本發(fā)明涉及紅花龍膽草在制備預(yù)防或治療肺癌的藥物中的臨床新用途，屬于制藥
技術(shù)領(lǐng)域：
。
背景技術(shù)：
：肺癌是目前發(fā)病率和死亡率上升最快的惡性腫瘤。肺癌發(fā)生于支氣管黏膜上皮，近50年來肺癌的發(fā)病率顯著增高，在歐美工業(yè)發(fā)達(dá)國家和我國的一些工業(yè)大城市中，肺癌發(fā)病率在男性惡性腫瘤中已居首位，在女性發(fā)病率也迅速增高，占女性常見惡性腫瘤的第2位或第3位。肺癌成為危害生命健康的一種主要疾病。肺癌病人一經(jīng)發(fā)現(xiàn)多是中后期，已經(jīng)失去了手術(shù)治療的機(jī)會(huì)，應(yīng)用放療、化療對(duì)于患者毒副作用又很大。腫瘤患者接受放療、化療殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，由于多數(shù)抗腫瘤藥物缺乏選擇作用，對(duì)正常機(jī)體也有相當(dāng)大的損傷，如骨髓造血功能抑制、消化道反應(yīng)、肝臟及腎臟等組織的損害、免疫功能低下等。中藥配合放療、化療不但可以減輕其副作用,對(duì)腫瘤的療效也有明顯的提高。但是，目前治療肺癌中藥很少，特別是作用機(jī)制清楚、療效確切的中藥更少。紅花龍膽，別名紅龍膽、龍膽草、小青魚膽、星秀花，GentianarhodanthaFranch.exHemsl.龍膽科、龍膽屬多年生草本，具短縮根莖。根細(xì)條形，黃色。莖直立?；~呈蓮座狀，橢圓形、倒卵形或卵形；莖生葉寬卵形或卵狀三角形?；▎紊o頂，無花梗；花萼膜質(zhì)，有時(shí)微帶紫色；花冠淡紅色，上部有紫色縱紋，筒狀，上部稍開展；雄蕊著生于冠筒下部，花絲絲狀，花藥橢圓形；子房橢圓形。蒴果內(nèi)藏或僅先端外露，淡褐色，長橢圓形，兩端漸狹，果皮薄，種子淡褐色，近圓形，具翅。花果期10月至翌年2月，全草入藥。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于，提供紅花龍膽草在制備預(yù)防或治療肺癌的藥物中的應(yīng)用。用紅花龍膽草或其提取物為原料制成的藥物制劑對(duì)預(yù)防或治療肺癌具有顯著的作用。另外，紅花龍膽草提取物的制備方法還具有出膏率高、成本低廉、適合工業(yè)化生產(chǎn)、制備效率高、收率高的優(yōu)點(diǎn)。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下：紅花龍膽草在制備預(yù)防或治療肺癌的藥物中的應(yīng)用。上述的應(yīng)用中，所述的預(yù)防或治療肺癌，是預(yù)防或治療肺癌引起的氣陰兩虛，陰虛內(nèi)熱型中、晚期肺癌，癥見氣短、乏力、咳嗽、咯血、胸痛。上述的應(yīng)用中，所述的肺癌為非小細(xì)胞肺癌。前述的應(yīng)用中，肺癌的分布情況右肺多于左肺,下葉多于上葉。起源于主支氣管、肺葉支氣管的肺癌稱為中央型肺癌。起源于肺段支氣管遠(yuǎn)側(cè)的肺癌,位于肺的周圍部位者稱為周圍型肺癌"絕大多數(shù)肺癌起源于支氣管粘膜上皮,表現(xiàn)為腫瘤組織血管密度和血管內(nèi)皮生長因子的不斷表達(dá)T細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、白細(xì)胞數(shù)量急劇下降，最終導(dǎo)致肺癌患者的免疫狀態(tài)下降或缺失。肺癌患者臨床上表現(xiàn)為咳嗽、咯痰、咯血等癥狀。前述的應(yīng)用中，所述的紅花龍膽草，是以水、乙醇或二氧化碳為溶媒提取的紅花龍膽草提取物。前述的應(yīng)用中，所述的紅花龍膽草提取物的制備方法為，將紅花龍膽草切制成0.02～1cm段，稱取60～110g，用8～11倍量水將藥材浸潤35～125min，煎煮2～3次，每次2～3小時(shí)，濾過，合并濾液，濃縮，于溫度為60～70℃、真空度為0.08～0.1Mpa的條件下減壓干燥，即得。前述的應(yīng)用中，所述的將紅花龍膽草應(yīng)用于制備預(yù)防或治療肺癌的藥物，是以紅花龍膽草為原料，制備成適用于臨床上使用的藥物。前述的應(yīng)用中，所述的藥物的劑型包括散劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、微囊劑、丸劑、滴丸、軟膠囊、口服液、糖漿劑、分散片、噴霧劑或氣霧劑、靜脈注射劑、肌肉注射劑、吸入劑、貼劑或凝膠劑。前述的應(yīng)用中，所述的將紅花龍膽草應(yīng)用于制備預(yù)防或治療肺癌的藥物，是將紅花龍膽草與治療肺癌的藥物組合制成的復(fù)方藥物。本發(fā)明應(yīng)用紅花龍膽草制備的藥物預(yù)防或治療肺癌的療效，特別是紅花龍膽草的提取物制備的藥物預(yù)防或治療肺癌的療效非常優(yōu)越。為了確保本發(fā)明的效果，申請人進(jìn)行了一系列的實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證紅花龍膽草在預(yù)防或治療肺癌及其并發(fā)癥方面的作用效果，并且申請人還對(duì)紅花龍膽草的提成物的制備方法作了改進(jìn)，改進(jìn)后的制備工序和工序參數(shù)協(xié)同作用，具有出膏率高、成本低廉、適合工業(yè)化生產(chǎn)、制備效率高、收率高的優(yōu)點(diǎn)。以下是本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)例：實(shí)驗(yàn)例1：提取溶媒的選擇及提取方法的粗選取紅花龍膽草的粗粉100克，按下表1中的方案進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果如表2所示：表1不同提取方案表2不同提取溶劑對(duì)出膏率的影響由表2可知：紅花龍膽草以水和二氧化碳為溶媒進(jìn)行提取，提取物的出膏率最高，從節(jié)約成本考慮，選擇水作為最佳提取溶媒，提取方式選擇煎煮提取。實(shí)驗(yàn)例2:紅花龍膽草水提工藝考察一、藥材的炮制長度對(duì)出膏率的影響稱取紅花龍膽草100g，用10倍量水將藥材浸潤40分鐘，煎煮2次，每次2小時(shí)，濾過，合并濾液，濃縮，進(jìn)行出膏率測定，結(jié)果見表3：表3藥材炮制長度對(duì)出膏率的影響由上表3可知：藥材粗粉的出膏率最高，但是由于藥材粗粉提取后藥液難于濾過，實(shí)驗(yàn)時(shí)雖然可用機(jī)械的方法榨干藥渣，但并不適用于大工業(yè)生產(chǎn)；而且切制成1.0cm段的藥材的出膏率與藥材粗粉的出膏率相近，故以切制成1.0cm段進(jìn)行提取為佳。二、浸泡時(shí)間對(duì)出膏率的影響藥材吸水率測定：將紅花龍膽草炮制成1.0cm段，稱取100g，加水至浸泡藥材完全，過夜，測定其吸水率，結(jié)果見表4：表4浸泡過夜藥材吸水率測定稱取100g炮制成1.0cm段的紅花龍膽草，用10倍量水將藥材浸潤不同時(shí)間，煎煮2次，每次2小時(shí)，濾過，合并濾液，濃縮，測定出膏率，結(jié)果見表5：表5藥材不同浸泡時(shí)間由上表5可知：不同的浸泡時(shí)間，對(duì)藥材的出膏率影響不大，從節(jié)約時(shí)間和成本考慮，以浸潤30分鐘為佳。三、不同加水量、煎煮時(shí)間和提取次數(shù)對(duì)出膏率的影響在藥材炮制長度和浸泡時(shí)間確定之后，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)，選定對(duì)影響出膏率的主要因素：煎煮時(shí)間、提取次數(shù)和加水量，采用正交實(shí)驗(yàn)的方法，以三因素的三個(gè)不同水平來進(jìn)行考察各環(huán)節(jié)對(duì)出膏率的影響，從而選取最佳工藝。其中因素水平如表6所示：表6綜合評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)水平采用L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)，稱取100g炮制成1.0cm段的紅花龍膽草，按表6中的因素和水平條件進(jìn)行，藥材浸泡時(shí)間均為30分鐘，提取后，提取液濾過，濾液濃縮，進(jìn)行出膏率測定，結(jié)果如表7所示：表7正交表實(shí)驗(yàn)結(jié)果由表7可知：各因素影響的順序?yàn)锳>B>C，最佳提取工藝為A2B2C2，即：炮制成1.0cm段的紅花龍膽草提取2次，第一次加8倍量水浸泡30分鐘，煎煮2小時(shí)，第二次加8倍量水煎煮2小時(shí)。實(shí)驗(yàn)例3:紅花龍膽草提取物的提取方案驗(yàn)證根據(jù)優(yōu)選出的試驗(yàn)條件，稱取10000g炮制成1.0cm段的紅花龍膽草，提取2次，第一次加8倍量水浸泡30分鐘，煎煮2小時(shí)，第二次加8倍量水煎煮2小時(shí)，提取后，提取液濾過，濾液濃縮，減壓干燥（溫度為65～75℃，真空度為0.08～0.1Mpa）進(jìn)行出膏率測定，結(jié)果如表8所示：表8提取方案驗(yàn)證由上表8可見，優(yōu)選出的試驗(yàn)條件用來提取紅花龍膽草是合理、可行的。上述實(shí)驗(yàn)例中所述出膏率測定的具體方法為：取濃縮至相對(duì)密度1.20～1.30（測定溫度60℃）的清膏，轉(zhuǎn)移至1000ml的容量瓶中并定容，搖勻，精密量取20ml分別置于已恒重的蒸發(fā)皿中，水浴揮干，殘?jiān)?05℃干燥3小時(shí)，取出，置干燥器中放置30分鐘，稱重，計(jì)算；超臨界二氧化碳萃取的提取物水浴揮干，置于105℃下干燥至恒重，稱重，計(jì)算。以下通過試驗(yàn)例來進(jìn)一步闡述紅花龍膽草藥物的療效,這些試驗(yàn)例包括了紅花龍膽草的藥效學(xué)試驗(yàn)和臨床療效觀察試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)例4：紅花龍膽草藥效學(xué)試驗(yàn)1.實(shí)驗(yàn)材料1.1.1動(dòng)物實(shí)體瘤肺癌種鼠，體重17～22g，購于重慶騰鑫比爾實(shí)驗(yàn)動(dòng)物銷售有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK(渝)，2014-0006。提取物及試劑取紅花龍膽草提取物，成人臨床劑量為0.045g/kg,小鼠等效劑量與人換算為7倍人用臨床劑量。參蓮膠囊:批號(hào):20140403,中國吉林通化金馬藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)；環(huán)磷酞胺:批號(hào):20131214,200mg/瓶,上海華聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)；氨茶堿片:批號(hào):20140212,湖南制藥廠生產(chǎn);止咳寶片:批號(hào):20140713,中國廣東臺(tái)城制藥廠生產(chǎn);三七片:批號(hào):20130208,中國廣西柳州長安制藥廠生產(chǎn);復(fù)方阿斯林片(復(fù)方乙酞水楊酸片):批號(hào):20120818,湖北中天愛百顆藥業(yè)有限分司生產(chǎn);胃復(fù)安片(甲氧氯普胺片):批號(hào):020703,山兩省臨汾健民制藥廠生產(chǎn);西洋參片:批號(hào):010312,力菲克藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。試驗(yàn)方法與結(jié)果2.1體內(nèi)抑瘤作用2.1.1對(duì)小鼠Lewis肺癌的抑制作用取帶生長良好的實(shí)體瘤肺癌種鼠，無菌條件下剝離瘤塊,生理鹽水1:4制成勻漿，取C57BL/6J小鼠，雌雄兼用，體重18～22g，按無菌操作于右腋皮下接種小鼠腫瘤無菌稀釋液0.2ml/只，24小時(shí)后稱重，隨機(jī)分為6組:荷瘤對(duì)照組、本發(fā)明藥物高、中、低劑量組、參蓮膠囊組和環(huán)磷酞胺組。荷瘤對(duì)照組藥20只動(dòng)物，其他各組均為10只動(dòng)物。環(huán)磷酞胺組每日ip20mg/kg，其余各組灌胃給藥，荷瘤對(duì)照組給予等體積蒸餾水。另取正常動(dòng)物(未接利腫瘤,接種等量生理鹽水作藥假接種組)10只，每日灌服等體積蒸餾水作為正常對(duì)照組。分組當(dāng)日給藥，每日1次，連續(xù)7天，停藥次日處死小鼠，稱重后剝離皮下瘤塊,稱瘤重,計(jì)算抑瘤率"結(jié)果見表1。表1本發(fā)明藥物對(duì)小鼠Lewis肺癌的抑制作用與荷瘤對(duì)照組比較,***p<0.01。由表1可見，本藥提取物物(高劑量)對(duì)小鼠Lewis肺癌最大抑癌率大劑量達(dá)47.1%，小劑量達(dá)37.9%。荷瘤對(duì)照組動(dòng)物均未見假性腫塊形成，體重及死亡率均符合要求，表明腫瘤生長良好;荷瘤動(dòng)物有少量在中途死亡，體重變化各組間比較無顯著性差異。環(huán)磷酞胺和參蓮膠囊也表現(xiàn)較穩(wěn)定的抑瘤作用，其中參蓮膠囊抑瘤率略高于本發(fā)明藥物小劑量，但無顯著性差異。結(jié)果表明，本發(fā)明藥物對(duì)小鼠Lewis肺癌表現(xiàn)出較強(qiáng)、較穩(wěn)定的抑制作用,并呈一定的劑量依賴性。腫瘤免疫作用2.2.1對(duì)荷肺癌小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響取C57BL/6J雄性小鼠50只，體重18～23,按無菌操作于右腋皮下接種小鼠Lewis肺癌生理鹽水(1:4)無菌稀釋液0.2ml/只，24小時(shí)后稱重，隨機(jī)分為5組：荷瘤對(duì)照組、本藥物23.92、11.96、5.98g/kg組和參蓮膠囊1.179/kg組，每組10只，另取正常動(dòng)物10只接種等量生理鹽水作為正常對(duì)照組。分組當(dāng)日給藥，每日1次，連續(xù)8天，對(duì)照組給予等體積蒸餾水。末次給藥后1小時(shí),各鼠ip5%雞紅細(xì)胞生理鹽水混懸液0.5ml，5小時(shí)后處死，腹腔注射生理鹽水2ml,轉(zhuǎn)動(dòng)鼠體1分鐘，然后抽取腹腔洗液，分滴于兩片載玻片上，放入墊有濕紗布的搪瓷盒中，于37℃溫育30分鐘，取出玻片，于生理鹽水中漂洗，涼干后1:1丙酮-甲醇液固定5分鐘，用4%(v/v)Giemsa一Wright’S染液染色3分鐘，蒸餾水漂洗，涼干，油鏡下觀察,按公式計(jì)算吞噬百分率和吞噬指數(shù)，結(jié)果見表2。表2本發(fā)明藥物對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響(x±SD)組別動(dòng)物數(shù)（只）劑量（/kg）吞噬百分率（%）吞噬指數(shù)正常對(duì)照組1020ml39.92±5.5*0.73±0.16*荷瘤對(duì)照組1020ml33.92±6.00.68±0.21本藥提取物（高劑量）1023.92g41.91±8.3**0.91±0.22**本藥提取物（中劑量）1011.96g40.80±9.4*0.85±0.18*本藥提取物（低劑量）105.88g37.51±8.1*0.75±0.15*參蓮膠囊組91.18g40.22±8.5*0.81±0.20*與荷瘤對(duì)照組比較,*p>0.05,**p<0.05。結(jié)果表明,荷瘤對(duì)照組吞噬百分率和吞噬指數(shù)較正常對(duì)照組有所降低，本發(fā)明藥物23.929/kg能明顯提高荷Lewis肺癌小鼠吞噬百分率和吞噬指數(shù),能顯著提高其吞噬細(xì)胞功能，增強(qiáng)小鼠機(jī)體免疫功能。對(duì)荷肺癌小鼠溶血素形成的影響取C57BL/6J雄性小鼠50只，體重18～24g，按無菌操作于右腋皮下接種小鼠Lewis肺癌生理鹽水(1:4)無菌稀釋液0.2ml/只，24小時(shí)后稱重，隨機(jī)分為5組:荷瘤對(duì)照組、本藥物23.92、11.96、5.98/kg組和參蓮膠囊1.179/kg組，每組10只，另取正常動(dòng)物10只接種等量生理鹽水作為正常對(duì)照組。分組當(dāng)日給藥，每日1次，連續(xù)8天，對(duì)照組給予等體積蒸餾水。給藥當(dāng)天每鼠ip5%雞紅細(xì)胞生理鹽水混懸液0.2ml，第8天末次給藥后1小時(shí)，摘眼球取血，離心取血清用生理鹽水稀釋100倍，取稀釋血清lml，與5%雞紅細(xì)胞混懸液0.5ml、10%補(bǔ)體0.5ml混合，于37℃恒溫箱中保溫30分鐘后，0℃冰箱中中止反應(yīng)。離心取上清液，用7230型分光光度計(jì)于540nm處比色，以不加血清的空白對(duì)照管調(diào)零，測定各管光密度OD值,以O(shè)D讀數(shù)作為判定血清溶血素的指標(biāo)，結(jié)果見表3。表3本發(fā)明藥物對(duì)荷瘤小鼠溶血素形成的影響(x±SD)組別動(dòng)物數(shù)（只）劑量（/kg）OD值正常對(duì)照組1020ml0.425±0.10**荷瘤對(duì)照組1020ml0.321±0.07本藥提取物（高劑量）1023.92g0.395±0.8**本藥提取物（中劑量）1011.96g0.406±0.06**本藥提取物（低劑量）105.88g0.349±0.05*參蓮膠囊組101.18g0.387±0.06**與荷瘤對(duì)照組t比較,*p>0.05,**p<0.05。結(jié)果表明,荷瘤對(duì)照組OD值明顯低于正常對(duì)照組，本發(fā)明藥物23.92、11.96/kg能明顯提高荷Lewis肺癌小鼠OD值，促進(jìn)溶血素形成，提高機(jī)體體液免疫功能。減毒作用2.3.1對(duì)環(huán)磷酞胺中毒小鼠的影響取ICR小鼠60只，體重18～23g，雌雄各半，隨機(jī)分為6組，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、本發(fā)明藥物23.92、11.96、5.98/kg組和參蓮膠囊1.179/kg組，每組10只，分組當(dāng)天灌胃給藥，每天1次，連續(xù)10天，對(duì)照組給予等體積蒸餾水。給藥第8天、第9天時(shí)除正常對(duì)照組外，其它各組動(dòng)物ip環(huán)磷酞胺100mg/kg，第10天末次給藥后1小時(shí)，各鼠摘眼球取血，用H12型血細(xì)胞分析儀測白細(xì)胞數(shù)。然后剝離一根股骨，用3%醋酸液10ml沖出骨髓內(nèi)細(xì)胞，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)盤計(jì)數(shù)四個(gè)大方格的有核細(xì)胞數(shù)，所得數(shù)×2.5×104，即為一根股骨中的骨髓有核細(xì)胞數(shù)，結(jié)果見表4。表4本發(fā)明藥物對(duì)環(huán)磷酞胺中毒小鼠的影響(x±SD)與模型對(duì)照組比較,*p>0.05,**p<0.05,***p<0.01。結(jié)果表明，模型對(duì)照組外周血白細(xì)胞數(shù)和骨髓有核細(xì)胞數(shù)明顯降低，本發(fā)明藥物23.929/kg能明顯提高環(huán)磷酞胺中毒小鼠的白細(xì)胞數(shù)和骨髓有核細(xì)胞數(shù)，具有一定的減毒作用。對(duì)60Co放療小鼠的影響取ICR小鼠60只，體重18～23g，雌雄各半，隨機(jī)分為6組，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、本發(fā)明藥物23.92、11.96、5.98/kg組和參蓮膠囊1.179/kg組，每組10只，分組當(dāng)天灌胃給藥，每天1次，連續(xù)10天，對(duì)照組給予等體積蒸餾水。給藥第5天時(shí)除正常對(duì)照組外，其它各組動(dòng)物用60Co照射1次，將待照射的小鼠置塑料鼠籠中，鼠籠呈輻射狀排列，置60Co輻射井中，60Co輻射源自中央以26Rad/min劑量率照射，總照射劑量為7.5Gy。第10天末次給藥后1小時(shí)，各鼠摘眼球取血，用H12型血細(xì)胞分析儀測白細(xì)胞數(shù)。然后剝離一根股骨，用3%醋酸液10ml沖出骨髓內(nèi)細(xì)胞，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)盤計(jì)數(shù)四個(gè)大方格的有核細(xì)胞數(shù),所得數(shù)×2.5×104，即為一根股骨中的骨髓有核細(xì)胞數(shù)，結(jié)果見表5。表5本藥物對(duì)60Co放療小鼠的影響(x±SD)與模型對(duì)照組比較,*p>0.05,**p<0.05,***p<0.01。結(jié)果表明，模型對(duì)照組外周血白細(xì)胞數(shù)和骨髓有核細(xì)胞數(shù)明顯降低，本發(fā)明藥物23.92、11.96/kg能明顯提高60Co放療小鼠的白細(xì)胞數(shù)和骨髓有核細(xì)胞數(shù),具有明顯的減毒作用。止血作用取體重18～23g昆明種小鼠50只，隨機(jī)分為5組，分別為正常對(duì)照組、本發(fā)明藥物23.92、11.96、5.989/kg組和三七片1.29/kg組，每組10只，雌雄各半，每天灌胃給藥1次，連續(xù)5天，對(duì)照組給予等體積蒸餾水。末次給藥后30分鐘，分別以利剪將小鼠尾尖0.5cm處橫斷，自血液自行流出后計(jì)時(shí)，每隔15秒用濾紙吸去血滴1次，直至血液自然停止，計(jì)算出血時(shí)間，進(jìn)行組間t檢驗(yàn)，結(jié)果見表6。表6本發(fā)明藥物對(duì)小鼠出血時(shí)間的影響(x±SD)組別動(dòng)物數(shù)（只）劑量（/kg）出血時(shí)間（min）正常對(duì)照組1020ml6.82±2.34本藥提取物（高劑量）1023.92g4.59±1.92**本藥提取物（中劑量）1011.96g6.08±2.73*本藥提取物（低劑量）105.88g5.21±2.51*三七片組101.20g3.85±1.74***與正常對(duì)照組t比較,*p>0.05,**p<0.05,***p<0.01。鎮(zhèn)痛作用取體重18～22g，昆明種小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組:正常對(duì)照組、本發(fā)明藥物23.92、11.96、5.989/kg組和阿斯匹林0.109/kg組，每組10只，每天灌胃給藥1次，連續(xù)5天，對(duì)照組給予等體積蒸餾水，于末次給藥后30分鐘各鼠腹腔注射0.6%冰醋酸0.2ml/只，記錄注射致痛劑后各鼠扭體反應(yīng)(腹部內(nèi)凹、伸屈后腿、臀部指高)潛伏期及15分鐘內(nèi)扭體反應(yīng)次數(shù)，計(jì)算扭體反應(yīng)抑制率，結(jié)果見表7。表7本發(fā)明藥物對(duì)小鼠醋酸扭體反應(yīng)的影響(x±SD)組別動(dòng)物數(shù)（只）劑量（/kg）扭體潛伏期（min）扭體數(shù)（次）抑制率（%）正常對(duì)照組1020ml3.55±0.9619.9±7.7/本藥提取物（高劑量）1023.92g4.96±1.15***10.2±6.2***48.7本藥提取物（中劑量）911.96g4.68±1.06**11.5±6.4**42.2本藥提取物（低劑量）85.88g4.58±0.99**13.5±5.5**32.2阿司匹林組90.10g5.11±1.04***9.3±5.1***53.3與正常對(duì)照組t比較,**p<0.05,***p<0.01。結(jié)果表明,本發(fā)明藥物能明顯延長醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)潛伏期，降低扭體反應(yīng)次數(shù)(與對(duì)照組比較，p<0.05或p<0.01)，具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。止咳作用取體重18～22g昆明種小鼠50只，雌性各半，隨機(jī)分為5組:正常對(duì)照組、本發(fā)明藥物23.92、11.96、5.989/kg組和止咳寶片0.399/kg組，每組10只，每天灌胃給藥1次，連續(xù)5天，對(duì)照組給予等體積蒸餾水。末次給藥后1小時(shí)，將小鼠置于玻璃鐘罩內(nèi)，用1ml25%氨水于沸水浴上蒸發(fā)，讓氨水蒸汽刺激小鼠45秒，而后迅速將小鼠移至另一玻璃鐘罩內(nèi)，用小兒聽診器在鐘罩內(nèi)察聽小鼠咳嗽情況，小鼠咳嗽表現(xiàn)以其腹肌收縮，同時(shí)張開嘴為準(zhǔn)，有時(shí)有咳嗽聲，記錄3分鐘內(nèi)的咳嗽次數(shù)。結(jié)果見表8。表8本發(fā)明藥物對(duì)小鼠氨水引咳的止咳作用組別動(dòng)物數(shù)（只）劑量（/kg）三分鐘咳嗽次數(shù)（次，x±SD）正常對(duì)照組1020ml24.1±8.7本藥提取物（高劑量）1023.92g15.4±5.8**本藥提取物（中劑量）1011.96g16.7±5.1**本藥提取物（低劑量）105.88g20.7±6.5*止咳寶片組100.39g12.0±4.3***與正常對(duì)照組t比較,*p>0.05,**p<0.05,***p<0.01。結(jié)果表明，本發(fā)明藥物能降低氨水引咳小鼠3分鐘內(nèi)的咳嗽次數(shù)，23.92、11.96g/kg組與對(duì)照組比較有顯著性差異,具有明顯的止咳作用。止吐作用取體重250～350g家鴿50只，雌雄兼用，隨機(jī)分為5組:模型對(duì)照組、本藥物20.00、10.00、5.00g/kg組和胃復(fù)安片0.39g/kg組,每組10只，每天灌胃給藥1次，連續(xù)5天，對(duì)照組給予等體積蒸餾水。末次給藥后45分鐘，各組動(dòng)物按0.39/kg的劑量灌胃給予硫酸銅致吐，觀察記錄動(dòng)物嘔吐發(fā)生的潛伏期及1小時(shí)內(nèi)嘔吐次數(shù)，結(jié)果見表9。表9本發(fā)明藥物對(duì)家鴿嘔吐反應(yīng)的影響(x±SD)組別動(dòng)物數(shù)（只）劑量（/kg）嘔吐潛伏期（min）嘔吐數(shù)（次）模型對(duì)照組1020ml9.73±2.6516.5±5.8本藥提取物（高劑量）1020.00g11.68±3.90**10.8±3.2**本藥提取物（中劑量）1010.00g12.88±3.26**11.4±3.5**本藥提取物（低劑量）105.00g10.82±2.18*12.9±4.0*胃復(fù)安片組103×10-3g14.29±4.07***10.3±2.7***與模型對(duì)照組t比較,*p>0.05,**p<0.05,***p<0.01。結(jié)果表明，本發(fā)明藥物能對(duì)抗硫酸銅引起的家鴿嘔吐反應(yīng)，延緩其嘔吐發(fā)生時(shí)間，減少其嘔吐次數(shù)，具有明顯的止吐作用。益氣作用取ICR小鼠60只，體重18～22g，雌雄各半，隨機(jī)分為6組:正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、本發(fā)明藥物23.92、11.96、5.98g/kg組以及西洋參片0.129/kg組，每組10只。除正常對(duì)照組給予正常食量外，模型對(duì)照組和各給藥組每日按100g/kg喂飼7天，此后恢復(fù)正常食量并灌胃給藥，每天1次，連續(xù)7天，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組灌胃等體積蒸餾水。末次給藥后1小時(shí)，將小鼠尾部系一重物(為體重的10%)，置于水深25cm、水溫20±0.5℃的水池中，自小鼠投入水中至頭部沉入水中10秒不能浮出時(shí)所經(jīng)歷的時(shí)間，即為小鼠游泳時(shí)間，進(jìn)行組間t檢驗(yàn)，結(jié)果見表10。表10本發(fā)明藥物對(duì)氣虛小鼠游泳時(shí)間的影響(x±SD)組別動(dòng)物數(shù)（只）劑量（/kg）游泳時(shí)間（min）空白對(duì)照組1020ml11.69±3.61***模型對(duì)照組1020ml7.22±2.23本藥提取物（高劑量）1023.92g11.51±3.98***本藥提取物（中劑量）1011.96g10.46±3.23**本藥提取物（低劑量）105.88g10.28±3.43**西洋參片組100.18g11.86±3.03***與模型對(duì)照組t比較,**p<0.05,***p<0.01。結(jié)果表明，模型對(duì)照組小鼠游泳時(shí)間明顯低于空白對(duì)照組，本發(fā)明藥物能明顯提高氣虛小鼠的游泳時(shí)間，具有明顯的抗疲勞作用。實(shí)驗(yàn)例2：臨床試驗(yàn)通過臨床試驗(yàn)證明，本發(fā)明治療109例患者均經(jīng)病理學(xué)及痰細(xì)胞學(xué)證實(shí)為非小細(xì)胞肺癌，其中鱗癌60例，腺癌46例。其他類型3例，療效顯著，癥狀及體征緩解率為71.7%；病灶縮小率為68.2%，存活一年占73.7%。提高病人生活質(zhì)量改善為87.2%，對(duì)延長生存期也較為明顯。本藥具有清肺益氣、止咳化痰、止血散結(jié)的功用。既能增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，抑制腫瘤的生長，又能改善患者生存質(zhì)量，延長患者生存時(shí)間，是高效、安全、適用的抗癌良藥。通過治療觀察肺癌109例,治療前診斷經(jīng)X線、CT、內(nèi)窺鏡、手術(shù)、病理或細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)證實(shí)為非小細(xì)胞肺癌。109例患者服用本發(fā)明藥物，口服，每次1包，每日3次，隨時(shí)觀察臨床變化，5～6周觀察腫物大小及化驗(yàn)指標(biāo)；并以40例化療者做對(duì)照，對(duì)照組以聯(lián)合化療方法治療，每3周為1周期，2周期為1療程做復(fù)查。常用化療藥為卡鉑或順鉑、足葉乙叉甙、表阿霉索或阿霉素：鱗癌加用環(huán)磷酞胺或培普利歐霉素，腺癌加用氟脈嚓咤或吠喃氟脈嚓咤注射液化療方案均以3種藥組成并配合西藥對(duì)癥處理。、臨床癥狀改善情況分析:從療前與療后主要癥狀對(duì)比來看，本藥物(高劑量)對(duì)臨床癥狀的改善具有較好的效果，在咳嗽、咯痰、咯血等癥狀上與其它兩組相比均有顯著性差異(P<0.05)。兩組具體情況參見表11。(表中所提到的本發(fā)明藥物均指本藥物(高劑量))表11本發(fā)明藥物對(duì)臨床癥狀的緩解情況組別例數(shù)咳嗽咯痰咯血胸痛本藥物組10974/90*75/86*57/62*32/94化療組408/339/2912/244/11注:表中數(shù)據(jù)為緩解倒數(shù)/癥狀倒數(shù)I*P<0.01。另外，服用本發(fā)明藥物后其他癥狀亦得以緩解，包括五心(10/22)、虛汗(15/25)、煩渴(8/19)、舌苔黃燥(21/29)，無明顯其他毒副反應(yīng)。而化療組發(fā)生厭食、呢逆、脫發(fā)、面色萎黃等脾胃不和及氣血虧虛癥狀超過半數(shù)。、腫物大小變化：治療前后x線胸片對(duì)比病灶大小變化，參照1978年所定《抗腫瘤藥物療效通用標(biāo)準(zhǔn)》，可供評(píng)價(jià)者82例，表12顯示觀察組穩(wěn)定率明顯高于對(duì)照組，且惡化者少(P<0.001)。表12胸部x片病灶變化情況組別例數(shù)部分緩解例（%）穩(wěn)定例（%0惡化例（%）本藥物組821（1.2）55（67.0）26（31.8）*化療組202（10）7（35.0）11（55）3、化驗(yàn)指標(biāo)變化情況：血常規(guī)、肝腎功能、血沉、免疫球蛋白及T細(xì)胞亞群各項(xiàng)指標(biāo)，本發(fā)明藥物治療前后無顯著變化。表13示，應(yīng)用本發(fā)明藥物后，堿性磷酸酶(AKP)、乳酸脫氫酶(LDH)、唾液酸(THA)、癌胚抗原(CEA)下降明顯，且與化療組比較顯著差異。表13化驗(yàn)指標(biāo)變化情況與對(duì)照組t比較*P<0.05Δ<0.01。、生存質(zhì)量情況分析：根據(jù)Karnofsky百分分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，全身狀況以變化10分及10分以上為上升或下降指標(biāo)表14顯示，觀察組生存質(zhì)量穩(wěn)定及上升者明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。對(duì)照組在化療期間生存質(zhì)量明顯下降。表14生存質(zhì)量變化情況組別例數(shù)上升例（%）穩(wěn)定例（%）下降例（%）本藥物組10922（20.2）73（67.0）14（12.8）*對(duì)照組403（7.5）16（40.0）31（52.5）*5、生存期情況分析:2009年1月～2012年1月，對(duì)收治的130例無法進(jìn)行手術(shù)的NSCLC患者應(yīng)用化學(xué)治療、放射治療及“本發(fā)明藥物”等保守療法，療效較滿意。共有128例患者符合病例選擇標(biāo)準(zhǔn)，通過電話及信函隨訪，截止日期為2012年12月31日，118例患者有明確的存活時(shí)間，其基本情況。治療方法及中位生存期見表16。10例患者失訪，失訪率為7.8%。表16生存期單因素分析情況相關(guān)因素例數(shù)中位生存期（月）P值性別>0.05男9012.43女2811.97年齡<0.0530～491611.9750～593111.5060～695613.1070～78157.53分期>0.05IIIB1814.73IV10011.97病理類型<0.05鱗癌5014.73腺癌659.73其他33.60化療<0.01用8514.73不用337.13本藥物<0.01用6816.57不用505.70放療>0.05用8512.67不用339.07表17生存期多因素分析情況回歸系數(shù)β標(biāo)準(zhǔn)誤S.E.自由度dfP值危險(xiǎn)比Exp(β)本藥物組-1.28990.22191<0.010.2751化療組-0.70750.21461<0.010.4837本組118例肺癌患者生存期的Cox多因素分析表明,化療和”本藥物”是延長生存期的獨(dú)立預(yù)后因子。服用本發(fā)明藥物的患者平均中位生存期為16.57個(gè)月，而未服用本發(fā)明藥物的患者平均中位生存期為5.70個(gè)月，差異顯著。從本研究結(jié)果表明:本發(fā)明治療肺癌咯血有效率高達(dá)91%，止咳及化痰作用也均在80%以上，均優(yōu)于化療組及西藥對(duì)癥的處理，這和方中集中了多味肺經(jīng)要藥有關(guān)。尤其對(duì)中晚期肺癌病人，既不能手術(shù)治療，又不是以放療和化療者,用本藥治療后不僅癥狀改善，胸痛減輕，病情緩解，病灶縮小，還可以獲得較長期的生存期，受到患者好評(píng)。臨床觀察證實(shí)，本發(fā)明治療肺癌不但療效顯著，而且長期用藥無任何毒副作用，是高效、安全、適用的抗癌良藥。具體實(shí)施方式實(shí)施例1：紅花龍膽草提取物的制備：將紅花龍膽草切制成1cm段，稱取100g，用8倍量水將藥材浸潤35min，煎煮2次，每次2小時(shí)，濾過，合并濾液，濃縮，于溫度為70℃、真空度為0.1Mpa的條件下減壓干燥，即得。實(shí)施例2：紅花龍膽草提取物的制備：將紅花龍膽草切制成0.5cm段，稱取90g，用8倍量水將藥材浸潤60min，煎煮2次，每次2.5小時(shí)，濾過，合并濾液，濃縮，于溫度為68℃、真空度為0.09Mpa的條件下減壓干燥，即得。實(shí)施例3：紅花龍膽草提取物的制備：將紅花龍膽草切制成0.9cm段，稱取110g，用10倍量水將藥材浸潤120min，煎煮3次，每次3小時(shí)，濾過，合并濾液，濃縮，于溫度為70℃、真空度為0.1Mpa的條件下減壓干燥，即得。實(shí)施例4：紅花龍膽草提取物的制備：將紅花龍膽草切制成0.02cm段，稱取80g，用11.5倍量水將藥材浸潤35min，煎煮4小時(shí)，濾過，濃縮，于溫度為65℃、真空度為0.08Mpa的條件下減壓干燥，即得。實(shí)施例5：紅花龍膽草提取物的制備：將紅花龍膽草切制成1cm段，稱取100g，加10倍藥材量的5%乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過，合并濾液，濃縮，于溫度為72℃、真空度為0.09Mpa的條件下減壓干燥，即得。實(shí)施例6：紅花龍膽草提取物的制備：將紅花龍膽草切制成1cm段，稱取100g，加10倍藥材量的40%乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過，合并濾液，濃縮，于溫度為72℃、真空度為0.09Mpa的條件下減壓干燥，即得。實(shí)施例7：紅花龍膽草提取物的制備：將紅花龍膽草切制成1cm段，稱取100g，加10倍藥材量的80%乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過，合并濾液，濃縮，于溫度為72℃、真空度為0.09Mpa的條件下減壓干燥，即得。實(shí)施例8：紅花龍膽草提取物的制備：將紅花龍膽草切制成1cm段，稱取100g，加10倍藥材量的95%乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過，合并濾液，濃縮，于溫度為72℃、真空度為0.09Mpa的條件下減壓干燥，即得。實(shí)施例9：紅花龍膽草提取物的制備：將紅花龍膽草切制成1cm段，稱取100g，CO2超臨界提取，其中，以質(zhì)量比為5%的乙醇作夾帶劑，萃取壓力為30Mpa，萃取溫度為50℃，靜態(tài)浸泡時(shí)間為3h，動(dòng)態(tài)萃取3h，減壓干燥，即得。實(shí)施例10：紅花龍膽草提取物的制備：將紅花龍膽草切制成1cm段，稱取100g，CO2超臨界提取，其中，以質(zhì)量比為40%的乙醇作夾帶劑，萃取壓力為30Mpa，萃取溫度為50℃，靜態(tài)浸泡時(shí)間為3h，動(dòng)態(tài)萃取3h，減壓干燥，即得。實(shí)施例11：紅花龍膽草提取物的制備：將紅花龍膽草切制成1cm段，稱取100g，CO2超臨界提取，其中，以質(zhì)量比為75%的乙醇作夾帶劑，萃取壓力為30Mpa，萃取溫度為50℃，靜態(tài)浸泡時(shí)間為3h，動(dòng)態(tài)萃取3h，減壓干燥，即得。實(shí)施例12：紅花龍膽草提取物的制備：將紅花龍膽草切制成1cm段，稱取100g，CO2超臨界提取，其中，以質(zhì)量比為95%的乙醇作夾帶劑，萃取壓力為30Mpa，萃取溫度為50℃，靜態(tài)浸泡時(shí)間為3h，動(dòng)態(tài)萃取3h，減壓干燥，即得。實(shí)施例13：取實(shí)施例1～4任一所得的紅花龍膽草提取物，加入適量的常規(guī)輔料，混勻，烘干，滅菌，裝入硬膠囊，包裝，制成膠囊劑。該制劑日服1～3次，每次10～20mg，益氣養(yǎng)陰，清熱解毒、化痰止咳。適用于氣陰兩虛，陰虛內(nèi)熱型中、晚期肺癌，癥見氣短、乏力、咳嗽、咯血、胸痛等，或兼有上述癥狀的放化療無效及復(fù)發(fā)者。實(shí)施例14：取實(shí)施例5～8任一所得的紅花龍膽草提取物，加適量的增溶劑，研磨，加入少量水稀釋，混勻，加入矯味劑和防腐劑，混勻，加水至規(guī)定量，過濾，混勻，分裝，滅菌，制成口服液。該制劑日服1～3次，每次10～20mg，益氣養(yǎng)陰，清熱解毒、化痰止咳。適用于氣陰兩虛，陰虛內(nèi)熱型中、晚期肺癌，癥見氣短、乏力、咳嗽、咯血、胸痛等，或兼有上述癥狀的放化療無效及復(fù)發(fā)者。實(shí)施例15：取實(shí)施例9～12任一所得的紅花龍膽草提取物，加適量的常規(guī)輔料，混勻，制成顆粒，干燥，壓片，制成片劑。該制劑日服1～3次，每次10～20mg，益氣養(yǎng)陰，清熱解毒、化痰止咳。適用于氣陰兩虛，陰虛內(nèi)熱型中、晚期肺癌，癥見氣短、乏力、咳嗽、咯血、胸痛等，或兼有上述癥狀的放化療無效及復(fù)發(fā)者。實(shí)施例16：取實(shí)施例1～4任一所得的紅花龍膽草提取物，加入適量常用輔料，成丸，干燥，制成丸劑。該制劑日服1～3次，每次10～20mg，益氣養(yǎng)陰，清熱解毒、化痰止咳。適用于氣陰兩虛，陰虛內(nèi)熱型中、晚期肺癌，癥見氣短、乏力、咳嗽、咯血、胸痛等，或兼有上述癥狀的放化療無效及復(fù)發(fā)者。實(shí)施例17：取實(shí)施例1～12任一所得的紅花龍膽草提取物，另取常規(guī)的治療肺癌的藥物，加適量的常規(guī)輔料，混勻，制成顆粒劑。該制劑日服1～3次，每次10～20mg，益氣養(yǎng)陰，清熱解毒、化痰止咳。適用于氣陰兩虛，陰虛內(nèi)熱型中、晚期肺癌，癥見氣短、乏力、咳嗽、咯血、胸痛等，或兼有上述癥狀的放化療無效及復(fù)發(fā)者。實(shí)施例18：取實(shí)施例5～8任一所得的紅花龍膽草提取物，另取常規(guī)的治療肺癌的藥物，加適量的常規(guī)輔料，混勻，制成軟膠囊。益氣養(yǎng)陰，清熱解毒、化痰止咳。適用于氣陰兩虛，陰虛內(nèi)熱型中、晚期肺癌，癥見氣短、乏力、咳嗽、咯血、胸痛等，或兼有上述癥狀的放化療無效及復(fù)發(fā)者。當(dāng)前第1頁1 2 3