本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種犬干擾素α顆粒復(fù)合物及其制備方法與應(yīng)用、以及一種抗病毒的組合物。

背景技術(shù)：
目前，犬的飼養(yǎng)數(shù)量越來越大，但是犬病、特別是病毒病的發(fā)病率不斷升高，常常導(dǎo)致犬的死亡，給人類造成精神和經(jīng)濟上的損失。犬干擾素α由于其廣泛的抗病毒活性而在治療犬類病毒病方面得到廣泛應(yīng)用。但是，現(xiàn)在市場上的犬干擾素α制劑需要每天給藥，2-4周為一個療程。每天給藥和長時間的周期不僅是病犬的痛苦，也增加了飼養(yǎng)主的精神和經(jīng)濟負擔(dān)，同時也需要大量的藥物。這種現(xiàn)狀主要是由于現(xiàn)有的犬干擾素α活性時間短。因此，急需研究開發(fā)長效犬干擾素α制劑?，F(xiàn)有技術(shù)中，僅見一專利[公開號：CN101411868A]公開了一種犬干擾素長效注射劑型的制備方法。但是該制備方法中采用了丙交脂/乙交脂共聚物，在體內(nèi)不可降解，生物相容性差。并且該技術(shù)中引入了二氯甲烷、聚乙烯醇等生物毒性較大的有機試劑，有機試劑的殘留給藥物的應(yīng)用埋下了很大的隱患。同時，該制備方法工藝復(fù)雜，耗費時間長，不僅使制備成本高，而且制備過程可能使犬干擾素α降解或活性降低。γ-聚谷氨酸，即γ-PGA，是一種微生物合成的氨基酸聚合物，能在體內(nèi)降解成谷氨酸，因此無毒副作用，生物相容性好[葉海峰.γ-聚谷氨酸-順鉑復(fù)合物的制備及其抗腫瘤活性研究[D].上海:華東師范大學(xué).2007]。有研究報道聚谷氨酸是有效的藥物載體，具有增強藥物活性、緩慢釋放藥物、延長藥物的循環(huán)時間等作用[synthesisandcharacterizationofcisplatin-loaded,EGFR-targetedbiopolymerandinvitroevaluationfortargeteddelivery[J].XuGeng,etc.JournalofBiomedicalMaterialsResearchPartA2012,100,2839-2848.]。但是γ-PGA自身親水性強，在水相中無法形成外殼結(jié)構(gòu)，需通過化學(xué)合成的方法將藥物連到γ-PGA的羧基上，因此對藥物的選擇性強，不具備通用性；同時化學(xué)反應(yīng)過程對藥物尤其蛋白藥物的活性有很大的損傷。另一方面，現(xiàn)有技術(shù)中目前市場上犬干擾素α活性時間短，犬干擾素α制劑需要每天給藥，且給藥周期長。目前在藥物領(lǐng)域，由于納米材料的優(yōu)越性，對納米藥物載體的研究越來越多。納米藥物載體是指粒徑在10-1000nm的載體，納米藥物載體裝載藥物后的納米藥物有許多優(yōu)點，包括提高藥物的吸收度和穩(wěn)定性、改善藥物性質(zhì)和靶向性、藥物作用時間延長、療效增加、毒副作用小等[納米藥物載體的研究及臨床應(yīng)用[J].金麗霞.中國組織工程研究與臨床康復(fù). 2010,8:1429-1432]。但是如果納米藥物太小，就會經(jīng)過腎臟的過濾變成尿排到體外；相反，如果大于400nm就會被體內(nèi)排異系統(tǒng)所識別而將其清除掉，因此，納米藥物的大小必須介于4-400nm之間[葉海峰.γ-聚谷氨酸-順鉑復(fù)合物的制備及其抗腫瘤活性研究[D].上海:華東師范大學(xué).2007]。專利[公開號：CN101411868A]公開了一種犬干擾素長效注射劑型的制備方法，所得的顆粒為微球，遠遠大于400nm。但是，在現(xiàn)有技術(shù)中，納米藥物多為抗腫瘤藥物等人用藥物，還未見其應(yīng)用于犬類抗病毒藥物的報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
為克服以上缺陷，本發(fā)明提出了一種長效活性犬干擾素α顆粒復(fù)合物。納米材料在藥物領(lǐng)域有顯著優(yōu)越性，但只有大小介于4-400nm才是有效的納米藥物。本發(fā)明提出了一種犬干擾素α顆粒復(fù)合物CaIFNα-NPs，其粒徑在100-300nm之間，為一種有效的犬類抗病毒藥物納米藥物。本發(fā)明將親水的γ-PGA與疏水的苯丙氨酸乙酯(即PAE)，通過酰胺鍵脫水縮合反應(yīng)連接，從而改變γ-PGA的親水性，得到具有兩親性的PGA-PAE材料。本發(fā)明將PGA-PAE材料與犬干擾素α水溶液混合，由于PGA-PAE材料的兩親性，在水溶液中自聚合形成外部親水而內(nèi)部疏水的外殼結(jié)構(gòu)，將犬干擾素α包裹其中，得到犬干擾素α顆粒復(fù)合物，即CaIFNα-NPs。本發(fā)明所述之CaIFNα-NPs由PGA-PAE外殼和包裹在殼內(nèi)的犬干擾素α組成。外殼能緩解酶對犬干擾素α的降解，延長其在體內(nèi)的代謝時間，同時緩慢釋放犬干擾素α，達到長效的目的，從而改善現(xiàn)有技術(shù)中犬干擾素α活性時間短、需要頻繁注射等缺陷。本發(fā)明所述之CaIFNα-NPs所用材料安全無毒，且制備條件溫和，工藝簡單快速，克服了現(xiàn)有技術(shù)中的上述不足。同時該制備方法還適用于多種藥物，具有通用性，拓展了γ-PGA作為藥物載體的應(yīng)用。本發(fā)明提出了一種犬干擾素α顆粒復(fù)合物CaIFNα-NPs，其包括γ-聚谷氨酸-苯丙氨酸外殼即PGA-PAE外殼、以及包裹在所述外殼內(nèi)的犬干擾素α。其中，所述γ-聚谷氨酸-苯丙氨酸外殼即PGA-PAE外殼，是由γ-聚谷氨酸和苯丙氨酸乙酯通過酰胺鍵脫水縮合而成。其中，所述γ-聚谷氨酸-苯丙氨酸外殼為生物可降解材料。γ-聚谷氨酸是一種微生物合成的氨基酸聚合物，分子量為5萬-100萬，由天然的氨基酸谷氨酸組成，能在體內(nèi)降解成谷氨酸。因此無毒副作用，生物相容性好。有研究報道聚谷氨酸是有效的藥物載體，具有增強藥物活性、緩慢釋放藥物、延長藥物的循環(huán)時間等作用。苯丙氨酸也是一種必需氨基酸。因此由PGA-PAE材料組成的外殼在體內(nèi)能降解成氨基酸，安全無毒，生物相容性好。同時，外殼能減緩酶對犬干擾素α的降解，延長其在體內(nèi)的代謝時間，緩慢 釋放犬干擾素α，達到長效的目的，從而改善現(xiàn)有技術(shù)中犬干擾素α活性時間短、需要頻繁注射等缺陷。相比較地，現(xiàn)有技術(shù)中，專利[公開號：CN101411868A]采用了丙交脂/乙交脂共聚物，在體內(nèi)不可降解，生物相容性差。其中，所述犬干擾素α顆粒復(fù)合物CaIFNα-NPs粒徑在100-300nm之間，是納米尺寸藥物。納米藥物是指粒徑在10-1000nm的用納米載體裝載藥物后的體系，有許多優(yōu)點，包括提高藥物的吸收度和穩(wěn)定性、改善藥物性質(zhì)和靶向性、藥物作用時間延長、療效增加、毒副作用小等。其中，所述犬干擾素α顆粒復(fù)合物CaIFNα-NPs由PGA-PAE材料包裹犬干擾素α組成，包裹率非常高，達80％以上。即，在將PGA-PAE材料和犬干擾素α混合制成犬干擾素α顆粒復(fù)合物時，80％以上的犬干擾素α能夠被PGA-PAE材料包裹，避免了犬干擾素α的浪費，減少了犬干擾素α的用量，降低了生產(chǎn)成本。相比較地，現(xiàn)有技術(shù)中，例如專利[公開號：CN101411868A]公開了一種犬干擾素長效注射劑型的制備方法，所得犬干擾素微球粒徑在40μm以下，包裹率僅有30％左右。其中，所述犬干擾素α顆粒復(fù)合物CaIFNα-NPs的形成，是通過所述γ-聚谷氨酸-苯丙氨酸外殼和犬干擾素α的自聚合過程組裝形成。因為PGA-PAE材料具有兩親性即γ-聚谷氨酸-苯丙氨酸外殼同時帶有親水基團和疏水基團，當(dāng)溶在二甲基亞砜DMSO中的PGA-PAE材料滴加到犬干擾素α水溶液時，所述材料的兩親性使得親水基團在外、疏水基團/親脂基團在內(nèi)，形成球形顆粒結(jié)構(gòu)，同時將犬干擾素α包裹在顆粒結(jié)構(gòu)內(nèi)部。該過程為自聚合，操作簡單易行，成本低，易大規(guī)模生產(chǎn)。相比較地，現(xiàn)有技術(shù)中，例如專利[公開號：CN101411868A]在制備過程中引入了二氯甲烷、聚乙烯醇等生物毒性較大的有機試劑，有機試劑的殘留給藥物的應(yīng)用埋下了很大的隱患。同時，該制備方法工藝復(fù)雜，耗費時間長，不僅使制備成本高，而且制備過程可能使犬干擾素α降解或活性降低。而本發(fā)明在顆粒制備過程中，犬干擾素α溶解在水相緩沖液中，僅在包裹時引入相對溫和、毒性低的DMSO，包裹瞬間完成后，即可通過離心出去DMSO，制備快速簡單，大大降低制備成本，又極大程度上保護了犬干擾素α的生物活性。其中，所述犬干擾素α包括游離犬干擾素α或融合犬干擾素α。干擾素是一類能夠干擾病毒的感染和復(fù)制的細胞因子，分為幾類，其中干擾素α因其廣譜的生物學(xué)功能而被廣泛應(yīng)用和研究。犬干擾素α具有抗病毒效果，因此被廣泛用于治療犬類的病毒病。在一個具體實施方案中，所述犬干擾素α的序列如SEQIDNo:1所示。在另一個具體實施方案中，所述犬干擾素α的序列如SEQIDNo:2所示。本發(fā)明還提供了犬干擾素α顆粒復(fù)合物即CaIFNα-NPs的制備方法，包括以下步驟：(1)制備γ-聚谷氨酸-苯丙氨酸外殼材料：取γ-聚谷氨酸溶于純水中，配成2％w/v溶液。調(diào)節(jié)pH至3.0，在98℃水浴中降解，降解結(jié)束后立即冰浴。降溫后調(diào)節(jié)pH至7.0。依次加入水溶性多肽縮合劑1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽即EDC.I，和苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽。37℃，210rpm條件下反應(yīng)24h。將反應(yīng)體系離心，得白色沉淀。棄上清，將沉淀用純水重懸后離心。重復(fù)2次。將白色沉淀烘干。用二甲基亞砜溶解沉淀，得到PGA-PAE材料。(2)γ-聚谷氨酸-苯丙氨酸外殼和犬干擾素α的自聚合反應(yīng)：將PGA-PAE材料滴加到等體積的犬干擾素α溶液中，得到白色乳濁液。(3)得到犬干擾素α顆粒復(fù)合物：將白色乳濁液16000rpm離心15min，棄上清，沉淀用純水重懸，再次離心。重復(fù)2次。將沉淀凍干，得到本發(fā)明犬干擾素α顆粒復(fù)合物CaIFNα-NPs。步驟(1)中，降解時間為3-15min，優(yōu)選地，降解時間為11min。所述γ-聚谷氨酸和EDC.I的摩爾比為1:2。所述γ-聚谷氨酸和苯丙氨酸乙酯的摩爾比為1:0.60-1:0.98，優(yōu)選地，摩爾比為1:0.82。步驟(1)得到的PGA-PAE材料的濃度為20-40mg/ml，優(yōu)選地，濃度為40mg/ml。本發(fā)明還提供了犬干擾素α顆粒復(fù)合物CaIFNα-NPs在制備犬抗病毒藥物中的應(yīng)用。其中，所述CaIFNα-NPs由PGA-PAE外殼和包裹在殼內(nèi)的犬干擾素α組成。PGA-PAE外殼能減緩酶對犬干擾素α的降解，延長其在體內(nèi)的代謝時間，同時緩慢釋放犬干擾素α，達到長效的目的。實驗證明，本發(fā)明CaIFNα-NPs具有抗病毒活性，能保護犬腎細胞(MDCK)不受水泡性口炎病毒(VSV)的感染，同時相較于普通的犬干擾素α，本發(fā)明CaIFNα-NPs具有長效的抗病毒活性。因此，本發(fā)明CaIFNα-NPs可應(yīng)用于制成犬抗病毒藥物。本發(fā)明另一目的是提供一種抗病毒組合物，用于治療犬類病毒性疾病，其含有所述犬干擾素α顆粒復(fù)合物。所述組合物包括藥物組合物?？筛鶕?jù)本領(lǐng)域公知方法制備?？砂环N或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑和/或輔劑，包括本領(lǐng)域公知的各種稀釋劑、潤滑劑、濕潤劑、黏合劑、崩解劑、助流劑等。可制成適用的任何劑型包括液體劑型、固體劑型、半固體劑型等，包括普通制劑、緩釋制劑、靶向制劑等。所述犬干擾素α顆粒復(fù)合物或所述組合物可以以單位劑量給藥，給藥途徑包括腸道或非腸道，包括口服、注射等?？蓡为毷褂没蚺c其他藥物結(jié)合使用。所述犬干擾素α顆粒復(fù)合物在所述組合物中的含量為0.1～99％。在一個具體實施方案中，所述組合物包括甘露醇和犬干擾素α，其含量比為50mg/ml甘露醇、1mg/mlCaIFNα-NPs。本發(fā)明有益效果包括：本發(fā)明CaIFNα-NPs是由PGA-PAE外殼和包裹在殼內(nèi)的犬干擾素 α組成，其優(yōu)點包括：第一，PGA-PAE材料組成的外殼具有可降解性，安全無毒，生物相容性好，避免了由于載體生物安全性差所導(dǎo)致的毒副作用。第二，本發(fā)明所提出之CaIFNα-NPs是由PGA-PAE材料和犬干擾素α自聚合而成，制備條件溫和，克服了現(xiàn)有技術(shù)中制備過程引入有毒有機試劑的缺陷。操作簡單易行，成本低，易大規(guī)模生產(chǎn)。第三，PGA-PAE外殼對犬干擾素α的包裹率非常高，避免了犬干擾素α的浪費，減少了犬干擾素α的用量，降低了生產(chǎn)成本。第四，本發(fā)明所提出之CaIFNα-NPs粒徑在100-300nm之間，為有效的納米藥物，具有提高藥物的吸收度和穩(wěn)定性、改善藥物靶向性、藥物作用時間延長、療效增加、毒副作用小等優(yōu)點，同時克服了微米級藥物的缺陷，降低機體的清除率。第五，外殼能減緩酶對犬干擾素α的降解，延長其在體內(nèi)的代謝時間，緩慢釋放犬干擾素α，達到長效的目的，從而改善現(xiàn)有技術(shù)中犬干擾素α需要頻繁注射、活性時間短等缺陷。實驗證明，本發(fā)明所提出之CaIFNα-NPs具有長效的抗病毒活性，因此，本發(fā)明CaIFNα-NPs可制成犬抗病毒藥物，具有良好的應(yīng)用前景。附圖說明圖1為包裹融合犬干擾素α的犬干擾素α顆粒復(fù)合物CaIFNα-NPs的透射電鏡圖。圖2為包裹游離犬干擾素α的犬干擾素α顆粒復(fù)合物CaIFNα-NPs的透射電鏡圖。圖3為本發(fā)明犬干擾素α顆粒復(fù)合物CaIFNα-NPs的體外釋放曲線。圖4為本發(fā)明犬干擾素α顆粒復(fù)合物CaIFNα-NPs的長效抗病毒活性。具體實施方式結(jié)合以下具體實施例和附圖，對本發(fā)明作進一步的詳細說明，本發(fā)明的保護內(nèi)容不局限于以下實施例。在不背離發(fā)明構(gòu)思的精神和范圍下，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠想到的變化和優(yōu)點都被包括在本發(fā)明中，并且以所附的權(quán)利要求書為保護范圍。實施本發(fā)明的過程、條件、試劑、實驗方法等，除以下專門提及的內(nèi)容之外，均為本領(lǐng)域的普遍知識和公知常識，本發(fā)明沒有特別限制內(nèi)容。實施例1PGA-PAE材料的合成稱取0.1gγ-聚谷氨酸，溶于5ml純水中，配成2％的PGA溶液。用1mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)PGA溶液的pH為3.0。將PGA溶液放入98℃水浴鍋中降解11min，降解結(jié)束后立即冰浴降溫。隨后用1mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.0。依次加入0.297gEDC.I和0.146g苯丙氨酸乙酯。至搖床上37℃210rpm反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)體系12000rpm離心1min，沉淀用純水重懸。重復(fù)離心2次。將白色沉淀烘干。稱重，將沉淀用二甲基亞砜溶解，配成40mg/ml，即得PGA-PAE材料。實施例2包裹融合犬干擾素α的犬干擾素α顆粒復(fù)合物CaIFNα-NPs的制備取1ml上述的PGA-PAE材料，緩慢滴加到1ml0.25mg/ml融合犬干擾素α水溶液中，混勻得到白色乳濁液。將乳濁液16000rpm15min離心。沉淀與上清分離。沉淀用2ml純水重懸，16000rpm再次離心15min。沉淀與上清分離，將沉淀凍干，即得CaIFNα-NPs。其中，融合犬干擾素α的序列如SEQIDNo:1所示。為驗證融合犬干擾素α是否被包進顆粒中及計算融合犬干擾素α的包裹率，將CaIFNα-NPs用4％十二烷基磺酸鈉溶液裂解。由于CaIFNα-NPs是靠PGA-PAE材料的兩親性自聚合而成，而十二烷基磺酸鈉是表面活性劑，能同時結(jié)合親水性基團及親脂性基團，所以十二烷基磺酸鈉溶液能將CaIFNα-NPs裂解，釋放出包裹其中的犬干擾素α。若融合犬干擾素α未被包進PGA-PAE材料內(nèi)，則離心時不會隨顆粒沉淀，即存在于上清中。若融合犬干擾素α在第一次離心中附在PGA-PAE材料表面而被離心下來，則沉淀用純水重懸第二次離心后，融合犬干擾素α應(yīng)溶解在二次離心的上清中。用SDS-PAGE分析CaIFNα-NPs裂解液和離心上清。重復(fù)3次實驗，每次的包裹率和載藥量如下表1所示。其中包裹率為包在顆粒內(nèi)部的融合犬干擾素α的質(zhì)量與融合犬干擾素α總質(zhì)量的比值，載藥量為包在顆粒內(nèi)部的融合犬干擾素α的質(zhì)量與CaIFNα-NPs總質(zhì)量的比值。從表1中看出，CaIFNα-NPs的包裹率很高，達80％以上。表1CaIFNα-NPs的包裹率和載藥量實施例3包裹游離犬干擾素α的犬干擾素α顆粒復(fù)合物CaIFNα-NPs的制備取1ml上述的PGA-PAE材料，緩慢滴加到1ml0.4mg/ml游離犬干擾素α水溶液中，混勻得到白色乳濁液。將乳濁液16000rpm15min離心。沉淀與上清分離。沉淀用2ml純水重懸，16000rpm再次離心15min。沉淀與上清分離，將沉淀凍干，即得CaIFNα-NPs。其中，游離犬干擾素α的序列如SEQIDNo:2所示。為驗證游離犬干擾素α是否被包進顆粒中及計算游離犬干擾素α的包裹率，將CaIFNα-NPs用4％十二烷基磺酸鈉溶液裂解。由于CaIFNα-NPs是靠PGA-PAE材料的兩親性自聚合而成，而十二烷基磺酸鈉是表面活性劑，能同時結(jié)合親水性基團及親脂性基團，所以十二烷基磺酸鈉溶液能將CaIFNα-NPs裂解，釋放出包裹其中的游離犬干擾素α。若游離犬 干擾素α未被包進PGA-PAE材料內(nèi)，則離心時不會隨顆粒沉淀，即存在于上清中。若游離犬干擾素α在第一次離心中附在PGA-PAE材料表面而被離心下來，則沉淀用純水重懸第二次離心后，游離犬干擾素α應(yīng)溶解在二次離心的上清中。用SDS-PAGE分析CaIFNα-NPs裂解液和離心上清。重復(fù)3次實驗，每次的包裹率和載藥量如下表2所示。其中包裹率為包在顆粒內(nèi)部的游離犬干擾素α的質(zhì)量與游離犬干擾素α總質(zhì)量的比值，載藥量為包在顆粒內(nèi)部的游離犬干擾素α的質(zhì)量與CaIFNα-NPs總質(zhì)量的比值。從表2中看出，CaIFNα-NPs的包裹率很高。表2CaIFNα-NPs的包裹率和載藥量實施例4兩種CaIFNα-NPs的表征分別取0.1g實施例2和實施例3中的包裹融合犬干擾素α和包裹游離犬干擾素α的兩種CaIFNα-NPs溶解在10ml超純水中，將10ulCaIFNα-NPs溶液滴加到銅網(wǎng)上，烘干。烘干后將銅網(wǎng)用1％鉬酸銨溶液染色，染完后用超純水中沖洗。烘干后用透射電鏡觀察。包裹融合犬干擾素α的CaIFNα-NPs的透射電鏡結(jié)果如圖1。從圖中看出，CaIFNα-NPs呈規(guī)整的球形。取上述包裹融合犬干擾素α的CaIFNα-NPs溶液，用馬爾文激光粒度分析儀分析CaIFNα-NPs的粒徑大小。結(jié)果表明CaIFNα-NPs的粒徑為165nm。包裹游離犬干擾素α的CaIFNα-NPs的透射電鏡結(jié)果如圖2。從圖中看出，CaIFNα-NPs同樣呈規(guī)整的球形。取上述包裹游離犬干擾素α的CaIFNα-NPs溶液，用馬爾文激光粒度分析儀分析CaIFNα-NPs的粒徑大小。結(jié)果表明CaIFNα-NPs的粒徑為160nm。實施例5兩種CaIFNα-NPs的抗病毒活性的檢測采用微量細胞病變抑制法：將犬腎細胞MDCK接種于96孔板中，每孔10000個細胞，待細胞貼壁之后分別加入4倍比稀釋的包裹融合犬干擾素α和游離犬干擾素α的兩種CaIFNα-NPs，每個稀釋度做8個重復(fù)。在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。棄去上清，加入100TCID50的水泡型口炎皰疹病毒VSV。同時設(shè)立陰性對照組(只加CaIFNα-NPs，不加病毒)、陽性對照(只加病毒，不加CaIFNα-NPs)、空白組(不加CaIFNα-NPs，不加病毒)。在CO2培養(yǎng)箱 中培養(yǎng)24小時。觀察細胞病變情況。能保護半數(shù)細胞免受病毒感染的干擾素最高稀釋倍數(shù)，即為干擾素的效價。實驗結(jié)果表明，陽性對照組細胞出現(xiàn)病變，說明本實驗所用VSV確能感染MDCK，即該測試系統(tǒng)有效。陰性對照組的細胞狀態(tài)同空白組的相同，說明本發(fā)明CaIFNα-NPs對細胞沒有毒副作用。兩種包裹融合犬干擾素α的和包裹游離犬干擾素α的CaIFNα-NPs濃度較高的實驗組中細胞均未出現(xiàn)病變，說明本發(fā)明CaIFNα-NPs能保護MDCK不受VSV的感染。用Reed-Muench法計算實驗組，即本發(fā)明CaIFNα-NPs的效價。其中，包裹融合犬干擾素α的CaIFNα-NPs的效價為(2.9±1.5)×105U/mg，包裹游離犬干擾素α的CaIFNα-NPs的效價為(1.4±0.6)×106U/mg，可見，本發(fā)明包裹融合犬干擾素α的和包裹游離犬干擾素α的CaIFNα-NPs具有抗病毒活性。實施例6兩種犬干擾素α顆粒復(fù)合物的體外釋放實驗取上述兩種包裹融合犬干擾素α的和包裹游離犬干擾素α的CaIFNα-NPs分別溶解在10％新鮮小鼠血清中，置于37℃孵育，每隔一定時間取80ul樣品，其中40ul直接凍于-20℃保存，為該時間點犬干擾素α的總含量；另40ul16000rpm離心15min，上清與沉淀分開，上清凍于-20℃保存，為該時間點釋放出的犬干擾素α含量。最后用western-blot分析各樣品中犬干擾素α的含量。某一時間點上清中的犬干擾素α和犬干擾素α的總含量的比值即為該時間點CaIFNα-NPs中犬干擾素α的釋放比例。CaIFNα-NPs的體外釋放曲線如32。從圖中看出，隨著時間的延長，兩種犬干擾素α均能夠緩慢釋放，30天釋放了80％以上的藥物。實施例7兩種CaIFNα-NPs的長效抗病毒活性將犬腎細胞MDCK接種于96孔板中，待細胞貼壁之后分別加入4倍比稀釋的上述兩種犬干擾素α顆粒復(fù)合物，每個稀釋度做8個重復(fù)。在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)不同時間。棄去上清，加入100TCID50的水泡型口炎皰疹病毒VSV。在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。觀察細胞病變情況。能保護半數(shù)細胞免受病毒感染的干擾素最高稀釋倍數(shù)，即為干擾素的抗病毒活性。用Reed-Muench法計算各個時間段兩種CaIFNα-NPs的抗病毒活性。實驗結(jié)果如圖4所示，隨著處理時間的延長，兩種CaIFNα-NPs都具有抗病毒活性，且活性升高。說明包裹其內(nèi)的犬干擾素α緩慢釋放，發(fā)揮抗病毒活性。因此CaIFNα-NPs具有長效抗病毒活性。實施例8包含兩種CaIFNα-NPs的組合物的抗病毒活性分別稱取1mg上述兩種CaIFNα-NPs溶解于0.5ml去離子水中，另取50mg甘露醇，溶解于0.5ml去離子水中；將二者混勻，得到兩種CaIFNα-NPs與甘露醇的組合物，其中均含1mg/ml的CaIFNα-NPs和50mg/ml的甘露醇。將本實施例制備的組合物用于實施例4、實施例5、實施例6實驗中，均獲得了與實施例4、實施例5、實施例6類似的結(jié)果，表明兩種CaIFNα-NPs的組合物能緩慢釋放藥物，具有長效的抗病毒效果，因而可以用于治療犬類病毒性疾病。