本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及鱉甲的新用途，尤其是鱉甲或醋鱉甲在制備抑制腫瘤新生血管生成的藥物中的用途。

背景技術(shù)：

血管生成(angiogenesis)是從已有血管發(fā)芽生成新血管的過程。這一過程與血管內(nèi)皮細胞遷移和增殖相關(guān)。胚胎發(fā)育過程伴隨著血管生成。但除了傷口愈合、女性經(jīng)期及一些病理過程(如癌癥)外，成人很少出現(xiàn)血管生成。

血管生成對惡性實體腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移乃至預(yù)后都有著極其重要的意義。血管生成是惡性實體腫瘤突破上皮基底膜后進一步生長所必須的。腫瘤中新形成的血管具有其自身獨特的結(jié)構(gòu)特點，表現(xiàn)為管壁不完整，無平滑肌成分，僅由有孔的內(nèi)皮細胞和片狀的基膜構(gòu)成。多數(shù)學(xué)者認為，新生血管的結(jié)構(gòu)特點使惡性腫瘤組織發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移成為可能。因此，惡性實體腫瘤中新生血管的定量被認為是一種重要的獨立的預(yù)后標(biāo)志。

鱉甲為鱉科動物鱉Trionyx sinensis Wiegmann的背甲。性味咸、寒。滋陰潛陽，軟堅散結(jié)，退熱除蒸。用于陰虛發(fā)熱，勞熱骨蒸，虛風(fēng)內(nèi)動，經(jīng)閉，癓瘕，久瘧瘧母。用法用量為9～24克?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)表明，鱉甲的炮制品有鱉甲和醋鱉甲兩種?，F(xiàn)代研究表明，鱉甲含骨膠原(collagen)、碳酸鈣、磷酸鈣、碘等。鱉甲浸出物含量以水浸出物為最多。背甲與腹甲均含鈣、磷、鈉、鎂、鉀、鋅、鐵、錳、鈷、銅、砷等11種元素。藥理作用如下：

1、強壯作用：鱉多糖0.5、1.0、2.0g/kg灌胃15-20天，能明顯提高小鼠耐缺氧能力和抗冷凍作用，可延長小鼠游泳時間，有抗疲勞作用。

2、免疫促進作用：鱉多糖0.5、1.0、2.0g/kg灌胃15-20天，能顯著提高小鼠空斑形成細胞的溶血能力，促進溶血素抗體生成；并增強小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)。

3、抗腫瘤作用。鱉甲粉末口服280mg/kg對小鼠移植實質(zhì)性癌MH134具有抑制作用，使腫瘤直徑減小，腫瘤重量顯著減輕。對腹水癌則沒有顯著作用。對接種人腸癌細胞的裸鼠每日按800mg/kg劑量口服鱉甲粉，治療35d后與對照組比較，抑瘤率為92.15％，腫瘤壞死面積達67％，與5-氟尿嘧啶(5-Fu)組比較,其優(yōu)點是不引起宿主白細胞數(shù)下降，表明鱉甲粉不僅對人腸癌有抑制作用，且副反應(yīng)小，對骨髓的抑制遠比5-Fu輕。

4、其它：以0.5％或1.0％鱉多糖Renger液浸泡蟾蜍坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本，有增加收縮高度和畫紋面積、延長持續(xù)收縮時間的作用。該品能抑制結(jié)締組織的增生，可消失結(jié)塊；并具有增加血漿蛋白的作用，可用于肝病所致的貧血。

雖然有報道稱其具有抗腫瘤作用，但是并未發(fā)現(xiàn)其具有抑制腫瘤新生血管生成的作用。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所解決的第一個技術(shù)問題是提供一種鱉甲的藥物新用途。

本發(fā)明所提供的鱉甲的藥物新用途是鱉甲或醋鱉甲在制備抑制腫瘤新生血管生成的藥物中的新用途。

所述藥物是以有效劑量的鱉甲或醋鱉甲為活性成分，按照藥學(xué)常規(guī)方法，加入藥學(xué)上的輔料制備而成的藥劑。具體的可以制成口服制劑或者注射劑，通過口服、肌肉注射、靜脈輸入或腹腔注射等方式給藥。

本發(fā)明所解決的第二個技術(shù)問題是提供一種抑制腫瘤新生血管生成的藥物組合物，尤，其主要活性成分為鱉甲或醋鱉甲，按照藥學(xué)常規(guī)方法制備而成的藥劑。制備時還可以加入藥學(xué)上的常規(guī)輔料制備?；钚猿煞诌€可以配加其他抗腫瘤藥增加協(xié)同增效的效果。

所述常規(guī)輔料包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等。

以鱉甲或醋鱉甲為活性成分制備的抑制腫瘤新生血管生成的藥物可以制成口服劑、注射液等多種形式。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。

本發(fā)明所解決的第三個技術(shù)問題是提供上述抑制腫瘤新生血管生成的藥物組合物的制備方法。

方法一：將鱉甲或醋鱉甲粉碎成細粉，混合即成散劑；或

方法二：將鱉甲或醋鱉甲粉碎成細粉，裝膠囊即成膠囊劑；或

方法三：將鱉甲或醋鱉甲粉碎成細粉，壓片即成片劑；或

方法四：將鱉甲或醋鱉甲用水煎煮提取后，過濾得煎煮液；或

方法五：將鱉甲或醋鱉甲用水煎煮提取后，過濾得煎煮液，干燥煎煮液；或

方法六：將鱉甲或醋鱉甲用水煎煮提取后，濃縮提取液制成顆粒，即成顆粒劑；或

方法七：將鱉甲或醋鱉甲用水煎煮提取后，濃縮提取液制成顆粒，裝膠囊即成膠囊劑；或

方法八：將鱉甲或醋鱉甲用水煎煮提取后，濃縮提取液制成顆粒，壓片即成片劑；或

方法九：將鱉甲或醋鱉甲用水煎煮提取后，制成水煎劑，或加常規(guī)輔料制成口服液、糖漿、合劑。

優(yōu)選的方法之一：包括如下步驟：

A、鱉甲或醋鱉甲加水煎煮，過濾得煎煮液；

B、干燥煎煮液即得。

進一步的，步驟B干燥煎煮液至含水量低于5％。

優(yōu)選的方法之二：包括如下步驟：

A、鱉甲或醋鱉甲加水煎煮，過濾得煎煮液；

B、煎煮液按照藥學(xué)常規(guī)方法，加入藥學(xué)上的常規(guī)輔料制備而得。

具體的可以制成口服制劑或者注射劑，可加入的常規(guī)輔料包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等。

綜上，本發(fā)明采用鱉甲或醋鱉甲抑制腫瘤新生血管生成作用顯著，為臨床抑制腫瘤新生血管生成以及治療腫瘤提供了一種全新的選擇。

附圖說明

圖1鱉甲干預(yù)的幼魚光鏡圖。

圖2鱉甲干預(yù)的幼魚熒光顯微鏡顯示圖的灰度格式圖。

圖3鱉甲干預(yù)的幼魚高倍熒光顯微鏡顯示圖的灰度格式圖。

圖4陽性對照-PTK787干預(yù)的幼魚光鏡圖。

圖5陽性對照-PTK787干預(yù)的幼魚熒光顯微鏡顯示圖的灰度格式圖。

圖6陽性對照-PTK787干預(yù)的幼魚高倍熒光顯微鏡顯示圖的灰度格式圖。

圖7陰性對照-Vehicle Control(0.1％DMSO)干預(yù)的幼魚光鏡圖。

圖8陰性對照-Vehicle Control(0.1％DMSO)干預(yù)的幼魚熒光顯微鏡顯示圖的灰度格式圖。

圖9陰性對照-Vehicle Control(0.1％DMSO)干預(yù)的幼魚高倍熒光顯微鏡顯示圖的灰度格式圖。

具體實施方式

下述實施例中所述實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法；所述試劑和材料，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑獲得。

考察鱉甲藥用新用途的試驗如下：

實施例：

1.材料與方法

1.1材料

中藥均購自四川回春堂醫(yī)藥有限公司。所有試劑均購自Sigma-Aldrich Co.(St.Louis,MO)，PTK787(vatalanib)購自Selleckchem。采用fli1a-EGFP轉(zhuǎn)基因斑馬魚進行實驗。斑馬魚按照標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境飼養(yǎng)。

1.2試劑配制

稱取中藥450g，8倍量水煎煮3次，每次1小時，將3次水煎液合并于800W電爐上濃縮至約400ml，過100目篩網(wǎng)(濾渣留樣)后，均勻涂布于蒸發(fā)皿中，將蒸發(fā)皿置于電熱鼓風(fēng)干燥箱中，于60℃下間斷干燥62小時后，繼續(xù)于玻璃干燥器中室溫干燥直至制成水分含量<5％(烘干法測定)的浸膏。

1.3實驗過程

將受精后22小時的胚胎放入12孔板中(每孔30個胚胎)，采用中藥干預(yù)26小時。中藥水提物溶解于0.1％二甲亞砜(DMSO)中，每孔加入中藥水提物濃度為200μg/ml。陽性對照組為5μg/ml PTK787(瓦他拉尼vatalanib,一種血管內(nèi)皮生長因子受體拮抗劑)，陰性對照組為0.1％DMSO。受精后48小時，三卡因麻醉幼魚，使用Nikon SMZ 1500熒光顯微鏡分析拍照。節(jié)間血管形成是評價藥效的主要指標(biāo)，同時也用于評價其毒性。

1.4結(jié)果及結(jié)論

采用鱉甲、陽性對照-PTK787、陰性對照-Vehicle Control干預(yù)的幼魚光鏡圖、熒光顯微鏡顯示圖(灰度格式圖)、高倍熒光顯微鏡顯示圖(灰度格式圖)分別見圖1-9。

采用鱉甲和PTK787干預(yù)的幼魚均出現(xiàn)了血管生成的缺陷。光鏡和熒光顯微鏡顯示，與0.1％DMSO陰性對照比較，采用鱉甲干預(yù)的幼魚，形成了較少的完整的節(jié)間血管。高倍鏡顯示，只能夠偶爾觀察到背主動脈苗。5μg/ml PTK787陽性對照則能夠完全抑制節(jié)間血管和背部縱向血管。鱉甲沒有導(dǎo)致斑馬魚死亡或者致畸，沒有發(fā)現(xiàn)鱉甲的神經(jīng)毒性或者器官毒性。

綜上，本發(fā)明采用鱉甲或醋鱉甲抑制腫瘤新生血管生成作用顯著，為臨床抑制腫瘤新生血管生成以及治療腫瘤提供了一種全新的選擇。