑(例如，水包油型、油包水型)、酏劑、糖漿、干藥糖劑、漱口水、滴劑、片劑(包括，例如，包衣片劑)、顆粒劑、粉劑、錠劑、軟錠劑(pastille)、膠囊(包括，例如，硬和軟明膠膠囊)、扁囊劑、丸劑、安瓿、大丸藥(boluses)、栓劑、陰道栓劑(pessaries)、酊劑、凝膠、糊劑、軟膏、乳膏劑、洗劑、油、泡沫劑、噴霧劑、霧劑(mists)、或氣霧劑。劑量本領域技術人員將理解的是，適當劑量的DAPA-2-5以及包含DAPA-2-5的組合物可以在患者之間變化。確定最佳劑量通常將涉及平衡治療益處對任何風險或有毒副作用的水平。選擇的劑量水平將取決于多種因素，包括但不限于DAPA-2-5的活性，給藥途徑，給藥時間，治療的持續(xù)時間，聯(lián)合使用的其他藥物、化合物、和/或物質(zhì)，障礙的嚴重性，以及患者的物種(種族)、性別、年齡、體重、狀況(病癥)、一般健康狀況、以及先前的病史。DAPA-2-5的量和給藥途徑最終將由醫(yī)師、獸醫(yī)或臨床醫(yī)師判斷決定，但是一般而言，將選擇劑量以在作用部位達到實現(xiàn)所期望的作用而不會造成實質(zhì)性損害或有害副作用的局部濃度。貫穿整個治療過程，可以以一個劑量，優(yōu)選在“按照需要”或必要的基礎上完成給藥。確定最有效的方式和給藥劑量的方法對于本領域技術人員而言是熟知的，并且將隨著用于治療的制劑、治療的目的、治療的一種或多種靶細胞、以及治療的受試者而變化。利用由患者、治療醫(yī)師、獸醫(yī)、或臨床醫(yī)生選擇的劑量水平和模式，可以進行單次或多次給藥。上呼吸消化道口腔包括用于咀嚼、品嘗、潤滑、以及推動食物團進入咽中的專門結構如牙齒、齒齦、舌頭、以及唾液腺。這是體內(nèi)最復雜的肌肉反射活動之 一，并且需要至少6個腦神經(jīng)和25個肌肉群的協(xié)調(diào)。由于口能夠耐受熱液體(當放置在皮膚上時會疼痛)，因此在口腔中熱感覺不是高等級保護性反射。另一方面，冷卻液體對于調(diào)節(jié)口渴是重要的，并且冷卻的檢測具有生存價值。Eccles等人[Coldpleasure.Whywelikeicedrinks,ice-lolliesandicecream.Appetite,71,357-60,2013]近來就冷卻液體、冰淇淋、正增強(積極增強，positivereinforcement)、以及口渴抑制的關系進行了概念綜述。感覺神經(jīng)密切監(jiān)視口腔和咽連接處的溫度。當外部環(huán)境溫度高時，飲用冷卻液體立刻令人愉悅，并且緩解了口渴、干燥、以及不適。咽是從鼻和口腔通向喉和食管的錐形通道。咽是喉嚨的一部分，是描述頸和喉周圍的身體區(qū)域的不精確術語。將咽分為三個區(qū)域：鼻、口、以及喉。也稱為咽之鼻部的鼻咽位于鼻腔的鼻后孔后面以及軟腭的水平之上。口咽從軟腭(腭咽)延伸至舌骨的水平。咽喉從舌骨延伸至環(huán)狀軟骨的下邊緣。咽表面利用非角化性復層上皮(NKSE)作內(nèi)層?？梢詫⒖谘蔬M一步分為上部區(qū)域和下部區(qū)域，正中央是例如在Daniel等人[“Pharyngealdimensionsinmenandwomen”,Clinics(SaoPaulo)62,5-10,2007]的磁共振成像研究中示出的所謂的下軟腭口咽(LRO)。咽是梯形倒置漏斗形管，并且LRO是具有面積約1cm2的最小橫截面的區(qū)域，所述最小橫截面等于20％的US25美分硬幣(quartercoin)或25％的歐元硬幣。舌根處的咽表面和約3cm2至5cm2的面積的LRO周圍的咽壁是用于針對本文中描述方法的藥物遞送的期望靶的一個部分，第二部分是上食管表面?？谘蕛?nèi)腔是食物、液體、以及空氣的管道，并且是消化系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)的部分，并且還將其稱為呼吸消化道部分(由國際衛(wèi)生術語標準開發(fā)組織定義的解剖學術語)。每天通過口咽的輸送量是令人驚駭?shù)?。平均每天，成人呼?2,000L的空氣，飲用2L的流體，分泌1L的唾液，并且吃2kg的食物。這些活動是恒定的，在醒著的時間，每分鐘約15次呼吸和1次吞咽動作。生物體要生存，必須協(xié)調(diào)這種輸送流，使得食物和液體向下進 入食管而不是進入氣道，而空氣直接進入氣道。例如，當和軟飲料一起進食大披薩餅時，該系統(tǒng)的效率是明顯的并且不證自明。沒經(jīng)過多少忙亂(withaminimumoffuss)，就完成了從口至胃的物質(zhì)輸送。腦是咽的交通協(xié)調(diào)者，并且受動器是橫紋肌和平滑肌。至少6個腦神經(jīng)和25塊肌肉參與了吞咽。對于固體，將食物咀嚼，混合并且用分泌的唾液潤滑，然后，將食團隨后快速向下推向食管。當食團以約35cm/s向下輸送至咽時，吞咽的口咽階段發(fā)生在一眨眼的毫秒間。支配口和延髓舌(rostraltongue)中的該過程的感覺信號來自三叉(5th)神經(jīng)和舌下(8th)神經(jīng)分支的傳入神經(jīng)。來自口咽和舌頭的后表面的傳入信號主要來自舌咽神經(jīng)(9th)。來自喉咽的信號通過迷走神經(jīng)(10th)。吞咽和咳嗽(當物質(zhì)走錯路徑時)是由用以引導輸送負載至它們的正確目的地的腦神經(jīng)和肌肉的協(xié)調(diào)反射。上呼吸消化道(口腔和鼻腔、咽、上氣道、以及食管)的上皮(鼻、口、喉、上食管、以及支氣管上皮)的神經(jīng)元感受野主要由5th、9th以及10th腦神經(jīng)推動。這些表面主要由粘膜，即，非角化性復層上皮(NKSE)作內(nèi)層。這些細胞具有高更新速率(近似幾天)并且對于損傷敏感。例如，當在咽中存在固體或液體的混亂輸送時，酸和胃蛋白酶，或來自肺的滲出物或痰、呼吸消化道中的堆積物將激活腦神經(jīng)并且引起刺激、癢、疼痛、以及炎癥。咽障礙的特征性表現(xiàn)是球感(globus)(喉嚨中腫塊的感覺)，吞咽中的困難(吞咽困難)、嘶啞、疼痛、癢、咳嗽、和紅，以及咽粘膜腫脹。咽具有排列為虎鉗并且用以獲取口咽內(nèi)容物以及將食團推進食管中的強縮肌。解剖(結構)就像棒球運動中的第一壘手手套。在該系統(tǒng)中存在兩個重要的瓣膜：吞咽過程中關閉的會厭，以及松弛以使內(nèi)容物進入食管然后關閉以阻止反流的上食管括約肌(UES，或環(huán)咽肌(cricopharyngeusmuscle))。咽收縮沖洗并且倒空內(nèi)腔碎片，并且通過產(chǎn)生負壓而有助于從 鼻腔和鼻咽吸取內(nèi)容物。良好調(diào)節(jié)的(well-toned)咽肌對于保持氣道通暢，允許平穩(wěn)氣流也是重要的，并且功能障礙將引起打鼾和睡眠呼吸暫停。局部抗感受傷害性藥劑在其中可具有效用的上呼吸消化道障礙的實例是：咽炎：最常由病毒和細菌試劑引起的咽內(nèi)層炎癥。密切相關的狀況是扁桃體炎[Bathala,S.andEccles,R.Areviewonthemechanismofsorethroatintonsillitis.JournalofLaryngologyandOtology,127:227-32,2013]?；瘜W污染物如香煙煙霧，也能夠直接刺激和損害粘膜。咽炎和扁桃體炎的主要癥狀是刺激、癢、以及疼痛或“喉嚨痛”。延長的咽刺激也可導致表現(xiàn)為持續(xù)咳嗽(當其存在超過8周時，稱為慢性咳嗽)的慢性超敏綜合征。本文中描述的藥劑將減輕咽炎不適，并且潛在地減少炎癥。吞咽困難(吞咽功能障礙)：老年人、中風患者、具有帕金森病的個體、以及具有頭頸癌的個體的常見苦惱?？谘市酝萄世щy是應用于其中食物的食團不正確地從咽傳遞至食管的狀況的術語。當顆粒進入氣道時，結果是造成吸入性肺炎，其成為照顧這類受害者的重大經(jīng)濟負擔。已經(jīng)表明，用噴霧器給予的感覺刺激物如黑胡椒、辣椒素類物質(zhì)(紅辣椒的活性成分)，以及用鼻管給予的薄荷醇溶液縮短了老年人的吞咽反射潛伏期，并且因此可以用于降低吸入性肺炎的風險[Ebiharaetal.,Sensorystimulationtoimproveswallowingreflexandpreventaspirationpneumoniainelderlydysphagicpeople”,J.Pharmacol.Sci.,115,99-104,2011]。當進入氣道的物質(zhì)來自食管而不是口腔時，將相關狀況稱為吸入性肺炎(aspirationpneumonitis)。后鼻滴涕(鼻后滴漏，post-nasaldrip)：其中存在從鼻腔和鼻咽的粘膜進入咽的分泌物增加的狀況。這些分泌物可以包含炎性滲出物，并且可以由感染或鼻膜的過敏癥(例如，過敏性鼻炎和鼻竇炎)引起。分泌物的增加引起喉嚨不適、疼痛、癢、咳嗽、以及受損氣流的感覺。通過減輕咽 刺激的感覺，遞送至口咽粘膜的抗炎性或抗感受傷害性藥劑將對這種狀況具有治療價值。咽喉反流疾病(喉咽反流疾病，LPR)和食管反流疾?。浩渲兴岷臀傅鞍酌笍奈噶骰刂裂实臓顩r。通常，適當?shù)耐萄室约笆湛s的上食管括約肌(UES)阻止了回流，但當該系統(tǒng)受損時，酸和胃蛋白酶進入咽表面并且甚至能夠進入咽鼓管(Eustachiantube)和鼻竇。結果是嘶啞、疼痛、喉水腫、以及持續(xù)清嗓的綜合病征。喉的檢查表明了圍繞喉的紅和腫脹粘膜。減少表面炎癥的感覺藥劑很可能對于治療LPR是有用的。酸反流疾?。侯愃朴贚PR的狀況[Oustamanolakisetal.,Dyspepsia:Organicvsfunctional.J.Clin.Gastroenterol.,46,175-190,2012]。該狀況由上腹部的諸如以下的癥狀組成：飽脹、不適、早飽、胃氣脹、胃灼熱、打嗝、惡心、嘔吐、或疼痛。將上消化道障礙進一步細分為“器質(zhì)性”和“功能性消化不良”。器質(zhì)性消化不良(OD)例如由以下引起：胃潰瘍；胃食管反流疾病(GERD)；巴雷特食管、胃或食管癌；胰腺或膽道疾?。粚κ澄锘蛩幬锏牟荒托?；以及感染或系統(tǒng)疾病。由于病理學的客觀證據(jù)不容易鑒別，而癥狀類似于OD，因此包括NERD的功能性消化不良(FD)更復雜。這些狀況的處理包括：抑酸藥物、根除幽門螺旋桿菌(H.pylori)的抗生素、促胃腸動力藥、基底松弛藥(fundus-relaxingdrugs)、抗抑郁劑、以及心理干預。上消化道中的上腹部不適：包括稱為“胃灼熱”和作為酸反流障礙的主要癥狀的非心源性胸痛的癥狀的狀況。胃灼熱的疼痛和不適主要是食管起源。非心源性胸痛是食管起源的疼痛，而不是由心功能障礙引起。將這些狀況的一些癥狀描述為胃灼熱(在進食之后發(fā)生并且持續(xù)幾分鐘至幾小時的恰好在胸骨后面的胸部的燃燒感覺)。胸骨下的燃燒感覺往往會輻射至頸，一波接一波到來，并且感覺其更像燃燒而不是疼痛。也可以將胃灼熱描述為胸痛，并且通過呈現(xiàn)促進胃食管回流的姿勢(如俯身或躺在某人背上)而相應地擴大。在中線而不是胸部的側(cè)面上感覺到胃灼熱。其他感 覺包括由于在口和喉嚨中的發(fā)酵、酸性或咸味流體所產(chǎn)生的咽喉上或咽喉后面的燃燒，難以吞咽并且感覺食物“粘”在胸部或喉嚨的中間。胃灼熱和酸反流疾病可以引起慢性咳嗽、喉嚨痛、或慢性嘶啞。酸性和消化酶如胃蛋白酶過多反流至食管和咽中產(chǎn)生在GERD、咽喉反流疾病(LPR)、非侵蝕性反流疾病(NERD)、非心源性胸痛(NCCP)、以及功能性消化不良中看到的不適。與鹽水灌注交替地使用0.1NHCl灌注食管的激發(fā)試驗(伯恩斯坦試驗)可用于引起易感個體的胃灼熱，以及證明癥狀的食管起源，例如，以確定是否胸痛由酸反流引起。對于該試驗，將細管通過一個鼻孔，向下至喉嚨后面，并且放置在食管的中間。將0.1N的鹽酸溶液和生理鹽溶液通過導管以例如8mL/min的速率交替灌注10分鐘并且灌注在食管中?；颊邲]有覺察到所灌注的溶液。如果用酸灌注引起患者通常的疼痛，而鹽溶液的灌注沒有產(chǎn)生疼痛，那么結論是：患者的疼痛與酸反流有關。使用該客觀評價方法，在7％的正常受試者、17％的巴雷特食管患者、32％的GERD患者、以及58％的NERD患者中記錄了對于HCl灌注的不適抱怨。在實施例中，動物模型用于證明DAPA-2-5作為針對0.1N鹽酸的刺激性影響的抗感受傷害性藥劑。胸痛和胸痛的鑒別診斷有時伴隨有心悸、發(fā)汗、呼吸急促、以及窒息感的胸痛是引起患者看醫(yī)師或?qū)で筮M入急診科的常見癥狀。對于檢查患者，醫(yī)師最優(yōu)先的是確定是否存在任何危及生命的心血管狀況。如果必要，由于檢查診斷如血清酶測定、心電圖、以及關于心功能的放射性示蹤劑研究，因此胸痛入院可能是昂貴的。已經(jīng)注意到，具有胸痛的患者入院的平均費用是US$7340[Coleyetal.,Economicburdenofnotrecognizingpanicdisorderintheemergencydepartment.J.EmergencyMedicine36:3-7.2009]。每年，大約640萬美國人因胸痛和相關癥狀的抱怨就診急診科，但僅小百分比(個體)表 現(xiàn)出潛在的心血管病因，其他則具有非心源性胸痛(NCCP)。胸痛是急診科就診的第二最常見原因，第一原因是胃痛和腹痛[參見，例如，Pitts等人的表8，NationalHospitalAmbulatoryMedicalCareSurvey:2006emergencydepartmentsummary”,NationalHealthStatisticsReports,Vol.7,pp.1-38,2006]。存在NCCP的多種原因，包括胸肌拉傷、肺部疾病、消化不良、驚恐性障礙，并且最常見的是食管功能障礙如GERD[Amsterdametal.,Testingoflow-riskpatientspresentingtotheemergencydepartmentwithchestpain:ascientificstatementfromtheAmericanHeartAssociation.Circulation,122:1756-1776,2010]。標準質(zhì)子泵抑制劑藥物如艾美拉唑(esomeprazole)在抑制不明原因的胸痛方面具有非常有限的功效，并且藥物作用的開始需要至少幾天時間[Flooketal.,Acid-suppressivetherapywithesomeprazoleforreliefofunexplainedchestpaininprimarycare:arandomized,double-blind,placebo-controlledtrial,Amer.J.Gastroenterol.,108:56-64,2013]。將NCCP與心源性疼痛區(qū)別開的簡單試驗可以有助于胸痛的鑒別診斷，允許患者的治療分類，并且改善減少護理費用的資源配置。在本文中描述的案例研究中，老年受試者打了一輪激烈的高爾夫球，然后飲食過多，并且開始經(jīng)歷胸部的胸骨后區(qū)和左胸肌區(qū)的疼痛。他服用了Alka-Seltzer和抗酸劑，并且試圖躺下，但疼痛沒有消失。在做出求救急救服務的決定之前，他吞咽了每片包含1.5mgDAPA-2-5的三片片劑，并且令人驚訝地，他的胸痛不適在5min內(nèi)得到了減輕。然而，該顯著結果與DAPA-2-5的藥理學(即，在上消化道的腦神經(jīng)末梢上施加抗感受傷害性作用)一致在此，提出遞送至上消化道表面上的活性成分如DAPA-2-5對于減輕胸痛可以是有用的，并且有助于胸痛的鑒別診斷。抵消酸對于咽和食管的影響的藥劑如DAPA-1-7、DAPA-1-8、DAPA-2-6、以及DAPA-2-7也可以用于該目的，這是因為它們對于NKSE的神經(jīng)末梢是抗感受傷害性的，并且將對抗NCCP。因此，可以將這類藥劑用于胸痛的短期處理和鑒別診斷。有效用于上腹部不適和胸痛的藥劑，對于諸如惡心和嘔吐(例如由暈動病(motionsickness)和采用癌癥化療劑進行治療所致)的病狀也將有用。這是因為，內(nèi)臟傳入信息的中樞整合在腦干核如前庭核以及孤束核匯合。因此，冷卻食管內(nèi)層表面的藥劑可發(fā)送信號至腦干，其將緩解暈動病以及其他惡心嘔吐病癥的癥狀。氣道疾病氣道疾病如哮喘、慢性阻塞性肺疾病、以及支氣管炎與氣道粘膜炎癥和滲出物的產(chǎn)生增加有關。滲出物如粘液通常通過吐痰或吞咽除去。在晚上和睡眠期間，咽肌松弛而抑制了清除，使得滲出物可能堆積在口咽中，并且引起窒息和作嘔。抵消口咽和氣道不適的感覺藥劑對于這類氣道疾病將是有用的。在本文描述的研究中，表明了傾注至離體迷走神經(jīng)上的DAPA-2-5直接抑制了辣椒素誘導的去極化。因此，表明了遞送至9th和10th傳入神經(jīng)的藥劑具有抵消口咽和上食管不適的效能。令人驚訝地，DAPA-2-5還在熱損傷模型中證明了抗炎活性，并且因此可能在治療NKSE的炎癥中具有價值。已經(jīng)存在利用感覺藥劑治療上呼吸消化道的有限次嘗試。已經(jīng)提出使用感覺藥劑如黑胡椒、薰衣草、辣椒素、衣殼(capsid)、以及薄荷醇治療老年人的吞咽困難問題[Ebihara等，2011]。將這些藥劑以霧化液體懸浮液施加，或以通過鼻管遞送至咽的液體施加。用于增強清除反射(clearancereflexes)的確切感覺事件沒有被限定。有效的薄荷醇和薄荷油糖果如也是口腔和鼻腔中的感覺刺激物。有時還將各自稱重約2.7g至3.4g，并且在糖-染料基質(zhì)中包含5mg、7mg或達到最大10mg的薄荷醇的薄荷醇錠劑用作口服刺激物，但由于澀味而具有有限的功效。針對用于治療喉嚨不適和氣道刺激，已經(jīng)描述了某些N-烷基-羰基-氨基酸酯[Wei,US20110082204A1,2011和US084226463，2013年4月23日]。具有期 望性能的化合物是(R)-2-[((1R,2S,5R)-2-異丙基-5-甲基-環(huán)己烷-羰基)-氨基]-丙酸乙酯和[((1R,2S,5R)-2-異丙基-5-甲基-環(huán)己烷羰基)]-氨基-乙酸異丙酯]。在本發(fā)明的上下文中，目標是：(a)定義將抵消不適(刺激、癢、以及疼痛)的具有上呼吸消化道膜中的確切抗感受傷害性感覺的活性化合物。這種感覺本身將不會產(chǎn)生不適，而是產(chǎn)生類似于當吞咽冰淇淋時的稱為“動態(tài)涼爽”的感覺。對于每種測試的化合物，要避免的感覺是稱為“冷不適”的狀況。(b)開發(fā)用于將活性化合物局部遞送至5th、9th、以及10th腦神經(jīng)的一種或多種的神經(jīng)末梢的靶上的局部制劑。(c)定義具有開始快(小于10s)和長持續(xù)時間(有效持續(xù)至少幾小時)的藥物作用，其利用能夠基于“根據(jù)需要”基礎(必要時或p.r.n.)的劑量計劃表，并且因此允許患者再次控制感覺不適。理想地，在每次給予小于5mg的單位劑量下，活性化合物是有效的。(d)定義具有對于上皮組織的抗炎作用的另外益處的活性化合物。利用包含DAPA-2-5，例如1mg至5mg的DAPA-2-5的制劑，滿足了這些目的。氣道粘液和炎性滲出物的清除氣道分泌物包括粘液、粘液質(zhì)、以及痰。粘液是由氣道內(nèi)層產(chǎn)生的異質(zhì)性、粘性、粘彈性凝膠。其主要是水并且包含稱為粘蛋白的高分子量粘液糖蛋白。粘液質(zhì)來自針對炎癥的希臘語，并且包含粘液連同炎癥細胞、細菌、以及碎片。痰是咳出的粘液質(zhì)并且包含唾液和其他液體。在氣道疾病如支氣管炎、支氣管擴張、一些形式的哮喘、囊性纖維化、以及感染中， 粘液的分泌過多以及粘液質(zhì)的產(chǎn)生是主要的病理生理事件，并且增強分泌物的清除是治療目標。在針對具有氣道疾病的患者的DAPA-2-5臨床試驗中，藥物功效的關鍵測量是：功能性咳嗽指數(shù)＝咳出的分泌物[mg]/固定觀察時間間隔的咳嗽次數(shù)時間間隔可以是早晨醒來之后的3h，或24h(如果資源可用)。由于支氣管分泌物堆積過夜，因此早上取樣時間是重要的?？梢匀菀椎厥占?、稱重痰液，并且針對固體、蛋白質(zhì)、炎癥細胞、或粘蛋白對其進一步分析。這類方法對于本領域是眾所周知的。為了進一步評估DAPA-2-5治療的功效，在臨床試驗階段期間可以給予生命質(zhì)量問卷。DAPA-2-5給藥方案可以是：早上第一件事情是服用各自1.5mg的兩個片劑，白天在“按照需要”的基礎上服用兩片，在晚餐之后服用兩片，并且在入睡之前服用兩片。教導受試者感覺粘液/粘液質(zhì)堆積物的循環(huán)時間，例如每15min、30min等，并且呈現(xiàn)姿勢，例如手在大腿上并且俯身以有效地咳嗽，即咳出(吐痰)。用自動記錄裝置監(jiān)控咳嗽頻率，并且收集痰液。還可以記錄針對肺功能的適當測試例如FEV1以確定是否改善了通氣。用以促進通過咳嗽有效清除的藥物設計理念是新穎的。作用機理基于藥物抑制無痰干咳(non-productivecough)[抑制9th和10th神經(jīng)中的傷害感受]的抗感受傷害性作用，而不存在對于機械性刺激感受器敏感性的藥物作用。在該藥物作用下，患者能夠“更好地感覺”喉附近的氣道分泌物的堆積，以在喉嚨中具有較小的刺激，以控制咳嗽刺激物，并且更有效地咳出。在臨床試驗中，功能性咳嗽指數(shù)數(shù)值增加，并且QOL指數(shù)改善。患者可以具有來自較好的氣道清除和較少的無痰干咳的改善的治療益處。靶向局部遞送至特定位置上為了研制用于局部遞送至咽表面和食管表面的藥物，需要仔細理解靶組織和組織環(huán)境的動力學。如果冷卻成分僅是針對牙膏和口香糖，那么用唾液溶解成分，并且將其遞送至5th神經(jīng)[三叉神經(jīng)，其使舌頭和口腔粘膜受神經(jīng)支配]舌分支的神經(jīng)末梢是足夠的。相比之下，咽、喉、以及食管的神經(jīng)元感受野連接至9th[舌咽神經(jīng)]、10th[迷走神經(jīng)]的傳入神經(jīng)以及脊髓傳入神經(jīng)，并且其具有不同的解剖學?？谘适巧喔幍墓靶谓Y構，中間具有懸雍垂(uvulva)[或葡萄]掛。稱為咽喉的前柱(anteriorpillarsoffauces)的拱形底部對于冷感覺尤其敏感。如果將冷金屬探針放置在人類受試者的該位點，則會引起冷卻感覺和快速吞咽動作[Kaatzke-McDonald,E.etal.TheEffectsofCold,Touch,andChemicalStimulationoftheAnteriorFaucialPillaronHumanSwallowing.Dysphagia11:198-206,1996]。咽表面和喉表面受9th和10th腦神經(jīng)的神經(jīng)末梢密集地神經(jīng)支配[MuandSanders.Sensorynervesupplyofthehumanoro‐andlaryngopharynx:apreliminarystudy.TheAnatomicalRecord,258,406-20,2000]。在舌頭的舌神經(jīng)中發(fā)現(xiàn)了TRPM8免疫反應性纖維[Abe,J.etal.TRPM8proteinlocalizationintrigeminalganglionandtastepapillae.BrainResearch.MolecularBrainResearch,136:91-8,2005]，但其在口咽的邊緣處，以及在喉中而不是會厭中尤其豐富[Sato,T.etal.Thedistributionoftransientreceptorpotentialmelastatin-8intheratsoftpalate,epiglottis,andpharynx.CellularandMolecularNeurobiology,33:161-5,2013]。期望的藥物靶是9th和10th神經(jīng)的感受野。喉嚨是描述圍繞喉的身體區(qū)域的術語。內(nèi)在地，相關結構是分為三個區(qū)域：鼻、口、以及喉的咽。也稱為咽之鼻部的鼻咽位于鼻子后面以及軟腭的水平之上?？谘蕪能涬?腭咽)延伸至舌骨的水平。咽喉處于喉后面的空間中，并且從舌骨延伸至環(huán)狀軟骨的下邊緣?？谘屎秃硌适沁B續(xù)漏斗形倒置梯形管[Daniel等，2007]，并且總表面積是約10cm2至15cm2。用于藥物遞送的有利的靶是軟腭上、咽喉柱上、以及橫向口咽壁上的口咽的喙表面。第二靶位是上食管的內(nèi)腔。為了達到上食管內(nèi)層，制劑必須通過上食管括約肌，而不在咽喉中長時間停留。從舌頭、口咽、以及咽喉的后表面至腦干的傳入信號主要來自9th(舌咽神經(jīng))和10th(迷走神經(jīng))腦神經(jīng)，幾個纖維來自7th(面部)腦神經(jīng)。來自感受野的傳入神經(jīng)協(xié)調(diào)清空咽的清除反射，并且保護氣道免于進入液體和固體。對于上食管，神經(jīng)支配來自迷走神經(jīng)和脊髓傳入神經(jīng)。用于藥物遞送的靶主要是9th和10th腦神經(jīng)，并且在較小程度上是上食管的7th神經(jīng)和脊髓傳入神經(jīng)的感受野。當食團從口移動至食管時，吞咽的口咽階段發(fā)生在毫秒內(nèi)的眨眼間。如通過激光多普勒超聲或X射線視頻熒光照相術測定的輸送時間(transittime)是約35cm/s[Sonomuraetal.,Numericalsimulationoftheswallowingofliquidbolus.J.TextureStudies42:203-211,2011]。因此，難以遞送(涂覆上)，并且將感覺藥劑保留在口-咽喉的表面上?；钚猿煞植荒軌蛞怨腆w顆粒遞送，這是因為其將產(chǎn)生刺激并且引起咳嗽，因此以液體、噴霧、或唾液中的溶解物遞送是理想方法。在本申請的單獨部分中進一步描述了局部藥物遞送的方法。作用開始、持續(xù)時間和遞送時間表如在本文中預期的，遞送的用于治療的藥劑應當具有作用快速開始，例如小于10s并且不超過2min的感覺效果。效果應當有效持續(xù)至少一小時并且優(yōu)選更長，否則患者將必須反復施加藥物以獲得減輕。優(yōu)選地，應當存在活性成分的“驚喜效果(woweffect)”，以刺激感覺事件?；颊邞斈軌蜩b別該“驚喜效果”，并且在“按照需要”(p.r.n.)基礎上使用ODT、液體、或噴霧。在本發(fā)明的上下文中，將“驚喜效果”稱為“動態(tài)涼爽”。在作用的快速開始下，應當能夠減輕患者的咽喉不適和上食管不適，并且 該減輕將進一步減少與喉嚨不適有關的心理因素(例如，焦慮)。這些目標由DAPA-2-5實現(xiàn)。活性成分的選擇：分子靶存在普遍的觀點：稱為TRPM8受體的離子通道受體是響應感覺/冷卻劑如薄荷醇和icilin(1-[2-羥基]-4-[3-硝基苯基]-1,2,3,6-四氫嘧啶-2-酮)的主要生理元件[McKemyetal.,IdentificationofacoldreceptorrevealsageneralroleforTrpchannelsinthermosensation,Nature,416,52-58,2002]。TRPM8是具有1104個氨基酸殘基的蛋白質(zhì)，并且具有六個跨膜區(qū)。通過降低環(huán)境溫度激活該受體導致非特異性陽離子進入細胞。然后，感覺神經(jīng)元的去極化可以主要通過Aδ(以及一些C)纖維將信號傳輸至腦。盡管針對感覺生理學中TRPM8的角色的該概念對于溫度的物理變化可以是有效的，但化學劑如薄荷醇和icilin的感覺效果的解釋更加復雜。薄荷醇不僅刺激體外TRPM8，而且刺激TRPV3(與溫暖有關的受體)[Macphersonetal.,Morethancool:promiscuousrelationshipsofmentholandothersensorycompounds.MolCellNeurosci2006；32:335-343,2006]。薄荷醇還抑制TRPA1。icilin不僅刺激TRPM8，而且刺激TRPA1，并且icilin抑制TRPV3[Sherkhelietal.,Supercoolingagenticilinblocksawarmth-sensingionchannelTrpV3.ScientificWorldJournal2012；982725,2012]和甘氨酸傳遞(glycinergictransmission)[Choetal.TrpA1-likechannelsenhanceglycinergictransmissioninmedullarydorsalhornneurons.JNeurochem122:691-701.2012]。因此，薄荷醇和icilin是“混雜”藥物，并且它們的特異性感覺效果可能與任何一個特定的受體蛋白質(zhì)無關。對TRPM8受體的化學效能(由EC50μM測定)和引起口咽中的感覺事件的效能之間的相互關系是復雜的。發(fā)明人研究了21種化合物(包括在本文中描述的11種DAPA化合物、薄荷醇、icilin、7(種)對薄荷烷甲酰胺氨基酸酯(p-menthanecarboxamideaminoacidester)、以及1(種)對 薄荷烷羧基酯(p-menthanecarboxylester))，覆蓋了TRPM8效能的100倍范圍，其中的每一種均表現(xiàn)出TRPM8受體的全部功效，并且評價了它們的感覺效果。令人驚訝地，利用一些化合物觀察到了多種副作用。例如，在21種測試化合物中，在TRPM8效能中排第16位的薄荷醇在ODT的2mg劑量下產(chǎn)生了胸部不適。相比之下，在21種測試化合物中，在TRPM8效能中排第4位的icilin沒有產(chǎn)生胸部的冷卻，或喉嚨上的期望感覺。在21種測試化合物中，在TRPM8效能中排第1、第5、以及第13位的三種對薄荷烷甲酰胺氨基酸酯在喉嚨中產(chǎn)生了舒適的冷卻。然而，它們中的僅一種對于口咽具有期望的“清新/動態(tài)冷卻”。在DAPA化合物中，TRPM8受體效能與感覺事件的關系難以分類。令人驚訝地，具有針對活性成分的所有期望性質(zhì)的DAPA-2-5在21種測試的化合物中在TRPM8效能中排第12位。如在研究4中示出的，用于激活TRPM8的候選物的EC50[半數(shù)有效量]對于鑒別用于治療上消化道中的感覺不適的候選物具有很小的預測價值。這并非令人驚訝，并且EC50值的過度解釋是幼稚的。多個EC50值的95％的置信界限重疊，并且僅在效能中具有至少5倍差別的類似物在感覺效果方面彼此清晰可辨。EC50值不會給出有關排熱感覺的質(zhì)量、作用持續(xù)時間、或使人不愉快的味道的可能性的信息。因此，選擇性試劑的識別需要更加能夠直接解決這些問題的其他生物測定。近來，已經(jīng)表明，存在分別介導無害涼爽、抗感受傷害性活性、以及冷疼痛的作用的表達TRPM8神經(jīng)元的不同組[Knowltonetal.,Asensory-labeledlineforcold:TRPM8-expressingsensoryneuronsdefinethecellularbasisforcold,coldpain,andcooling-mediatedanalgesia.JNeurosci33,2837-2848.2013]。于是，給定的TRPM8激動劑的感覺效果將是對于每個子集神經(jīng)元的刺激作用的平衡。DAPA-2-5可以是折中的激動劑(eclecticagonist)，選擇性地產(chǎn)生無害涼爽和抗感受傷害，而不會引起刺激/疼痛或不利味道。治療不適的喉嚨中的精確的期望感覺當TRPM8受體效能篩選不能夠用作用于活性成分的選擇的主要方法變得清晰時，有必要開發(fā)生物測定的替代方法。喉嚨中的期望感覺的精確定義有必要設置用于進一步測試的階段。當將測試化合物施加至非角化性體表面(例如，口咽表面)時，可以表征所得的感覺。由各個化合物產(chǎn)生的感覺質(zhì)量支持某些不同的特性。將引起的感覺的質(zhì)量、它們的描述符、以及它們的提出作用機制總結在以下表中。對于任何化合物，在活性上可以存在一些重疊，但通常一種化合物僅占據(jù)一種或兩種感覺類別。研究的一些DAPA化合物在口腔中引起酷寒的感覺。感覺類似于快速飲用利用冰片混合和平衡的冷水。如果例如利用檸檬水將飲料酸化，將進一步加劇酷寒?？梢詫⒖谘时砻嫔系倪t鈍感覺和酷寒描述為痛苦、不舒服、以及令人厭惡。術語“冰冷”用于描述這些不利的酷寒感覺。例如，利用DAPA-1-6、DAPA-2-6、以及DAPA-2-7，指出的第二種類型的冷不適是胸部冷的感覺。冷的感覺位于胸骨后面和上胸中。最可能地，化合物快速分布，并且在食管內(nèi)層中激活冷感覺。一些受試者認為這些感覺是使人不愉快的，但在胃灼熱和胸痛的治療中可以具有效用。在DAPA-2-7的較高口服劑量(例如，5mg或更多)下，還注意到在其他體表面上存在冷的感覺。面部皮膚和眼球表面感覺到?jīng)鏊屠?。肩胛骨和踝的表面皮膚也感覺到?jīng)鏊屠洌绕涫侨绻谑覂?nèi)存在穿堂風(增加的氣流)。手感覺到冷，好像血管收縮。這些感覺可以由DAPA-2-7至血流中的全身性吸收引起?？商鎿Q地，可能的是，一個部位處的強烈的 涼爽可以使得大腦“概括”感覺，并且將涼爽歸于身體的其他部分。如果不是測試受試者所預期的，這些全身性冷感覺可能是令人擔憂的，并且將其認為是使人不愉快的。將這三種類型的感覺-“冰冷”、胸部的冷、以及全身性冷稱為“冷不適”。冷不適限制了針對設計用于對口咽/上食管局部作用的藥劑的活性成分的選擇。理想藥劑必須具有局限的作用部位，并且感覺強度不應當引起“冰冷”、胸部的冷、或全身性寒戰(zhàn)?？谇?、喉嚨、以及上食管可以感覺涼爽、寒戰(zhàn)、以及冷。這是人類經(jīng)歷的事實。當將冰淇淋放置在口中時，在舌頭上以及在口壁上存在令人愉快的冷卻以及甜的感覺。當吞咽冰淇淋時，在口的后部存在非常短暫的(至多一秒或兩秒)強烈的清新感覺?？梢酝ㄟ^反復吞咽或啜冰淇淋，或“奶昔”或“冰沙”的同樣啜取，重復上喉嚨中的這種感覺。這是用于治療口咽/食管不適的期望的感覺。在本文中將這種感覺描述為“動態(tài)涼爽(dynamiccool)”，并且與涼爽、冷、或冰冷不同。該“動態(tài)涼爽”產(chǎn)生了“驚喜(vow)”效果，這是因為其是強烈的并且是令人愉快的?？梢詫⒑韲抵械摹皠討B(tài)涼爽”感覺與快速啜冰冷的水或檸檬水的涼爽、冷、以及冰冷感覺對比。例如：攝取一杯用冰片(攪拌之后)平衡的溫度為約4℃的水。以約1啜/秒的速率開始啜水。第一個5次啜取是令人愉快的，但通過5至10次啜取之后，喉嚨感覺遲鈍的冷，并且在約10至15次啜取之后，喉嚨中的冰冷變得使人不愉快，并且能夠在胸中感覺到冰冷的感覺，中途向下至胃。這些令人不愉快的感覺構成“冷不適”。為什么啜冰淇淋的感覺不同于冰冷水的感覺？在兩種情況下，喉嚨中的內(nèi)容物的溫度大約相同，但利用冰淇淋在喉嚨中很少可能獲得令人不愉快的冷！一種解釋是制作冰淇淋的油和脂肪的熱導率與水不同。例如，橄欖油的熱導率值是0.17W/m·K，而水的熱導率值是0.58W/m·K。與冰淇淋相比，具有較高熱導率(以及較高熱質(zhì)量)的冰水吸取更多熱量。然后，從喉嚨表面的排熱速率是感覺感知的決定因素，并且當其太過迅速或連續(xù)時，存在冷不適。另一方面，平滑的排熱速率產(chǎn)生清新的感覺。實驗上，具有高奶油含量的冰淇淋如香草對于引起“動態(tài)涼爽”起最佳作用。然后，目標是識別產(chǎn)生最佳“動態(tài)涼爽”而不是“冷不適”的化學感覺藥劑(即，不會排熱的化合物)。令人驚訝地并且出乎意料地，DAPA-2-5在口咽中引起“動態(tài)涼爽”持續(xù)5min至15min，而不存在“冷不適”。DAPA-2-5通過位于口咽喉中的傳入神經(jīng)的感受野上的作用引起“動態(tài)涼爽”。感覺神經(jīng)包括面部(7th)-使鄰近腭扁桃體的表面受神經(jīng)支配，舌咽神經(jīng)(9th)-使較后的1/3舌頭和口咽壁受神經(jīng)支配，以及迷走神經(jīng)(10th)-使口咽和咽喉的橫向/較后的壁部分受神經(jīng)支配。進一步沿著呼吸消化道向下，上食管由迷走神經(jīng)和脊髓傳入神經(jīng)刺激神經(jīng)。技術上的困難阻止了來自7th、9th以及10th神經(jīng)的感受野的感覺輸入的直接測量，但已經(jīng)針對來自大鼠的口鼻(snout)皮膚的感受野的5th神經(jīng)進行了映射。通過推論，可以假定對于所有這些腦神經(jīng)，信息的處理是相同的。從對大鼠的面部和舌的無害熱刺激做出反應的大鼠表面髓狀背角，已經(jīng)記錄并且研究了5th神經(jīng)的神經(jīng)元的中樞反應。-Δ5℃的階躍變化刺激具有靜態(tài)放電率的細胞和主要具有動態(tài)特性的細胞[Davies,SNetal.Sensoryprocessinginathermalafferentpathway.J.Neurophysiol.53:429-434,1985]。在貓和人類中的類似研究表明：通過神經(jīng)元以及通過精神物理學測量可很容易地檢測溫度以如Δ0.5℃/s這樣低的階躍降低(動態(tài)變化)[Davies,SNetal.Facialsensitivitytoratesoftemperaturechange:neurophysiologicalandpsychophysicalevidencefromcatsandhumans.J.Physiol.344:161-175,1983]。從神經(jīng)元放電尖峰模式(spikepatterns)(脈沖/s)的研究來看，可清楚的是，對溫度變化的動態(tài)而非靜態(tài)放電反應是產(chǎn)生涼爽/冷感覺的最有力的刺激[參見，例如Davies等，1983]。也就是說，大腦“看到”-Δ℃/t而不是絕對的℃。因此，模擬有關神經(jīng)放電的最佳-Δ℃/t的藥劑將產(chǎn)生“動態(tài)冷卻”。局部遞送至靶的方法在本申請中，治療的概念是將抗感受傷害性藥劑局部施加至5th、9th、以及10th腦神經(jīng)的感受野的部分上，例如，局部施加至口腔、口咽、上食管、以及上氣道的表面上。設計施加的感覺藥劑以抵消酸、刺激物、以及炎癥的影響，并且減輕刺激、癢、和/或疼痛。固體/液體經(jīng)由口咽的快速輸送時間(～35cm/s)是局部藥物遞送至神經(jīng)元感受野的障礙，但這種障礙能夠通過將活性成分配制為放置在舌頭的中后部背面上的口腔崩解片(ODT)，或通過集中遞送(focuseddelivery)液體溶液中的藥劑，例如以粗滴(大液滴，macrodroplet)、凝膠、或以氣霧劑(遞送)而規(guī)避。將快速口腔崩解片(ODT)定義為：“當放置在舌頭上時，在30s內(nèi)快速崩解的包含藥用物質(zhì)的固體劑型。此外，設計產(chǎn)品以在與唾液接觸時快速崩解或溶解，因而排除了咀嚼片劑、吞咽完整的片劑、或用水服用片劑的需要”[美國衛(wèi)生和人類服務部，食品和藥物管理局，藥品評價與研究中心(CDER)，行業(yè)指南：口腔崩解片，2007]。通常將口腔崩解片(ODT)用于將藥物遞送至血流中。在本發(fā)明的上下文中，將ODT用作用于局部化的局部遞送活性成分至上呼吸消化道的非角化性復層上皮(NKSE)表面上的方法。如用于本發(fā)明中所預期的，在稱重為50mg至150mg的片劑(例如，按重量計0.6％至10％的片劑)中包含約1mg至5mg的DAPA-2-5的片劑足以用于達到期望的感覺效果。如果喉嚨中的刺激來自鼻滴(nosedrip)或酸反流，在口咽中的快速分解是最有效的，但如果來自氣道的刺激物向上進入咽喉中，其效率較低?？诜瑒┑娜芙鈨?nèi)容物在涂覆氣道入口處的神經(jīng)末梢中具有較大的困難，這是因為吞咽刺激氣道孔的關閉。對于氣道粘膜，噴霧遞送可以是更有效的。本發(fā)明的DAPA化合物在室溫下是無色或略微黃的液體，并且具有小于水的密度，通常是約0.7g/mL至0.8g/mL。DAPA分子與C5至C16烷烴存在表面相似之處，但氧化膦基團具有強的氫鍵活性，并且有效的化合物在水中以至少10mg/mL至20mg/mL的濃度可溶解。相比之下，C5至C16烷烴不會與水混合。之前，沒有人曾嘗試使用片劑制造機(制片機)利用DAPA化合物生產(chǎn)ODT，這證明了存在相當大的挑戰(zhàn)。ODT的研制開始于將在壓制下結合以形成片劑的顆粒集合(collectionofparticles)的“制粒過程”。通過選擇正確的參數(shù)，用于粉末共混物的配方將自由流動至壓片機的漏斗中，可壓實成一定硬度，具有最小的易碎性，并且快速崩解。近年來，直接壓制是用于制備ODT的有利方法，其中，將成分的組預共混，與活性成分混合，放置在壓片機上，并且快速制備。預共混物中的有利的成分或賦形劑是填充劑(bulkingagent) 如多元醇[例如，甘露醇或乳糖]以及潤滑劑如硬脂酸鎂。直接壓制減少了制造中的步驟并且降低了成本。將活性成分和賦形劑的共混粉末稱為可壓制的直接共混物制劑。令人驚訝地，DAPA化合物與多種標準預共混物制劑的混合導致了油性非自由流動的粉末。例外是PharmaBurst500，但該共混物不是可壓制的。當將DAPA化合物吸附至稱為硅酸鋁鎂的礦物賦形劑上時，克服了這些制劑問題。在本發(fā)明的一種優(yōu)選的實施方式中，硅酸鋁鎂可以是由FujiChemicalIndustryCo.,Ltd生產(chǎn)的NeusilinTM、或Al2O3·MgO·2SiO2·xH2O[參見www.fujichemusa.com]。用于口服給予的ODT的替代物是凝膠，其被定義為在其自然狀態(tài)下是非流動性的聚合物混合的膠狀材料。水凝膠，即，其中水是主要組分的凝膠是特別優(yōu)選的，這是因為其將在口的后部快速溶解。使用凝膠或糖漿作為調(diào)味品對于本領域眾所周知，并且類似的成分和制劑可以用于遞送DAPA-2-5。對于液體遞送，替代方法是使用進料有活性化合物并且適于將活性化合物遞送至例如以下的裝置和分配器：●人的口咽；●人的上食管表面；和/或●人的上氣道。優(yōu)選地，裝置或分配器是具有或不具有適配器的手動啟動或定量分配器，以大量選擇性地將活性化合物遞送至人類表面上，例如使得按重量計至少70％的活性化合物繞開口腔而遞送至期望的表面上。取決于孔徑尺寸和分配機制的速度，遞送的液滴可以是氣霧劑或粗滴。優(yōu)選地，適配器(adaptor)是用于遞送裝置的間隔附件。優(yōu)選地，間隔附件具有從0.5英寸(～1.27cm)至4.0英寸(～10.2cm)的長度。優(yōu)選地，裝置或分配器適于遞送作為氣霧劑或粗滴的組分的活性化合物。優(yōu)選地，裝置或分配器的啟動適于以恒定劑量單位遞送活性化合物。優(yōu)選地，每次啟動期間的總劑量是1mg至5mg的活性化合物。優(yōu)選地，單位劑量獲得自0.05mL至0.2mL的活性化合物的液體制劑?？蛇x地，裝置或分配器附有關于其使用的說明(例如，書面說明)。由于水溶性和化學穩(wěn)定性，DAPA化合物尤其順從作為集中水噴霧，或以固定的液體等分部分，或以糖漿遞送。液體遞送的這些方法對于不能夠容易地使用固體劑型的個體(例如，幼兒、老年人)，以及具有流涎或吞咽困難的有缺陷的個體，可以是有用的。液體制劑的缺點是活性成分快速擴散至口腔的表面上，或液體快速輸送至食管中。這將限制活性成分與預定靶的接觸時間。優(yōu)選的制劑是包含1mg至5mg的DAPA-2-5的口腔崩解片[ODT]。當放置在口的后部處的舌頭頂部時，針對喉嚨不適和胃灼熱，這種制劑通常在小于10s內(nèi)發(fā)揮感覺效果，并且有效持續(xù)幾小時。優(yōu)選的液體制劑是溶解在25％(wt/v)的檸檬汁、1.5％(wt/v)的木糖醇、以及水中的1mg/mL至5mg/mL的DAPA-2-5?？梢詫⒃撊芤悍胖迷谒芰蟽σ浩恐?，并且利用分配器瓶(dispenserbottle)的擠壓“噴出”至口的后部上?？商鎿Q地，可以將溶液放置在具有手動啟動噴霧泵(帶有將有助于遞送至口的后部處的表面上的3英寸(～7.5cm)的間隔附件)的儲液瓶中。針對患者的“按照需要”基礎，而不是以固定時間間隔的藥物，設計藥劑的遞送時間表。通過這種治療策略，個體恢復了上呼吸消化道不適的自愿控制，并且能夠例如在晚上睡眠較好，獲得內(nèi)心平靜，并且具有較少的焦慮。對于肛門與生殖器表面，可以使用乳膏劑、洗劑、凝膠、溶液、或噴霧遞送系統(tǒng)。研究1毒性對DAPA-2-5和DAPA-2-7進行了初步毒理學研究。在艾姆斯氏試驗(菌株TA98和TA100，存在和不存在肝臟激活)中這些化合物沒有一種突變(試驗由Apredica,Watertown,MA,USA進行)。將溶解在3％乙醇/97％1,2-丙二醇或單獨的載體中的DAPA-2-7每天以30mg/kg體重皮下給予雄性大鼠(每組N＝8)，持續(xù)7天，并且在第8天時，用戊巴比妥鈉使動物安樂死，并且除去主要器官(身體、心臟、肝臟、肺、腎、睪丸、腦)并稱重。用蘇木精和伊紅將心臟組織(心室和心臟瓣膜)和肝臟樣品染色，并且檢查了組織學。在兩個組之間不存在身體或器官重量的顯著差別，并且心臟和肝臟組織學是正常的。具有相同設計，但利用通過填喂法以20mg/kg口服給予DAPA-2-5持續(xù)7天(每組中N＝10)的研究產(chǎn)生了類似的結果。在大規(guī)模試驗中，通過飲用水將DAPA-2-5給予雄性大鼠，持續(xù)40天。將DAPA-2-5與煉乳[8.5％]以0.5mg/mL混合，并且監(jiān)控液體消耗。治療組[N＝12只大鼠]中的平均攝入量是41mg/kg體重/天，持續(xù)40天。單獨的載體組是N＝11。在兩個實驗中，在用DAPA-2-5治療的組和用載體治療的組之間，不存在器官重量或組織學的統(tǒng)計學差異。結論是，在最小的不利影響風險下，DAPA-2-5能夠由人類志愿者以小于10mg的每日劑量口服進樣。研究2制備用于口腔表面和咽表面上的感覺試驗的ODTDAPA分子是具有連接至三個疏水烷基鏈的親水中心的液體，并且因此建立了用于結合至片劑賦形劑的不同尋常的分子環(huán)境。沒有人曾嘗試利用本發(fā)明的DAPA化合物研制ODT，并且該目標變得相當具有技術挑戰(zhàn)性。在本發(fā)明中，特別感興趣的賦形劑是硅酸鋁鎂。制備了三種ODT，并且將其標記為ODT-A、ODT-B以及ODT-C。在此，以一些細節(jié)描述了制劑和制備的詳細情況，這是因為發(fā)現(xiàn)了制粒配方是“藝術形式(artform)”，并且在實驗中需要相當大的努力。通過將DAPA化合物溶解在無水乙醇中，添加等重量的80％甘露醇-20％麥芽糖醇混合物，然后添加等體積的蒸餾水，制備ODT-A。然后，用玻璃棒攪拌混合物，并且利用一次性塑料吸液管將其分配至蠟或羊皮紙片上。然后，在熱源下干燥形成的粘性液體滴，持續(xù)至少4h。ODT-A中的API的標稱(nominal)劑量范圍從1mg/片至3mg/片。干燥的片劑各自平均稱重為150mg，并且當在舌頭的背面上時，快速完全溶解在唾液中并且包覆了口咽表面。這些片劑適合于初始試驗性研究，但尺寸不均勻，易碎(尤其是在高環(huán)境濕度條件下)，并且難以順從進一步的分析評價。在RaviMahalingam,Ph.D和RajendraS.Tandale,Ph.D的監(jiān)督下，由Formurex,Inc.,2470N.WilcoxRoad,Stockton,CA95215.Tel:(209)9312040的專家顧問制備了ODT-B。在通過引用合并于此的報告[FR-2013-1038，2013年5月1日，F(xiàn)ormulationofDAPA-2-5intoUpperEsopharyngeal/LowerPharynxDosageForms]中總結了該研究。實驗目的是 開發(fā)以1.5mg、2.0mg、5.0mg、以及8.0mg劑量遞送DAPA-2-5的原型片劑制劑，表征片劑性能，以及開發(fā)用于量化DAPA-2-5釋放的HPLC法。實驗方法.使用了這些材料，來源/Lot#：DAPA-2-5，PhoenixPharmaceuticals,Inc.Lot#429773；共處理的乳糖、聚維酮、以及交聚維酮(Ludipress)，J.T.BakerLot#1AH0516；微晶纖維素，NF(AvicelPH102)，F(xiàn)MCBiopolymerLot#P212824001；共處理的微晶纖維素和瓜爾膠(AvicelCE-15)，F(xiàn)MCBiopolymerLot#RH1082185；聚維酮，USP(PlasdoneK-29/32)，ISPTechnologiesLot#05100280713；黃原膠，USP/NF(Xanthural75)，CPKelco,Lot#2B4685K；甘露醇，USP(Mannogem)，SPIPharma,Lot#12000076G；共處理的ODT賦形劑(FMelt)，F(xiàn)ujiChemicalInd.Co.,Lot#201002；麥芽糊精，NF(altrinM510)，GrainProcessingCorporation,Lot#M0832960；膠體二氧化硅(Cab-O-SilM5P)，Cabot，Lot#1222272；硅酸鋁鎂，USP(NeusilinUS2)，F(xiàn)ujiChemicalInd.Co.Lot#009025；共處理的ODT賦形劑(Pharmaburst500)，SPIPharmaLot#10M019；共處理的乳糖(Ludipress)，BASFLot#17137275L0；羥丙甲纖維素，USP，50mPa.S，SpectrumChemicalsLot#2BIO277；硬脂酸鎂，NF(HyQual)mMallinckrodtLot#20100125。由制造商提供的預共混賦形劑通常是填充劑或稀釋劑，以及糖如甘露醇、乳糖、或麥芽糖醇。其他賦形劑是微晶纖維素、淀粉、膠體二氧化硅、羥基乙酸淀粉鈉，并且潤滑劑是硬脂酸鎂或硬脂酸鈣。以三個階段進行研究：經(jīng)由1)稀釋方法、2)吸附、或3)結合至粘膜粘附聚合物，通過利用預共混賦形劑稀釋，將DAPA活性藥理學成分[API]轉(zhuǎn)化成固體形式。稀釋方法：在～12個實驗中，將DAPA-2-5液體負載至賦形劑(批量大?。?2-24g)上。使用不銹鋼抹刀幾何地混合API和選擇的賦形劑，并且混合物通過篩#20。將篩過的共混物使用硬脂酸鎂(之前通過篩目#40過篩)潤滑，并且針對外觀和流動性能(通過漏斗)進行評價。根據(jù)流動性質(zhì)，使用Acura旋轉(zhuǎn)壓制機上的(對于120mg片劑)，或(對于高于120mg片劑)標準凹圓工具，將選擇的共混物壓制成片劑。針對厚度、硬度、易碎性、以及在室溫下在10mL的純化水中的崩解試驗，對片劑進行評價。拍攝了粉末共混物和片劑的外觀。賦形劑：Ludipress、AvicelPH102、AvicelCE-15、甘露醇、F-Melt、以及麥芽糊精，產(chǎn)生了外觀具有油性并且具有較差的流動的共混物。例外是Pharmaburst500共混物。然而，Pharmaburst500共混物示出了較差的可壓性，并且改變Pharmaburst500的量不會增強可壓性。利用兩種硅酸鹽賦形劑：NeusilinUS2和Syloid244FP，進行了進一步的試驗。令人驚訝地，NeusilinUS2是用于與DAPA-2-5共混的有效賦形劑。與Pharmaburst的隨后混合產(chǎn)生了能夠壓制成具有可接受的硬度、易碎性、以及崩解時間物理性能的片劑的共混物。嘗試了各種粘膜粘附聚合物，并且結果表明并入羥丙甲纖維素可以具有有益效果。通過幾個參數(shù)，評價形成的片劑。溶解速率是片劑溶解在固定體積的水[例如，10mL]中的時間，并且，在ODT的情況下，崩解時間應當小于30s。片劑硬度測量了“在儲存、運輸、以及在使用之前處理的條件下”的片劑的結構完整性。施加力至片劑直至其破裂，并且力的單位可以是牛頓或千克力(kp)。牛頓單位由等式1牛頓＝1kg·m/s2給出，其中，kg是千克，m是米，并且s是秒。易碎性或易碎，描述了固體物質(zhì)在很小的努力下破裂成較小塊的能力。易碎性的典型指數(shù)是在機械應力之后切下的片劑的％。用于針對100mgODT的臨床試驗的可以是最佳的用于ODT-B的最終預共混物是以下的混合：DAPA-2-5：1.5mg；NeusilinUS2：20.0mg；共混物：Pharmaburst50076.5mg；羥丙甲纖維素[50cps]1.0mg；以及硬脂酸鎂：1.0mg，以產(chǎn)生能夠放置在片劑制造機的漏斗中的非油性自由流動的粉末，以產(chǎn)生厚度(mm)：3.4，硬度(kp)：3.0-5.0，易碎性(％w/w)：0.04，崩解時間(S)：<20，以及具有良好可壓性的片劑。為了分析水溶液中的DAPA-2-5，開發(fā)了高壓液相色譜[HPLC]法。色譜條件是：柱：WatersXTerraRP18，150x4.6mm，3.5μm；柱溫：40℃；流動相：900mL水和100mL乙腈中的0.1％的四丁基銨和三氟乙酸；流動：1.0mL/min；稀釋劑：水；波長：226nm；注入體積：100μL；運行時間：10min；標準制備：水中的0.75mg/mL的DAPA-2-5。樣品制備：相當于水中的0.75mg/mL的DAPA-2-5。將包含DAPA-2-5的原型片劑崩解，并且測量了DAPA-2-5的含量。結果表明，86±2％的DAPA-2-5從水相回收，并且因而生物活性可利用。很可能的是，未洗脫的DAPA-2-5仍然緊緊地結合至NeusilinUS2上的位點。ODT-C.進行了更多的實驗以找到在40mg至60mg的范圍內(nèi)，具有<10s的崩解的較小片劑。這些參數(shù)可以達到較好的藥理作用。ODT-B大小是100mg，并且在<20s內(nèi)崩解。通過反復試驗(bytrialanderror)，發(fā)現(xiàn)用于共混DAPAODT的可再現(xiàn)的配方是：a.DAPA化合物溶解在按體積計等份的乙醇中，然后，添加1.5重量份至2.0重量份的NeusilinUS2，混合組合，并且通過將混合物放置在熱源，例如100瓦的電燈泡下蒸發(fā)乙醇。例如，向1.5g的DAPA-2-5中添加1.5g的無水乙醇，隨后添加2.0g的NeusilinUS2。在Speedmixer中以500rpm搖動或混合混合物，持續(xù)1min。將樣品放置在熱源下并且約2h之后，在預期乙醇已經(jīng)蒸發(fā)的情況下，重新稱重樣品大小，并且現(xiàn)在樣品稱重是3.5g。這種粉末是自由流動的。b.制備麥芽糖醇粉末樣品(來自Roquette的P200)。c.制備EasyTab樣品(JRSPharma,Rosenburg,Germany)。d.制備a.[2.80g]、b.[15.73g]、以及c.[31.46g]的共混物以制造1000ODT片劑，每個稱重為50mg并且包含1.2mg的DAPA-2-5。e.首先通過手搖動共混物，然后，在500rpm下的SpeedMixer中放置2min。將共混物傾注至新單沖壓片機PillMakingMachineMakerTDP-1-5[獲得自Amazon.com]的漏斗中，并且收集擠出的片劑。還發(fā)現(xiàn)第二無機賦形劑：CaHPO4、噴霧干燥顆粒、無水二堿式磷酸鈣(DibasicCalciumPhosphateAnhydrous)、無水磷酸氫鈣、由FujiChemicalCo.,Ltd.制造的商品名稱是在與預混合的共混物共混之前用于DAPA化合物的有效吸附成分。然而，吸附能力是NeusilinUS2的一半，并且崩解速率是兩倍長?？傊?，研制了DAPA化合物的原型ODT制劑。設計ODT用于將API遞送至咽表面和食管表面上。制粒過程旨在選擇用于將是自由流動的、壓實成一定硬度，并且具有最小易碎性以及快速崩解時間的粉末共混物的正確參數(shù)。發(fā)現(xiàn)了成功制劑中的關鍵因素是使用以NeusilinUS2商業(yè)上可獲得的鋁硅酸鹽氧化物(aluminummetasilicateoxide)。該賦形劑允許液體DAPA化合物配制在滿足使用標準的片劑中。代表性制劑由DAPA-2-5(l.5％)、NeusilinUS2(20.0％)、Pharmaburst500(76.5％)、羥丙甲纖維素(1.0％)、以及硬脂酸鎂(l.0％)組成。Pharmaburst500的替代預共混 物賦形劑是EasySolv。這些共混物具有針對壓制成ODT的優(yōu)異性能，并且滿足針對可壓性和ODT參數(shù)的標準。研究3ODT對于口腔表面和咽表面的感覺質(zhì)量針對對于志愿者的感覺性能，評價了研究2的DAPAODT。ODT-A結果[參見表]來自熟悉“冷卻劑”的感覺性能的幾個有經(jīng)驗個體的每種化合物的6至8次試驗。ODT-A的結果將與ODT-B和ODT-C一起討論。在施加ODT-A之后，存在與各種強度和持續(xù)時間的排熱有關的感覺。特別值得注意的是利用一些化合物感覺到“冰或痛苦”冷的感覺，但效果是可變的。為了更精確地辨別(isolate)這種感覺并且減少可變性，將ODT-A放置在舌頭上，并且在10min之后，指導受試者飲用一口之前利用冰片平衡的水。如果受試者在喉嚨中感到“正常涼爽”，值是“0”，如果水在喉嚨上感到“過度地冷”，將其評為“+”，并且如果在喉嚨上存在“疼痛冷/不適”，等級是“++”。將術語“冷不適”應用于產(chǎn)生了“++”的化合物，并且利用冷水測試，現(xiàn)在能夠容易地定義和鑒別這種現(xiàn)象。由FormurexCorp.制備的ODT-B外觀使人愉快，具有均勻的重量、硬度、顏色、以及幾何學。在篩選制劑之后，選擇組合物F25[1.5mg，100mg]和F27[8mg，240mg]用于詳細的測試。在舌頭表面上，100mg的片 劑大小非常適合，盡管體外崩解時間<20s以及片劑硬度為3kp至6kp，但在唾液中完全溶解相對緩慢(～1min)。通過啜取小量的水以潤濕舌頭加速了溶解，但在實踐中，增強片劑性能的該方法可能不方便。F27，較大片劑[8mg的DAPA-2-5]對于食管表面作用良好，并且在此，能夠利用水服用片劑。F27冷卻上食管，并且在胸部，向下至胸骨的水平能夠感到令人愉快的冷卻。對于治療胃灼熱以及對于非心源性胸痛的鑒別診斷，F(xiàn)27制劑和劑量將是優(yōu)異的原型。接下來的制劑目標是減少片劑大小以及加速溶解和遞送。在每種化合物至少3次試驗以及1.2mg/ODT至1.5mg/ODT下，針對感覺性能，對4個志愿者測試了在研究2中描述的ODT-C。將ODT放置在舌頭的中線后背側(cè)面上，并且以標準化形式記錄感覺效果，持續(xù)30min，并且以標準化形式記錄效果，持續(xù)30min。將ODT編碼(code)，并且在雙盲基礎上給予。將中等[0]、稍微涼爽[-1]、涼爽[-2]、冷[-3]、以及冰冷[-4]的修改的ASHRAE等級用于排列口和喉嚨中的峰排熱感覺。也注意到了其他感知效果，例如味道和持續(xù)時間。在表6中示出了結果。對于具有DAPA化合物的所有ODT-C，排熱感覺在放置ODT的1min內(nèi)明顯。與ODT-B片劑相比，開始快得多，并且可以反映改善的制劑。在排熱感覺的測定中不存在模糊(情形)，因此在15次試驗之后，中斷僅具有賦形劑而不存在DAPA化合物的安慰劑ODT的使用，這是因為這些安慰劑均被測試受試者識別，并且被立即評為零。排熱感覺在峰強度，或在藥理學術語、最大效能[或響應]中具有性質(zhì)上的差別，DAPA-2-5產(chǎn)生了清新的涼爽和冷，并且當劑量增加至8mg時，對于感覺存在燃燒的穿透質(zhì)量，但其不是有害的，即，不存在疼痛或明顯的不適。相比之下，1-6、1-7、2-6、以及2-7產(chǎn)生了對于喉嚨后部而言是痛苦的冷和冰冷。疼痛的程度及其持續(xù)時間足以將這些化合物評為對于治療是不期望的。DAPA-2-5具有由老化學家描述為“氯仿類”的輕微的有機甜味。相比之下，1-6、1-7、2-6、和2-7，以及其他類似物，例如1-8和1-9產(chǎn)生了持續(xù)至少20min的描述為“金屬性”、“收斂劑”、“未成熟的柿子樣”、以及“澀”的使人不愉快的味道。味道在舌頭上具有與8mg至10mg的高劑量下的1-薄荷醇的一些相似之處，但“金屬性”和其他感覺質(zhì)量是不同的，并且是有害的：即，受試者說其使人非常不愉快并且是不期望的。利用1-8、1-9、以及2-8，這些使人不愉快的味道尤其顯著。利用木糖醇，人造無熱量甜味劑掩蓋味道的嘗試沒有成功。味道質(zhì)量中的這些差別是令人驚訝的、不可預料的、以及出乎意料的，并且使得DAPA-2-5成為用于開發(fā)的最佳候選物。類似物1-4和2-4產(chǎn)生了<5min的冷卻效果，并且因此不具有治療價值。DAPA-2-5具有平均為～12.8min的冷卻效果，但冷卻持續(xù)時間隨著環(huán)境條件變化。喉嚨中的冷卻感覺在晚上、接近睡眠時間更顯著，推測這是因為存在較少的用于分心的環(huán)境提示。因此，排熱感覺將持續(xù)20min或更長，而不是僅12min。與2-6、1-6和1-7相比，2-7具有較長的冷卻作 用。盡管可能感覺不到明顯的冷卻感覺，但感覺不適的減輕能夠持續(xù)3+小時。從結構-活性觀點，盡管制劑中存在差別，但來自ODT-A和ODT-C的結果令人驚訝地產(chǎn)生了密切類似的結果和結論。R1和R2必須是仲烷基基團，即，連接至(或α位)磷原子的碳必須是支化的。因此，二異丁基部分(DAPA-3-1中)對于口咽實際上是無活性的。其中DAPA-2-5的正戊基由3-甲基-丁基(DAPA-3-2)取代的R3的末端碳的支化也導致活性的顯著喪失。但需注意的是，DAPA-2-5、DAPA-1-7、DAPA-3-1、以及DAPA-3-2具有相同的分子量，但它們的活性彼此明顯不同。在二異丙基和二仲丁基系列中發(fā)現(xiàn)了活性化合物。將R3中的碳數(shù)目從C4增加至C7增加了冷卻的持續(xù)時間，一種可以有助于親油性和組織保留的效果。在此，出乎意料的和令人驚訝的觀察是DAPA-2-5具有“動態(tài)涼爽”。[當R3是正戊基時]。但當R3由一種或兩種亞甲基基團擴展至正己基(DAPA-2-6)或正庚基(DAPA-2-7)時，化學品引起冷不適和不利的味道。減少正戊基的一個碳原子成為正丁基(DAPA-2-4)保留了冷卻清新，但該類似物作用時間太短以至于不可用于例如口咽障礙中。總之，ODT試驗令人驚訝地表明，DAPA-2-5是用于咽中的感覺不適的最佳API，具有治療有效的作用持續(xù)時間。用于API的第二選擇是2-7，但由于痛苦的冷和令人不愉快的味道使得其是較不理想的。存在使得DAPA-2-5是選擇性的和例外的藥物作用的性質(zhì)上的差別。測試化合物的性能(尤其是不利的味道)是出乎意料的，并且僅通過進一步的實驗和制劑才能發(fā)現(xiàn)。不具有冷不適和不利味道并且具有局部化的動態(tài)涼爽的DAPA-2-5中的正戊基基團的獨特特性是令人驚訝的，并且尚不能夠從現(xiàn)有技術預測。得出的結論是，DAPA-2-5是作為用于上呼吸消化道的抗感受傷害性藥劑的最佳API候選物。如果掩蓋了使人不愉快的味道，DAPA-2-7是替代物，并且其具有增加的作用持續(xù)時間和強烈的感覺體驗的優(yōu)點。研究4咽表面上的感覺質(zhì)量：疼痛炎癥的“疼痛”組分包括刺激、癢、以及不適，并且將這些端點的抑制稱為“抗感受傷害性”。為了確定化合物是否具有抗感受傷害性活性， 發(fā)明人已經(jīng)設計了改良的辣椒素激發(fā)方法以引起口咽不適：紅辣椒醬刺激試驗。放置在舌頭的后背面的紅辣椒醬引起了口咽的癢/刺激感覺。與紅辣椒醬有關的感覺位于口的后部，并且被清楚地識別，并且與刺激和清喉的欲望相關。施加至舌頭的后背面的紅辣椒醬引起了能夠利用包含活性成分的ODT容易抑制的感覺，但(這種感覺)不受僅包含賦形劑的ODT的影響。在紅辣椒醬刺激試驗中，使用如在研究3中的ODT遞送測試化合物，并且在30min之后，將0.2mL至0.25mL的醬施加至舌頭的后背面上(利用注射器或塑料棒)。將在本文中使用的紅辣椒醬稱為Yank紅辣椒醬(YSGourmetProductions,Inc.,POBox26189,SanFrancisco,CA94126)，并且是與點心(dimsum)(中國茶午餐)使用的眾所周知的調(diào)味品。如果不存在醬的刺激/癢感覺的抑制，值是“0”，如果存在一些抑制，值是“+”，并且如果存在完全的抑制，那么值是“++”。對于產(chǎn)生“++”得分的化合物，紅辣椒醬的刺激信號完全不存在，但仍然能夠容易地品嘗到來自調(diào)味品的醬油的咸味。在以下表中總結了結果?！?+”結果表明了紅辣椒醬的刺激作用的抑制。數(shù)值結果來自每種化合物的6至8次試驗。在紅辣椒醬刺激試驗中注意到的一個不同尋常的特征是口咽上的“動態(tài)涼爽”感覺(在咽刺激研究中測定的)持續(xù)了約10min至15min，然而，抗感受傷害性活性(在紅辣椒醬刺激試驗中測定的)持續(xù)了幾個小時。這種“記憶痕跡(memorytrace)”作用是最不同尋常的并且是令人驚訝的， 但如果清楚地認識到清除反射對于存活是必要的，并且一旦引起或增強，很可能恢復其他腦反射以處理喉嚨中的監(jiān)控障礙，則可以得到解釋。腦中的該恢復過程可以具有長持續(xù)時間?；钚訢APA化合物的抗感受傷害性活性非常吸引人，并且之前尚未觀察到。研究5關于TRPM8、TRPV1、以及TRPA1的激動劑活性使用Fluo-8鈣試劑盒和熒光成像讀板器儀器，在克隆的hTRPM8通道(由人類TRPM8基因編碼，在CHO細胞中表達)上評價測試化合物的體外效應。試驗由ChanTestCorporation進行(14656NeoParkway,Cleveland,OH44128,USA)。通過在HEPES緩沖生理鹽水(HBPS)溶液中稀釋儲備溶液，制備測試化合物和陽性對照溶液。將測試化合物和對照制劑負載在聚丙烯或玻璃襯里的384孔板中，并且放置在FLIPR儀器(MolecularDevicesCorporation,UnionCity,CA,USA)中。在每次測定中n＝4次重復下，以4至8個濃度評價測試化合物。陽性對照參考化合物是L-薄荷醇，其是已知的TRPM8激動劑。測試細胞是用人類TRPM8cDNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的中國倉鼠卵巢(CHO)細胞。對于試驗，將細胞以約30,000個細胞/孔，平鋪(plate)在平坦的透明底微孔滴定板的384孔黑壁中(類型：BDBiocoat多聚D-賴氨酸多孔細胞培養(yǎng)板)。將細胞在37℃下溫育過夜以達到適合用于熒光分析中的接近融合的單層。測試操作是除去生長培養(yǎng)基以及在37℃下用30min添加40μL的包含熒光-8的HBPS。將10μL的HBPS中的測試化合物、載體、或?qū)φ杖芤禾砑又撩總€孔并且讀取4min。濃度-反應數(shù)據(jù)經(jīng)由提供有FLIPR系統(tǒng)(MDS-AT)的FLIPR控制軟件分析，并且擬合以下形式的希爾方程：其中，“Base”是測試化合物的低濃度下的反應；“Max”是高濃度下的最大反應；“xhalf”是EC50，其是測試化合物產(chǎn)生最大活性的一半時的 濃度；以及“rate”是希爾系數(shù)。假設簡單的一對一的結合模式，作出了非線性最小二乘法擬合。使用GraphPadPrism6軟件，獲得了95％的置信區(qū)間。在以下表中總結了結果(TRPM8受體試驗中的激動劑活性)。11種測試的DAPA化合物均表現(xiàn)出對于TRPM8受體的充分的效力，即，在最高的測試濃度下，存在～100％的鈣內(nèi)流刺激，并且數(shù)據(jù)擬合S形劑量-反應曲線。更加有效的感覺化合物(1-6至1-8和2-5至2-8)的EC50落在具有重疊95％的置信區(qū)間的窄范圍內(nèi)。在能夠預測在上消化道中具有期望冷卻性能的化合物的EC50中，不存在區(qū)別特征。3-1和3-2的結構修飾導致生物活性的顯著喪失。在圖1中示出了針對DAPA-2系列的結果。圖1是TRPM8轉(zhuǎn)染的細胞中引起的測試化合物的熒光(相對熒光單位：％最大值)作為針對DAPA-2-4(圓形)、DAPA-2-5(正方形)、DAPA-2-6(倒三角形)、DAPA-2-7(菱形)、以及DAPA-2-8(星形)中的每一個測試化合物的濃度(μM)的對數(shù)的函數(shù)的曲線圖。與DAPA-2-5、DAPA-2-6、DAPA-2-7、以及DAPA-2-8相比，DAPA-2-4明顯效力較小。DAPA-2-5至DAPA-2-8的效能與重疊的95％置信區(qū)間類 似。然而，DAPA-2-5是優(yōu)選的，這是因為當體內(nèi)給予時，在這些化合物中存在不同的、選擇性藥理學區(qū)別。為了研究測試化合物的特異性，在TRPV1通道(在HEK293細胞中表達的人類TRPV1基因)和TRPA1通道(在CHO細胞中表達的人類TRPA1基因)上進行了進一步的研究。測試細胞是用人類TRPV1或TRPA1cDNA轉(zhuǎn)染的中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或人胚腎(HEK)293細胞。陽性對照參考化合物是辣椒素(已知的TRPV1激動劑)或芥子油(已知的TRPA1激動劑)。DAPA-2-5、DAPA-2-6、以及DAPA-2-7在100μM的最大測試濃度下在TRPA1通道上沒有表現(xiàn)出任何激動劑活性。令人驚訝地，DAPA-2-5、DAPA-2-6、以及DAPA-2-7表現(xiàn)出弱TRPV1激動劑活性，分別具有7.0mM、0.13mM、以及0.22mM的預計EC50。注意，在刺激TRPV1中，DAPA-2-5的效力是DAPA-2-6的1/54。在第二實驗中證實了DAPA-2-5、DAPA-2-6、以及DAPA-2-7的相對效能，并且其提供了用于利用這些化合物觀察到的不同藥理學特性的基礎。在膜片鉗實驗中，在轉(zhuǎn)染的細胞中以5μM還評價了DAPA-2-5，并且其表達了針對ASIC3(酸敏感)、hNav1.7(鈉通道)、以及hERG(鉀通道)的通道受體。盡管陽性對照(即，阿米洛利、利多卡因、以及E4031)在這些細胞中分別是活性的，但在這些細胞中針對DAPA-2-5沒有觀察到激動劑或拮抗劑活性?？傊?，TRPM8EC50[半數(shù)有效量]似乎具有很小的預測價值。多個EC50的95％的置信界限重疊，并且僅在效能中具有至少5倍差別的類似物彼此清晰可辨。從ODT研究，清楚的是“動態(tài)涼爽”、冰冷、不利味道、以及作用持續(xù)時間是重要的參數(shù)。但EC50不會給出有關排熱感覺的質(zhì)量、使人不愉快的味道的可能性、或藥物作用的持續(xù)時間的信息。因此，TRPM8的易接近性和功效不是由EC50定義。過度解釋EC50是幼稚的。需要其他生物測定以解決選擇性問題。研究6動物模型中熱引起的水腫的抑制將炎癥定義為血管化活組織對局部損傷的反應[Cotran,RS.1989.Inflammationandrepair.InRobbins:PathologicBasisofDisease,ed.S.L.Robbins,R.S.Cotran,V.Kumar,2:39-86.Philadelphia:Saunders.4thed.]。炎癥的特性征兆是紅、腫脹、熱、以及疼痛(以及功能喪失)。在熱引起的血管滲漏的模型中研究了DAPA化合物的抗炎性能[Weietal.Methodofinhibitinginflammatoryresponse.US4,801,612；Weietal.,Anti-inflammatorypeptideagonists.AnnualReviewPharmacolToxicol.33:9-108,1993]。當將戊巴比妥麻醉的大鼠(200g至300g體重)的爪浸漬在58℃的水中持續(xù)1min時，在30min內(nèi)，約1.8mL的正常爪體積增加了～88％，腫脹是由于爪的水含量的增加。測試是看在加熱之前將爪暴露于選擇的DAPA化合物持續(xù)30min是否降低了熱引起的爪體積的增加。將測試化合物以20mg/mL溶解于20％水-80％R-1,2-丙二醇中。使用連接至在其尖端利用聚乙烯60管片覆蓋的鈍21號針的注射器，以0.3mL/爪，將溶液施加至戊巴比妥麻醉的大鼠(200g至300g體重)的爪皮膚。在將溶液分布在爪上之后，將爪緊緊地封裝在從一次性手套切割的塑料手指(套)中。對側(cè)爪[對照]僅接收載體。在施加30min之后，將兩只爪都浸漬在58℃的水中持續(xù)1min。在浸漬30min之后，利用剪刀在踝關節(jié)切割兩只爪，并且稱重。在初步研究中，發(fā)現(xiàn)了在熱暴露(58℃的水持續(xù)1min)之后，對照動物(N＝12)的爪重量從1.77±0.02g(平均±S.E.M.)增加至3.33±0.07g，爪重量增加88±2％。如由圖2中的數(shù)據(jù)示出的，相對于對側(cè)爪，DAPA-2-5將該反應顯著抑制了12.9％(P<0.01)。由于損傷刺激物具有超大強度，因此針對組織保護，該抑制程度是顯著的。對于未經(jīng)訓練的觀察者，DAPA-2-5效果是顯而易見的。這些結果是令人驚訝的，這是因為沒有預期到DAPA-2-5的這種抗炎性能，并且之前在科學文獻中尚未對此進行報道，此外，對于其他DAPA化合物，沒有看到DAPA-2-5的抑制效果。在其他文獻(elsewhere)已經(jīng)討論了熱引起的水腫的機制[Reedetal.,Transcapillaryexchange:roleandimportanceoftheinterstitialfluidpressureandtheextracellularmatrix.CardiovascularRes.87:211-217,2010]。熱損傷組織的變性蛋白質(zhì)展開并且暴露親水基團。隨后，降低的細胞外基質(zhì)的組織間隙液壓從血液隔室吸收水進入皮膚。這導致了快速的組織水腫。DAPA-2-5而不是其他測試的DAPA化合物抑制了該過程[參見圖2]。*P<0.01相對于對側(cè)爪研究7動物模型中的炎癥效應利用一些DAPA化合物觀察到的冰冷刺痛感覺表明，它們可能是直接刺激物。通過將20μL的純化合物施加至戊巴比妥麻醉的大鼠的刮去的腹部皮膚上，測試了該假說。將測試物質(zhì)封閉(enclose)在乳膏劑環(huán)的～1cm直徑的環(huán)中。利用微量吸液管施加測試物質(zhì)，并且在1小時之后，利用化裝棉擦拭區(qū)域，并且將存在的紅(刺激)評定為0至+++的等級。在以下表中總結了數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)表明，未稀釋形式的DAPA-2-6和DAPA-2-7中的每一種是皮膚刺激物。相比之下，純DAPA-2-5對于皮膚具有最小或無促炎作用。由于DAPA-2-5的一些預期用途是關于發(fā)炎的粘膜和變移上皮，因此DAPA-2-5的炎性作用的缺乏是重要的，并且DAPA-2-5的任何抗感受傷害性作用可以加重刺激或疼痛。此時不清楚這些結構上類似的化合物的選擇性和非選擇性的確切原因，但其可以包括其他受體如由高濃度下的DAPA-2-6和DAPA-2-7激活的TRP通道(如，TRPV1)下的相互作用。這些結果還與稱為咽喉反流(LPR)的咽障礙中DAPA-2-5的可能性應用具有特定關聯(lián)性。在LPR中，胃酸和胃蛋白酶回流至咽喉表面上，并且引起組織損傷。利用喉鏡，患者咽周圍的炎癥容易可視化，并且炎癥引起疼痛、嘶啞、以及清嗓。目前，治療的主要方法是例如使用質(zhì)子泵抑制劑減少來自胃的酸分泌物，然而，不存在治療喉嚨中的不適或咽粘膜炎 癥的方法。配制用于以口腔崩解片(ODT)、凝膠、液體溶液、或氣霧劑遞送的藥劑如DAPA-2-5，提供了用于LPR的炎性粘膜治療的新策略。研究8上呼吸消化道內(nèi)層中的主要內(nèi)源刺激物是鹽酸。咽粘膜的酸刺激將引起反射性吞咽。接受區(qū)域(接收區(qū)域)位于咽壁中，并且受舌咽神經(jīng)(9th)和內(nèi)部喉上神經(jīng)(10th)神經(jīng)支配。在大鼠動物模型中，有機酸如乙酸和檸檬酸的溶液在引起吞咽中是有效的[Kajiietal.,SourtastestimulationfacilitatesreflexswallowingfromthepharynxandlarynxintheratPhysiology&Behavior77:321-325,2002]。在本發(fā)明中，用于測量對于酸的感覺響應的方法適于篩選可以抑制對于鹽酸的敏感性的藥劑。因此，抑制酸激發(fā)的藥劑在減輕胃灼熱不適中具有效用。在俄羅斯圣彼得堡巴甫洛夫生理學研究所進行了實驗。稱重為200g至400g的成年雄性Wistar大鼠獲得自Roppolovo動物飼養(yǎng)所。利用戊巴比妥鈉/氨基甲酸乙酯(urethane)將所有大鼠麻醉，并且固定在仰臥位。利用加熱墊，將體溫維持在37.0℃。在頸的腹側(cè)面進行正中切口，并且將氣管插管。將導向管(聚乙烯，直徑：2.2mm)固定在硬腭的中線處，然后，將內(nèi)部灌注管(聚乙烯，直徑：0.9mm)平齊軟腭的末端放置。該操作允許在最小機械擾動下利用液體刺激咽喉區(qū)域。將食管導管放置在胸水平處，以在灌注之后排出溶液。使用灌注泵，以1.5μL/s的流速將灌注溶液施加至咽喉區(qū)域持續(xù)20s，產(chǎn)生了約30μL的總單位體積。以2min至3min的時間間隔施加刺激，時間間隔允許利用抽吸漂洗和清理。灌注的溶液是蒸餾水、生理鹽水、0.1N的鹽酸、或溶解在生理鹽水中的測試化合物。將成對單極電極插入在單側(cè)下頜舌骨肌中，以記錄肌動電流圖(EMG)活動和處理用于隨后分析的信號。將吞咽動作確定為EMG活性，并且還可以將其可視化為喉動作。將固定時間間隔中的吞咽的次數(shù)用作端點。測試過程類似于早期描述的那些(參見，例如Kajii等人，2002)。同樣，食管的排出物處于胸水平，以避免咽的機械擾動。溶液的灌注速率是1.5μL/s，持續(xù)15s至18s。用于測試化合物的載體鹽水不會誘導吞咽動作。對于0.1N的HCl灌注(約18秒期間30μL)的響應是高度重復的。在1min內(nèi)平均存在36 ±4次吞咽動作(N＝7只大鼠)。在具有休息期或以10min的時間間隔鹽水灌注的2小時期間內(nèi)，在同一大鼠中能夠引起這種響應。將Dixon的上下法(up-downmethod)[Efficientanalysisofexperimentalobservations.Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.:20,441-462,1980]用于吞咽響應的滴定抑制，并且獲得具有50％的吞咽頻率降低的EC50，作為計數(shù)反應(定量反應)終點。將DAPA-2-5的EC50(N＝8)評價為0.09mg/mL。在圖3A-3D中示出了實驗的實例。圖3A-3D示出了在將0.1N的HCl灌注在口咽中之后，從麻醉大鼠的下頜舌骨肌記錄的肌動電流圖(EMG)活動的振幅(mV)的圖。圖3A：在酸之后47次吞咽。圖3B：用約18s的DAPA-2-5的灌注(0.4mg/mL，以1.5μL/s)抑制了5min之后產(chǎn)生的酸激發(fā)(3次吞咽/min)。圖3C：在DAPA-2-5之后10min產(chǎn)生的第二次酸激發(fā)引起了僅9次吞咽/min。圖3D：在鹽水漂洗(1.5μL/s，持續(xù)20s)之后，在DAPA-2-5之后15min的第三次酸激發(fā)產(chǎn)生了27次吞咽/min的部分恢復響應。在以下表中總結了針對所有測試化合物的數(shù)據(jù)(其中，每種化合物N＝4至8次實驗)。為了比較，在最后一欄中示出了TRPM8受體試驗的EC50。盡管DAPA-2-6、DAPA-2-7、以及DAPA-1-7在TRPM8受體試驗中更有效，但對于抑制酸誘導的吞咽，DAPA-2-5是最有效的化合物。在圖4中示出了針對測試的DAPA化合物的EC50和IC50的相對效能的比較?？梢郧宄乜闯?，效能的兩種生物測定量度(measure)不相關。用于抑制酸誘導的吞咽的TRPM8EC50試驗和IC50之間缺乏效能的相關性，這一點相當驚人。例如，在受體試驗中，DAPA-2-6具有兩倍于DAPA-2-5的效能，但僅是其抑制吞咽活性的5％。DAPA-2-7不如DAPA-2-5 有效，但其對于吞咽抑制的持續(xù)時間具有更長的持續(xù)時間。對于胸痛的鑒別診斷，與DAPA-2-5相比，由于DAPA-2-7較長的作用效果，其可以更有效。這些實驗結果再次強調(diào)相對于類似的類似物，DAPA-2-5對于上消化道的不同尋常的選擇性活性。對于DAPA-2-5在抑制咽和上食管的酸反流相關不適中的潛在應用，這種酸刺激動物模型中的結果尤其相關。然而，應當注意的是，DAPA-2-7相對DAPA-2-5的較長作用持續(xù)時間表明，其可以是DAPA-2-5用于酸反流疾病中的替代候選物。研究9對離體迷走神經(jīng)的研究：直接抗感受傷害性活性為了檢查DAPA-2-5對于抑制感覺不適的能力，在英國倫敦帝國學院(ImperialCollege,London,U.K.)開發(fā)的動物模型中對其進行了測試[Birrelletal.TRPA1agonistsevokecoughinginguineapigandhumanvolunteers.Amer.J.RespiratoryandCriticalCareMedicine180,1042-7,2009；Pateletal.,Inhibitionofguinea-pigandhumansensorynerveactivityandthecoughreflexinguinea-pigsbycannabinoid(CB2)receptoractivation.BritishJ.Pharmacol.140,261-82003]。在該體外試驗中，將迷走神經(jīng)片段放置在平臺上，并且在局部施加辣椒素之后記錄電活動性。當將其施加至皮膚時，辣椒素是引起疼痛的已知刺激物，并且其將去極化離體迷走神經(jīng)。測定了物質(zhì)抑制這種辣椒素誘導的去極化的能力。簡言之，用精細鑷將近尾部結狀神經(jīng)節(jié)的迷走神經(jīng)片段從小鼠中除去，并且將片段放置在充氧的克雷布斯液中并且用95％O2/5％CO2起泡。將去鞘神經(jīng)干固定在‘油脂-間隙(grease-gap)’記錄室中，并且經(jīng)常以約2mL/min的流速用克雷布斯液傾注，并且神經(jīng)的電活動性用電極監(jiān)控。通過水浴將灌注液的溫度保持在37℃恒定。用辣椒素(1μM)灌注神經(jīng)，誘導神經(jīng)去極化。在兩次對辣椒素的可重現(xiàn)去極化響應之后，將DAPA-2-5以灌注液的形式用10min以1mg/mL(4μM)施加，接著施加辣椒素。然后，將神經(jīng)用克雷布斯液洗滌直至響應已經(jīng)返回基線并且再次用辣椒素激發(fā)(挑戰(zhàn))。在圖5A-5B中示出了在正常和TrpM8基因敲除(knockoutmouse)的小鼠中獲得的結果和跡線。圖5A-5B示出了在第一跡線圖5A(“野生型”)中說明由以1mg/mL傾注的DAPA-2-5引起的離體小鼠迷走神經(jīng)的辣椒素誘導的去極化的抑制 以及在第二跡線圖5B(“TRPM8KO”)中說明由以1mg/mL傾注的DAPA-2-5引起的離體TRPM8KO小鼠迷走神經(jīng)的抑制的顯著缺乏的極化跡線。在圖5A-5B中示出的跡線中，前兩個峰示出了小鼠迷走神經(jīng)對辣椒素(“Caps”)的去極化響應。在施加DAPA-2-5(1mg/mL)之后，響應在正常小鼠迷走神經(jīng)圖5A(“野生型”)中受到抑制，但在TRPM8基因敲除圖5B(“TRPM8KO”)小鼠迷走神經(jīng)中沒有受到抑制。由DAPA-2-5引起的離體正常小鼠迷走神經(jīng)的辣椒素誘導的去極化的抑制百分數(shù)是約60％；由DAPA-2-5引起的離體TRPM8基因敲除小鼠迷走神經(jīng)的辣椒素誘導的去極化的抑制百分數(shù)是約0％。該實驗清楚地表明了DAPA-2-5對于感覺神經(jīng)的直接藥理學作用，這是令人驚訝的并且是出乎意料的結果。此外，TRPM8KO小鼠響應減弱表明受體目標是TRPM8。這些結果提供了強有力的證據(jù)，證明DAPA-2-5可以用作對由感覺神經(jīng)如迷走神經(jīng)神經(jīng)支配的非角化性膜的抗感受傷害性藥劑。辣椒素是TRPV1激動劑，并且尋找有效的TRPV1拮抗劑在過去十年或更多年前一直是眾多藥物公司的超強追求。本文表明了DAPA-2-5在低濃度下是TRPV1有效的“生理學”拮抗劑。DAPA-2-5本身不會引起去極化，表明其在該“疼痛”受體下不具有激動活性。這些結果有力地表明DAPA-2-5作為抗感受傷害性藥劑的有用性。研究10豚鼠咳嗽模型在中國廣州的廣州醫(yī)科大學的廣州呼吸疾病研究所的呼吸疾病國家重點實驗室進行了該研究。研究者是DongPeiJian、LiuChunLi、ZhangQingling、WeiTakFung、以及ZongNanShan。在標準化豚鼠咳嗽模型中評價了DAPA-2-5。稱重為250g至300g的年齡約一個月的雄性特定無病原體豚鼠獲得自中國廣州省的醫(yī)學實驗動物中心，并且在12h光循環(huán)和20次換氣/h的情況下，將其飼養(yǎng)在維持在22±2℃和55±15％濕度的室內(nèi)。由機構動物護理和使用委員會批準了實驗過程。將豚鼠放置在配備有以2.5L/min的速率排除空氣的偏流調(diào)節(jié)器的透明塑料2L體積描記室(Buxco,Wilmington,NorthCarolina,USA)中。使用具有0.6mL/min輸出的超聲波霧化器，將2mL溶解在鹽水中的1M檸檬酸(Sigma)遞送至室，其遞送具有估計0.9mm平均粒徑的氣霧劑(LabNebulizerSystem,Aerogen,Galway,Ireland)。將動物暴露10min。豚鼠的咳嗽以快速、腹部運動發(fā)生，伴隨特有的發(fā)聲。以室中氣流的瞬時變化和通過壓力傳感器和計算機記錄的信號，檢測頻率。此外，還電子地記錄了音頻放大計數(shù)。對咳嗽進行計數(shù)，持續(xù)10min暴露期。實驗由研究者視覺監(jiān)控。針對所有動物(N＝20)，記錄了咳嗽的基線頻率，并且在7天之后，利用乙醚(二乙醚，diethylether)將動物麻醉。將小動物喉鏡用于將微型噴霧注射器的尖端放置在口腔中。針對小劑量遞送的專門儀器來自PennCenturyInc.Wyndmoor,PA19038USA。在每組N＝10下，以75μL/動物給予鹽水或以2mg/mL溶解在鹽水中的DAPA-2-5。在注射10min之后，將豚鼠暴露于檸檬酸霧，并且記錄咳嗽次數(shù)。圖6示出了結果圖。暴露于1M的檸檬酸溶液的豚鼠(N＝20)具有每10min觀察期間19.9±3.9次咳嗽的咳嗽頻率。一周后，遞送至口咽區(qū)域中的鹽水不影響咳嗽頻率(18.0±4.0次咳嗽)，但以75μL/動物遞送的鹽水中的2mg/mL的DAPA-2-5抑制了咳嗽(6.7±1.6次咳嗽，P<0.01曼-惠特尼U檢驗)。在麻醉的大鼠和豚鼠中的這些臨床前研究確定了DAPA-2-5和相關分子具有針對上消化道中的酸刺激的抗感受傷害性作用。利用相同的設計，但使用辣椒素0.1mM霧作為刺激物重復了該研究。DAPA-2-5還抑制了該豚鼠模型中的辣椒素誘導的咳嗽。這是其中局部冷卻劑已經(jīng)示出了抑制標準化動物試驗模型中的咳嗽的第一實例。案例(病例，case)研究162歲男性是制藥公司的高級主管。他具有繁忙的工作時間表，但對導致持續(xù)性嘶啞和咳嗽的病毒性感冒敏感。這些癥狀對于他的社交方面是令人憂煩的，這是因為他喜歡參加歌劇(表演)，并且這些癥狀還干擾他在持續(xù)幾個小時并且需要他積極參與的持續(xù)商務會議中的角色(狀態(tài)發(fā) 揮)。他自愿嘗試包含1mg至1.5mg的DAPA-2-5的口腔崩解片(ODT-A)。使用甘露醇(75至80％wt/wt)和麥芽糖醇或木糖醇(20至25％wt/wt)作為賦形劑，制備這些ODT。片劑通常各自稱重為50mg至120mg，并且包含1mg至5mg的DAPA-2-5。對于該個體，DAPA-2-5的1mg至1.5mg的劑量在當他需要時的五次場合下可完全有效地減輕他的嘶啞。他評論說，ODT的適宜尺寸允許他謹慎服用片劑。他評論說，DAPA-2-5ODT具有快速(作用)開始和“平滑的”感覺。他說如果不適當?shù)刂苽?，ODT有時具有“刺激的(edgy)”感覺，并且在“動態(tài)涼爽”開始之前使喉嚨發(fā)癢且引起咳嗽，但在其他方面不存在副作用。他還嘗試了噴出至他的喉嚨后面的2mg/mLDAPA-2-5溶液，并且他說這些感覺很好。他聲稱這是他因為喉嚨不舒服曾服用的最好的藥物。55歲的學術研究員曾赴亞洲會議，并且接觸地鐵和大型購物中心的人群。他出現(xiàn)了喉嚨痛，隨后是～+1℃的低熱，然后是強烈的咳嗽，具有來自胸部(下胸骨水平處)的“呼呼聲(gurgling)”不適。由于一旦躺下，他就感覺到他的喉嚨中的流體激烈鼓動并且咳嗽的發(fā)作無法控制，因此他無法入睡。他的喉嚨感到刺痛，并且他的喉嚨痛和嘶啞變得嚴重。他同意嘗試DAPA-2-5[1.5mg]片劑方案：正餐后兩片，晚上睡覺之前兩片，以及早晨兩片。令人驚訝地，他現(xiàn)在突然能夠控制他的咳嗽并且清楚地說話。他定時他的粘液質(zhì)產(chǎn)生，并且注意到隨著他好轉(zhuǎn)，以15min周期，然后是30min周期，然后是3h周期出現(xiàn)粘液質(zhì)。他將使用該時間表和周期以傾身，以35至40的脊椎角度，他的雙手放置在他的背側(cè)大腿上，并且咳進廁所或盥洗池。他說他能夠有效地處理發(fā)白的黃色粘液質(zhì)咳痰，并且具有排痰性咳嗽相對無痰干咳的約1:2的比率。他的喉嚨痛在兩天之內(nèi)消失了，并且在兩周內(nèi)，他沒有任何氣道不適。這是在DAPA-2-5之后增強咳嗽效率的突出案例。片劑給予的劑量模式從“按照需要”基礎變化至半-“固定時間間隔”方案。案例研究270歲退休建筑師患有病毒性感冒持續(xù)了3周，并且由于嚴重鼻塞而不能睡好。他不能通過他的鼻子呼吸，并且躺在床上加劇了他的挫折感。他自愿嘗試包含DAPA-2-5的片劑。在服用片劑1min之內(nèi)，他說他在他的喉嚨后面感到“驚喜(wow)”效果，并且能夠吞咽一些在他的鼻子中堆積的物質(zhì)。他說存在幫助他清理他的鼻子并且允許他更好地呼吸的吸入作用。他服用片劑持續(xù)了三個連續(xù)的晚上，并且說他比先前的三周睡眠更 好。他評論說，每片包含1mg的DAPA-2-5的兩片片劑或包含1.5mg的DAPA-2-5的一片片劑是用于他的鼻充血的有效補救。該結果是令人驚訝的，這是因為其表明鼻膜(包括鼻咽)不適能夠通過DAPA-2-5在喉嚨中的感覺效果減輕。DAPA-2-5可以在咽粘膜上具有血管收縮作用，并且降低鼻咽中的氣流阻力。案例研究368歲的男性在加利福尼亞州的卡梅爾海度假。在正餐期間，他喝了兩杯酒。由于他對盛開的花過敏，因此他的鼻道感覺到有點充血。在晚上，他服用了包含2mg的DAPA-2-5的口腔崩解片(ODT)，并且躺在床上，他說他的鼻子和喉嚨中的氣流感覺到了緩解和“超舒適”。具有海的氣息的涼爽空氣是完美的。不存在流動的阻力，并且他的呼吸是“毫不費力的”。在該經(jīng)歷中，他感到欣快和欣喜。案例研究466歲女性和69歲男性兩個受試者患有哮喘。他們均具有他們說可以忍受的白天期間的干咳和濕咳的發(fā)作。然而，在晚上，在喉嚨中的窒息和堆積物質(zhì)的感覺下，他們經(jīng)常在半夜醒來。他們談論喘息是由于胸中的氣流遇到了堆積的粘液質(zhì)。在兩個個體中，包含1mg的DAPA-2-5的口腔崩解片(ODT-A)在控制窒息和作嘔方面是有效的并且允許他們再次入睡。一個受試者在郵件中寫道：“只想讓你知道昨晚半夜我在發(fā)癢和無法忍受的咳嗽以及可怕喉嚨不透氣下醒來-一次又一次地咳嗽和清嗓。由于我太累，我只是想我能否忍耐過去，我能夠平靜下來并且繼續(xù)睡覺(太懶惰以至于沒有起床，打開燈以尋找片劑)；但運氣不佳-在連續(xù)窒息和咳嗽之后，我迫使我自己起來并且將一片片劑放置在喉嚨深處，隨著片劑深入喉嚨，咳嗽漸緩，并且我感到輕松。然后，不透氣的喉嚨放松，并且我能夠擺脫粘液質(zhì)，然后在10min內(nèi)繼續(xù)睡覺一直到今天早晨！”。在該受試者中，連續(xù)觀察到了粘液質(zhì)的散開，并且表明DAPA-2-5可以促進咳痰反射。兩個受試者都注意到了痛苦、斷續(xù)的咳類型(hackingtype)咳嗽由DAPA-2-5片劑減弱，但沒有損傷咳出粘液的能力。第二個受試者患有咳嗽變異性哮喘，當他從舊金山海灣地區(qū)移至香港時其嚴重惡化。三個月沒有停止咳嗽，并且減少了他的社交活動。當引入包含1.5mg的DAPA-2-5的口腔崩解片(ODT-A)時，他將一次服用兩片或三片片劑以控制他的不適。他指出DAPA-2-5ODT將在他的喉嚨中“削 弱他的咳嗽刺激物”。在一周試驗之后，他的咳嗽完全在控制之下，并且他評論說“他的生命已經(jīng)得到了解救”。然而，在該受試者中，起源于氣管和支氣管的深層咳嗽(deep-seatedcoughs)仍然是刺激和痛苦的。為了改變遞送，將4mg/mL的DAPA-2-5首先溶解在25％wt/wt的檸檬汁和1.5％wt/wt的木糖醇的溶液中，并且指導受試者將1mL的溶液(儲存在2mL的微量離心管)投入至他的口后面。令人驚訝地，該遞送系統(tǒng)比ODT更有效。受試者感到好像溶液快速通過上食管括約肌，并且進入食管以發(fā)揮穩(wěn)定的冷卻作用。然后，感覺到該冷卻作用從胸和氣道的中心發(fā)生。因此，激活了寬的神經(jīng)元感受野。通過以2mg/mL的溶液(在蒸餾水中)將DAPA-2-5放置在連接至約克噴管(YorkerSpout)(E.D.Lucepackaging)的波士頓圓1/2盎司(BostonRound1/2oz)(14mL)容器中，進行液體遞送系統(tǒng)的進一步改變。指導受試者將噴管的尖端放置在口的后面，并且輕輕擠出液滴。大致地，該方法遞送0.2mL至0.3mL。這也是控制氣道不適的有效方法。案例研究567歲老人喜歡吃冰淇淋，但患有偶爾的“冰淇淋頭痛”，由響應于過度冷的腦血管反射血管收縮引起的狀況。個體是化學家和科學家，并且在聽到術語“動態(tài)涼爽”和“冰冷”時，自愿嘗試各自包含2mg的DAPA-2-5或DAPA-2-7的口腔崩解片(ODT-A)，以察看這些物質(zhì)是否將促成“冰淇淋頭痛”。沒有ODT促成頭痛響應。受試者談論了DAPA-2-5ODT如何使他想起包含氯仿的老式(obsolete)糖漿的味道。作為化學家，他熟悉氯仿的味道。他說DAPA-2-5ODT具有相同的使人愉快的甜味、“有機”品質(zhì)、以及快速開始的作用。該個體還喜歡過食，并且具有由過量的披薩、冰淇淋、泡騰咖啡、以及仰臥式促成的胃內(nèi)容物回流至喉嚨的偶爾發(fā)作。通過快速吞咽兩片DAPA-2-5ODT，他立即控制了他的來自酸反流的喉嚨不適以及嘔吐的強烈欲望。在另一場合，該個體在過快吞咽食物之后出現(xiàn)打嗝。通過服用兩片DAPA-2-5ODT，在幾分鐘內(nèi)停止了這些打嗝。案例研究678歲的中國女性擁有她自己的旅游公司，并且經(jīng)常帶領旅游團去香港、上海、紐約、以及洛杉磯。她精力充沛并且健康，但抱怨由于連續(xù)長時間講話而“嘶啞”和“失音”。她詢問以嘗試包含1mg的DAPA-2-5的 口腔崩解片(ODT-A)。她說存在來自喉嚨不適的立即減輕，并且她能夠再次有效地說話和溝通。針對二十次試驗，已經(jīng)重復地觀察到了這種有益效果。案例研究7均超過60歲的六位女性遭受超過8周時間的不定時喉嚨不適。喉嚨不適的起因是過敏、過度吸煙、以及心理性(問題)。在根據(jù)“按照需要的基礎”服用ODT的指示下，將包含0mg(安慰劑)或1.0mg的DAPA-2-5的口腔崩解片(ODT-A)給予這些個體，但在任何一天都不超過三片片劑。激勵這些個體嘗試片劑以獲得感覺減輕。受試者在學習如何自我給予ODT中，不具有困難。立即將安慰劑ODT確定為無效用，并且在一次實驗之后拒絕服用。DAPA-2-5ODT在減輕喉嚨不適中具有100％的效能。在所有受試者中達到了期望的藥物作用。個體不僅感覺較好，而且她們停止了使用儲存在她們的藥柜中的所有其他藥物如薄荷油、抗酸劑、以及關于DAPA-2-5ODT抵消所有測試受試者的咽刺激的能力，不存在不明確之處。案例研究873歲的超重男性去高爾夫球練習場，并且擊中100個球的桶(bucket)，然后繼續(xù)行走并且打滿18洞。他習慣用右手。后來，他與他的朋友吃了5道菜，并且喝了3杯酒。后來在晚上，他抱怨在他的左胸肌和鎖骨上區(qū)存在酸痛和疼痛。然后，他抱怨胸悶、胸骨后面疼痛、以及呼吸短促。他感覺到在他的口中有酸味，并且服用了一些Alka-Seltzer、抗酸劑，然后是善胃得片劑(Zantactablet)。這些藥物沒有減輕他的胸痛或不舒服的感覺，并且他感到了焦慮、臉發(fā)紅、以及出汗。他擔心“死亡可能接近了”，并且想到他是否應該呼叫他的醫(yī)院急救服務。他居住在郊區(qū)，因此對于他而言不方便開車去他的醫(yī)院所處的城市。他決定嘗試先前已經(jīng)給他的一些實驗DAPA-2-5片劑，并且一口吞咽(利用水)各包含約1.5mgDAPA-2-5的三片片劑。他說感覺到?jīng)鏊乃窟M他的喉嚨并且慢慢滲透在他的胸中。涼爽強烈，但漸進并且滲透。他的胸骨后面的疼痛快速減小，并且他感到更舒適和激動(不安)減少。他入睡并且直到第二天早晨才醒來。然后，他去看了他的私人醫(yī)生，醫(yī)生測量他的血清肌鈣蛋白水平并且然后使他通過使用練習踏旋器的心臟壓力 試驗。他的酶水平和心電圖均在正常范圍內(nèi)。他的醫(yī)生建議他注意飲食和體重，除此之外不必擔心他的心臟，他的心臟看起來是健康的。68歲的男人與一群朋友出去一起吃四川菜，其中，特色菜是用四川辣椒和辣椒油充分烹飪的豬肉菜和烤魚菜。晚上，他喝了茅臺酒[按體積計53％的酒精含量]。接近午夜，他開始經(jīng)歷胸痛，并且突發(fā)熱汗。他的臉變紅，并且他喘不過氣來。他的同事想知道是否應該將他送到醫(yī)院。但隨后一位吸煙的客人記起在他的口袋中有一些DAPA-2-5片劑。他將四片片劑讓這位痛苦的個體用一口水吞咽下去，并且令桌旁的每一個人驚奇的是，在約10min內(nèi)胸痛不適的癥狀消失。個體恢復并且能夠自己開車回家。在兩種情況下，好像消化不良[非心源性疼痛]的癥狀可以與由心肌的不充分充氧引起的胸痛[例如，咽痛或心源性疼痛引起的冠狀動脈障礙]混淆。減輕非心源性疼痛而不是心源性疼痛的DAPA-2-5分子的可用性將是胸痛起因的鑒別診斷的有價值輔助物(佐劑，adjunct)。案例研究971歲的退休警官是肌肉身材，但在5英尺5英寸(165cm)和185磅(84kg)下的理想體重之上。他在他的大學隊踢足球，具有短脖子，以及強大的斜方肌。至少五年來，他抱怨睡眠不好以及白天疲勞。服用鎮(zhèn)靜劑如沒有幫助他睡得更好，并且他擔心他的駕駛技能的削弱。他的妻子抱怨他打鼾，并且要求使用單獨的臥室。多道睡眠描記術測試表明了阻塞性睡眠呼吸暫停的邊緣型診斷，但他不能夠忍受使用連續(xù)氣道正壓通氣面罩和機器，這是因為他說其給他幽閉恐怖癥和窒息的感覺。在睡覺之前，他自愿服用包含2mg的DAPA-2-5的片劑。他的妻子立即注意到他停止了打鼾。他說由于片劑在喉嚨中給他清新的感覺和放松呼吸涼爽空氣的感覺，因此他睡眠更好。現(xiàn)在，他根據(jù)“按照需要基礎”使用片劑。他表明這些片劑在睡眠呼吸暫停中也具有價值。全面總結在類似同源物的組中尋找正確的治療分子，非常像是大海撈針。選擇過程取決于連續(xù)不斷的實驗。已經(jīng)提出的構思是：能夠?qū)⒂煞肿拥木植渴┘硬东@的排熱感覺用于減輕非角化性組織的不適。通過合成化合物和設計測試，將名稱為DAPA-2-5 的分子確定為具有用于實現(xiàn)該目的的選擇性的期望性能。針對呼吸消化道的非角化性復層上皮，DAPA-2-5是選擇性的，產(chǎn)生了強大的、冷卻感覺，而不存在刺激和刺痛。在角化皮膚中沒有看到該效果。在受體靶上，其對于TRPM8而非TRPVI和TRPA1是選擇性的。當在實驗室動物上進行生物測定時，DAPA-2-5選擇性地抑制了熱水腫，并且沒有在皮膚上產(chǎn)生刺激。DAPA-2-5在抑制大鼠中鹽酸誘導的吞咽中是選擇性最有效的類似物。當配制在ODT中并且在志愿者中進行測試時，DAPA-2-5是用于減輕上消化道感覺不適的選擇性最佳分子。當前第1頁1 2 3 當前第1頁1 2 3